CN103341175B - 一种丝素微球的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种丝素微球的制备方法,丝素微球可以做为药物缓释的载体。目前还没有包埋效率高,药物随丝素微球降解而缓慢均匀的释放的丝素微球的制备方法。本发明的步骤如下:在3-10wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,然后滴加入2-10wt%的凝固剂,在80-120转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液;将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;然后将冰微粒在0℃~室温下解冻,在0℃~室温下洗除凝固剂,离心或滤网收集得到丝素微球。本发明的包埋效率高,药物随丝素微球降解而缓慢均匀的释放,生物相容性优良。
Description
技术领域
本发明涉及一种丝素微球的制备方法,丝素微球可以做为药物缓释的载体。
背景技术
蚕丝丝素由18种氨基酸组成,由丝素制备的材料生物相容性优良,在体内可以缓慢降解,因此丝素微球在药物缓释载体方面的应用受到广泛的关注。在微球形态的丝素材料制备方面,目前已经有乳化(Yaowalak Srisuwanl)、凝固沉淀(Joydip Kundu)、喷雾干燥(Joo-Hong Yeo)、喷雾冷冻-冷冻干燥-交联(Esther wenk)等方法。如公开日为2008年08月20日,公开号为CN101244277的中国专利中,公开了一种丝素载药微球的制备方法,它采用水/油/水型的复乳技术和蛋白质的自组装技术,将水溶性药物与再生丝素溶液充分混合后,加入到搅拌中含有一定量乳化剂的油相中乳化,再加入有机溶剂搅拌,使丝素变性和结构Β化而形成乳白色结晶性丝素微粒的同时,药物被包埋,经离心除去上层液再加入有机溶剂,让丝素蛋白进一步结晶,药物继续被包埋,再离心除去溶剂和残留油相并收集微球;该丝素载药微球的制备方法属于乳化方法。
不同的制备方法的微球在包埋不同药物时的效果不同,释放机理和时间也不同,微球制备方法的设计需要针对药物的特性,目前还没有包埋效率高,药物随丝素微球降解而缓慢均匀的释放,生物相容性优良,适合于包埋和缓释纳米颗粒药物、多肽药物和酶类药物的丝素微球的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足,而提供一种包埋效率高,药物随丝素微球降解而缓慢均匀的释放,生物相容性优良的丝素微球的制备方法。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是:该丝素微球的制备方法的特点在于:所述制备方法的步骤如下:在3-10 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,然后滴加入2-10 wt%的凝固剂,在80-120转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液;将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;然后将冰微粒在0℃~室温下解冻,在0℃~室温下洗除凝固剂,离心或滤网收集得到丝素微球。本发明中的丝素微球具有包埋效率高,生物相容性优良的优点,药物随丝素微球降解而缓慢均匀的释放,药物缓释丝素微球可以直接使用外,还可以复合入生物材料中使用。
作为优选,本发明所述所需包埋和缓释的药物为纳米颗粒药物、多肽药物或酶类药物。
作为优选,本发明所述再生丝素溶液为家蚕、柞蚕和其他野蚕丝中的一种或者两种以上混合后的再生丝素溶液。
作为优选,本发明所述凝固剂为二甲亚砜、水溶性环氧化合物、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一种。
作为优选,本发明在0℃~室温下洗除凝固剂时,采用蒸馏水多次换水浸泡的方式洗除凝固剂。
作为优选,本发明所述丝素微球的粒径与喷雾细度有关,丝素微球的粒径呈离散分布,平均粒径在10~1000微米。
作为优选,本发明所述丝素微球在0℃~4℃保存待用,或经过低温真空干燥后保存待用,或经过冷冻干燥后保存待用。
作为优选,本发明当所用的凝固剂为水溶性环氧化合物时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;当所用的凝固剂为二甲亚砜时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存12小时以上;当所用的凝固剂为丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存24小时以上;当所用的凝固剂为甲醇或乙醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存48小时以上。
本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:包埋效率高,药物随丝素微球降解而缓慢释放,生物相容性优良;药物缓释丝素微球可以直接使用外,还可以复合入其他材料和饲料等中使用;本发明在喷雾—冷冻过程中已经形成了不溶于水的丝素微粒,无需再经冷冻干燥-交联;丝素微球内外固化结构均匀,降解缓慢均匀;因在低温下固化丝素微球,固化剂不与丝素和药物反应,这些水溶性的固化剂可以浸泡除去,而纳米颗粒药物、多肽、酶类药物与丝素蛋白有弱结合,被固定住在丝素微球内将随丝素微球降解而释放。本发明尤其适用于包埋和缓释纳米颗粒药物、多肽和酶类药物。
本发明与喷雾冷冻-冷冻干燥-交联方法的不同之处在于以下几个方面,(1)本发明在喷雾冷冻过程中已经形成了不溶于水的丝素微粒,无需再经冷冻干燥-交联,本发明中用冷冻干燥只是为了干燥,因此也可以用低温真空干燥,也可以直接使用;而喷雾冷冻-冷冻干燥-交联方法必须要经过冷冻干燥-交联。(2)本发明的丝素微球内外固化结构均匀,因此降解缓慢均匀;喷雾冷冻-冷冻干燥-交联方法在形成了微球后再交联固化,容易内外交联固化结构不均匀,快速降解。(3)本发明在低温下固化丝素微球,固化剂不与丝素和药物反应,这些水溶性的固化剂可以浸泡除去,而纳米颗粒药物、多肽、酶类药物与丝素蛋白有弱结合,被固定住在丝素微球内将随丝素微球降解而释放;喷雾冷冻-冷冻干燥-交联方法在形成了微球后再交联固化,需要高浓度的交联剂和温度等交联反应条件,这些有可能会使交联剂与包埋的药物发生反应。
附图说明
图1是通过透射电镜观察到的本发明实施例13中纳米银在丝素微球中的复合状态示意图。
图2是本发明实施例13中的丝素微球在37℃下蛋白酶溶液中的降解速度示意图。
具体实施方式
