CN103275145A

CN103275145A - 利用离子液体超声提取连翘酯苷类化合物的方法

Info

Publication number: CN103275145A
Application number: CN2013102367167A
Authority: CN
Inventors: 孙印石; 王建华
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2013-06-14
Filing date: 2013-06-14
Publication date: 2013-09-04

Abstract

本发明涉及一种利用离子液体超声提取连翘酯苷类化合物的方法。该方法以粉碎的连翘叶为原料，应用离子液体[C₆MIM]Br（溴化1-己基-2-甲基咪唑）作为溶剂，将连翘叶粉末加入浓度为0.6mol/L的离子液体溶剂中，[C₆MIM]Br离子液体溶剂和连翘叶粉末的比例为15：1（ml/g），超声提取10-60min。该方法采用离子液体为提取溶剂，具有提取时间短，提取率高，提取溶剂绿色环保等优点。

Description

利用离子液体超声提取连翘酯苷类化合物的方法

技术领域

本发明涉及一种利用离子液体超声提取连翘酯苷类化合物的方法，属于医药技术领域。

背景技术

离子液体是指在室温或接近室温下呈现液态的、完全由阴阳离子所组成的盐，也称为低温熔融盐。离子液体作为离子化合物，其熔点较低的主要原因是因其结构中某些取代基的不对称性使离子不能规则地堆积成晶体所致（Wilkes，2002；Welton，1999）。与有机溶剂不同，离子液体同时存在极性区和非极性区，因而对有机物、无机物、生物大分子乃至气体等都有较好的溶解性。在萃取分离领域，离子液体由于其液态范围宽，不挥发，结构可调控，对目标物具有很好的选择性，而且可以反复多次使用，被认为是一种可替代传统溶剂的新型绿色溶剂。目前所研究的离子液体中，阳离子主要以咪唑阳离子为主，阴离子主要以卤素离子和其它无机酸离子（如四氟硼酸根等）为主（Sun等，2010；Pandey，2006）。

中药的化学成分十分复杂，既有含有多种有效成分，又有无效成分，也包含有毒成分。提取其有效成分并进一步加以分离、纯化，得到有效单体是中药研究领域中的一项重要内容。中药提取就是利用一些技术最大限度提取其中有效成分，使得中药制剂的内在质量和临床治疗效果提高，使中药的效果得以最大限度的发挥。从中药中提取化学成分常用的方法有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和升华法。其中溶剂提取法是实际工作中应用最普遍的方法，原理是根据中药中各化学成分的溶解性能，选用对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，用适当的方法将有效成分尽可能完全地从药材组织中溶解出来。在溶剂提取法中，常采用有机溶剂作为提取溶媒，如甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等，这些溶媒具有较大的挥发性，会产生大量的有机蒸气，不仅造成环境污染，还对人类的健康构成极大威胁。因此，积极寻找和开发污染小、易回收的绿色溶剂成为广大提取工作者的广泛共识。近十年来，离子液体由于具有溶解范围广、不挥发性、不可燃性、热稳定性好等优点，在中药化学成分提取中方面已有相关报道（Du等，2009；Ma等，2010），但由于离子液体价格较高，距离工业化提取还有一段很长的路要走。

连翘[(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)]，别名连壳、黄花条、黄链条花，是木犀科连翘属植物，秋季果实初熟尚带绿色时采收,除去杂质,蒸熟,晒干,习称“青翘”，果实熟透时采收,晒干,除去杂质,习称“老翘”。具有清热解毒、消肿散结、疏散风热之功效（2010版中国药典）。连翘为落叶灌木，在我国分布很广，是我国典型的药用和绿化树种之一。目前对连翘的研究主要集中在果实上，而对连翘叶的研究较少。连翘的主要化学成分以连翘酯苷为代表的苯乙醇苷类物质和以连翘苷为代表的木脂素类物质，其中以连翘酯苷含量最高（李卫建等，2006；夏伯侯等，2010；曲欢欢等，2008）。目前连翘中连翘酯苷的提取主要应用回流提取法（白吉庆等，2011）和超声提取法（张杲等，2005），而离子液体超声提取法未见报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种利用离子液体超声提取连翘酯苷类化合物的方法，目的在于提供一种快速、绿色、高效的提取连翘叶中两种连翘酯苷类成分的新方法，即应用含有阴离子和阳离子的离子液体从连翘叶中超声波法提取连翘酯苷I（forsythoside I）和连翘酯苷A（forsythoside A），该方法分离条件温和，提取效率高，且提取时间短，所用提取溶剂绿色环保。

本发明是将连翘叶粉碎，应用阴离子为Br^-、阳离子为[C₆MIM]⁺（1-己基-2-甲基咪唑）的离子液体作为溶剂，将连翘叶粉末加入浓度为0.6mol/L的[C₆MIM]Br（溴化1-己基-2-甲基咪唑）离子液体溶剂中超声提取10-60min得到连翘叶提取物；所述[C₆MIM]Br离子液体溶剂和连翘叶粉末的比例为15：1（ml/g）。

本发明采用离子液体为提取溶剂，提取时间短，提取率高，提取溶剂绿色环保。证明了离子液体在一定程度上可以代替传统的挥发性、有毒有机溶剂，作为一种新型的绿色溶剂，有望被应用于天然产物或中草药成分的提取分离应用中。

