CN103323558B - 一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 - Google Patents
一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103323558B CN103323558B CN201310298598.2A CN201310298598A CN103323558B CN 103323558 B CN103323558 B CN 103323558B CN 201310298598 A CN201310298598 A CN 201310298598A CN 103323558 B CN103323558 B CN 103323558B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- solid phase
- ginkgo biloba
- gingko leaf
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 title claims abstract description 44
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 title claims description 17
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title claims description 16
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 title abstract description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title abstract description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 17
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 18
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 9
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 25
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 abstract description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 abstract 1
- 238000003859 hyphenated technique Methods 0.000 abstract 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 abstract 1
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 19
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 12
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 12
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N bilobalide Chemical compound O([C@H]1OC2=O)C(=O)[C@H](O)[C@@]11[C@@](C(C)(C)C)(O)C[C@H]3[C@@]21CC(=O)O3 MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N 0.000 description 10
- -1 flavonol glycosides Chemical class 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 8
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 8
- SQOJOAFXDQDRGF-WJHVHIKBSA-N ginkgolide B Natural products O=C1[C@@H](C)[C@@]2(O)[C@@H]([C@H](O)[C@]34[C@@H]5OC(=O)[C@]23O[C@H]2OC(=O)[C@H](O)[C@@]42[C@H](C(C)(C)C)C5)O1 SQOJOAFXDQDRGF-WJHVHIKBSA-N 0.000 description 8
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 7
- ORQIZUYAGXZVPI-LBPRGKRZSA-N Bilobanon Natural products O1C(CC(C)C)=CC([C@@H]2CC(=O)C(C)=CC2)=C1 ORQIZUYAGXZVPI-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 6
- ORQIZUYAGXZVPI-UHFFFAOYSA-N bilobanone Natural products O1C(CC(C)C)=CC(C2CC(=O)C(C)=CC2)=C1 ORQIZUYAGXZVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000007919 dispersible tablet Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 241000218628 Ginkgo Species 0.000 description 5
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 description 5
- AMOGMTLMADGEOQ-FNZROXQESA-N Ginkgolide C Chemical compound O([C@H]1O2)C(=O)[C@H](O)C31[C@]14[C@@H](O)[C@@H]5OC(=O)[C@@H](C)[C@]5(O)[C@@]12C(=O)O[C@@H]4[C@@H](O)[C@H]3C(C)(C)C AMOGMTLMADGEOQ-FNZROXQESA-N 0.000 description 5
- RTATXGUCZHCSNG-TYSPDFDMSA-N Kaempferol-3-O-rutinoside Natural products OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(C)O[C@H]1OCC1[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=CC(O)=CC=2)=O)O1 RTATXGUCZHCSNG-TYSPDFDMSA-N 0.000 description 5