下面结合附图并通过实施例对本发明作进一步的详细说明,以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。
实施例1。
本实施例中制备的是缓释纳米银的丝素微球,该丝素微球的制备方法的步骤如下:将1000克家蚕茧壳用0.5wt % 的Na2CO3水溶液脱胶2次,每次30min,脱胶温度100℃,浴比1:100。脱胶后用水充分洗净,60℃干燥,得到丝素纤维。用CaCl2水溶液溶解丝素纤维,丝素纤维: CaCl2·2H2O:水=1g:25g:25ml,溶解温度为100℃,溶解时间为5min。将溶解后得到的溶液过滤后注入纤维素透析膜中透析3d,所用的纤维素透析膜的截留分子量为8000-14000。丝素溶液浓缩至4wt%,加入0.3wt%纳米银,滴加入5%的二缩水甘油基***,100转/分缓慢均匀混合。-20℃下喷雾,收集冰微粒。继续在-20℃下保存冰微粒24小时。将冰微粒室温下解冻,室温下洗除凝固剂,2小时左右换水一次,总共换水3次。用滤网收集丝素微球,低温真空干燥后保存待用。
在丝素敷料制备过程中,将2~10wt %的丝素微球均匀混合入丝素溶液,可制成缓释纳米银的丝素敷料。丝素敷料的制备方法可以参见专利号为ZL 200510060655.9的中国发明专利。
在胶原生物敷料制备过程中,复合入5wt %的纳米银丝素微球,随着丝素微球的降解可以缓慢释放出纳米银和丝素蛋白,起到长效抑菌,促进创面愈合的作用。
实施例2。
本实施例中制备的是缓释生长因子的丝素微球,该丝素微球的制备方法的步骤如下:将1000克家蚕茧壳用0.5wt %的Na2CO3水溶液脱胶2次,每次30min,脱胶温度100℃,浴比1:100。脱胶后用水充分洗净,60℃干燥,得到丝素纤维。用CaCl2水溶液溶解丝素纤维,丝素纤维: CaCl2·2H2O:水=1g:25g:25ml,溶解温度100℃,溶解时间5min。将溶解后得到的溶液过滤,注入纤维素透析膜中透析3d,所用的纤维素透析膜截留分子量为8000-14000。丝素溶液浓缩至4wt%。灭菌后的丝素溶液冷却到0℃左右,在0℃左右的低温条件下,加入0.5wt %的人表皮生长因子(hEGF),滴加入3wt %二甲亚砜,在100转/分钟左右缓慢均匀混合。在-40℃下喷雾,收集冰微粒。继续在-40℃下保存冰微粒48小时。将冰微粒在0~4℃下解冻。0~4℃下洗除凝固剂,0.5小时左右换水一次,总共换水5次。用离心收集丝素微球,冷冻干燥后保存待用。
在磺胺嘧啶银药膏中,加入10-20wt % hEGF丝素微球,混合均匀后直接涂在清创后的烧烫伤创面上。随着丝素微球的降解可以缓慢释放出hEGF和丝素蛋白,促进创面的愈合。
实施例3。
本实施例中制备的是缓释抗菌肽的丝素微球,该丝素微球的制备方法的步骤如下:将500克家蚕茧壳用0.5wt % Na2CO3水溶液脱胶2次,每次30min,脱胶温度100℃,浴比1:100。脱胶后用水充分洗净,60℃干燥,得到丝素纤维。用摩尔比为1:8:2的氯化钙、水、乙醇溶液溶解丝素纤维,溶解温度70℃,浴比1:25,时间10分钟。将溶解后得到的溶液过滤后注入纤维素透析膜中透析3d,所用的纤维素透析膜截留分子量为8000-14000。丝素溶液浓缩至5wt %,加入抗菌肽1wt %,滴加入5wt %乙醇,100转/分钟左右缓慢均匀混合。在-20℃下喷雾,收集冰微粒。继续在-20℃下保存冰微粒96小时。将冰微粒4℃下解冻。4℃下洗除凝固剂,2小时左右换水一次,总共换水5次。滤网收集丝素微球,冷冻干燥后保存待用。
可以将缓释丝素微球复合入各种膏状涂敷药物中,随着丝素微球的降解可以缓慢释放出抗菌肽,起到抑菌、促进皮肤病的愈合的作用。
实施例4。
本实施例中制备的是包埋饲料添加酶的丝素微球,该丝素微球的制备方法的步骤如下:用CaCl2水溶液溶解丝素纤维,丝素纤维: CaCl2·2H2O:水=1g:25g:25ml,溶解温度100℃,时间5min。将溶解后得到的溶液过滤后注入纤维素透析膜中透析3d,所用的纤维素透析膜截留分子量为8000-14000。丝素溶液浓缩至6wt %,加入酶,滴加入5wt %乙醇,100转/分钟缓慢均匀混合。在-40℃下喷雾,收集冰微粒。继续在-40℃下保存冰微粒96小时。将冰微粒在4℃下解冻。在4℃下洗除凝固剂,2小时左右换水一次,总共换水3次。滤网收集丝素微球,冷冻干燥后保存待用。
将包埋了酶的丝素微球混入动物饲料中,可以延长酶的活性,提高酶的活性温度,加宽酶活性pH范围。
实施例5。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在3wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为纳米颗粒药物,所用的再生丝素溶液为家蚕的再生丝素溶液。然后滴加入2 wt%的凝固剂,在100转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为二甲亚砜。将混合溶液喷雾入-50℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-50℃的空间保存48小时以上。然后将冰微粒在15℃下解冻,在15℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。在15℃下洗除凝固剂时,可以采用每2小时换水一次,总共换水5次的方式洗除凝固剂。
本发明可以在3-10 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物可以为纳米颗粒药物、多肽药物或酶类药物,所用的再生丝素溶液可以为家蚕、柞蚕和/或其他野蚕丝的再生丝素溶液。然后可以滴加入2-10 wt%的凝固剂,可以在80-120转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂可以为二甲亚砜、水溶性环氧化合物、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一种。
本发明可以将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存24小时以上,当所用的凝固剂为水溶性环氧化合物时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒可以继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;当所用的凝固剂为二甲亚砜时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒可以继续在-20℃~-80℃的空间保存12小时以上;当所用的凝固剂为丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒可以继续在-20℃~-80℃的空间保存24小时以上;当所用的凝固剂为甲醇或乙醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒可以继续在-20℃~-80℃的空间保存48小时以上。
