CN103298803A - 作为激酶抑制剂化合物的取代的哒嗪羧酰胺化合物 - Google Patents

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Abstract

新的哒嗪衍生物具有预料之外的作为蛋白激酶抑制剂的药物特性，尤其是针对c-Met，并且可用于治疗与异常蛋白激酶活性相关的紊乱，例如癌症。

Description

作为激酶抑制剂化合物的取代的哒嗪羧酰胺化合物
相关申请
本申请要求于2010年10月8日提交的美国临时申请第61/391,464号的权益，其全部内容结合入本文。
技术领域
本发明涉及新的哒嗪衍生物、其盐、溶剂合物、水合物及其多晶型物。本发明还提供包含本发明化合物的组合物和该组合物在治疗与蛋白激酶调节相关的疾病和症状的方法中的用途。
背景技术
蛋白激酶是催化蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上的羟基磷酸化的酶。细胞生命的很多方面（例如，细胞生长、分化、增殖、细胞周期和存活）依赖于蛋白激酶活性。而且，异常的蛋白激酶活性与许多的紊乱例如癌症和炎症相关。因此，已做出相当的努力来识别调控蛋白激酶活性的途径。具体而言，已做出很多尝试来识别充当蛋白激酶抑制剂的小分子。
c-Met原癌基因编码Met受体酪氨酸激酶。Met受体是190kDa的糖基化二聚复合物，由50kDa的α链以双硫键连接到145kDa的β链而构成。α链在胞外发现，而β链包括跨膜和胞质域。Met被合成为前体，并被蛋白水解切割，以得到成熟的α和β亚基。其表现出与脑信号蛋白（semaphorin）以及丛状蛋白（plexin）（涉及细胞-细胞相互作用的配体-受体家族）的结构相似性。Met的配体肝细胞生长因子（HGF），是扩散因子家族的一员并与血纤维蛋白溶酶原具有一定同源性（Longati,P.et al.,Curr.Drug Targets2001,2,41-55;Trusolino,L.andComoglio,P.Nature Rev.Cancer2002,2,289-300）。
Met在肿瘤发生和肿瘤转移中起作用。Met随其配体HGF的表达是转化的、致瘤的和转移的（Jeffers,M.等人,Oncogene1996,13,853-856;Michieli,P.等人,Oncogene1999,18,5221-5231）。MET在显著百分比的人类癌症中过表达并在原发肿瘤和转移之间的转变过程中扩大。很多研究已经将c-MET和/或HGF/SF的表达与不同种类癌症（包括肺癌、结肠癌、乳腺癌、***癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌和骨癌）的疾病进展状态进行关联。此外，c-MET或HGF的过表达已经显示出与多种主要人类癌症（包括肺癌、肝癌、胃癌和乳腺癌）中的预后不佳和疾病转归相关联。c-MET还直接牵涉到没有成功治疗方案的癌症中，例如胰腺癌、神经胶质瘤和肝细胞癌。
表现出增强的激酶活性的Met突变体在遗传形式和偶发形式的***状肾癌中均有发现（Schmidt,L.等人,Nat.Genet.1997,16,68-73;Jeffers,M.等人,Proc.Nat.Acad.Sci.1997,94,11445-11500）。已显示HGF/Met在头颈部鳞状细胞癌细胞中抑制失巢凋亡——悬浮引起的程序性细胞死亡（细胞凋亡）。失巢凋亡抗性或锚地独立存活是上皮细胞的致癌性转化的标志（Zeng,Q.等人,J.Biol.Chem.2002,277,25203-25208）。
Met/HGF的增加表达在很多转移性肿瘤中发现，包括结肠癌（Fazekas,K.等人,Clin.Exp.Metastasis2000,18,639-649）、乳腺癌（Elliott,B.E.等人,2002,Can.J.Physiol.Pharmacol.80,91-102）、***癌（Knudsen,B.S.等人,Urology2002,60,1113-1117）、肺癌（Siegfried,J.M.等人,Ann.Thorac.Surg.1998,66,1915-1918）和胃癌（Amemiya,H.等人,Oncology2002,63,286-296）。HGF-Met信号传导还与增加的动脉粥样硬化风险（Yamamoto,Y.等人,J.Hypertens.2001,19,1975-1979;Morishita,R.等人,Endocr.J.2002,49,273-284）和增加的肺纤维化（Crestani,B.等人,Lab.Invest.2002,82,1015-1022）相关。
2-氨基-吡啶，例如PF-2341066，已经被报道为HGF受体酪氨酸激酶（c-Met）和ALK的有效抑制剂（J.G.Christensen,等人AbstractLB-271,AACR2006meeting;H.Y.Zou等人Cancer Res2007;67:4408;patent disclosures:WO2004076412,WO2006021881,WO2006021886）。
PF-234,1066
Figure BDA00003272449500021
之前，我们描述了取代的哒嗪羧酰胺化合物作为蛋白激酶抑制剂（WO2009/154769）。这些化合物中的大部分有效地抑制c-Met和ALK，IC50为<100nM。本发明公开了不饱和杂环取代的哒嗪羧酰胺作为更有选择性的c-Met抑制剂。
发明内容
本发明涉及哒嗪衍生物化合物（例如，任何本文通式的化合物）、包含该化合物的组合物、以及使用该化合物和化合物组合物的方法。化合物和包含化合物的组合物可用于治疗或预防疾病或疾病症状，包括由蛋白激酶调节活性介导的或与其相关的那些疾病。
本发明通过提供分离的式I化合物或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物而解决上述问题：
其中：
Figure BDA00003272449500031
R1、R2、R3、和R4各自独立地为H、烷基或Z1；
R6为不饱和杂环基，其中R6任选地被1～3个独立选自烷基、环烷基、杂环基、烷氧基、羟烷基和Z1的基团取代；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
本发明的化合物、包含其的组合物可用于治疗或减轻蛋白激酶调节的疾病、紊乱或其症状（即，被蛋白激酶特别是c-met的抑制剂有效治疗的紊乱）的严重度。
另一方面，本发明涉及在需要的受试者中治疗疾病或疾病症状的方法，包括对受试者施用有效量的任何本文通式的化合物、或其药用盐、溶剂合物或水合物（或其组合）。该疾病或疾病症状可以是任何由蛋白激酶（例如，c-met）调控的那些。这些疾病或疾病症状可以是，例如癌症或增殖疾病或紊乱（例如，包括本文中描述的那些）。
附图说明
图1示出所有这些细胞系中的c-Met表达。U87MG、PC3和Caki细胞表达磷酸化的高水平的c-Met。与总的c-Met表达水平相比，U87-MG显示出升高最多的磷酸-c-Met水平，因此被选择用于体内研究。
图2.实施例1对U-87MG异种移植肿瘤模型的生长抑制。数据图显示出Balb/c裸鼠中U-87MG的肿瘤体积。线条表示各组的平均肿瘤体积，竖条（bar）为±S.E。
具体实施方式
定义
术语“改善”和“治疗”可以互换使用，且均表示减少、抑制、减弱、减小、阻止或稳定疾病的发生或进展（例如，本文所描述的疾病或紊乱）。
“疾病”是指损害或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何病症或紊乱。
“标志物”是指与疾病或紊乱相关的任何改变。例如，与疾病或紊乱相关的表达水平或活性有改变的任何蛋白或多核苷酸。
在本公开中，“包括（comprises、comprising）”、“含有”和“具有”和类似术语可以具有美国专利法中所赋予它们的含义，并且可以指“包括（includes、including）”和类似含义；“基本上由……组成”或“基本上包括”同样具有美国专利法所赋予它们的含义，并且该术语是开放式的，允许所引用物以外的对象的存在，只要被引用物的基础或新的特征不因所引用物以外的对象的存在而改变，但不包括现有技术的实施方式。
如本文所使用的术语“化合物”，也意在包括本文的通式化合物的盐、前药和前药盐。该术语还包括前述任一项的任意溶剂合物、水合物和多晶型物。在本申请中描述的本发明的某些方面中，对“前药”、“前药盐”、“溶剂合物”、“水合物”或“多晶型物”的具体引用不应该被解释为在使用术语“化合物”而没有引用这些其他形式的本发明的其他方面中，意在排除这些形式。
本发明的化合物的盐在酸与化合物的碱性基团，诸如氨基官能团，或在碱与化合物的酸性基团，诸如羧基官能团，之间形成。根据另一个优选的实施方式，该化合物是药学可接受的酸加成盐。
如本文中使用且除非另外指明，术语“前药”是指化合物的衍生物，其可以在生物学条件（体外或体内）下水解、氧化或以其他方式反应以提供本发明的化合物。前药可以仅在生物学条件下的此类反应后变得有活性，或可以在其未反应形式下具有活性。本发明考虑的前药的实例包括，但不限于，本文公开的任意一个通式的化合物的类似物或衍生物，其包括生物可水解的部分，诸如酰胺、酯、氨基甲酸酯（盐）、碳酸酯（盐）、和磷酸酯（盐）类似物。前药可以典型地使用公知方法制备，诸如由Burger′s Medicinal Chemistry and Drug Discovery（Burger药物化学和药物发现）（1995）172-178，949-982（ManfredE.Wolff编辑，第五版）所述的那些；还参见Goodman和Gilman′s，ThePharmacological basis of Therapeutics（治疗学药理学基础），第八版，McGraw-Hill，Int.编辑，1992，“Biotransformation of Drugs（药物的生物转化）”。