- RTATXGUCZHCSNG-QHWHWDPRSA-N Nicotiflorin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=CC(O)=CC=2)=O)O1 RTATXGUCZHCSNG-QHWHWDPRSA-N 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- AMOGMTLMADGEOQ-DPFZUGDXSA-N ginkgolide C Natural products O=C1[C@@H](C)[C@]2(O)[C@H]([C@H](O)[C@@]34[C@H]5[C@H](O)[C@@H](C(C)(C)C)[C@]63[C@H](O)C(=O)O[C@H]6O[C@@]24C(=O)O5)O1 AMOGMTLMADGEOQ-DPFZUGDXSA-N 0.000 description 5
- LMEHVEUFNRJAAV-HOSIAMDISA-N ginkgolide J Natural products O=C1[C@H](C)[C@@]2(O)[C@H](O1)C[C@@]13[C@H]4[C@@H](O)[C@@H](C(C)(C)C)[C@@]51[C@@H](O)C(=O)O[C@@H]5O[C@@]23C(=O)O4 LMEHVEUFNRJAAV-HOSIAMDISA-N 0.000 description 5
- SQOJOAFXDQDRGF-MMQTXUMRSA-N ginkgolide-b Chemical compound O[C@H]([C@]12[C@H](C(C)(C)C)C[C@H]3OC4=O)C(=O)O[C@H]2O[C@]24[C@@]13[C@@H](O)[C@@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@]21O SQOJOAFXDQDRGF-MMQTXUMRSA-N 0.000 description 5
- LMEHVEUFNRJAAV-UKWFQYJJSA-N ginkgolide-j Chemical compound O([C@H]1O2)C(=O)[C@H](O)[C@@]31[C@]14C[C@@H]5OC(=O)[C@@H](C)[C@]5(O)[C@@]12C(=O)O[C@@H]4[C@H](O)[C@H]3C(C)(C)C LMEHVEUFNRJAAV-UKWFQYJJSA-N 0.000 description 5
- RTATXGUCZHCSNG-ZFDPGQBLSA-N nicotiflorin Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC2=C(c3ccc(O)cc3)Oc3c(c(O)cc(O)c3)C2=O)O1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 RTATXGUCZHCSNG-ZFDPGQBLSA-N 0.000 description 5
- RTATXGUCZHCSNG-UHFFFAOYSA-N nicotiflorine Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=CC(O)=CC=2)=O)O1 RTATXGUCZHCSNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 5
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 description 5
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 description 5
- GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N Isorhamnetin Natural products C1=C(O)C(C)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KEIZXGINFPDITQ-UHFFFAOYSA-N UNPD138008 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=C(OC2C(C(O)C(O)C(COC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KEIZXGINFPDITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N isorhamnetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008800 isorhamnetin Nutrition 0.000 description 4
- UIDGLYUNOUKLBM-GEBJFKNCSA-N isorhamnetin-3-O-rutinoside Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)O)O2)O)=C1 UIDGLYUNOUKLBM-GEBJFKNCSA-N 0.000 description 4
- BGLPQQKZNUKSAR-UHFFFAOYSA-N isorhamnetin-3-O-rutinoside Natural products COc1ccc(cc1O)C2=C(OC3OC(COCC4OC(O)C(O)C(O)C4O)C(O)C(O)C3O)C(=O)c5c(O)cc(O)cc5O2 BGLPQQKZNUKSAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002222 matrix solid-phase dispersion Methods 0.000 description 4
- IEPKWJCBNGNVDF-UHFFFAOYSA-N narcissin Natural products OC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC2C(C(O)C(O)C(COC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)O2)O)=C1 IEPKWJCBNGNVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- FPUXKXIZEIDQKW-MFJLLLFKSA-N ginkgolide A Natural products O=C1[C@H](C)[C@@]2(O)[C@@H](O1)C[C@]13[C@@H]4OC(=O)[C@]21O[C@@H]1OC(=O)[C@H](O)[C@]31[C@@H](C(C)(C)C)C4 FPUXKXIZEIDQKW-MFJLLLFKSA-N 0.000 description 3
- FPUXKXIZEIDQKW-VKMVSBOZSA-N ginkgolide-a Chemical compound O[C@H]([C@]12[C@H](C(C)(C)C)C[C@H]3OC4=O)C(=O)O[C@H]2O[C@]24[C@@]13C[C@@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@]21O FPUXKXIZEIDQKW-VKMVSBOZSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 3
