CN102302615B - 一种祖师麻叶有效部位群、其制备方法、药物组合物和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种祖师麻叶有效部位群、其制备方法、含该祖师麻叶有效部位群的药物组合物和其作为制备治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物中的用途，属于中药药剂学技术领域。本发明的祖师麻叶有效部位群有效成分含量高，药效显著，且用药部位采收不破坏植被和环境，提取过程简便，可操作性强。

Description

一种祖师麻叶有效部位群、其制备方法、药物组合物和应用

技术领域

本发明涉及中药药剂学技术领域，具体涉及祖师麻叶有效部位群、其制备方法、含该祖师麻叶有效部位群的药物组合物和其作为制备治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物中的用途。

背景技术

祖师麻为又名祖司麻、走师麻，为瑞香科黄瑞香(Daphnegiraldii Nitsche)、陕甘瑞香(又名唐古特瑞香)(D.tanguticaMaxim)、凹叶瑞香(D.retusaHemsl)的根皮或茎皮。味辛、苦，性温，小毒，具有祛风除湿、止痛散瘀的功效，主治风湿痹痛、四肢麻木、头痛、胃痛、跌打损伤等症。民间有“打得满地爬，离不开祖师麻”的谚语，也说明了其镇痛作用深入人心。

一直以来，各类药学书籍等文献中普遍说明其药用部位为根皮和茎皮，但对根皮和茎皮的采收过程是毁灭性的，对当地植被破坏严重，目前各地已采取了限制采挖的措施，药材资源减少。而祖师麻叶，人们一直认为药效不理想，目前尚未被利用，其采收过程不破坏植被和环境，不仅符合可持续发展的要求，且对于保护生态环境非常有利。

目前，以祖师麻为原料的成方制剂有祖师麻片、祖师麻膏、祖师麻注射液、黄瑞香注射液等，原药材需求量较大，已无法满足制剂和临床需求。

有关祖师麻的发明专利申请有(1)祖师麻叶提取物及其药物用途(201010574800.6)，该发明涉及祖师麻叶提取物的制法及其药物主要60-90％的乙醇回流提取，大孔树脂精制，即得，该提取物用于制备关节炎的药物。(2)一种祖师麻的有效组分群及其制备方法和应用(200810243322.3)，该发明涉及祖师麻抗类风湿关节炎有效组分群的制备，其活性成分为总香豆素和总皂苷，按一定重量配比制成，其制法为采用醇提，再分别用两种有机溶剂萃取、回收、浓缩得到两种萃取物，一种为二萜类有毒成分，弃去，另一种萃取物为香豆素类成分，将香豆素成分萃取后的药液，再用大孔树脂处理得总皂苷成分，将总香豆素类成分和总皂苷类成分按一定重量配比混合而成。(3)一种祖师麻的有效组分及其制备方法与应用(200510013864.8)，该发明涉及祖师麻的有效组分及其制备方法与应用，采用水或含水低级醇厚提取，树脂精制，得到祖师麻的有效组分，该药物由祖帅麻中的祖师麻甲素、西瑞香素、瑞香辛等组成，总香豆素的含量在50～90％之间。所得到的祖师麻有效组分可作为抗炎镇痛应用，可制成口服剂，注射剂，外用制剂等等。

综合研究结果表明：有关祖师麻(茎皮和根皮)的研究内容较多，主要药效成分明确(香豆素和皂苷)，制备工艺和药效学研究较深入，而祖师麻叶的研究几乎为空白，其药效物质基础研究薄弱，未明确其有效组分及其含量，药效学实验研究也非常少，但一般中药的药用部位不同，其化学成分种类、含量会有很大差异。

发明内容

本发明的目的在于提供一种祖师麻叶有效部位群，其主要成分为总香豆素和总黄酮。

本发明的另一目的在于提供一种祖师麻叶有效部位群的制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种含有祖师麻叶有效部位群的药物组合物。

本发明的另一目的在于提供祖师麻叶有效部位群在制备治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物中的用途。