如本文所使用且除非另外指明，术语“生物可水解的部分”是指官能团（例如，酰胺、酯、氨基甲酸酯（盐）、碳酸酯（盐）、或磷酸酯（盐））类似物，其：1）不破坏化合物的生物活性并且赋予该化合物以体内有利性质，诸如摄取、作用持续时间、或作用的发生；或2）本身是无生物活性的，但在体内转变为生物活性化合物。
前药盐是酸与前药的碱性基团，诸如氨基官能团，或碱与前药的酸性基团，诸如羧基官能团，之间形成的化合物。在一个实施方式中，前药盐是药学可接受的盐。
特别优选的前药和前药盐是当此类化合物施用至哺乳动物时增加本发明的化合物的生物利用度（例如，通过使口服给药的化合物更容易被吸收入血液中）或相对于母体物种促进母体化合物至生物腔室（例如，脑或中枢神经***）的递送的那些。优选的前药包括其中将增加水溶性或增加通过肠膜的主动转运的基团添加在本文所述的通式结构上的衍生物。参见，例如，Alexander，J.等，Journal of Medicinal Chemistry1988，31，318-322；Bundgaard，H.Design of Prodrugs（前药设计）；Elsevier：Amsterdam，1985，1-92页；Bundgaard，H.，Nielsen，N.M.Journalof Medicinal Chemistry1987，30，451-454；Bundgaard，H.A Textbook ofDrug Design and Development（药物设计和开发手册），HarwoodAcademic Publ.：Switzerland，1991，113-191页；Digenis，G.A.等，Handbook of Experimental Pharmacology（实验药理学手册）1975，28，86-112；Friis，G.J.，Bundgaard，H.A Textbook of Drug Design andDevelopment（药物设计和开发教科书），第二版，Overseas Publ.：Amsterdam，1996，351-385页；Pitman，I.H.Medicinal Research Reviews（药物研究综述）1981，1，189-214。
如本文使用的术语“药学可接受的”是指在合理的医学判断的范围内，适合用于与人和其他哺乳动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比相称的组分。“药学可接受的盐”是指任何无毒性的盐，其在施用于受者后，能够直接地或间接地提供本发明的化合物或化合物的前药。
通常用来形成药学可接受的盐的酸包括无机酸，诸如二硫化氢、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及有机酸，诸如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、二酒石酸（bitartaric）、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡糖酸、葡糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸，以及相关的无机和有机酸。因此，这样的药学可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐（decanoate）、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐（caprate）、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟丁酸盐、羟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐和类似的盐。优选的药学可接受的酸加成盐，包括与诸如盐酸和氢溴酸的矿物酸形成的那些，特别是与诸如马来酸的有机酸形成的那些。
与本发明的前药的酸性官能团形成药学可接受的盐的合适的碱包括，但不限于，诸如钠、钾和锂的碱金属的氢氧化物；诸如钙和镁的碱土金属的氢氧化物；其他金属，诸如铝和锌的氢氧化物；氨、和有机胺，诸如未取代的或羟基取代的单、二或三烷基胺；二环己胺；三丁胺；吡啶；N-甲基胺、N-乙基胺；二乙胺；三乙胺；单-、二-或三-(2-羟基-低级烷基胺)，诸如单-、二-、或三-(2-羟基乙基)胺、2-羟基-叔丁基胺、或三-(羟甲基)甲基胺，N，N-二-低级烷基-N-(羟基低级烷基)-胺，诸如N,N-二甲基-N-(2-羟乙基)胺、或三-(2-羟乙基)胺；N-甲基-D-葡萄糖胺；和氨基酸，诸如精氨酸、赖氨酸和类似物。
如本文所使用的术语“水合物”是指，还包括化学计量或非化学计量的通过非共价分子间作用力结合的水的化合物。
如本文所使用的术语“溶剂合物”是指，还包括化学计量或非化学计量的通过非共价分子间作用力结合的溶剂的化合物，所述溶剂诸如水、丙酮、乙醇、甲醇、二氯甲烷、2-丙醇、或类似物。
如本文所使用的术语“多晶型物”是指化合物或其复合物的固体结晶形式，它们可以通过物理手段，例如，X-射线粉末衍射谱或红外光谱法来表征。相同化合物的不同多晶型物可以显示不同的物理、化学和/或光谱性质。不同的物理性质包括，但不限于稳定性（例如，对热、光或水分）、可压缩性和密度（在制剂和产品制造中很重要）、吸湿性、可溶性、和溶解速率（可影响生物利用度）。稳定性的差异可以由化学反应性（例如，有差别的氧化，使得当由一种多晶型物组成时比当由另一种多晶型物组成时剂型更快地变色）或机械特性（例如，在动力学有利的多晶型物转变成热力学更稳定的多晶型物时片剂在储存时崩解）或两者（例如，一种多晶型物的片剂在高湿度下更易于破碎）的变化而引起。多晶型物的不同物理性质可以影响其加工。例如，由于例如其颗粒的形状或粒径分布，一种多晶型物比另一种更可能形成溶剂合物或可能较难以过滤掉或洗掉杂质。
如本文所使用的术语“基本上不含其他立体异构体”是指存在小于25％的其他立体异构体，优选小于10％的其他立体异构体，更优选小于5％的其他立体异构体，且最优选小于2％的其他立体异构体，或小于“X”％的其他立体异构体（其中X是0和100之间的数，包括0和100）。获得或合成非对映体的方法是本领域中公知的，并且可以根据实践应用于最终的化合物，或应用于起始物质或中间体。其他实施方式是其中化合物是分离的化合物的实施方式。如本文所使用的术语“至少X％富含对映体的”是指至少X％的化合物是单一对映体形式，其中X是0和100之间的数，包括0和100。
如本文使用的术语“稳定化合物”是指，具有足以允许制造的稳定性的化合物，并且其在足以应用于本文所详述的目的（例如，配制成治疗性产品、用于生产治疗化合物的中间体、可分离的或可保存的中间化合物、治疗对治疗剂有响应的疾病或病症）的时期内保持化合物的完整性。
“立体异构体”是指对映体和非对映体两者。
如本文所使用的术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘的任意基团。
术语“alk”或“烷基”是指具有1-12个碳原子，优选1-8个碳原子的直链或支链烃基。表述“低级烷基”是指1-4个碳原子的烷基（包括1和4个碳原子）。
术语“芳基烷基”是指其中烷基氢原子被芳基取代的部分。
术语“烯基”是指具有至少一个双键的2-10个，优选2-4个碳原子的直链或支链烃基。当烯基与氮原子连接时，优选不直接通过带有双键的碳连接此类基团。
术语“烷氧基”是指-O-烷基基团。术语“亚烃基二氧代”是指结构-O-R-O-的二价物种，其中R代表亚烷基。
术语“炔基”是指具有至少一个三键的2-10个，优选2-4个碳原子的直链或直链烃基。在炔基与氮原子连接时，优选不直接通过带有三键的碳连接此类基团。
术语“亚烷基”是指通过单键连接的1-5个碳原子的二价直链桥（例如，-(CH2)X-，其中x为1-5），其可被1-3个低级烷基取代。
术语“亚烯基”是指通过单键连接的具有一个或两个双键的2至5个碳原子的直链桥，且可以取代有1至3个低级烷基。示例性的亚烯基为-CH＝CH-CH＝CH-、-CH2-CH＝CH-、-CH2-CH=CH-CH2-、-C(CH3)2CH=CH-和-CH(C2H5)-CH=CH-。
术语“亚炔基”是其中具有三键、通过单键连接的2至5个碳原子的直链桥，且可以取代有1至3个低级烷基。示例性的亚炔基是-C≡C-、-CH2-C≡C-、-CH(CH3)C≡C-和-C≡C-CH(C2H5)CH2-。
如本文所采用的术语“环烷基”和“环烯基”分别包括饱和和部分饱和的具有3-12个碳原子，优选3-8个碳原子，且更优选3-6个碳原子的环状烃基。
术语“Ar”或“芳基”是指含有6-14个碳原子的芳族环状基团（例如6元单环、10元二环或14元三环环系）。示例性的芳基包括苯基、萘基、联苯基和蒽。
“杂芳基”是指含有1、2、3或4个环杂原子的5-12个环原子的单环或稠环（即，共享相邻的一对原子的环）基团，所述杂原子选自N、O或S，其余的环原子为C，并且另外，所述基团具有完全共轭的pi-电子体系，其中每个环的0、1、2、3或4个原子可以被取代基取代。杂芳基的实例为，但不限于，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、喹唑啉、异喹啉、嘌呤和咔唑。
术语“杂环”、“杂环的”或“杂环基（heterocyclo）”是指完全饱和或部分不饱和的环状基团，例如，3-7元单环、7-12元二环、或10-15元三环环系，其在至少一个环中具有至少一个杂原子，其中每个环的0、1、2或3个原子可以被取代基取代。含有杂原子的杂环基团的每个环可以具有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂环基团可以在环或环系的任意杂原子或碳原子处连接。