- FPUXKXIZEIDQKW-UHFFFAOYSA-N 9H-1,7a-(Epoxymethano)-1H,6aH-cyclopenta[c]furo[2,3-b]furo[3',2':3,4]cyclopenta[1,2-d]furan-5,9,12(4H)-trione, 3-tert-butylhexahydro-4,7b-dihydroxy-8-methyl- Chemical compound O=C1OC2CC(C(C)(C)C)C34C(O)C(=O)OC4OC41C32CC1OC(=O)C(C)C41O FPUXKXIZEIDQKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属中药制剂分析领域，涉及一种多种银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法。本发明将银杏叶制剂粉碎后过筛，取一定量的银杏叶制剂样品和固相分散剂混合均匀，将混合材料均匀装入一个底部垫有微孔滤膜的注射器后洗脱，能提取出银杏叶制剂中的黄酮类和内酯类成分，与HPLC-DAD-ELSD联用技术结合，可用于快速准确测定16种主要有效成分含量，快速反映银杏叶制剂质量，提高生产效率。本方法简便、准确、样品用量少，提取效率高、提取时间短、重现性好、回收率高。
Description
技术领域
本发明涉及多种银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法，属于中药制剂分析领域。
技术背景
银杏叶制剂是目前治疗心脑血管疾病有效且常用的天然药物。统计数据表明，全球市场银杏叶制品的年销售额高达550亿元，我国银杏叶制剂年销售额从2000年的6亿元发展到2012年的120亿元，目前已成为心脑血管***植物药领先品种，我国目前已批准不同规格的银杏制剂100余个，相关制剂在我国应用广泛。
银杏叶制剂在中、美、欧等国药典中均有收载。中国、美国、欧洲药典标准将黄酮类和内酯类成分分别测定，其中黄酮类成分均以酸水解黄酮醇苷后测定总黄酮苷元含量，并折算成总黄酮醇苷含量，酸水解后测定黄酮苷元的含量仅能反应黄酮类成分的总量，难以体现不同成分间的差异。内酯类成分均通过超声提取、乙酸乙酯提取后蒸干和甲醇复溶等步骤处理后进行检测，大量辅料的存在使样品制备过程更为繁琐，样品制备方法耗时费力，在生产中使用难以及时获得准确的样品质量信息，影响了生产效率，同时使用过多的有机试剂也造成一定程度的污染。建立一种更加有效、快速的分析样品制备方法，对于快速分析银杏叶制剂的质量具有重要意义。
基质分散固相提取(MSPD，matrix solid-phase dispersion)是美国Louisiana州立大学的Barker教授在1989年提出并给予理论解释的一种快速样品处理技术。其原理是将涂渍有多种聚合物的载体固相提取材料与样品一起研磨，得到半干状态的混合物并将其作为填料装柱，然后用不同的溶剂淋洗柱子，将各种待测物洗脱下来。其优点是浓缩了传统的样品前处理中的样品匀化、提取、净化等过程，不需要进行反复提取、浓缩、定容等操作步骤，避免了样品制备过程中的损失。MSPD适用于药物的残留分析，它是一种简单高效实际的提取净化方法，适用于各种分子结构和极性农药残留的提取净化，提高了分析速度、减少了试剂用量、适于自动化分析。目前该方法常用于药品杂质分析、农药残留检测和重金属分析等实验的样品前处理中，在中药制剂成分分析中应用较少。
HPLC-DAD-ELSD联用技术可快速同步检测有无紫外吸收的化学成分，近年来在我国应用较为成熟，各大科研院所与高校发表过大量相关文献，其稳定性好、应用性强的特点使其成为公认的中药研发的常规设备。该方法已在2010版《中国药典》中使用，经验证该方法具有良好的实用性，具备推广的通用性与普适性。
目前银杏制剂在生产中主要采用传统的热回流提取法提取样品，并分别进行黄酮和内酯的含量测定，如果能建立一种分析用样品的快速制备方法，简化样品提取步骤，减少样品提取时有机试剂使用，实现黄酮和内酯同步定量分析，可帮助企业生产时快速及时监控产品生产全过程质量，可及时发现质量有问题的样品进一步加工，提高生产效率，降低生产成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法，解决了传统分析样品制备方法提取时间长、溶剂用量大、有效成分制备过程损失多、不能及时反映待测样品质量等问题。该方法具有高效、快速、操作简便、有机溶剂消耗少、且集提取、净化、分离一步完成，最大程度的避免了样品的损失。
本发明通过基质固相分散提取法针对部分市售银杏叶制剂进行样品前处理，选择制剂中的黄酮和内酯作为方法考察指标，与常规样品处理方法进行比较。所述化合物分别为：Quercetin3-O-2，6-dirhamnosylglucoside、Kaempferol 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin 3-O-rutinoside、Kaempferol 3-O-rutinoside、lsorhamnetin 3-O-rutinoside、Quercetin 3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol 3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol 3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside、Quercetin、Kaempferol、Isorhamnetin、Ginkgolide A、Ginkgolide B、Ginkgolide C、Ginkgolide J、Bilobalide。
本发明方法包含以下步骤：
将银杏叶制剂粉碎后过筛，取一定量的银杏叶制剂样品和固相分散剂，置于研钵中，加入一定量的去离子水，充分研磨，使银杏叶制剂粉末与柱层析材料混合均匀，将混合后的材料均匀装入一个底部垫有微孔滤膜的注射器中，压实后上端垫少量脱脂棉。先加入一定量的去离子水洗脱，洗脱液弃去，随后加入一定量的混合有机溶剂洗脱，收集一定量的洗脱液，定容后用高效液相色谱分析测定提取液中Quercetin 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Kaempferol 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin3-O-rutinoside、Kaempferol 3-O-rutinoside、Isorhamnetin 3-O-rutinoside、Quercetin3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol 3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside、Quercetin、Kaempferol、lsorhamnetin、Ginkgolide A、GinkgolideB、Ginkgolide C、Ginkgolide J、Bilobalide有效成分的含量。
上述基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法中，银杏叶制剂粉碎后需经过筛以保证一定的均匀度，样品取样量为0.1-0.5g，粉碎后过100目筛。
上述基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法中，固相分散剂需加入足够量，以保证银杏叶制剂粉末分散均匀，且能与固相分散剂在短时间内充分吸附与解吸附，固相分散剂为C18柱层析材料，加入量为2-10g，材料粒径为80-100目。