具体而言，本发明提供：

(1)一种祖师麻叶有效部位群，其特征在于含有总香豆素和总黄酮，其中总香豆素含量为10～90％，总黄酮含量为5～60％。

(2)一种制备上述(1)所述祖师麻叶有效部位群的方法为：将祖师麻叶粉碎过4号筛(65目)，用3-15倍的有机溶剂提取，提取液回收有机溶剂，加水分散后，离心或滤过，上清液上大孔吸附树脂，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用30-90％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，粉碎即得。

(3)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中洗脱液回收乙醇后，可再加水稀释，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压回收溶剂，浓缩，干燥，粉碎即得。

(4)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中洗脱液回收乙醇后，可再上聚酰胺(60～90目)层析柱，以不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，收集60-90％乙醇洗脱液，洗脱液减压回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎即得。

(5)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中所述有机溶剂为乙醇和/或乙酸乙酯。

(6)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中所述加水分散是将提取液稀释至生药含量为0.1-0.8g/ml；优选为0.2-0.4g/ml。

(7)上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中所述大孔吸附树脂采用LS-300和/或LS-303。

发明人经过大量试验研究发现，不同型号的大孔吸附树脂对祖师麻叶有效部位群含量影响很大，发明人分别采用LS-300、LS-303、LS-202、D101四种型号大孔吸附树脂对其进行了详细的研究，结果见表1：

表1四种型号大孔吸附树脂静态吸附量和解析量比较试验结果

以上研究结果可见，LS-300和LS-303两种型号对总黄酮和总香豆素的吸取量较高，解吸率较达到85％以上，故确定选用这两种型号的树脂。

(8)上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中用乙醇洗脱时的乙醇浓度为70％。

(9)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中所述回收和浓缩指在常压或减压下进行。

(10)根据上述(2)制备祖师麻叶有效部位群的方法，其中所述的干燥指常压干燥、真空干燥等。

(11)一种祖师麻叶有效部位群在制备治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物中的用途。

(12)一种治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物组合物，其包含祖师麻叶有效部位群和药物赋形剂。

(13)根据(12)所述治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物组合物为口服固体制剂，其中总香豆素和总黄酮以1∶0.20～15.0重量比与常规药物固体赋形剂混合，以常规制剂工艺制成口服固体制剂。其中片剂辅料主要包含淀粉、糊精、蔗糖粉、硬脂酸镁、滑石粉等；硬胶囊辅料主要包括淀粉、糊精、纤维素衍生物等；软胶囊辅料主要包括玉米油、蜂蜡、明胶、水、甘油、尼泊金乙酯、可可壳色素等；颗粒剂辅料主要选自淀粉、糊精、蔗糖粉或甜菊苷或甜蜜素或蛋白糖等。

(14)根据(12)所述治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物组合物为口服液体制剂，其中总香豆素和总黄酮以1∶10～50重量比与常规液体制剂药物赋形剂混合，以常规制剂工艺制成口服液体制剂。其中口服液辅料主要选自蔗糖、甜菊苷或甜蜜素或蛋白糖、吐温-80、尼泊金乙酯、苯甲酸及其钠盐等；

(15)根据(12)所述治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物组合物为固体外用制剂，其中总香豆素和总黄酮以1∶10～50重量比与常规固体外用药物赋形剂混合，以常规制剂工艺制成固体外用制剂。其中外用巴布剂辅料主要包括聚丙烯酸、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、卡波姆、高岭土、丙二醇、明胶、酒石酸、甘羟铝、聚维酮、乙二胺四乙酸(EDTA)、氮酮、冰片等。外用膏剂辅料主要包括明胶、甘油、氮酮、尼泊金乙酯、苯甲酸等；外用贴片辅料主要包括乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚乙二醇等。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供的祖师麻叶有效部位群其镇痛、抗炎作用明显优于祖师麻提取物。

(2)本发明制备祖师麻叶有效部位群的方法，有效成分含量高，方法简便，易于产业化生产。

(3)本发明所使用的原料为祖师麻植株的叶子，采收过程只采收其叶子，不影响植株生长，每年均可采收，不破坏植被和环境，符合可持续发展的要求；目前祖师麻使用的部位为根皮和茎皮，采收时药农均是将其连根抜出，采取的是毁灭性的手段，对产地植被造成严重破坏，且其资源日益匮乏，并造成水土流失，生态环境破坏严重，不符合科学发展观的要求。

