CN103353491A - 一种用液相色谱法分离测定苯甲酸阿格列汀原料及其制剂的方法 - Google Patents
一种用液相色谱法分离测定苯甲酸阿格列汀原料及其制剂的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定苯甲酸阿格列汀有关物质的方法，该方法以辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机酸盐缓冲溶液－有机相为流动相，可以定量测定苯甲酸阿格列汀及其有关物质的含量，从而有效控制苯甲酸阿格列汀及含苯甲酸阿格列汀制剂产品的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定苯甲酸阿格列汀及其有关物质的方法。
背景技术
苯甲酸阿格列汀是丝氨酸蛋白酶二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂，能维持体内胰高血糖素样肽1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)的水平，促进胰岛素的分泌，从而发挥降糖疗效，适用于治疗2型糖尿病。苯甲酸阿格列汀化学名为2-[[6-[(3R)-3-Amino-1-piperidinyl]-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl]methyl]benzonitrile benzoate，分子式为C25H27N5O4。苯甲酸阿格列汀结构式为：
在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个中间体即药物质量控制中的有关物质，对于苯甲酸阿格列汀的合成主要控制的有关物质有6个，分别是中间体1 6-Chloro-3-methyl-1H-pyrimidine-2,4-dione、中间体22-Bromomethyl-benzonitrile、中间体3 2-(6-Chloro-3-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2H-pyrimidin-1-ylmethyl)-benzonitrile，中间体4 Piperidin-3-ylamine acid amide，中间体5 2-[6-(3-Amino-piperidin-1-yl)-3-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2H-pyrimidin-1-ylmethyl]-benzonitrile acid amide，中间体6 Benzoic acid结构式分别为：
中间体1 中间体2 中间体3
中间体4 中间体5 中间体6
对于合成苯甲酸阿格列汀中引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量控制的，因此，实现苯甲酸阿格列汀及其有关物质的分离，在苯甲酸阿格列汀的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析苯甲酸阿格列汀的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现苯甲酸阿格列汀与其有关物质的分离和测定，保证苯甲酸阿格列汀及含苯甲酸阿格列汀制剂的质量控制。
本发明所述的用液相色谱法分析苯甲酸阿格列汀的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。
上述所说的色谱柱以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Apollo-C8或Ultimate -C8。
上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选为甲醇。
上述所说的方法，其流动相无机盐缓冲溶液-有机相采用梯度洗脱。
上述所说的方法中，无机盐缓冲溶液中包含的无机盐选自磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐，优选为磷酸盐。
其中无机盐缓冲溶液中包含的无机盐的浓度为0.01～0.1mol/L，优选浓度为0.02mol/L。
本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：
1) 取苯甲酸阿格列汀或含苯甲酸阿格列汀的制剂样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含苯甲酸阿格列汀0.1～1.5mg的样品溶液。
2) 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min ，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为200～250nm，最佳检测波长为215nm，柱温箱温度为10～40℃，柱温箱温度最佳为20℃。
3) 取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀与有关物质的分离测定。其中：
高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp
色谱柱：C8（Apollo，250×4.6 mm，5μm）
流动相：A：磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72gKH2PO4，0.94g己烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，KOH溶液调节pH至5.5）；B：甲醇；采用梯度洗脱
流速：1.0mL/min
检测波长：215nm
柱温：20℃
进样体积：10μL
本发明采用C8 (Apollo，250×4.6 mm，5μm)，能够有效的分离苯甲酸阿格列汀及其有关物质。本发明解决了苯甲酸阿格列汀及其有关物质的分离测定问题，从而确保了苯甲酸阿格列汀及其制剂的质量可控。
附图说明
图1 空白溶剂的高效液相色谱图
图2 苯甲酸阿格列汀及其有关物质的高效液相色谱图
图3 苯甲酸阿格列汀原料的高效液相色谱图
图4 苯甲酸阿格列汀片辅料空白的高效液相色谱图
图5 苯甲酸阿格列汀片的高效液相色谱图
具体实施方式：
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；
色谱柱：C8（Apollo，250×4.6 mm，5μm）；
流动相：A：磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72gKH2PO4，0.94g己烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，KOH溶液调节pH至5.5）；B：甲醇；按以下梯度进行洗脱
| T(min) | 0 | 5 | 15 | 25 | 30 | 40 | 50 |
| B% | 15 | 15 | 35 | 50 | 50 | 15 | 15 |
流速：1.0mL/min
检测波长：215nm
柱温：20℃
进样体积：10μL
实验步骤
分别取苯甲酸阿格列汀及其中间体约25mg，置50mL量瓶中，加流动相（A：B=1：1）溶解并稀释至刻度，摇匀，各取适量配制成混合样品溶液。
分别取试剂空白溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。
图2中保留时间为28.494min的色谱峰为苯甲酸阿格列汀的色谱峰，其余色谱峰为苯甲酸阿格列汀各中间体的色谱峰，由图可以看出，苯甲酸阿格列汀与其中间体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。
实施例 2
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；
色谱柱：C8（Apollo，250×4.6 mm，5μm）；