上述基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法中，底部垫有微孔滤膜的注射器为保证所得洗脱液可直接进高效液相色谱仪检测，滤膜为有机相0.22μm。
上述基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法中，混合有机溶剂洗脱液会影响提取液中有效成分的种类与含量，所用洗脱液是水与甲醇组成的混合溶液，用量为5-15mL，甲醇含量为50％-100％。
上述基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法中，洗脱剂流速也会影响最终的提取效果，本方法的洗脱剂流速为0.5-1mL/min。
本发明提取银杏叶制剂中黄酮和内酯类有效成分的方法，该方法简便、准确、样品用量少，提取效率高、提取时间短、重现性好、回收率高。本方法与HPLC-DAD-ELSD联用技术相结合，可用于准确测定银杏叶制剂中16种黄酮和内酯类成分的含量，更加快速全面客观的检测银杏叶制剂的质量，可帮助企业提高生产效率。
附图说明
图1是基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法与常规超声提取法所得样品提取液的16种有效成分色谱图。
图2是3个不同厂家银杏叶制剂应用基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法所得样品提取液的16种有效成分色谱图。
具体实施方式
实施例1：以银杏酮酯分散片为对象，采用基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法与常规超声提取法提取效率比较。
仪器与材料：
仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪(包括G1315B二极管阵列检测器和All-tech蒸发光散射检测器联用)，色谱柱为安捷伦C18色谱柱(250×4.6mm，5.0Micron80A)。
材料：银杏酮酯分散片(江苏神龙药业有限公司，批号：111215)乙腈(默克，色谱纯)，甲酸(默克，色谱纯)，去离子水由Millipore Direct-Q纯净水发生器制得，Quercetin3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Kaempferol 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin 3-O-rutinoside、Kaempferol 3-O-rutinoside、Isorhamnetin 3-O-rutinoside、Quercetin 3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol 3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol 3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside由实验室自制，经1H NMR和13C NMR进行结构鉴定，高效液相色谱法检测纯度均大于98％，Quercetin、Kaempferol、Isorhamnetin、GinkgolideA、Ginkgolide B、Ginkgolide C、Ginkgolide J、Bilobalide对照品购自中国药品生物制品检定所。
样品前处理：
常规方法：将银杏酮酯分散片粉碎后过100目筛，取粉末约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加甲醇回流提取4小时，浓缩至较小体积后转移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度定容，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得。
基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法：将银杏酮酯分散片粉碎后过100目筛，取粉末约0.2g，加入5-10g的C18柱层析材料，置于研钵中，加入0.5-2mL去离子水，充分研磨5分钟，将混合后的材料均匀装入一个底部垫有微孔滤膜的注射器中，压实后上端垫少量脱脂棉。以0.5-1mL/min流速先加入5-15mL去离子水洗脱，洗脱液弃去，随后加入50-100％甲醇溶剂洗脱，定量收集10mL洗脱液，即得。
将上述两种方法所得样品提取液用HPLC-DAD-ELSD联用法同步检测银杏叶制剂提取物中的Quercetin 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Kaempferol 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin3-O-rutinoside、Kaempferol3-O-rutinoside、Isorhamnetin3-O-rutinoside、Quercetin3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol 3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside、Quercetin、Kaempferol、Isorhamnetin、Ginkgolide A、GinkgolideB、Ginkgolide C、Ginkgolide J、Bilobalide有效成分的含量(如图1)，结果发现两种方法比较未见明显差异，提示新方法与传统方法相比提取效果相同，但提取时间、溶剂消耗量、样品用量等方面有明显改善。
实施例2：以3种银杏叶制剂为对象，采用基于固相提取技术的银杏叶制剂中有效成分的快速提取制备方法分析银杏叶制剂中黄酮类和内酯类成分含量。
仪器同实施例1
材料：银杏酮酯分散片(江苏神龙药业有限公司，批号：111215)，银杏叶提取物片(德国威玛舒培博士大药厂，批号：1350311)，银杏叶片(江苏飞马药业有限公司，批号：110201)其余材料同实施例1。
样品前处理：
将银杏酮酯分散片、银杏叶提取物片和银杏叶片分别粉碎后过100目筛，各取粉末约0.2g，分别加入5-10g的C18柱层析材料，置于研钵中，加入0.5-2mL去离子水，充分研磨5分钟，将混合后的材料均匀装入一个底部垫有微孔滤膜的注射器中，压实后上端垫少量脱脂棉。以0.5-1mL/min流速先加入5-15mL去离子水洗脱，洗脱液弃去，随后加入50-100％甲醇溶剂洗脱，定量收集10mL洗脱液，即得。
将上述3个不同厂家银杏叶制剂样品提取液用HPLC-DAD-ELSD联用法同步检测银杏叶制剂提取物中的Quercetin3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Kaempferol 3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin3-O-rutinoside、Kaempferol 3-O-rutinoside、Isorhamnetin 3-O-rutinoside、Quercetin3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol 3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside、Quercetin、Kaempferol、Isorhamnetin、GinkgolideA、GinkgolideB、Ginkgolide C、Ginkgolide J、Bilobalide有效成分的含量(如图2)，结果发现应用该方法可较好的对不同厂家银杏叶制剂中黄酮类和内酯类成分进行提取，可快速获得样品中有效成分含量信息。