(4)一直以来，祖师麻用药部位为其根茎，人们也一直认为叶子的药效不理想，目前尚未被利用。本发明人通过大量试验研究意外发现，祖师麻叶中有效成分含量较祖师麻药材(根皮和茎皮)高，其中：指标成分之一的祖师麻甲素，叶子中含量可达1.602％，而根皮和茎皮大部分在0.2-1.0％之间；采用祖师麻叶作为提取原料，提取纯化更容易，得率更高。其采收过程不破坏植被和环境，不仅符合可持续发展的要求，且对于保护生态环境非常有利。

(5)祖师麻叶的采收加工及提取过程较祖师麻药材更为简便、不需要特殊的劳动保护。祖师麻叶采收过程可徒手采摘的方法进行，而药材采收需剥取其根皮或茎皮，都采收连根抜起或使用砍刀砍伐后，再剥取其皮部，由于祖师麻皮部含有二萜类等对呼吸道刺激性强的成分，故剥取其皮时需要一定的防护措施，而叶子由于二萜类成分含量极低，没有刺激性气味，故不需采取防护措施；同理，在粉碎时，祖师麻根皮和茎皮刺激性非常强，尤其对口、眼、鼻，故必须采取严格的防护措施，而叶子刺激性很小，不需要特殊防护。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1：祖师麻叶有效部位群的制备方法

将5公斤祖师麻叶粉碎过4号筛(65目)，用12倍的60％乙醇回流提取三次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压(-0.084Mpa)回收乙醇，加水分散至含生药0.3g/ml，离心(4000转/分钟)，上清液上LS-300型大孔吸附树脂柱，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用2.5BV70％乙醇洗脱，洗脱液减压(-0.084Mpa)回收乙醇后，加水稀释至含生药1.5g/ml，继用等量乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压(-0.084Mpa)回收溶剂并浓缩至相对密度1.20(80℃)，真空干燥，粉碎即得。

实施例2：祖师麻叶有效部位群的制备方法

将5公斤祖师麻叶粉碎过4号筛(65目)，加5倍的60％乙醇浸泡36小时，装入渗漉桶中，以3ml·min^-1·kg^-1的流速，进行渗漉，共用溶剂12倍量，收集渗漉液，减压(-0.084Mpa)回收溶剂，加水分散至含生药0.3g/ml，离心(4000转/分钟)，上清液上LS-303型大孔吸附树脂柱，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用2.5BV70％乙醇洗脱，洗脱液减压(-0.084Mpa)回收乙醇后，加水稀释至含生药1.5g/ml，继用等量乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压(-0.084Mpa)回收溶剂并浓缩至相对密度1.20(80℃)，真空干燥，粉碎即得。

实施例3：祖师麻叶有效部位群的制备方法

将5公斤祖师麻叶粉碎过4号筛(65目)，用8倍的乙酸乙酯回流提取三次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压(-0.084Mpa)回收溶剂，加水分散至含生药0.3g/ml，离心(4000转/分钟)，上清液上LS-300型大孔吸附树脂柱，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用2.5BV70％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压(-0.084Mpa)回收乙醇并浓缩至相对密度1.20(80℃)，真空干燥，粉碎即得。

实施例4：祖师麻叶有效部位群的制备方法

将5公斤祖师麻叶粉碎过4号筛(65目)，加5倍的60％乙醇浸泡36小时，装入渗漉桶中，以3ml·min^-1·kg^-1的流速，进行渗漉，共用溶剂12倍量，收集渗漉液，减压(-0.084Mpa)回收溶剂，加水分散至含生药0.3g/ml，离心(4000转/分钟)，上清液上LS-300型大孔吸附树脂柱，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用2.5BV70％乙醇洗脱，洗脱液减压(-0.084Mpa)回收乙醇后，加水稀释至含生药1.5g/ml，上聚酰胺(60～90目)层析柱，以0-90％乙醇进行梯度洗脱，收集60-90％乙醇洗脱液，洗脱液减压(-0.084Mpa)回收溶剂并浓缩至相对密度1.20(80℃)，真空干燥，粉碎即得。