流动相：A：磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72gKH2PO4，0.94g己烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，KOH溶液调节pH至5.5）；B：甲醇；按以下梯度进行洗脱
| T(min) | 0 | 5 | 15 | 25 | 30 | 40 | 50 |
| B% | 15 | 15 | 35 | 50 | 50 | 15 | 15 |
流速：1.0mL/min
检测波长：215nm
柱温：20℃
进样体积：10μL
实验步骤
取苯甲酸阿格列汀原料约25mg，置50mL量瓶中，加流动相（A：B=1：1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。
图3中保留时间为28.452min的色谱峰为苯甲酸阿格列汀的色谱峰，由图可以证明，苯甲酸阿格列汀的化学纯度达到原料药的要求，本法可以用于苯甲酸阿格列汀的质量监测。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp；
色谱柱：C8 (Apollo，250*4.6mm，5μm)；
流动相：A：磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72gKH2PO4，0.94g己烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，KOH溶液调节pH至5.5）；B：甲醇；按以下梯度进行洗脱
| T(min) | 0 | 5 | 15 | 25 | 30 | 40 | 50 |
| B% | 15 | 15 | 35 | 50 | 50 | 15 | 15 |
流速：1.0mL/min
检测波长：215nm
柱温：20℃
进样体积：10μL
实验步骤
取苯甲酸阿格列汀片适量，约相当于苯甲酸阿格列汀12.5mg，置25mL量瓶中，加流动相（A：B=1：1）超声处理溶解，并用流动相（A：B=1：1）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，并同法进行空白辅料试验，结果见图4、图5。
图4证明，空白辅料不干扰本品的测定，图5证明本法可以用于苯甲酸阿格列汀片的质量监测。 28.384min的色谱峰为苯甲酸阿格列汀的色谱峰。
从图1－图5表明：本发明的方法，可以清楚地将苯甲酸阿格列汀与其中间体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出苯甲酸阿格列汀的含量，从而有效控制苯甲酸阿格列汀的产品质量。
Claims (10)
1.一种液相色谱法分离测定苯甲酸阿格列汀有关物质的方法，其特征在于：辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以无机盐缓冲溶液－有机相为流动相，进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Ultimate或Apollo的色谱柱。
3.根据权利要求1 所述的分离测定方法，所述的有机相为甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃中的一种。
4.根据权利要求3 所述的分离测定方法，所述的有机相为甲醇。
5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所述的无机盐缓冲溶液中无机盐为磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐中的一种。
6.根据权利要求5 所述的分离测定方法，所述的无机盐缓冲溶液中无机盐为磷酸盐。
7.根据权利要求6所述的分离测定方法，磷酸盐为磷酸二氢钾。
8.根据权利要求1所述的分离测定方法，所述的无机盐缓冲溶液中所含无机盐的浓度为0.02mol/L；缓冲液的pH值优选为5.5。
9.根据权利要求1 所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
1）取苯甲酸阿格列汀或含苯甲酸阿格列汀的制剂样品适量，分别用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含苯甲酸阿格列汀及其中间体0.1～1.5mg的样品溶液；
2） 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为200～250nm，柱温箱温度为10～40℃；
3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀及其有关物质的分离测定。
10.根据权利要求9所述的分离测定方法，步骤2）所述的流动相流速为1.0mL/min；检测波长为215 nm。
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| CN (1) | CN103353491B (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104316606A (zh) * | 2014-09-24 | 2015-01-28 | 万特制药(海南)有限公司 | 一种用液相色谱法分离测定维格列汀有关物质的方法 |
| CN104569172A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-04-29 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种用液相色谱检测苯甲酸阿格列汀片溶出度的方法 |
| CN104749269A (zh) * | 2013-12-31 | 2015-07-01 | 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 | 一种利用hplc测定阿格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的方法 |
| CN105527348A (zh) * | 2014-09-28 | 2016-04-27 | 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 | 分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法 |
| CN105699547A (zh) * | 2016-04-22 | 2016-06-22 | 中山万汉医药科技有限公司 | 一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法 |
| CN105738517A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-07-06 | 中山万汉医药科技有限公司 | 一种测定曲格列汀片中有关物质的方法 |
| CN109580835A (zh) * | 2018-12-31 | 2019-04-05 | 辰欣药业股份有限公司 | 一种用液相色谱法分离测定阿格列汀有关物质的方法 |
| CN109668988A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-23 | 浙江华贝药业有限责任公司 | 一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法 |
| CN111537622A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-08-14 | 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 | 杂环硼酸化合物的杂质及检测方法 |
| CN112480074A (zh) * | 2020-12-08 | 2021-03-12 | 湖南千金湘江药业股份有限公司 | 3,4-二氢嘧啶苯甲腈衍生物及其制备方法与应用 |