术语“杂环基（heterocyclyl）”是指完全饱和或部分不饱和的环状基团，例如，3-7元单环、7-12元二环、或10-15元三环环系，其在至少一个环中具有至少一个杂原子，其中每个环的0、1、2或3个原子可以被取代基取代。含有杂原子的杂环基的每个环可以具有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂环基可以在环或环系的任意杂原子或碳原子处连接。
术语“取代基”是指在本文描述的任意官能团上“取代”的基团，例如，在该基团的任意原子上的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、或杂芳基基团。适合的取代基包括但不限于，卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1-C2全氟烷基、C1-C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中n独立地为0-6，包括0和6。每个R15独立地为氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基。每个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3-C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1-C4烷基或被C3-C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1-C4烷基。每个R17独立地为C3-C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1-C4烷基或被C3-C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1-C4烷基。每个R15、R16和R17中的每个C3-C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基和C1-C4烷基可以任选地被卤素、CN、C1-C4烷基、OH、C1-C4烷氧基、NH2、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、C1-C2全氟烷基、C1-C2全氟烷氧基或1,2-亚甲基二氧基取代。
术语“氧代”是指氧原子，当连接到碳时其形成羰基，当连接到氮时其形成N-氧化物，且当连接到硫时其形成亚砜或砜。
术语“酰基”是指烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、杂环基羰基或杂芳基羰基取代基，其任意一个可进一步被取代基取代。
在本文变量的任何定义中对化学基团的列举的描述包括将该变量定义为任意单个基团或列举的基团的组合。对于本文变量的实施方式的描述包括该实施方式作为任何单个实施方式或与任何其他实施方式或其部分组合。对本文实施方式的描述包括该实施方式作为任何单个实施方式或与任何其他实施方式或其部分组合。
本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此作为外消旋物和外消旋混合物、单一对映体、单独的非对映体和非对映体混合物出现。这些化合物的所有此类异构体形式均明确地包括在本发明中。本发明的化合物还可以表现为多种互变异构形式，在此情况下，本发明明确地包括本文所述的化合物的所有互变异构形式。此类化合物的所有此类异构体形式包括在本发明中。本文所述的化合物的所有结晶形式明确地包括在本发明中。
本发明的化合物
一方面，本发明提供式I的化合物：
Figure BDA00003272449500111
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中：
R1、R2、R3、和R4各自独立地为H、烷基或Z1；
R6为不饱和杂环基，其中R6任选地被1～3个独立选自烷基、环烷基、杂环基、烷氧基、羟烷基和Z1的基团取代；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；以及
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
在一个实施方式中，本发明提供式II的化合物：
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中R1、R2、R3、R4、R7和R8各自独立地为H、烷基或Z1；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
在另一个实施方式中，本发明提供式III的化合物：
Figure BDA00003272449500122
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中R7和R8各自独立地为H、烷基或Z1；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
本发明的代表性化合物描绘在表1中。在这些实例中，在手性碳原子处的立体化学独立地为RS、R或S，除非具体指出。本文中描述的结构，包括表1的结构，可以包括某些-NH-、-NH2（氨基）和-OH（羟基）基团，其中相应的氢原子并未明确地显示出。然而，它们将被视情况读作-NH-、-NH2或-OH。在某些结构中，画出杆键（stick bond），意味着表示甲基。
表1
本文的代表性化合物在以下列出：
{5-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{5-[(1S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-[1-(2-甲氧基乙基)-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基]甲酰胺
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-乙基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺。
本文通式化合物的合成可以容易地由普通合成化学技术人员来实现。例如，相关方法和中间体在本文中公开。本文提及的每一篇专利、专利申请和出版物，不管其在传统的杂志中或仅可通过互联网获得，均整体地引入本文以供参考。
合成本文通式化合物的其他方式可以容易地从本文引用的参考文献进行改动。这些程序的变化形式和其优化在普通技术人员的能力范围内。
上面显示的具体方式和化合物不意在限制。本文方案中的化学结构描绘了一些变量，在此用在本文通式化合物中相应位置的化学基团定义（部分、原子等）来对它们进行相应地定义，不管是否由相同的变量名称来识别（例如，R1、R2、R、R′、X等）。化合物结构中的化学基团用于合成另一种化合物结构的适合性在本领域普通技术人员的能力范围内。合成本文通式化合物和它们的合成前体的其他方法，包括在本文方案中没有明确显示的途径内的那些，在本领域普通技术人员的化学手段的范围内。如果需要使竞争性副产物降至最低，优化反应条件的方法是本领域中已知的。本文所述的方法还可以另外地包括本文具体描述的步骤之前或之后的步骤，以加入或去除合适的保护基，从而最终能够合成本文的化合物。另外，各个合成步骤可以以可变的次序或顺序进行以得到所需化合物。可用于合成可应用化合物的合成化学转化和保护基方法学（保护和脱保护）在本领域中是已知的，并且包括，例如，在R.Larock，Comprehensive Organic Transformations（综合有机物转化），VCH Publishers（1989）；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis（有机合成中的保护基），第三版，John Wiley and Sons（1999）；L.Fieser和M.Fieser，Fieser and Fieser′sReagents for Organic Synthesis（用于有机合成的Fieser和Fieser试剂），John Wiley and Sons（1994）；和L.Paquette，编辑，Encyclopedia ofReagents for Organic Synthesis（有机合成试剂百科全书），John Wiley andSons（1995）以及它们随后的版本中所述的那些。
本文描述的方法预期将一种通式化合物转变为另一种通式化合物。转变过程是指一种或多种化学转化作用，其可以原位进行，或分离中间化合物来进行。转化作用可以包括使用本领域中已知的技术和方案将起始化合物或中间体与另外的试剂反应，所述技术和方案包括本文引用的参考文献中的那些。中间体可以纯化（例如，过滤、蒸馏、升华、结晶、研磨、固相萃取和色谱法）或不经纯化而使用。
本发明预想的取代基和变量的组合，仅是导致稳定化合物形成的那些。
本发明还提供组合物，其包括有效量的本文任何通式的化合物，或如果适用，所述化合物的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、多晶型物或前药；以及可接受的载体。优选地，本发明的组合物为药用用途而配制（“药物组合物”），其中所述载体是药学可接受的载体。考虑到与制剂其他成分相容、并且在药学可接受的载体的情况下，所述载体必须是“可接受的”，在典型用于药物中的量下不损害其接受者。
可用于本发明的药物组合物的药学可接受的载体、佐剂和赋形剂包括但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、例如人血清白蛋白的血清蛋白、例如磷酸盐的缓冲物质、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本发明的药物组合物包括适合于口服、直肠、鼻、局部（包括口腔和舌下）、***或胃肠外（包括皮下、肌内、静脉内和皮内）给药的那些。在某些实施方式中，本文的通式化合物透皮（例如，利用透皮贴片）给药。其他制剂可以方便地以单位剂型存在，例如，片剂和持续释放胶囊，以及在脂质体中存在，并可以通过药学领域中已知的任何方法来制备。参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences（雷明顿制药科学），Mack Publishing Company，Philadelphia，PA（第17版，1985）。