实施例5：祖师麻叶有效部位群片剂的制备方法

处方：

祖师麻叶有效部位群：100g

淀粉：              100g

糊精：              80g

蔗糖：              15g

硬脂酸镁：          适量

滑石粉：            适量

制成                1000片

制法：取处方量的祖师麻叶有效部位群、淀粉、糊精、蔗糖混匀，制成颗粒，在60℃以下干燥，加入适量硬脂酸镁、滑石粉，混匀，压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

实施例6：祖师麻叶有效部位群胶囊剂的制备方法

处方：

祖师麻叶有效部位群：100g

淀粉：              100g

糊精：              80g

制成                1000片

制法：取处方量的祖师麻叶有效部位群、淀粉、糊精、蔗糖混匀，制成颗粒，填充制成1000粒，即得。

实施例7：祖师麻叶有效部位群软胶囊剂的制备方法

处方：

祖师麻叶有效部位群：50g

玉米油：            200g

蜂蜡：              4.8g

蔗糖：              15g

制成                1000粒

制法：取处方量的祖师麻叶有效部位群，粉碎，过120目筛，再与玉米油、蜂蜡液(加热深化，滤过)混合，经胶体磨研匀，使药物以极细腻的质点形式均匀的悬浮于玉米油中，制成囊化液；另取明胶、甘油等囊皮的组成成分放入夹层罐中，蒸气夹层加热，使其溶化，成为胶浆；将囊化液、胶浆分别放入料斗中，共压制成1000软胶囊，干燥，即得。

实施例8：祖师麻叶有效部位群外用膏的制备方法

处方：

祖师麻叶有效部位群：3000g

明胶：              75g

甘油：              300g

氮酮：              70g

制成                1000贴

制法：取处方量的祖师麻叶有效部位群，粉碎，过120目筛，备用；另取明胶75g，加5倍量水充分溶胀后，沥去多余的水，加入300g的甘油加热至明胶完全溶解，并浓缩至540g，加入上述细粉，并加入70g的氮酮、0.1％尼泊金乙酯、0.4％的苯甲酸，充分搅拌均匀，共制成4500g，摊涂于无纺布上，加上盖衬，切割成1000贴，即得。

实施例9：祖师麻叶有效部位群巴布剂的制备方法

处方：

祖师麻叶有效部位群：400g

聚丙烯酸：          200g

甘羟铝：       8g

柠檬酸：       8g

交联聚维酮：   80g

丙二醇：       1200g

氮酮：         80g

二乙胺四乙酸： 200g

制成           1000贴

制法：将甘羟铝、二乙胺四乙酸加入甘油中，充分混合，再加入聚丙烯酸，继续混合。另取交联聚维酮和柠檬酸溶解在水中；分别取等份的上述溶液依次加入，充分混合，将混合物涂于无纺布上，加上盖衬，切割成1000贴，即得。

试验例10：祖师麻叶有效部位群含量测定

(1)仪器与试药

仪器日立し-2001型紫外-可见分光光度计；高效液相色谱仪(美国TSP公司system***)，配P4000泵，UV1000检测器，SEPU3000数据工作站(杭州普惠)。电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司，型号：BS210S d＝0.1mg)。迪马C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)。

试剂甲醇为色谱纯试剂，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

对照品芦丁(供含量测定用，0080-9705)祖师麻甲素(瑞香素)(供含量测定用，批号：0900-200001)均购自中国药品生物制品检定所。

样品：根据实施例1、2、3、4制备方法自制的样品。

(2)方法与结果

①总香豆素含量测定

对照品溶液的制备取祖师麻甲素对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含祖师麻甲素0.1mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml与1.0ml，分别置5ml量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在327nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品细粉约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，用甲醇适量使溶解，并定容到刻度，摇匀。再精密吸取上述溶液1ml移置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。照标准曲线制备项下的方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中祖师麻甲素的重量(μg)，计算，即得。各个实施例样品测定结果见表2。

②总黄酮含量测定

对照品溶液的制备取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录V A)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加***适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去***液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移置100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg)，计算，即得。各个实施例样品测定结果见表2。