| CN115656389A (zh) * | 2022-11-17 | 2023-01-31 | 重庆科瑞南海制药有限责任公司 | 一种lc-ms测定苯甲酸阿格列汀中r-3-氨基哌啶二盐酸盐含量的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009011451A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Solid preparation comprising alogliptin and metformin hydrochloride |
| CN103142518A (zh) * | 2013-02-22 | 2013-06-12 | 广东先强药业股份有限公司 | 一种阿格列汀脂质体固体制剂及其制备方法和应用 |
| CN103156819A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-06-19 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 苯甲酸阿格列汀组合物片剂及其制备方法 |
-
2013
- 2013-06-29 CN CN201310266993.2A patent/CN103353491B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009011451A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Solid preparation comprising alogliptin and metformin hydrochloride |
| CN103142518A (zh) * | 2013-02-22 | 2013-06-12 | 广东先强药业股份有限公司 | 一种阿格列汀脂质体固体制剂及其制备方法和应用 |
| CN103156819A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-06-19 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 苯甲酸阿格列汀组合物片剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RAMZIA I. EL-BAGARY等: "Liquid Chromatographic Determination of Alogliptin in Bulk and in its Pharmaceutical Preparation", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOMEDICAL SCIENCE》 * |
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104749269A (zh) * | 2013-12-31 | 2015-07-01 | 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 | 一种利用hplc测定阿格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的方法 |
| CN104316606A (zh) * | 2014-09-24 | 2015-01-28 | 万特制药(海南)有限公司 | 一种用液相色谱法分离测定维格列汀有关物质的方法 |
| CN105527348B (zh) * | 2014-09-28 | 2018-07-24 | 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 | 分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法 |
| CN105527348A (zh) * | 2014-09-28 | 2016-04-27 | 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 | 分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法 |
| CN104569172A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-04-29 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种用液相色谱检测苯甲酸阿格列汀片溶出度的方法 |
| CN105738517A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-07-06 | 中山万汉医药科技有限公司 | 一种测定曲格列汀片中有关物质的方法 |
| CN105738517B (zh) * | 2016-02-24 | 2016-11-09 | 中山万汉医药科技有限公司 | 一种测定曲格列汀片中有关物质的方法 |
| CN105699547A (zh) * | 2016-04-22 | 2016-06-22 | 中山万汉医药科技有限公司 | 一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法 |
| CN105699547B (zh) * | 2016-04-22 | 2017-03-29 | 中山万远新药研发有限公司 | 一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法 |
| CN109580835A (zh) * | 2018-12-31 | 2019-04-05 | 辰欣药业股份有限公司 | 一种用液相色谱法分离测定阿格列汀有关物质的方法 |
| CN109668988A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-23 | 浙江华贝药业有限责任公司 | 一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法 |
| CN109668988B (zh) * | 2019-02-27 | 2021-07-02 | 浙江华贝药业有限责任公司 | 一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法 |
| CN111537622A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-08-14 | 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 | 杂环硼酸化合物的杂质及检测方法 |
| CN112480074A (zh) * | 2020-12-08 | 2021-03-12 | 湖南千金湘江药业股份有限公司 | 3,4-二氢嘧啶苯甲腈衍生物及其制备方法与应用 |
| CN115656389A (zh) * | 2022-11-17 | 2023-01-31 | 重庆科瑞南海制药有限责任公司 | 一种lc-ms测定苯甲酸阿格列汀中r-3-氨基哌啶二盐酸盐含量的方法 |
| CN115656389B (zh) * | 2022-11-17 | 2024-02-06 | 重庆科瑞南海制药有限责任公司 | 一种lc-ms测定苯甲酸阿格列汀中r-3-氨基哌啶二盐酸盐含量的方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103353491B (zh) | 2018-11-16 |
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| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |