CN103333939A - 一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，包括如下步骤：(1)将脱脂脱矿后的骨胶原纤维(骨素颗粒)，在碱性溶液中预处理；(2)然后将其在碱和蛋白酶的共同作用下降解；(3)过滤、水洗后，沸水灭酶；(4)加去离子水在一定的温度下抽提，过滤得到明胶粗提液；(5)明胶粗提液进行离子交换、脱色、浓缩、干燥、粉碎和包装，即可得到明胶产品。本发明与传统酶法制备骨胶工艺相比，采取碱酶复合降解，提高了降解效率，达到预处理周期短，同时明胶纯度高，为实现明胶的绿色制备提供了依据。

Description

一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法

技术领域

本发明涉及一种明胶的制备方法，尤其涉及一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法。 

背景技术

目前，我国对骨明胶需求逐年增加，骨明胶生产规模也逐年扩大，但各明胶生产企业的骨明胶生产工艺却仍然很难得到大的突破，传统的碱法制备骨明胶工艺，因其生产周期长(浸灰工序耗时长达40～60天)，生产耗能大，生产效率低，耗水量大，因此，急需开发一种节能高效的骨明胶生产新工艺。 

自上世纪五十年代，人们就开始尝试将蛋白酶催化胶原蛋白的降解作用引入到明胶生产中。与传统的碱法制胶工艺相比，酶法生产周期将会大大缩短。因此，国内外明胶工作者一直很重视对酶法制胶的研究。但是到目前为止，还尚没有将酶法制备骨胶工艺应用于骨明胶的大生产中，这与酶降解胶原反应难控制有关。 

专利公开号CN 1473901A公开了一种酶降解骨胶原制备明胶的方法，具体包括以下步骤：采用脱脂不脱矿的骨粒为原料，磨碎成尺寸在4～8mm的骨粒，加酸或偏碱性蛋白酶，调pH为1.5～4或7～8，控制胶原降解，加酶量为骨泥重量的2～8‰；再热水抽提，分离过滤明胶抽提液，得到高纯度的硬胶囊明胶溶液。从骨粒磨碎到胶液产生仅为7～10小时，此外，工艺用水量非常少，从根本上扭转了传统工艺耗水量大、生产周期长、污染严重的问题；降低了生产成本，提高了经济、环境效益。但是，选用脱脂不脱矿的骨粒直接酶解提胶，导致明胶液中残留大量无机盐离子，给后续的分离工序造成困难。 

专利公开号CN 101107974A公开了一种组合酶制备食用明胶的方法，具体步骤如下：加入干骨素质量1～3‰的酸性蛋白酶，于55～60℃进行第一次降解2～5小时，高温灭酶提胶，余留骨素中加入2～3‰的中性或偏碱性蛋白酶，于55～60℃下第二次酶解，灭酶提胶。第一次酶解所得明胶粘度为2.3mPa.s，冻力139Bloom g；第二次酶解所得明胶粘度为3.4mPa.s，冻力101Bloom g。该方法提出利用专一性不同的蛋白酶依次酶解骨素，增加了酶切位点，使骨素尽 可能被降解完全，同时将两种酶的酶解过程分离，使小分子量的明胶肽产生较少，但这势必会导致得到的明胶分子量低。所以此工艺选用的蛋白酶制备的明胶冻力较低。 

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本申请的发明人进行了反复的深入研究。 

本发明的目的在于提供一种碱与酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的新方法。 

本申请的发明人令人惊奇地发现如下技术方案可以实现上述目的。 

一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，包括如下步骤： 

(1)粉碎和筛选脱脂脱矿后的骨胶原纤维(骨素颗粒)，在碱性溶液中浸泡处理； 

(2)将(1)的产物在碱和蛋白酶的共同作用下降解； 

(3)过滤后，沸水灭酶； 

(4)水洗至一定的pH； 

(5)加去离子水，在一定温度下抽提，然后过滤得到明胶粗提液； 

(6)明胶粗提液进行离子交换、脱色、浓缩、干燥、粉碎和包装。 

根据本发明所述的方法，优选地，步骤(1)为：粉碎和筛选脱脂脱矿后的骨素颗粒，使粒径在5～12mm，然后在pH为8.0～10.0的碱性溶液中浸泡4～12小时。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(1)中，脱脂脱矿后的骨素颗粒与碱性溶液的体积比例为1∶2～1∶5；碱性溶液为氢氧化钙水溶液、氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(2)中，碱和蛋白酶的溶液中碱含量为0.1～0.5％，碱和蛋白酶的溶液中蛋白酶浓度为1～10ppm。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(2)中，以克为单位的骨素颗粒重量与以立方厘米为单位的碱和蛋白酶的溶液体积的比例为1∶1～1∶6。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(2)中，所用蛋白酶为碱性蛋白酶，碱为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾，降解温度为20～50℃，降解时间为1～15小时。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(3)中，沸水灭酶的温度为80～110℃；沸水灭酶的时间为10～30分钟。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(4)中，水洗至pH7.0～7.5。 

根据本发明所述的方法，优选地，在步骤(5)中，以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单位的水体积的比例为1∶1～1∶6，热水抽提的温度为60～90℃。 

根据本发明所述的方法，优选地，步骤(1)的脱脂脱矿后的骨素通过如下步骤获得：将动物骨骼粉碎至粒径为2～5cm，然后采用高压水力方法脱脂，再采用浓度为0.2～1.0mol/L的盐酸溶液脱钙。 

与传统碱法生产骨明胶工艺相比，本发明采用碱和酶复合降解骨胶原纤维，缩短了生产时间，降低了工业化实现的难度。例如，预处理(浸灰)周期由原来的60～90天缩短至15小时左右。此外，本发明的方法减少了大量碱液的排放，降低了环境污染。与现有酶法制备骨明胶相比，本发明采用碱性蛋白酶和碱复合，所用酶量和碱量较少。此外，本发明的方法降低了环境污染，提高了经济效益。与未脱除矿物质而直接酶解提胶工艺相比，本发明的方法采用脱钙骨素，明胶粗提液经过过滤、离子交换工艺，大大降低了明胶液中无机盐含量，提高了明胶的质量。 

附图说明

图1是本发明一种具体实施方式的生产工艺路线。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。 

在本发明中，所述的“粒径”，无特殊说明，均表示过筛粒径。 

<骨胶原纤维>

本发明提供一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法。用于本发明方法的动物骨骼可以为羊骨、牛骨、猪骨、或鸡骨等，优选为羊骨、或牛骨，更优选为羊骨。 

本发明的步骤(1)的脱脂脱矿后的骨胶原纤维(骨素)可以通过如下步骤获得：将动物骨骼粉碎，采用高压水力方法脱脂和酸溶液脱钙。例如，将动物骨骼粉碎至粒径为2～5cm，优选为3～4cm。脱钙使用的酸溶液可以为盐酸，优选是浓度为0.2～1.0mol/L盐酸，更优选是浓度为0.5～0.8mol/L盐 酸，再优选是浓度为0.6～0.7mol/L盐酸。 

<骨明胶生产工艺>

图1为本发明的一种具体实施方式的骨明胶生产工艺路线。经过碱酶处理后，再进行热水提胶。这样可以缩短生产时间，并降低酶的用量和碱的用量。 

本发明提供一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法包括如下步骤：(1)碱性溶液浸泡步骤；(2)碱和酶降解步骤；(3)沸水灭酶步骤；(4)热水抽提步骤；(5)离子交换步骤；(6)脱色、干燥、粉碎等步骤。下面将进行详细描述。 

<碱性溶液浸泡步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，步骤(1)为：将脱脂脱矿后的骨素在碱性溶液中浸泡。可以将脱脂脱矿后的骨素粉碎至粒径5～12mm，优选为7～10mm。这样有利于骨胶原快速降解。用于浸泡脱脂脱矿后的骨素颗粒的碱性溶液的pH为8.0～10.0，优选为8.5～9.5。脱脂脱矿后的骨素在碱性溶液中浸泡温度可以为室温。脱脂脱矿后的骨素颗粒在碱性溶液中浸泡时间优选为4～12小时，更优选为6～11小时，再优选为8～10小时。这样可以保证骨胶原降解充分且效率较高。 

在本发明方法的步骤(1)中，脱脂脱矿后的骨素与碱性溶液的体积比例可以为1∶2～1∶5，优选为1∶3～1∶4。浸泡脱脂脱矿后的骨素的碱性溶液可以为氢氧化钠水溶液、氢氧化钙水溶液或氢氧化钾水溶液；优选为氢氧化钠水溶液、或氢氧化钾水溶液；更优选为氢氧化钠水溶液。这样有利于后续处理工序的进行。 

<碱和酶降解步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，步骤(2)为：在碱和蛋白酶的溶液中降解。为了保证酶的活力，在步骤(2)中，降解温度可以为20～50℃，优选为25～45℃，更优选为30～40℃，最优选为38℃。降解时间可以为1～15小时，优选为5～12小时，更优选为8～10小时。这样可以保证骨胶原纤维的酶解过程充分且效率较高。 

在本发明方法的步骤(2)中，以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单 位的碱和蛋白酶的溶液体积的比例可以为1∶1～1∶6，优选为1∶2～1∶5，更优选为1∶3～1∶4。具体的实例包括以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单位的碱和蛋白酶的溶液体积的比例为1∶2、1∶4、1∶6。 

在本发明方法的步骤(2)中，碱和蛋白酶的溶液中碱含量为0.1～0.5％，优选为0.3～0.4％，这样有利于提高酶的活力。在碱和蛋白酶的溶液中，蛋白酶浓度为1～10ppm，优选为2～8ppm，更优选为3～6ppm。这样可以保证酶充分发挥酶解效力。在本发明中，所用的蛋白酶可以为为木瓜蛋白酶(7万U/g)、胰蛋白酶(250万U/g)和碱性蛋白酶(10万U/mL)，优选为碱性蛋白酶；碱为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾，优选为氢氧化钠。配制所述的水溶液使用的水优选为去离子水、蒸馏水、或MILLIPORE纯水。 

碱性蛋白酶是生物催化剂，具有高度专一性，即不同的蛋白酶肽链的作用位点不同，但蛋白质内切酶对骨胶原纤维的降解很困难，在工业生产中，通常采用的石灰水对胶原纤维的降解随机性强并且用时较长，使其工艺的控制性较差。本方法主要通过碱与碱性蛋白酶协同作用实现胶原纤维的可控降解，缩短了处理时间，降解的可控制强，同时提高了明胶生产的效率和质量，以及工业化的可行性。在本发明中，碱性蛋白酶是本领域所熟知的，这里不再赘述。 

<沸水灭酶步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，步骤(3)为：降解后过滤，然后沸水灭酶。过滤的方法是本领域所熟知的那些，这里不再赘述。优选地，所述的沸水为沸腾的去离子水、沸腾的蒸馏水、或沸腾的MILLIPORE纯水。沸水灭酶的温度可以为80～110℃，优选为85～105℃，更优选为90～100℃。沸水灭酶的时间可以为10～30分钟，优选为12～25分钟，更优选为15～20分钟。 

<热水抽提步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，步骤(4)为：水洗至一定的pH，步骤(5)为：加水，以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单位的水体积的比例为1∶1～1∶6，优选为1∶2～1∶5；在一定温度下抽提，然后过滤得到明胶粗提液。水洗至pH7.0～7.5；热水抽提的温度可以为60～90℃，优选为65～85℃，更优选为70～80℃。如果温度高于90℃，将会破坏 胶液的粘度；如果温度低于60℃，将会降低产率。热水抽提的时间可以为1～5小时，优选为2～4小时。这样可以保证将明胶抽提充分。抽提得到的溶液进行过滤以除去杂质。过滤的方法是本领域所熟知的那些，这里不再赘述。热水抽提使用的水优选为去离子水、蒸馏水、或MILLIPORE纯水。 

<离子交换步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，步骤(6)为：明胶粗提液进行离子交换。在本发明的离子交换步骤中，将明胶粗提液过滤后，通过离子交换树脂纯化，得到明胶溶液。优选地，将明胶粗提液过滤后，通过阳离子交换树脂交换，然后通过阴离子交换树脂交换，得到明胶溶液。这样可以保证纯化效果。 

<脱色、干燥、粉碎等步骤> 

在本发明的碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，优选包括如下步骤：(6)离子交换后的明胶进行活性炭吸附脱色、干燥、和粉碎。这样可以获得质量更高的明胶。 

在本发明的干燥步骤中，将明胶溶液浓缩，然后热风干燥。优选地，将明胶溶液浓缩至原料体积的1/2，优选为1/3，更优选为1/4。这样可以缩短干燥时间，提高产品质量。浓缩设备是本领域所已知的那些，例如双效浓缩器。优选地，浓缩后的明胶溶液在70℃以下、60℃以下、50℃以下、更优选40～50℃的热风中干燥；或者在20℃～40℃下干燥。干燥至明胶中水分含量低于20wt％，优选14wt％，更优选12wt％即可。这样可以将明胶很好地保存。 

在下文的实施例中，骨素∶碱和蛋白酶的溶液(W/V)均为质量与体积比，单位g/mL；骨素∶水(W/V)均为质量与体积比，单位g/mL，除非特别声明；所用的碱性蛋白酶活力为10万U/ml；所述的碱液为氢氧化钙溶液。 

在本发明中，以下实施例的总体方法如下： 

将新鲜的羊骨，剔除表面的筋、肉和骨膜，砸碎至粒径2～5cm，水力脱脂，再用0.2mol/L～1.0mol/L的盐酸脱钙；中和、水洗得到羊骨胶原纤维(骨素颗粒)。 

粉碎和筛选骨素颗粒，使粒径在10～15mm，再用2倍体积pH为8.0～ 10.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.0～8.5左右，持续浸泡4～12小时。 

配制pH为8.0～10.0、碱性蛋白酶浓度为1～10ppm的碱和蛋白酶的溶液，按骨素∶碱和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶1、1∶2、1∶4、或1∶6，于30～45℃下进行降解；降解反应时间为2～15小时。 

降解完成后，过滤，加沸水快速搅拌灭酶10～30分钟，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶2、1∶4或1∶5将二者混合；于60～90℃下进行提胶。 

对得到的浑浊明胶溶液进行离心分离，去除固体滤渣，得到明胶粗提液。 

分离出的明胶粗液用过滤棉过滤，经离子树脂交换除去无机盐离子。具体步骤为：过滤后的明胶溶液先以8倍柱体积/h的流速通过阳离子交换树脂交换，然后以8倍柱体积/h的流速通过阴离子交换树脂交换；收集交换后的明胶溶液。 

离子交换后的明胶溶液经过活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到明胶。所述的干燥步骤具体如下：用双效浓缩器浓缩至原液浓度的1/2；40℃热风干燥明胶至水分含量＜14wt％。 

下面将描述本发明的明胶的测试方法。 

<凝冻强度测试方法> 

所用仪器为组织分析仪，参照GB6783-1994。 

<分子量的测试方法> 

所使用仪器是美国Waters HPLC，配以Waters2414折光检测器，三个色谱柱串联，柱温为30℃，淋洗液为混合磷酸盐溶液(磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、叠氮钠)，流速0.8mL/min。 

检测的明胶样品浓度为4mg/mL，测定重均分子量。 

<灰分测试方法> 

采用灼烧法，参照GB 5009.4-2010。 

实施例1

选用脱脂脱矿的羊骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右，持续浸泡8小时。 

配制氢氧化钠含量为0.3％、碱性蛋白酶浓度为6ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于38℃下进行酶解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶4，于70℃下抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在225Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1wt％。 

实施例2

选用脱脂脱矿的羊骨骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右。 

配制氢氧化钠含量为0.3％、碱性蛋白酶浓度为6ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于30℃下进行酶解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶4，于60℃，抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在225Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1wt％。 

实施例3

选用脱脂脱矿的羊骨骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右。 

配制氢氧化钠含量为0.3％、碱性蛋白酶浓度为6ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于40℃下进行降解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH 为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶2，于65℃，抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在230Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1％。 

实施例4

选用脱脂脱矿的羊骨骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右。 

配制氢氧化钠含量为0.35％、碱性蛋白酶浓度为10ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于30℃下进行降解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶4，于80℃，抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在225Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1wt％。 

实施例5

选用脱脂脱矿的羊骨骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右。 

配制氢氧化钠含量为0.4％、碱性蛋白酶浓度为6ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于30℃下进行降解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶5，于75℃，抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在235Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1wt％。 

实施例6

选用脱脂脱矿的羊骨骨素30g，粒径在7～10mm，加2倍体积的pH为9.0的碱液浸泡，至pH稳定在8.5左右。 

配制氢氧化钠含量为0.35％、碱性蛋白酶浓度为6ppm的氢氧化钠和蛋白酶的溶液，按骨素∶氢氧化钠和蛋白酶的溶液(W/V)＝1∶2，于30℃下进行降解，降解反应时间为8小时。 

降解后过滤，置于沸水中，快速搅拌20分钟使酶失去活性，水洗至pH为7.0～7.5。 

按骨素∶水(W/V)＝1∶4，于85℃，抽提3小时，得到明胶粗提液。 

采用过滤棉过滤、阴阳离子交换树脂纯化得到明胶澄清溶液，再经活性炭吸附脱色、干燥、粉碎得到固体明胶。 

所得明胶的凝冻强度在225Bloom g以上，重均分子量大于60000，灰分小于0.1wt％。 

本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。 

Claims (10)

1.一种碱酶复合降解骨胶原纤维制备明胶的方法，包括如下步骤：

(1)粉碎和筛选脱脂脱矿后的骨胶原纤维(骨素颗粒)，在碱性溶液中浸泡处理；

(2)将(1)的产物在碱和蛋白酶的共同作用下降解；

(3)过滤后，沸水灭酶；

(4)水洗至一定的pH；

(5)加去离子水，在一定温度下抽提，然后过滤得到明胶粗提液；

(6)明胶粗提液进行离子交换、脱色、浓缩、干燥、粉碎和包装。

2.根据权利要求1所述的方法，步骤(1)为：粉碎和筛选脱脂脱矿后的骨素颗粒，使粒径在5～12mm，然后在pH为8.0～10.0的碱性溶液中浸泡4～12小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中，脱脂脱矿后的骨素颗粒与碱性溶液的体积比例为1∶2～1∶5；碱性溶液为氢氧化钙水溶液、氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中，碱和蛋白酶的溶液中碱质量分数为0.1～0.5％，蛋白酶的浓度为1～10ppm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中，以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单位的碱和蛋白酶的溶液体积的比例为1∶1～1∶6。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中，所用蛋白酶为碱性蛋白酶，碱为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾，反应温度为10～60℃，降解时间为1～15小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(3)中，沸水灭酶的温度为80～110℃；时间为10～30分钟。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(4)中，水洗至pH7.0～7.5。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(5)中，以克为单位的骨素重量与以立方厘米为单位的水体积的比例为1∶1～1∶6。热水抽提的温度为60～90℃。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)的脱脂脱矿后的骨素颗粒通过如下步骤获得：将动物骨骼粉碎至粒径为2～5cm，然后采用高压水力方法脱脂，再采用浓度为0.2～1.0mol/L的盐酸溶液脱钙。