③祖师麻甲素的含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与***适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5％磷酸(20∶80)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按祖师麻甲素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取祖师麻甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品细粉约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加85％甲醇使溶解，并定容至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。各个实施例样品测定结果见表2。

表2祖师麻叶有效部位群含量测定结果

试验例11：药效试验

试验目的：本发明所得祖师麻叶有效部位群与祖师麻药材提取物进行如下药效学试验：

材料：按照实施例2方法自制祖帅麻叶有效部位群(以下简称祖师麻A)，采用与祖师麻A相同方法制备祖师麻药材提取物(以下简称祖师麻B)。

统计学处理：所有资料数据先进行组间Lev-ene’s方差齐性检验，然后采用独立样本t检验方法进行均值显著性统计，其结果以

表示。

(1)祖师麻A与祖师麻B对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

取雌性小鼠108只，随机分成9组，每组12只。每天给药一次，每次每只小鼠给药0.4mL，连续给药7d，分别灌胃给予下列药物。空白对照组：自来水0.4mL/只；阳性对照组：阿司匹林，200mg/kg；给药组：祖师麻A大剂量120mg/kg；祖师麻A中剂量60mg/kg；祖师麻A小剂量30mg/kg；祖师麻B大剂量120mg/kg；祖师麻B中剂量60mg/kg；祖师麻B小剂量30mg/kg。末次给药30min后于右耳廓正、反两面均匀涂抹二甲苯30ul/只，120min后拉颈处死，沿耳郭基线剪下两耳，8mm直径打孔器打耳片，分别称重量。以两耳片重量之差为肿胀度，并求出抑制率，结果见表1。

抑制率＝[(对照组肿胀度平均值-给药组肿胀度平均值)/对照组肿胀度平均值]×100％。

表1祖师麻A、B对小鼠二甲苯引起的耳肿胀影响

注：组间进行t检验，与对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果显示：祖师麻A与祖师麻B大、中剂量组、阳性对照阿司匹林组与空白对照组相比，均能显著地减少二甲苯所致耳肿胀度，与对照组相比肿胀度抑制率相比较，均具有显著效果，且A优于B。

(2)祖师麻A与祖师麻B对大鼠角叉菜胶足趾肿胀的影响

取雄性大鼠80只，随机分成8组，每组10只。每天给药一次，每次每只按1.0ml/100g，连续7d，分别灌胃给予下列药物。空白对照组：自来水；阳性对照组：阿司匹林；给药组：祖师麻A大剂量100mg/kg；祖师麻A中剂量50mg/kg；祖师麻A小剂量25mg/kg；祖师麻B大剂量100mg/kg；祖师麻B中剂量50mg/kg；祖师麻B小剂量25mg/kg。末次给药后，先用YLS-7B足趾容积测量仪测定其右足体积，作为给药前体积V₀，立即在右足掌皮下注射0.1％角叉菜胶0.1ml。在给药后1、2、3、4、5、6h，分别测定其右足体积V_s，并计算肿胀率，结果见表2。

肿胀率＝[(V_s-V₀)/V₀]×100％。

表2祖师麻A、B对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响

与对照组比，祖师麻A、B三个剂量组在炎症后期(致炎后3.0～6.0小时)，效果明显，与对照组比均具有显著性差异，且A优于B。

(3)小鼠热板法痛阈时间的测定

选取(55±0.5)℃热板上筛选合格雌性小白鼠(5s＜舔后足时间＜30s，108只，按痛阈值随机分成9组，每组12只。每天给药一次，连续给药7d。分别灌胃给予的药物和药物的各组剂量同1.4.1。末次给药45min、90min、120min后分别测定小鼠舔后足的时间(大于60s以60s计，并且小鼠每跳4次，时间减掉1s)。

小鼠热板法痛阈时间的测定结果如表3所示，祖师麻A大、中、小剂量组，祖师麻B大、中、小剂量组，阳性对照阿司匹林组的痛阈时间均比水对照组的痛阈时间长，且A优于B。

表3祖师麻A、B对小鼠热板法痛阈的影响

注：组间进行t检验，与同时相对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01

(4)醋酸扭体法小鼠扭体次数的测定

选取雌性小鼠112只，随机分成8组，每组14只。每天给药一次，连续给药10d。分别灌胃给予的药物和药物的各组剂量同1.4.1。末次给药后45min腹腔注射0.7％冰醋酸0.1ml/10g，记录注射后20min内的扭体次数。醋酸扭体法小鼠扭体次数的测定结果见表4，与水对照组相比，阳性对照***组有极强的镇痛作用。祖师麻A与祖师麻B组均能减少扭体次数，表明祖师麻A与祖师麻B有较强的镇痛作用，。