Claims (1)
1.一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品的快速制备方法，其特征在于，利用基质分散固相提取技术，将银杏叶制剂中黄酮类和内酯类有效成分的提取、净化、分离一步完成，其包括下属步骤：
将银杏叶制剂粉碎后过100目筛，取约0.2g的银杏叶制剂样品，加入5-10g的C18柱层析材料，置于研钵中，加入0.5-2ml去离子水，充分研磨5分钟，将混合后的材料均匀装入一个底部垫有微孔滤膜的注射器中，压实后上端垫少量脱脂棉，0.5-1mL/min流速先加入5-15mL去离子水洗脱，洗脱液弃去，随后加入50%-100%的甲醇溶剂洗脱，收集洗脱液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310298598.2A CN103323558B (zh) | 2013-07-17 | 2013-07-17 | 一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310298598.2A CN103323558B (zh) | 2013-07-17 | 2013-07-17 | 一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103323558A CN103323558A (zh) | 2013-09-25 |
| CN103323558B true CN103323558B (zh) | 2014-12-10 |
Family
ID=49192436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310298598.2A Active CN103323558B (zh) | 2013-07-17 | 2013-07-17 | 一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103323558B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103638071A (zh) * | 2013-12-23 | 2014-03-19 | 湖南科技学院 | 一种银杏药用提取物高效生产方法 |
| CN106279315B (zh) * | 2015-05-15 | 2019-05-21 | 北京华润高科天然药物有限公司 | 一种从银杏叶提取物中制备槲皮素-3-o-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法 |
| CN106279317B (zh) * | 2015-05-15 | 2019-04-12 | 北京华润高科天然药物有限公司 | 一种从银杏叶提取物中制备槲皮素-3-o-葡萄糖苷的方法 |
| CN105753920B (zh) * | 2016-02-19 | 2018-06-15 | 浙江大学 | 一种从荔枝果肉中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法 |
| CN108816194B (zh) * | 2018-06-15 | 2019-12-31 | 东北林业大学 | 利用金属有机骨架@介孔硅复合材料-基质固相分散技术分离富集槲皮素的方法 |
-
2013
- 2013-07-17 CN CN201310298598.2A patent/CN103323558B/zh active Active
Non-Patent Citations (11)
| Title |
|---|
| A.Hasler等.Identification and determination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high-performance liquid chromatography.《Journal of Chromatography》.1992,第605卷41-48. * |
| HPLC determination of certain flavonoids and terpene lactones in selected Ginkgo biloba L phytopharmaceuticals;Mostafa K.Mesbah等;《IL FARMACO》;20050603;第60卷;583-590 * |
| Identification and determination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high-performance liquid chromatography;A.Hasler等;《Journal of Chromatography》;19921231;第605卷;41-48 * |
| Mostafa K.Mesbah等.HPLC determination of certain flavonoids and terpene lactones in selected Ginkgo biloba L phytopharmaceuticals.《IL FARMACO》.2005,第60卷583-590. * |
| 我国开发银杏叶制剂的现状和前景;钟雪庐等;《中国药房》;19941231;第5卷(第5期);3-5 * |
| 杨义方等.银杏叶及其制剂中萜内酯含量测定方法研究进展.《国外医药（植物药分册）》.2000,第15卷(第2期),61-66. * |
| 汤道权等.银杏叶提取物中四种黄酮类成分固相萃取技术优化.《中药材》.2008,第31卷(第6期),918-920. * |
| 邵胜荣.银杏叶活性成分提取纯化、制剂工艺及质量研究.《浙江大学硕士学位论文》.2005,论文第三章第2.2节、图3-1. * |
| 钟雪庐等.我国开发银杏叶制剂的现状和前景.《中国药房》.1994,第5卷(第5期),3-5. * |
| 银杏叶提取物中四种黄酮类成分固相萃取技术优化;汤道权等;《中药材》;20080630;第31卷(第6期);918-920 * |
| 银杏叶活性成分提取纯化、制剂工艺及质量研究;邵胜荣;《浙江大学硕士学位论文》;20051231;论文第三章第2.2节、图3-1 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103323558A (zh) | 2013-09-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103323558B (zh) | 一种基于固相提取技术的银杏叶制剂分析样品快速制备方法 | |
| CN105203657A (zh) | 酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用 | |
| CN105842373B (zh) | 一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法 | |
| CN104458993B (zh) | 壮药材滇桂艾纳香hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN103969346B (zh) | 一种三七皂苷类成分的分析方法 | |