这样的制备方法包括使例如构成一种或多种辅助成分的载体的成分与要施用的分子相缔合的步骤。一般地，通过将活性成分与液体载体、脂质体或细分散的固体载体或两者进行均匀地和紧密地缔合，然后如有必要使产品成型，来制备组合物。
在某些优选的实施方式中，所述化合物口服给药。适合于口服给药的本发明的组合物可以作为离散单位存在，例如各自含有预定量的活性成分的胶囊、小袋（sachet）或片剂；作为粉剂或颗粒剂；作为水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂，或包裹在脂质体中，以及作为丸剂等等。软明胶胶囊可用于含有这样的悬浮液，其可以有益地提高化合物的吸收率。
片剂可以通过压缩或模压，任选地与一种或多种辅助成分一起来制成。压缩的片剂可以通过将自由流动形式的活性成分例如粉剂或颗粒剂，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合，在适合的机器中压缩来制备。模压的片剂可以通过在适合的机器中模压用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制成。片剂任选地可以被包衣或刻痕，并且可以被配制以提供其中活性成分的缓慢或受控释放。配制这种药学活性成分（例如本文的那些和本领域已知的其他化合物）的缓慢或受控释放的组合物的方法的是本领域已知的，并且在一些授权的美国专利中描述过，其中一些包括但不限于美国专利第4,369,172号和第4,842,866号、以及其中引用的参考文献。可以使用包衣将化合物递送到肠（参见，例如，美国专利第6,638,534、5,217,720、和6,569,457、6,461,631、6,528,080、6,800,663号和其中引用的参考文献）。对于本发明的化合物的有用的制剂是肠丸粒的形式，其中肠层包含羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸盐。
在口服用途的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。典型地也添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊剂形式口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服施用水性悬浮液时，活性成分与乳化剂和悬浮剂结合。如果需要，可以添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
适合于局部给药的组合物包括锭剂（lozenge），其包括在调味基质中的成分，调味基质通常为蔗糖和***胶或黄耆胶；和软锭剂（pastille），其包括在惰性基质中的活性成分，惰性基质是例如明胶和甘油、或蔗糖和***胶。
适合于肠胃外给药的组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预定接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。制剂可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如，密封的安瓿瓶和小瓶，并可以保存在冷冻干燥的（冻干）条件中，仅需要在使用前即刻添加无菌的液体载体，例如注射用水。临时的注射溶液和悬浮液可以从无菌的粉剂、颗粒剂和片剂来制备。
这样的注射溶液可以是例如无菌可注射的水性或油性悬浮液的形式。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用适合的分散剂或润湿剂（例如，Tween80）和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中，例如1，3-丁二醇溶液中的无菌可注射溶液或悬浮液。在可接受的赋形剂和溶剂之中，可以使用甘露醇、水、Ringer’s溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸，例如油酸和它的甘油酯衍生物在注射剂的制备中是有用的，其是天然的药学可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙烯化形式也是一样。这些油溶液或悬浮液也可含有长链醇类稀释剂或分散剂。
本发明的药物组合物可以以用于直肠给药的栓剂形式来施用。这些组合物可以通过将本发明的化合物与适合的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但在直肠温度下是液体，因而将在直肠中融化而释放出活性组分。这种材料包括但不限于，可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药物组合物可以通过鼻气雾剂或吸入剂来给药。根据药物制剂领域公知的技术来制备这种组合物，并且可以将其制备为盐水的溶液，并使用苯甲醇或其他适合的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物、和/或本领域已知的其他增溶剂或分散剂。
当希望的治疗涉及通过局部施用容易达到的区域或器官时，本发明的药物组合物的局部给药是特别有用的。为了局部用于皮肤，药物组合物应配制为含有悬浮于或溶解于载体的活性组分的适合的软膏剂。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不限于，矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药物组合物可以用适合的洗液或乳膏剂配制，其含有悬浮于或溶解于载体中的活性化合物。适合的载体包括但不限于，矿物油、单硬脂酸山梨糖醇酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸腊硬脂（cetearyl）醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本发明的药物组合物也可以通过直肠栓剂或以适合的灌肠制剂的形式局部地施用到低位肠道。局部透皮贴片和离子电渗给药也包括在本发明中。
特别有利的衍生物和前药是，当将这种化合物施用给哺乳动物时提高本发明的化合物的生物利用度的那些（例如，通过容许口服施用的化合物更容易地吸收到血液中），或相对于母体物种能增强母体化合物向生物腔室（例如，脑或中枢神经***）的递送的那些。优选的前药包括其中增强水溶性或穿肠膜主动转运的基团被附加到本文所述的通式结构上的衍生物。参见，例如，Alexander，J.等，Journal of MedicinalChemistry1988，31，318-322；Bundgaard，H.Design of Prodrugs（前药设计），Elsevier：Amsterdam，1985，1-92页；Bundgaard，H.，Nielsen，N.M.Journal of Medicinal Chemistry1987，30，451-454；Bundgaard，H.A Textbook of Drug Design and Development（药物设计和开发教科书），Harwood Academic Publ.：Switzerland，1991，113-191页；Digenis，G.A.等，Handbook of Experimental Pharmacology（实验药理学手册）1975，28，86-112；Friis，G.J.，Bundgaard，H.A Textbook of Drug Designand Development（药物设计和开发教科书），第2版，Overseas Publ.：Amsterdam，1996，351-385页；Pitman，I.H.Medicinal Research Reviews（药学研究综述）1981，1，189-214。
主体治疗剂的应用可以是局部的，以在目标部位施用。各种技术可以用于在目标部位处提供主体组合物，例如注射，使用导管、套针、抛射剂（projectile）、pluronic凝胶、支架（stent）、药物持续释放聚合物或其他提供用于内部通路的设备。
根据另一个实施方式，本发明提供一种注入可植入的药物释放装置的方法，包括将所述药物释放装置与本发明的化合物或组合物接触的步骤。可植入的药物释放装置包括但不限于，可生物降解的聚合物胶囊或丸剂，不可降解的、可扩散的聚合物胶囊和可生物降解的聚合物薄片。
根据另一个实施方式，本发明提供一种可植入的医学设备，其包被有本发明的化合物或包括本发明的化合物的组合物，使得所述化合物是治疗活性的。
在另一个实施方式中，本发明的组合物还包括第二治疗剂。第二治疗剂包括任何化合物或治疗剂，它们当单独给药或与本文任何通式化合物一起给药时已知具有或证明有有利性质。可以与这些化合物有用地组合的药物包括其他激酶抑制剂、和/或用于治疗以上讨论的疾病和紊乱的其他化学治疗剂。
这样的试剂是本领域中详细描述的。优选地，第二治疗剂是可用于选自癌症的疾病或病症的治疗或预防的试剂。
再更优选地，与本发明的化合物共同配制的第二治疗剂是在c-met、ron、或ALK及其融合蛋白例如EML4-ALK和NPM-ALK介导的疾病/紊乱的治疗中有用的作用剂。再更优选地，与本发明的化合物共同配制的第二治疗剂是在c-met介导的紊乱的治疗中有用的作用剂。