表4祖师麻A、B对小鼠扭体次数的影响

注：组间进行t检验与对照组比，^**p＜0.01；^*p＜0.05

(5)光照甩尾法测定小鼠甩尾潜伏期选取雄性小鼠72只，随机分成8组，每组9只。每天给药一次，连续给药7d。分别灌胃给予的药物和药物的各组剂量同1.4.1。于末次给药45min后测定小鼠甩尾时间(2s＜甩尾时间＜16s为合格数据)。对光照甩尾法小鼠甩尾潜伏期的测定结果见表5，与对照组相比较，祖师麻A与祖师麻B组和阳性对照阿司匹林组都能延长光照甩尾的潜伏时间(P＜0.05)。

表5祖师麻A、B对小鼠甩尾潜伏期的影响

注：组间进行t检验与对照组比，^**p＜0.01；^*p＜0.05

本实验结果表明祖师麻A与祖师麻B组能显著性地减少二甲苯所致小鼠耳肿胀度、角叉菜胶所致大鼠的足肿胀率，且A优于B，证明他们具有良好的抗急性炎症作用。在镇痛实验中，祖师麻A与祖师麻B组能显著性增加热板痛阈时间、减少醋酸引起的扭体次数和延长光电甩尾的潜伏时间，这表明祖师麻A与祖师麻B组有镇痛的作用。祖师麻A与祖师麻B组具有显著的抗炎和镇痛作用，A优于B或与B等效，通过本实验，可以为扩大祖师麻药用资源提供证据。

Claims (8)

1.一种祖师麻叶有效部位群，含有总香豆素和总黄酮，其中总香豆素含量为10～90％，总黄酮含量为5～60％，其特征在于所述祖师麻叶有效部位群按如下步骤制备而成：

1)将祖师麻叶粉碎过4号筛，用3-15倍的乙醇和/或乙酸乙酯提取，提取液回收乙醇和/或乙酸乙酯，加水分散后，离心或滤过，上清液上大孔吸附树脂，先用水洗，除去水溶性杂质，洗至流出液近无色，再用30-90％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇；

2)、洗脱液回收乙醇后，加水稀释，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压回收溶剂浓缩，干燥，粉碎即得；或

3)、洗脱液回收乙醇后，上聚酰胺层析柱，以不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，收集60-90％乙醇洗脱液，洗脱液减压回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎即得。

2.如权利要求1所述制备祖师麻叶有效部位群，其中所述制备步骤3)中的聚酰胺层析柱为60-90目。

3.如权利要求1所述制备祖师麻叶有效部位群，其中所述制备步骤1)加水分散是将提取液稀释至生药含量为0.1-0.8g/ml。

4.如权利要求1所述制备祖师麻叶有效部位群，其中所述制备步骤1)加水分散是将提取液稀释至生药含量为0.2-0.4g/ml。

5.如权利要求1所述制备祖师麻叶有效部位群，其中所述制备步骤1)中的大孔吸附树脂采用LS-300和/或LS-303。

6.如权利要求1所述的祖师麻叶有效部位群在制备治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物中的用途。

7.一种治疗跌打损伤、关节炎等疾病的药物组合物，其包含权利要求1所述祖师麻叶有效部位群和药物赋形剂。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述药物组合物为口服固体制剂、口服液体制剂、固体外用制剂，其特征在于：

口服固体制剂为祖师麻叶有效部位群与常规药物固体赋形剂混合，以常规制剂工艺制成口服固体制剂。

口服液体制剂为祖师麻叶有效部位群与常规液体制剂药物赋形剂混合，以常规制剂工艺制成口服液体制剂。

固体外用制剂为祖师麻叶有效部位群与常规固体外用药物赋形剂混合，以常规制剂工艺制成固体外用制剂。