附图说明

图1为采用本发明的方法提取的连翘叶样品高效液相色谱图。

图2是离子液体阴离子种类对连翘酯苷I和连翘酯苷A提取率的影响。

图3是离子液体阳离子种类对连翘酯苷I和连翘酯苷A提取率的影响。

图4是离子液体浓度对连翘酯苷I和连翘酯苷A提取率的影响。

图5是料液比对连翘酯苷I和连翘酯苷A提取率的影响。

图6是超声提取时间对连翘酯苷I和连翘酯苷A提取率的影响。

具体实施方式：

实施例1

1实验流程设计

采集连翘叶，粉碎，过40-60目筛。精确称取0.2g样品粉末，采用单因素实验方法，使用离子液体为提取溶剂，在不同浓度、液固比、提取时间等实验条件下，采用超声波法提取样品。用0.45μm的微孔滤膜过滤后，进行HPLC检测。

2色谱条件

使用高效液相色谱仪，C₁₈色谱柱，流动相乙腈-水（体积比为18：82）等度洗脱，流速1.0mL/min，检测温度30℃，检测波长280nm，进样量20μL，样品的色谱图见图1。

3对照品溶液的制备

精确称取对照品连翘酯苷I2.3mg和连翘酯苷A3.5mg置于10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。制成混合对照品溶液，保存于4℃冰箱中。

4样品溶液的制备

样品经中草药粉碎机粉碎后，过筛，精确称取连翘叶粉末0.2g。根据实验要求，分别加入不同种类及浓度的离子液体后定容，在不同的条件下超声波提取。提取液分别经0.45μm微孔滤膜过滤后供HPLC检测。

5阴离子的筛选

在相同的条件下（样品0.2g，浓度为0.6mol/L，液固比为30：1，提取时间20min），比较了三种不同阴离子离子液体[C₃MIM]I、[C₄MIM]BF₄、[C₆MIM]Br对连翘酯苷I和连翘酯苷A的提取率。结果表明（图2）[C₆MIM]Br具有最高的提取率，其次是[C₄MIM]BF₄。所以，Br^-为所选溶剂中的最优阴离子。

6阳离子的筛选

以Br为阴离子，选择五种不同的阳离子做溶剂。在相同的提取条件（样品0.2g，浓度为0.6mol/L，液固比为30：1，提取时间20min）下比较了具有五种不同阳离子（[C₂MIM]⁺、[C₃MIM]⁺、[C₄MIM]⁺、[C₆MIM]⁺、[C₈MIM]⁺）的离子液体对连翘酯苷提取率的影响。结果表明（图3）[C₆MIM]Br具有最高的提取率，[C₈MIM]Br次之。因此，[C₆MIM]Br为所选离子液体中的最优提取溶剂。

7离子液体浓度的影响

精密称取40-60目的样品0.2g，使用不同浓度（0.1、0.3、0.6、0.9、1.2mol/L）的离子液体[C₆MIM]Br超声提取20min，提取液应用HPLC检测。结果表明（图4），当离子液体[C₆MIM]Br浓度为0.6mol/L时具有最高的提取率，

当离子液体浓度为0.3mol/L、0.9mol/L和1.2mol/L时提取率相近（p＞0.05）。因此将[C₆MIM]Br的浓度设定为0.6mol/L作为最终的离子液体浓度。

8液固比的影响

在其它实验条件（样品0.2g、溶剂为[C₆MIM]Br、浓度为0.6mol/L、提取时间为20min）相同时，考察不同液固比对连翘酯苷类成分的影响。结果表明，随着液固比的升高，提取率增大；液固比为15：1时，提取率最高；当液固比高于15：1时，提取率降低（图5）。因此，15：1为本实验的最优液固比条件。

9提取时间的影响

精确称取40-60目样品0.2g，使用浓度为0.6mol/L的离子液体[C₆MIM]Br在不同的超声时间（5、10、20、30、45、60min）内考察提取时间对提取率的影响。测定结果见图6，提取时间低于5min时，提取率降低，但提取时间大于10min后，随着提取时间的延长，提取率差异不显著（p＞0.05）。为了节省时间，最终将提取时间设定为10min。

通过以上提取实验，得到离子液体超声波法提取连翘叶中连翘酯苷I和连翘酯苷A的最佳工艺条件：提取溶剂为[C₆MIM]Br，溶剂浓度为0.6mol/L，液固比为15：1，提取时间为10min。在此条件下，连翘酯苷I和连翘酯苷A的提取率分别为8.87和107.37mg/g。

实施例2：

精确称取40-60目连翘叶粉末样品0.3g，使用浓度为0.6mol/L的离子液体[C₆MIM]Br（溴化1-己基-2-甲基咪唑）4.5mL作为溶剂在超声波提取器中提取20min，连翘酯苷I和连翘酯苷A的提取率分别为8.90和108.52mg/g。

Claims

1.一种利用离子液体超声提取连翘叶中两种连翘酯苷类化合物的方法，其特征在于将连翘叶粉碎，应用阴离子为Br^-、阳离子为[C₆MIM]⁺的离子液体作为溶剂，将连翘叶粉末加入浓度为0.6mol/L的[C₆MIM]Br离子液体溶剂中超声提取10-60min得到连翘叶提取物；所述[C₆MIM]Br离子液体溶剂和连翘叶粉末的比例为15：1（ml/g）。