在另一个实施方式中，本发明提供彼此缔合的本发明的化合物与第二治疗剂的独立剂型。如本文使用的术语“彼此缔合的”是指，所述独立剂型被包装在一起或以另外的方式彼此连接，从而容易地看出所述独立剂型预期被一同销售或给药（相互间少于24小时之内、连续地或同时地）。
在本发明的药物组合物中，本发明的化合物以有效量存在。如本文使用的术语“有效量”是指这样的量，当以合适的给药方案施用时，该量足够降低或改善要治疗的紊乱的严重度、持续时间或发展，防止要治疗的紊乱的进展，引起要治疗的紊乱的消退，或增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。
在Freireich等，（1966）Cancer Chemother Rep50：219中描述了剂量对动物和人的相互关系（根据毫克每平方米体表面积）。体表面积可以根据患者的身高和体重大致地确定。参见，例如，Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals（科学表格，Geigy药物），Ardley，N.Y.，1970，537。本发明的化合物的有效量可以从约0.001mg/kg到约500mg/kg，更优选的0.01mg/kg到约50mg/kg，更优选0.1mg/kg到约2.5mg/kg。有效的剂量也可以变化，如本领域技术人员所了解的，取决于所治疗的疾病、疾病的严重度、给药途径、患者的性别、年龄和一般健康状况、赋形剂用法、与其他治疗方法共同使用的可能性（例如使用其他试剂）、以及治疗医师的判断。
对于包括第二治疗剂的药物组合物，第二治疗剂的有效量为在仅使用该试剂的单治疗方案中通常利用的剂量的约20％到100％之间。优选地，有效量在正常的单治疗剂量的约70％和100％之间。这些第二治疗剂的正常单治疗剂量是本领域公知的。参见，例如，Wells等编辑，Pharmacotherapy Handbook（药物治疗手册）第2版，Appleton andLange，Stamford，Conn.（2000）；PDR Pharmacopoeia（PDR药典），Tarascon Pocket Pharmacopoeia2000（Tarascon袖珍药典2000），豪华版，Tarascon Publishing，Loma Linda，Calif.（2000），这些参考文献的每一个整体地引入本文以供参考。
预期上文提到的某些第二治疗剂将与本发明的化合物协同地作用。当这发生时，它将容许第二治疗剂和/或本发明的化合物的有效剂量少于单治疗中所需的剂量。这具有的优点是：使第二治疗剂或本发明的化合物的毒副作用最小化、功效的协同改善、改善给药或使用的方便性、和/或降低化合物制品或制剂的总体花费。
治疗方法
根据另一个实施方式，本发明提供了治疗患有或易患有疾病或障碍或其症状（例如，本文描述的那些）的受试者的方法，包括对所述受试者以有效量的本发明的化合物或组合物进行给药的步骤。这些疾病是本领域公知的，也在本文中公开。
一个方面，治疗方法涉及由蛋白激酶例如c-met、ron介导的紊乱的治疗。
在另一个方面，本发明提供在受试者中治疗疾病的方法，包括向受试者施用任何本文通式的化合物。
在另一个方面，本发明提供在受试者中治疗疾病的方法，包括向受试者施用包含任何本文通式的化合物的组合物。
在某些实施方式中，疾病由c-met或ron激酶介导。
在另一个实施方式中，疾病是癌症或增殖疾病。
在另一个实施方式中，疾病是肺、结肠、乳腺、***、肝脏、胰腺、脑、肾脏、卵巢、胃、或皮肤的癌症、或骨癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、和肝细胞癌、***状肾癌、或头颈鳞状细胞癌。
在一个实施方式中，本发明的方法用于治疗患有或易患有疾病或症状的受试者。这些疾病、紊乱或其症状包括，例如，由蛋白激酶（例如，c-met、ron）调控的那些。疾病或疾病症状可以是，例如，癌症或增殖疾病或紊乱。所述疾病或疾病症状可以是肺、结肠、乳腺、***、肝脏、胰腺、脑、肾脏、卵巢、胃、皮肤、和骨的癌症、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、和肝细胞癌、***状肾细胞癌、或头颈部鳞状细胞癌。本文描绘的方法包括其中受试者被鉴别为需要具体说明的治疗的那些受试者。鉴别受试者需要此治疗可以在受试者或医护专家的判断之内，并且可以是主观的（例如，意见）或客观的（例如，通过测试或诊断方法可测量的）。
在另一个实施方式中，本发明提供调节细胞中的蛋白激酶（例如，蛋白酪氨酸激酶、本文所列举激酶）的活性的方法，包括将细胞与一种或多种任何本文通式的化合物进行接触。
在另一个实施方式中，上述治疗方法包括向所述患者共施用一种或多种第二治疗剂的进一步步骤。第二治疗剂的选择可以从已知可用于本文中的适应症的任何第二治疗剂中进行。另外的治疗剂包括但不限于用于治疗疾病、紊乱或其症状的药剂，包括，例如，抗癌剂、抗增生剂、抗肿瘤剂（antineoplastic agent、antitumor agent）、抗代谢物型/胸苷酸合成酶抑制物抗肿瘤剂、烷基化型抗肿瘤剂、抗生素型抗肿瘤剂，或在癌症治疗方案中一般用作基础药剂或佐剂施用的任何其他试剂（例如，止吐剂、抗贫血剂等等），包括，例如，硫酸长春碱、长春新碱、长春地辛、vinestramide、长春瑞滨、长春曲醇、长春利定、三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene、醋酸甲地孕酮、阿那曲唑、来曲唑、硼嗪、依西美坦、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙酸环丙孕酮、醋酸戈舍瑞林、亮丙瑞林（luprolide）、非那雄胺、赫塞汀、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、阿霉素、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、放线菌素、光辉霉素、顺铂、卡铂、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、白消安、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、thiotephan、长春新碱、紫杉醇、泰索帝（taxotere）、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、伊立替康、拓朴替康、埃博霉素、易瑞沙（Iressa）、阿瓦斯丁（Avastin）、OSI-774、血管生成抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、VEGFR抑制剂、CDK抑制剂、Her1和Her2抑制剂和单克隆抗体。
本文使用的术语“共同施用的”是指第二治疗剂可以与本发明的化合物一起，作为单一剂型（例如，包括本发明的化合物和如上所述的第二治疗剂的本发明组合物）的部分或作为独立的、多剂量形式来施用。或者，在本发明的化合物施用之前、或接续地、或在其之后，可以施用另外的试剂。在这样的联合治疗中，本发明的化合物和第二治疗剂通过常规方法来施用。包括本发明的化合物和第二治疗剂的本发明的组合物向受试者的给药，不排除同一治疗剂、任何其他第二治疗剂或本发明的任何化合物在治疗过程中的其他时间向所述受试者的独立给药。
这些第二治疗剂的有效量是本领域技术人员公知的，并且给药的指导可以在本文引用的专利和公开的专利申请中，以及在Wells等编辑，Pharmacotherapy Handbook（药物治疗手册），第2版，Appleton andLange，Stamford，Conn.（2000）；PDR Pharmacopoeia（PDR药典），Tarascon Pocket Pharmacopoeia2000（Tarascon袖珍药典2000），豪华版，Tarascon Publishing，Loma Linda，Calif.（2000）和其他医学教科书中找到。然而，确定所述第二治疗剂的最佳有效量范围在本领域技术人员的能力之内。
在本发明的一个实施方式中，当第二治疗剂被施用给受试者时，本发明的化合物的有效量低于不施用第二治疗剂时它的有效量。在另一个实施方式中，第二治疗剂的有效量低于不施用本发明的化合物时它的有效量。这样，与高剂量的任一试剂相关的不希望的副作用可以被最小化。其他潜在的优点（非限制性地包括，改善的给药方案和/或降低的药物成本）对于本领域技术人员将是显而易见的。
在又一个方面，本发明提供本文任何通式的化合物单独地或与上文描述的一种或多种第二治疗剂一起在制造药物中的应用，作为单一组合物或作为独立的剂型，所述药物用于治疗或预防受试者中本文列举的疾病、紊乱或症状。本发明的另一个方面是用于治疗或预防受试者中本文描述的疾病、紊乱或症状的本文通式的化合物。
在其他方面，本文的方法包括进一步包括监测受试者对治疗给药的反应的那些方法。这样的监测可以包括作为治疗方案的标志物或指示物的受试者组织、体液、样本、细胞、蛋白质、化学标志物、遗传物质等等的定期采样。在其他方法中，通过评估相关标志物或指示物对这样的治疗的适应性，受试者被预先筛选或鉴定为需要这样的治疗。
在一个实施方式中，本发明提供一种监测治疗进展的方法。所述方法包括测定患有或易患有本文描述的紊乱或其症状的受试者中诊断标志物（标志物）（例如，由本文的化合物调节的本文描绘的任何靶标或细胞类型）或诊断测量值（例如，筛选、测定）的水平的步骤，其中所述受试者已经施用了足以治疗所述疾病或其症状的治疗量的本文的化合物。在所述方法中测定的标志物的水平可以与健康的正常对照中或其他患病患者中的标志物已知水平相比较，以确立受试者的疾病状况。在优选的实施方式中，在晚于测定第一水平的时间点测量受试者中的标志物的第二水平，并且比较两个水平来监测疾病的进程或疗法的功效。在某些优选的实施方式中，受试者中治疗前的标志物水平在开始根据本发明的治疗之前被测定；这种标志物的治疗前水平可以与治疗开始后受试者中的标志物水平进行比较，来确定治疗的效力。
在某些方法实施方式中，受试者中的标志物或标志物活性的水平被测定至少一次。标志物水平与例如从同一患者、另一患者或正常受试者早先或随后获得的标志物水平的另一个测量值进行比较，可用于确定根据本发明的疗法是否具有期望的效果，并且由此允许视情况调整剂量水平。标志物水平的测定可以利用本领域已知的或本文描述的任何适合的采样/表达测定方法来进行。优选地，首先从受试者取出组织或液体样品。适合的样品的实例包括血液、尿、组织、口或颊细胞、以及含有根部的毛发样品。其他适合的样品是本领域的技术人员已知的。样品中蛋白质水平和/或mRNA水平（例如，标志物水平）的测定可以利用本领域已知的任何适合的技术，包括但不限于，酶免疫测定、ELISA、放射性标记/测定技术、印迹/化学发光方法、实时PCR等等来进行。
本发明还提供一种用于治疗包括本文所描述的那些的疾病、紊乱或其症状的试剂盒。这些试剂盒包括：a）包括本文的任何通式的化合物或其盐；或其前药、或前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物的药物组合物，其中所述药物组合物处于容器中；以及b）描述利用所述药物组合物来治疗包括本文描述的疾病、紊乱或其症状的方法的说明书。
所述容器可以是能够容纳所述药物组合物的任何容器或其他密封的或可密封的设备。实例包括瓶子；分开的或多室的储器瓶，其中每个分区或隔室包括所述组合物的单剂量；分隔的箔包装（foil packet），其中每个分区包括单剂量的所述组合物；或分配器，其分配单剂量的所述组合物。所述容器可以是本领域已知的任何常规的形状或形式，其由药学可接受的材料制成，例如纸或纸板盒、玻璃或塑料瓶或罐、可重新密封的袋子（例如，以容纳片剂的“重新装填物”用于放置到不同容器中）、或具有单个剂量的泡罩包装用于根据治疗时间表从包装中挤出。采用的容器可以取决于所涉及的确切剂型，例如，常规的纸板盒一般将不用于容纳液体悬浮液。可行的是，可以在单个包装中一起使用超过一个容器来将单一剂型市场化。例如，片剂可以容纳在瓶子中，瓶子接着容纳在盒子内。优选地，容器是泡罩包装。
试剂盒可以另外包括医师、药剂师或受试者的信息和/或说明书。这些记忆辅助物包括打印在含有药剂的每个隔室或分区上的数字，其与所指定的片剂或胶囊应当摄入的方案的天数相符，或打印在每个隔室或分区上的每周的天数，或包含相同类型信息的卡片。
本文描绘的化合物可以使用本领域中已知的方案，包括，例如，本文中描绘的那些，来评价它们的生物活性。本文的某些化合物证明了出人意料的优异的属性（例如，inhibition of P450（P450的抑制）,Met,Ron等；pharmacokinetic properties（药代动力学特性）等），使得它们成为潜在治疗剂的优异候选物。
本文引用的所有参考文献，无论是以打印的、电子的、计算机可读的保存介质或其他形式，都明确地整体引入本文以供参考，包括但不限于摘要、文章、期刊、出版物、教科书、论文、技术数据表、互联网网站、数据库、专利、专利申请以及专利出版物。
实施例
5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-{(叔丁氧基)-N-[(叔丁基)氧基羰基]羰 基氨基}哒嗪-3-羧酸（A）的合成
Figure BDA00003272449500251
步骤1：A1（400g，2.68mol）于25%氢氧化铵（3L）中的悬浮液在密封的不锈钢高压釜中于130℃加热12h。在该管冷却至0℃之后，过滤混合物。得到的固体用水清洗数次，并在真空下干燥，以得到A2（284g，82%）。
步骤2：在室温下，向A2（284g，2.19mol）于甲醇（3.5L）的溶液中加入NaHCO3（368.4g，4.38mol），之后逐滴加入溴（350g，2.19mol）。在完成添加之后，将混合物搅拌20h，之后过滤并用甲醇清洗数次。将滤液浓缩，并将残余物溶解在水（2L）中并用乙酸乙酯萃取（2L×3）。合并的有机相用10%的硫代硫酸钠水溶液（2L）、饱和碳酸氢钠水溶液（2L）和盐水（2L）清洗，经无水硫酸镁干燥并蒸发。剩余物通过柱层析（EA：PE=2:1）纯化，以得到A3（159.8g，35%）。
步骤3：向冷却至0℃的A4（150g，0.72mol）于甲醇（800mL）的溶液中逐份地加入NaBH4（66g，1.74mol）。得到的混合物于室温搅拌约1h，并进行蒸发。在0℃将水（1L）加入剩余物中，之后加入3N的HCl直至pH=6。得到的混合物用乙酸乙酯进行萃取（400mL×4）。合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到A5（148.6g，98%）。
步骤4：在0℃向A5（147.6g，0.71mol）于THF（3L）的溶液中加入60%NaH（28.4g，0.71mol），得到的混合物在此温度下搅拌30min，之后快速加入A3（147g，0.71mmol）。得到的混合物在回流下加热过夜并蒸发。通过柱层析（PE：EA=4:1）纯化剩余物，以得到进一步的中间体A6（89.3g，37.6%）。
步骤5：向A6（97g，0.288mol）于DMF（1L）的溶液中加入Boc2O（113g，0.519mol）和DMAP（7g，58mmol）。混合物在室温下搅拌过夜，并蒸发。通过柱层析（PE：EA=10:1）纯化剩余物，以得到A7（136g，88%）。
步骤6：将乙酸钠（41g，0.50mol）加入到A7（136g，0.25mol）于乙醇/DMF[（5:1）（1200mL）]的溶液中。使混合物脱气，之后加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2（18.63g，22.5mmol）。得到混合物于90℃在CO氛下加热1.5h，之后蒸发。通过柱层析（PE：EA=1:4）来纯化剩余物，以得到A8（141g，97%）。
步骤7：向A8（141g，0.246mol）于THF（650ml）的溶液中加入1N的LiOH水溶液（390mL）。得到的混合物在室温下搅拌一个周末，之后经2N的HCl酸化至pH=5，用乙酸乙酯萃取（300mL×5）。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到A（134g，99%）。
6-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪 -3-羧酸（B）的合成
Figure BDA00003272449500271
步骤1：在0℃下，向A5（219g，1.05mol）于1,2-二氯乙烷（3500mL）的溶液中加入Boc-D-Pro（141g，0.65mol），之后加入EDCI（163g，0.85mol）和DMAP（21.57g，0.18mol）。得到的混合物在室温下搅拌过夜，之后加入水（3500mL）并分离，水相用DCM（1500mL×3）萃取，经MgSO4干燥，浓缩并通过柱层析纯化（PE：EA=30:1），以得到B1（55.96g，收率：51.1%）。
步骤2：在0℃下，在B1（59.96g，268mmol）于THF（1200mL）的溶液中加入60%的NaH（10.71g，268mmol），得到的混合物在该温度下搅拌30min，之后快速加入A3（55.82g，268mmol）。得到的混合物在回流下加热过夜，并蒸发。经柱层析（PE：EA=4:1）纯化剩余物，以提供进一步的中间体B2（33.95g，37.7%）。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.87(d,3H),5.08(s,2H),6.03-6.09(m,1H),6.42(s,1H),7.14(t,1H),7.35(dd,1H).LC-MS[M+H]+:336.0。
步骤3：向B2（33.95g，101mmol）于DMF（400mL）的溶液中加入BOC2O（39.59g，182mmol）和DMAP（2.46g，20.2mmol）。在室温下将混合物搅拌过夜，并蒸发。经柱层析（PE：EA=10:1）纯化剩余物，将剩余物用PE：EA=10:1处理，以得到B3（46.9g，86.7%）。
步骤4：将乙酸钠（14.34g，175mmol）加入到B3（46.9g，87.4mmol）于乙醇/DMF[（5:1）（480mL）]的溶液中。将混合物脱气，之后加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2（7.14g，8.74mmol）。将得到的混合物于90℃在CO氛下加热过夜，之后蒸发。经柱层析（PE：EA=4:1）纯化剩余物，以得到B4（47.1g，94.0%）。1H-NMR(300MHz,CDC13):δ=1.38(s,18H),1.46(t,3H),1.88(d,3H),4.45-4.53(m,2H),6.18(q,1H),7.13(t,1H),7.34(dd,1H),7.57(s,1H).LC-MS[M+H]+:574.0。
步骤5：向B4（47.1g，82.1mmol）于THF（400mL）的溶液中加入1N的LiOH水溶液（98.5mL）。得到的混合物在室温下搅拌整个周末，之后经2N的HCl酸化至pH=5，用乙酸乙酯萃取（400mL×3）。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到B（45.94g，～100%）。
6-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-[(1S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪 -3-羧酸（C）的合成
Figure BDA00003272449500281