| CN104297026A (zh) | 一种提取中药陈皮中的黄酮类有效成分的方法 | |
| CN102000140A (zh) | 一种苦参药材及其制剂中苦参碱和氧化苦参碱同时定量新方法 | |
| CN101028388B (zh) | 一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法 | |
| CN106124639A (zh) | 杜仲药材的多成分含量测定方法 | |
| CN107688067A (zh) | 通窍鼻炎片的含量测定方法 | |
| CN104062374B (zh) | 益气补肾的中药组合物的检测方法 | |
| CN107843657A (zh) | 通窍鼻炎片的质量检测方法 | |
| CN101966223A (zh) | 一种复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法 | |
| CN101685089A (zh) | 一种快速检测西洋参人参及其制剂质量真伪的方法 | |
| CN108205022B (zh) | 颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法 | |
| CN101513467A (zh) | 皮肤病血毒制剂的质量控制方法 | |
| CN101926889B (zh) | 芍杞颗粒剂的检测方法 | |
| CN102048906B (zh) | 鸡骨草胶囊的含量测定方法 | |
| CN102008541B (zh) | 无糖型复方扶芳藤制剂中3种主要活性成分的同时检测方法 | |
| CN101703583B (zh) | 心宁胶囊的质量检测方法 | |
| CN108037200B (zh) | 一种滋肾宁神丸的质量检测方法 | |
| CN101700306A (zh) | 一种乳癖消制剂的质量控制方法 | |
| CN104807944A (zh) | 鸦葱总黄酮的制备方法及其指纹图谱 | |
| CN101953978B (zh) | 舒心降脂片药品质量检测方法 | |
| CN104133028B (zh) | 一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Qixia District of Nanjing City, Jiangsu province 210046 Xianlin streets latitude road No. 9, building F6, room 703 Applicant after: Jiangsu Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: China Pharmaceutical University Address before: 224200, No. 18 North North Road, Jiangsu, Dongtai Applicant before: Jiangsu Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant before: China Pharmaceutical University |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 224200 Jiangsu Province, Yancheng City Dongtai City Ho duo Road No. 18 Patentee after: Jiangsu Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee after: China Pharmaceutical University Address before: Qixia District of Nanjing City, Jiangsu province 210046 Xianlin streets latitude road No. 9, building F6, room 703 Patentee before: Jiangsu Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee before: China Pharmaceutical University |
|
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 224200 Jiangsu Province, Yancheng City Dongtai City Ho duo Road No. 18 Patentee after: Jiangsu Shenlong pharmaceutical Limited by Share Ltd Patentee after: Chinese Medicinal Univ. Address before: 224200 Jiangsu Province, Yancheng City Dongtai City Ho duo Road No. 18 Patentee before: Jiangsu Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee before: Chinese Medicinal Univ. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 224200, No. 18 North Road, Dongtai, Jiangsu, Yancheng City Patentee after: JIANGSU SHENLONG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee after: CHINA PHARMACEUTICAL University Address before: 224200, No. 18 North Road, Dongtai, Jiangsu, Yancheng City Patentee before: JIANGSU SHENLONG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee before: CHINA PHARMACEUTICAL University |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: No.15 Weiba Road, Dongtai City, Yancheng City, Jiangsu Province 224200 Patentee after: JIANGSU SHENLONG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee after: CHINA PHARMACEUTICAL University Address before: 224200, No. 18 North Road, Dongtai, Jiangsu, Yancheng City Patentee before: JIANGSU SHENLONG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee before: CHINA PHARMACEUTICAL University |
|
| CP02 | Change in the address of a patent holder |