本发明可以将冰微粒在0℃~室温下解冻,可以在0℃~室温下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。在0℃~室温下洗除凝固剂时,可以采用每隔几小时换水一次,换水多次的方式洗除凝固剂。本发明中所说的室温,通常情况是指25℃左右。
本发明中的丝素微球的粒径与喷雾细度有关,丝素微球的粒径呈离散分布,平均粒径在10~1000微米。本发明制备而成的丝素微球可以在0℃~4℃保存待用,也可以经过低温真空干燥后保存待用,还可以经过冷冻干燥后保存待用。
在本发明的丝素微球中可以复合多种药物,丝素微球又可以复合入各种生物敷料中,复合入各种膏状涂敷药物中,随着丝素微球的降解可以缓慢释放出药物,起到治疗作用。
实施例6。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在10 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为多肽药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入10 wt%的凝固剂,在80转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为甲醇。将混合溶液喷雾入-20℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃的空间保存96小时以上。然后将冰微粒在0℃下解冻,在0℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例7。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在5 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为酶类药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入9 wt%的凝固剂,在120转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为丙醇。将混合溶液喷雾入-80℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-80℃的空间保存72小时以上。然后将冰微粒在25℃下解冻,在25℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例8。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在8 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为多肽药物,所用的再生丝素溶液为家蚕的再生丝素溶液。然后滴加入6 wt%的凝固剂,在100转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为正丁醇。将混合溶液喷雾入-60℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-60℃的空间保存72小时以上。然后将冰微粒在10℃下解冻,在10℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例9。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在6 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为纳米颗粒药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入3 wt%的凝固剂,在100转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为异丙醇。将混合溶液喷雾入-30℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-30℃的空间保存72小时以上。然后将冰微粒在20℃下解冻,在20℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。在20℃下洗除凝固剂时,可以采用每2小时换水一次,总共换水5次的方式洗除凝固剂。
实施例10。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在4 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为酶类药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入7 wt%的凝固剂,在100转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为叔丁醇。将混合溶液喷雾入-40℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-40℃的空间保存72小时以上。然后将冰微粒在5℃下解冻,在5℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例11。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在7 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为酶类药物,所用的再生丝素溶液为家蚕的再生丝素溶液。然后滴加入4 wt%的凝固剂,在105转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为水溶性环氧化合物。将混合溶液喷雾入-70℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-70℃的空间保存24小时以上。然后将冰微粒在18℃下解冻,在18℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例12。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在9 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为多肽药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕。然后滴加入5 wt%的凝固剂,在95转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为乙醇。将混合溶液喷雾入-55℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-55℃的空间保存96小时以上。然后将冰微粒在22℃下解冻,在22℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。在22℃下洗除凝固剂时,可以采用每2小时换水一次,总共换水5次的方式洗除凝固剂。
实施例13。
本实施例中制备的是缓释纳米银的丝素微球,该丝素微球的制备方法的步骤如下:将1000克家蚕茧壳用0.5wt % 的Na2CO3水溶液脱胶2次,每次30min,脱胶温度100℃,浴比1:100。脱胶后用水充分洗净,60℃干燥,得到丝素纤维。用CaCl2水溶液溶解丝素纤维,丝素纤维: CaCl2·2H2O:水=1g:25g:25ml,溶解温度为100℃,溶解时间为5min。将溶解后得到的溶液过滤后注入纤维素透析膜中透析3d,所用的纤维素透析膜的截留分子量为8000-14000。丝素溶液浓缩至4wt%,加入0.05wt%纳米银,滴加入3%的二缩水甘油基***,100转/分缓慢均匀混合。-20℃下喷雾,收集冰微粒。继续在-40℃下保存冰微粒24小时。将冰微粒室温下解冻,室温下洗除凝固剂,2小时左右换水一次,总共换水6次。用滤网收集丝素微球,低温真空干燥后保存待用。
如附图1所示,显示的是在透射电镜下,纳米银在丝素微球中的复合状态,附图2显示的是丝素微球在37℃下蛋白酶溶液中的降解速度。
实施例14。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在5.5wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为多肽药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入6.5wt%的凝固剂,在98转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为甲醇。将混合溶液喷雾入-20℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃的空间保存96小时以上。然后将冰微粒在0℃下解冻,在0℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
实施例15。
本实施例中的丝素微球的制备方法的步骤如下:在10 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,该所需包埋和缓释的药物为多肽药物,所用的再生丝素溶液为柞蚕的再生丝素溶液。然后滴加入10 wt%的凝固剂,在102转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液,所用的凝固剂为甲醇。将混合溶液喷雾入-35℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃的空间保存96小时以上。然后将冰微粒在8℃下解冻,在8℃下洗除凝固剂,滤网收集得到丝素微球。
虽然本发明已以实施例公开如上,但其并非用以限定本发明的保护范围,任何熟悉该项技术的技术人员,在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰,均应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种丝素微球的制备方法,其特征在于:所述制备方法的步骤如下:在3-10 wt%的再生丝素溶液中加入所需包埋和缓释的药物,然后滴加入2-10 wt%的凝固剂,在80-120转/分钟的转速下缓慢搅拌,得到混合溶液;将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒,将冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;然后将冰微粒在0℃~室温下解冻,在0℃~室温下洗除凝固剂,离心或滤网收集得到丝素微球,所述所需包埋和缓释的药物为纳米颗粒药物、多肽药物或酶类药物,被固定在丝素微球内的纳米颗粒药物、多肽药物或酶类药物将随丝素微球降解而释放。
2.根据权利要求1所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:所述再生丝素溶液为家蚕、柞蚕和其他野蚕丝中的一种或者两种以上混合后的再生丝素溶液。
3.根据权利要求1所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:所述凝固剂为二甲亚砜、水溶性环氧化合物、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一种。
4.根据权利要求1所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:在0℃~室温下洗除凝固剂时,采用蒸馏水多次换水浸泡的方式洗除凝固剂。
5.根据权利要求1所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:所述丝素微球的粒径与喷雾细度有关,丝素微球的粒径呈离散分布,平均粒径在10~1000微米。
6.根据权利要求1所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:所述丝素微球在0℃~4℃保存待用,或经过低温真空干燥后保存待用,或经过冷冻干燥后保存待用。
7.根据权利要求3所述的丝素微球的制备方法,其特征在于:当所用的凝固剂为水溶性环氧化合物时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存2小时以上;当所用的凝固剂为二甲亚砜时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存12小时以上;当所用的凝固剂为丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存24小时以上;当所用的凝固剂为甲醇或乙醇时,将混合溶液喷雾入-20℃~-80℃的空间凝结,收集冰微粒后,冰微粒继续在-20℃~-80℃的空间保存48小时以上。
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