步骤1：在0℃下，向A5（41.8g，200mmol）于1,2-二氯乙烷（800mL）的溶液中加入Boc-L-Pro（26.9g，125mmol），之后加入EDCI（31.1g，163mmol）和DMAP（4.12g，33.8mmol）。得到的混合物在室温下搅拌过夜，之后加入水（350mL）并分离，水相用DCM萃取（150mL×3），经MgSO4干燥，浓缩并用柱层析纯化（PE：EA=30:1），以得到C1（13.72g，收率：65.6%）。
步骤2：从C1到C的步骤与B1到B相似（9.46g，从C1到C的收率：26.4%）
实施例1：{5-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500291
步骤1：向1a（16.0g，114mmol）于DMF（500mL）的溶液中加入NaH（5.5g，137mmol）。将悬浮液在0℃下搅拌0.5h并在0℃逐滴加入CH3I（17.8g，126mmol）。使得到的混合物变暖至室温，持续1h，并蒸发。在剩余物中加入饱和NaHCO3（50mL）和水（50mL）。用DCM（300mL）对悬浮液萃取两次。合并的萃取物用水清洗，经MgSO4干燥并浓缩。用PE：EA=10:1再处理剩余物，以得到1b（11.05g，63.0%）。
步骤2：在0℃下，向1b（15.4g，100mmol）于乙醇（300mL）的搅拌溶液中加入还原铁粉（39.0g，69.6mmol）和2N HCl（20mL）。将得到的混合物在回流下加热2h并过滤。使用乙醇将褐色固体清洗数次。将合并的乙醇相蒸发，并将剩余物溶解在乙酸乙酯（400mL）中并用1.5N Na2CO3水溶液（400mL）清洗。使两相混合物分离，并用乙酸乙酯对水相进行再萃取（250mL×3）。合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并蒸发，以得到1c（10.0g，80.6%）。
步骤11：在室温下，将B（20.00g，36.6mmol）、HATU（28.00g，73.7mmol）和DIEA（14g，108.5mmol）于DMF（200mL）的混合物搅拌0.5h，之后加入1c（10g，81.9mmol）。得到的混合物在室温下搅拌0.5h并蒸发。通过柱层析（EA：MeOH=5:1）来纯化剩余物，以得到1d（18.0g，75.4%）。
步骤12：将1d（18.0g，27.6mmol）溶解在DCM（150mL）和TFA（50mL）的混合物中，在室温下搅拌2小时并蒸发。通过饱和Na2CO3将剩余物调节到pH=8，并用DCM萃取（200mL×5）。将合并的有机相经MgSO4干燥并浓缩。使用甲醇将剩余物磨碎，并过滤，然后将固体溶解在DCM中，并添加HCl于Et2O的溶液，在室温下搅拌混合物过夜，之后经油泵浓缩并干燥，以得到1（13.5g，从1d为84.1%）。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=1.82(d,3H),3.41(s,3H),6.24(q,1H),6.38(d,1H),7.04(s,1H),7.42-7.66(m,3H),8.17(s,1H).LC-MS[M+H]+:452.0.
实施例2：{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500301
从A到2的过程与实施例1相似（70mg，从A为42%）。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.89(d,3H),3.57(s,3H),5.40(s,2H),6.21-6.27(m,1H),6.59(d,1H),7.06-7.12(m,1H),7.26-7.37(m,3H),8.28(d,1H),9.40(s,1H).LC-MS[M+H]+:451.9.
实施例3：{5-[(1S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500302
从C到3的过程与实施例1中相似，得到3（1.29g，收率：从7c为71.3%）。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=1.86(d,3H),3.42(s,3H),6.27(q,1H),6.41(d,1H),7.06(s,1H),7.52(t,1H),7.61-7.70(m,2H),8.23(d,1H),10.47(s,1H).LC-MS[M+H]+:452.1.
实施例4：{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代(3-哌啶基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500311
步骤1：向1b的甲醇溶液中加入10%Pd/C。混合物在H2氛下氢化过夜。过滤掉Pd/C并蒸发滤液得到粗产物4a，4a被用于下一步骤而不经纯化。
步骤2：从4a到4的过程与实施例1中相似（131mg，从A为21%）。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.88(d,3H),1.92-2.08(m,2H),2.47-2.54(m,2H),2.92(d,3H),3.20-3.27(m,1H),3.59-3.65(m,1H),4.39-4.42(m,1H),5.37(s,2H),6.18-6.24(m,1H),7.06-7.11(m,1H),7.31-7.36(m,2H),7.95(d,1H).LC-MS[M+H]+:457.1.
实施例5：{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500312
步骤1：从1a到5a的过程与1b到1c的过程相似，得到2a，2a用于下一步骤而不经纯化。
步骤2：从2a到5的过程与实施例1中相似（6.8mg，从5a为4.2%）。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=1.82(d,3H),6.14-6.21(m,1H),6.32(d,1H),6.89(s,2H),6.99(s,1H),7.47(t,1H),7.56-7.61(m,1H),7.76-7.80(m,1H),7.93(s,1H),10.40(s,1H),11.41(brs,1H).LC-MS[M+H]+:437.9.
实施例6：{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-[1-(2-甲氧基乙基)-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基]甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500321
该合成与实施例1相似（157mg，从B为56%）。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.89(d,3H),3.32(s,3H),3.69(t,2H),4.10-4.15(m,2H),5.38(s,2H),6.23-6.27(m,1H),6.58(d,1H),7.07-7.12(m,1H),7.32-7.44(m,3H),8.13(d,1H),9.39(s,1H).LC-MS[M+H]+:496.0.
实施例7：{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-乙基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺的合成
Figure BDA00003272449500322
步骤1：在室温下，将氢化钠（0.63g，于矿物油中的60%分散液，15.8mmol）加到化合物1a（2g，14.4mmol）于DMF（20mL）的溶液中，并搅拌30min。将乙基碘（2.2g，14.4mmol）加到反应混合物中并在室温下搅拌16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水清洗，经硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到化合物7a（2g，60%）。
步骤2：将化合物7a（5g，29.7mmol）、于AcOH（5mL）中的Fe（6.7g，119mmol）、水（50mL）和MeOH（50mL）的混合物在回流下加热30min。在真空下去除溶剂，并通过柱层析纯化剩余物，得到化合物7b（2.5g，60%）。
步骤3：向化合物7b（1g，7.25mmol）于DMF（30ml）的溶液中加入HATU（4.13g，10.87mmol）、化合物B（20mg，163mmol）、DIEA（3.8mL，21.74mmol），将混合物在室温下搅拌过夜。用水处理反应混合物，并用EA萃取。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，并在减压下浓缩，通过快速层析（flash chromatography）（DCM：MeOH=10:1）纯化粗产物，得到化合物7c（3.2g，66%）。
步骤4：向化合物7c（2g，3mmol）于DCM（5mL）的溶液中加入TFA（3mL）。将混合物在室温下搅拌4h并蒸发。通过柱层析（DCM：MeOH=20:1）来纯化剩余物，得到7（700mg，50%）。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ=10.04(s,1H),8.23-8.24(d,1H),7.69-7.73(dd,1H),7.56-7.61(m,1H),7.44-7.50(t,1H),6.97(s,1H),6.92(s,2H),6.33-6.37(d,1H),6.15-6.18(q,1H),3.85-3.92(q,2H),1.80-1.82(d,3H),1.17-1.22(t,3H),.LC-MS[M+H]+:467.0.
实施例8：生物学数据
Met、ALK生化检定
激酶检定如Fabian等人(2005)Nature Biotechnology,vol.23,p.329和Karaman等人(2008)Nature Biotechnology,vol.26,p.127中所述的进行检定。
对于大部分检定，激酶标记的T7噬菌体株在24孔板中的来自BL21菌株的大肠杆菌宿主中平行生长。大肠杆菌生长到对数期，用来自冷冻储备的T7噬菌体感染（感染复数～0.1）并在32℃下震荡孵育，直至溶菌（～90分钟）。将溶菌液离心（6,000×g）并过滤（0.2mm），以除去细胞碎片。余下的激酶在HEK-293细胞中生产，之后用DNA进行标记以用于qPCR检测。抗生蛋白链菌素包被的磁珠用生物素化的小分子配体在室温下处理30分钟，以产生激酶检定用的亲和树脂。配体处理过的珠子用过量生物素封闭并用封闭缓冲液（SeaBlock（Pierce），1%BSA、0.05%Tween20、1mM DTT）洗涤以除去未结合的配体并减少非特异性噬菌体结合。通过在1×结合缓冲液（20%SeaBlock、0.17×PBS、0.05%Tween20、6mM DTT）中结合激酶、配体化亲和珠以及测试化合物来进行结合反应。测试化合物制备为于100%DMSO的40×储液，并直接稀释到检定中。所有反应在聚丙烯384孔板中以0.04ml的终体积进行。检定板在室温下振荡孵育1小时，亲和珠用洗涤缓冲液（1×PBS、0.05%Tween20）洗涤。然后使珠子在洗脱缓冲液（1×PBS、0.05%Tween20、0.5mM非生物素化亲和配体）中再悬浮并在室温下振荡孵育30分钟。洗脱液中的激酶浓度通过qPCR测定。
本发明中R6为不饱和杂环的大部分实例是选择性的c-Met抑制剂。具体地，R-对映结构体（例如，实施例1）或外消旋混合物（例如，实施例2、5、6和7）在该c-Met检定中的IC50值<5nM，而对于ALK的相应IC50更高（>10nM）。
相比之下，S-对映结构体（实施例3）在该c-Met检定中在高达50nM时并不表现出任何显著的抑制。
此外，R6为饱和杂环的实例（实施例4）在c-Met和ALK检定中的IC50都>100nM，而R6为芳香环的实例（如下所示）对于c-Met和ALK是有效的（IC50<5nM）。
Figure BDA00003272449500341
因此，R6为不饱和杂环的化合物的R-对映结构体（例如，实施例1）具有出人意料的生物特性，是有效且有选择性的c-Met抑制剂（至少与ALK相比）。
c-Met受体磷酸化检定
在该检定中使用A549细胞。细胞以40,000细胞/孔的密度接种在24孔板的生长培养基（RPMI+10%FBS）中并在37℃培养过夜以贴壁。细胞暴露于饥饿培养基（RPMI+1%BSA）。将测试化合物的稀释液加到板中并在37℃孵育1小时。之后将细胞冷却至室温，15分钟后用40ng/ml的HGF刺激15分钟。细胞用冰冷PBS洗涤一次，然后在4℃用110μl/孔的裂解缓冲液（Cell Signaling#9803+0.2%蛋白酶抑制剂，Sigma P1860）裂解1小时。将细胞裂解液转移至微离心管并于4℃以10000rpm旋转10min，根据生产商的说明书通过HumanPhospho-HGFR/c-Met ELISA试剂盒（R&D，DYC2480）对磷酸化的HGFR进行定量。
实施例1的化合物1对U-87MG肿瘤异种移植模型的体内抗肿瘤效力
（a）基于c-Met的细胞磷酸化状态的细胞系选择
从ATCC获得Hela、NIH-3T3、HEK293T、U87MG、PC3和Caki，并在全生长培养基的10cm板中培养。活跃增生的细胞用1xPBS清洗一次，之后在裂解缓冲液中裂解，预超声（“prosonicated”），并通过在10,000rpm离心10分钟使其澄清。使用BCA蛋白检定试剂盒来测量总蛋白。对于各个细胞系装载等量的蛋白裂解物以进行蛋白质印迹。
（b）动物：
从上海斯莱克实验动物有限责任公司（中国上海）购买Balb/c裸鼠（6周龄，雄性）。在移植前，所有的小鼠都保持在没有病原菌的设施中约2周。它们被饲养在含有玉米芯的塑料盒（4～6只小鼠/笼）中并保持在12-h光照：黑暗周期的无病原菌设施中（20～25℃，30～70%湿度）。
（c）异种移植人类肿瘤模型
通过在无胸腺的Balb/c裸鼠中经皮下注射在右侧肋腹植入U-87MG细胞（3.6×106/小鼠，120μL），从而建立U-87MG异种移植模型。使肿瘤达到120～380mm3的大小。
组别和剂量：
组别 n 剂量 处理
载体对照 8 制剂载体 ig，BID×11天
实施例1 8 25mg/kg ig，BID×11天
实施例1 8 50mg/kg ig，BID×11天
注：所有的处理都通过口腔灌胃（10ml/kg）来进行。对于一天多次给药，第二次给药在第一次给药之后7小时后进行。
（d）观察指标
使用测径器，一周测量肿瘤体积两次。通过公式<肿瘤体积=长度×宽度2/2>来计算肿瘤体积。
在治疗开始之后，肿瘤生长抑制（GI）的百分比通过以下公式计算：
GI=100×{1-[(化合物治疗组的肿瘤体积最终-肿瘤体积最初)/(载体处理组的肿瘤体积最终-肿瘤体积最初)]}
相对肿瘤体积被定义为，在指定时点的体积与在治疗开始时的体积之间的比率。相对肿瘤体积（RTV）通过公式RTV=100×TVT/TV0来计算，其中
TV0：肿瘤体积最初
TVT：T时点的肿瘤体积
相对肿瘤生长率（T/C%）通过下式计算：
T/C%=100×TRTV/CRTV
TRTV：治疗的相对肿瘤体积
CRTV：对照的相对肿瘤体积
各个小鼠的体重随肿瘤大小测量一周称两次。重量损失的百分比通过公式计算：
重量损失的百分比=100%×(体重最初-体重最终)/体重最初
在实验结束时测量肿瘤重量。肿瘤抑制率（IR）通过公式计算：
IR=(WC-WT)/WC×100%
（e）结果
在肿瘤移植24天后开始治疗，此时平均肿瘤体积达到230.52±8.04mm3（均值±SE）。在11天的连续治疗后，25和50mg/kg ig BID的实施例1显示出显著的肿瘤生长抑制（GI），GI率分别为65.95%（P<0.01）和88.71%（P<0.01）。该结果总结在表8.1和图2中。
表8.1实施例1对肿瘤体积（均值±S.E，mm3）和GI（%）的效果
Figure BDA00003272449500361
注：与载体对照相比，*表示P值<0.05，**表示P值<0.01。
尽管我们已经描述了本发明的多个实施方式，但是，显然我们的基础实施例可被改变以提供利用本发明化合物和方法的其他实施方式。因此，应该理解的是，本发明的范围由所附权利要求而不是由以示例方式呈现的具体实施方式限定。
所有在本申请中引用的参考资料（包括文献、授权专利、公开的专利申请和共同待决的专利申请）的内容都明确地整体并入本文以作参考。除非另外定义，否则所有本文中使用的技术和科学术语都遵从本领域普通技术人员公知的意义。

Claims (12)

1.一种式I的化合物：
Figure FDA00003272449400011
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中：
R1、R2、R3、和R4各自独立地为H、烷基或Z1；
R6为不饱和杂环基，其中R6任选地被1～3个独立选自烷基、环烷基、杂环基、烷氧基、羟烷基和Z1的基团取代；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
2.一种式II的化合物：
Figure FDA00003272449400012
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中
R1、R2、R3、R4、R7和R8各自独立地为H、烷基或Z1；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
3.一种式III的化合物：
或其盐；或其前药或其前药的盐；或其水合物、溶剂合物或多晶型物；其中
R7和R8各自独立地为H、烷基或Z1；
各个Z1是卤素、CN、NO2、OR15、SR15、S(O)2OR15、NR15R16、C1～C2全氟烷基、C1～C2全氟烷氧基、1,2-亚甲基二氧基、C(O)OR15、C(O)NR15R16、OC(O)NR15R16、NR15C(O)NR15R16、C(NR16)NR15R16、NR15C(NR16)NR15R16、S(O)2NR15R16、R17、C(O)R17、NR15C(O)R17、S(O)R17、S(O)2R17、R16、氧代、C(O)R16、C(O)(CH2)nOH、(CH2)nOR15、(CH2)nC(O)NR15R16、NR15S(O)2R17，其中各个n独立地为0～6；
各个R15独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷基；
各个R16独立地为氢、烯基、炔基、C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基；且
各个R17独立地为C3～C6环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1～C4烷基或被C3～C6环烷基、芳基、杂环基或杂芳基取代的C1～C4烷基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中R8是氢且R7是C1～C3烷基。
5.根据权利要求3所述的化合物，其中各个Z1独立地为卤素。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是{5-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{5-[(1S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-6-氨基哒嗪-3-基}-N-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-[1-(2-甲氧基乙基)-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基]甲酰胺；
{6-氨基-5-[(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]哒嗪-3-基}-N-(1-乙基-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基)甲酰胺。
8.一种治疗受试者的疾病的方法，包括对所述受试者施用权利要求1、2、3、4、5或6中任一项所述的化合物。
9.一种治疗受试者的疾病的方法，包括对所述受试者施用包含权利要求1、2、3、4、5或6所述的化合物的组合物。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述疾病由c-met激酶介导。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述疾病是癌症或增殖疾病。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病是肺、结肠、乳腺、***、肝脏、胰腺、脑、肾脏、卵巢、胃、皮肤的癌症、或骨癌、胃癌、胰腺癌、神经胶质瘤、淋巴瘤、成神经细胞瘤、和肝细胞癌、***状肾癌、或头颈鳞状细胞癌。
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