CN103193735A - 红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法 - Google Patents

红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法 Download PDF

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Abstract

一种红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法，先将红豆杉枝叶粉碎至20-50目，加入3-5倍量的石油醚与正己烷（2-3：1）的混合物，于0-5℃下放置10-12小时，过滤得到滤渣；然后进行浸提，最后进行硅胶分离。本发明采用工艺，采用低温浸提，不同浓度梯度甲醇浸提，极大地保护了紫杉醇，使其在分离过程中不发生转化，紫杉醇作为一种生物大分子物质，受温度、有机溶剂、酸、碱等环境条件的影响，易降解或异构生成其它紫杉烷类物质。如紫杉醇在强酸性或弱碱性环境条件下会降解为巴卡亭III或发生表位异构生成7-表紫杉醇；温度较高时也会发生降解反应，生成相应的小分子物质。本发明工艺大大提高了紫杉醇的得率。产品纯度高。

Description

红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法
技术领域
本发明涉及一种从红豆杉科(Taxaceae) 红豆杉属(Tasus) 植物中提取精制紫杉醇的方法。
背景技术
红豆杉是一种珍贵的药用植物，为世界珍稀濒危树种，国家一级保护植物，被誉为“植物黄金”。南方红豆杉枝叶的次生代谢代谢产物中，其药用价值中除含有极少量的紫杉醇成分已在临床上广泛用于治疗各种恶性肿瘤，被认为是最好的抗癌药之一。紫杉醇作为一种抗癌药品，临床应用其纯度的要求非常高，一般要大于99．0％，这就对紫杉醇的纯化精制工艺提出了严格的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法，提取条件温和，紫杉醇提取物的得率达到0.2-0.3%，产品纯度达到99.3%。
本发明的技术方案如下：
一种红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法，其特征是，包括以下工艺步骤：
(1)    将红豆杉枝叶粉碎至20-50目，加入3-5倍量的石油醚与正己烷（2-3：1）的混合物，于0-5℃下放置10-12小时，过滤得到滤渣；
(2)    滤渣置于提取釜中，加入6-10 倍红豆杉枝叶体积的85-95%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣加入3-5倍量的55-65%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣再加入3-5倍量的40-45%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为10-15小时，过滤得到滤液；
(3)    合并每次过滤的滤液得到粗提取液；
(4)    将粗提取液进行0-5℃下低温减压浓缩得到粗浸膏；将粗浸膏溶于35-50℃的热水中，粗浸膏与热水的体积比为1∶2-3；
(5)    向热水中加入乙酸乙酯进行萃取，浸膏与乙酸乙酯的体积比为1∶2-3，萃取多次，合并乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏；
(6)    将含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏同硅胶混合制备干样，填充干样到硅胶200-300目的色谱柱上端，用乙酸乙酯-甲醇（2：1）混合液淋洗，淋洗液流出色谱柱后，分段收集馏分，按段将紫杉醇含量为10-30%之间的淋洗液馏分集中起来，经浓缩、干燥，得到中间产品；
(7)    将紫杉醇含量低于10%的淋洗液馏分，集中起来重复步骤（6）；
(8)    将步骤（6）得到的中间产品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
本发明采用工艺，采用低温浸提，不同浓度梯度甲醇浸提，极大地保护了紫杉醇，使其在分离过程中不发生转化，紫杉醇作为一种生物大分子物质，受温度、有机溶剂、酸、碱等环境条件的影响，易降解或异构生成其它紫杉烷类物质。如紫杉醇在强酸性或弱碱性环境条件下会降解为巴卡亭III或发生表位异构生成7-表紫杉醇；温度较高时也会发生降解反应，生成相应的小分子物质。本发明工艺大大提高了紫杉醇的得率。产品纯度高。
具体实施方式
一种红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法，包括以下工艺步骤：
(1)    将红豆杉枝叶（干叶3000g）粉碎至20-50目，加入5倍量的石油醚与正己烷（2：1体积比）的混合物，于0-5℃下放置10-12小时，脱脂，过滤得到滤渣；
(2)    滤渣置于提取釜中，加入6-7 倍红豆杉枝叶体积的90%的甲醇进行提取，提取液温度为-7- -5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣加入5倍量的55%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣再加入5倍量的45%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为15小时，过滤得到滤液；
(3)    合并每次过滤的滤液得到粗提取液；
(4)    将粗提取液进行0-5℃下低温减压浓缩得到粗浸膏；将粗浸膏溶于45-50℃的热水中，粗浸膏与热水的体积比为1∶3；
(5)    向热水中加入乙酸乙酯进行萃取，浸膏与乙酸乙酯的体积比为1∶3，萃取多次，合并乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏；
(6)    将含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏同硅胶混合制备干样，填充干样到硅胶200-300目的色谱柱上端，用乙酸乙酯-甲醇（2：1）混合液淋洗，淋洗液流出色谱柱后，分段收集馏分，按段将紫杉醇含量为10-30%之间的淋洗液馏分集中起来，经浓缩、干燥，得到中间产品；
(7)    将紫杉醇含量低于10%的淋洗液馏分，集中起来重复步骤（6）；
(8) 将步骤（6）得到的中间产品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离出紫杉醇，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到白色高纯度99.4%的紫杉醇7.57克。400HZ核磁共振图谱验证与标准样品一致，液-质联用色谱分析M/Z+为853.6。

Claims (1)

1.一种红豆杉紫杉醇活性提取物的提取方法，其特征是，包括以下工艺步骤：
（1）将红豆杉枝叶粉碎至20-50目，加入3-5倍量的石油醚与正己烷（2-3：1）的混合物，于0-5℃下放置10-12小时，过滤得到滤渣；
（2）滤渣置于提取釜中，加入6-10 倍红豆杉枝叶体积的85-95%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣加入3-5倍量的55-65%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为4-5小时，过滤得到滤液，滤液PH调为中性；滤渣再加入3-5倍量的40-45%的甲醇进行提取，提取液温度为-10--5℃，提取时间为10-15小时，过滤得到滤液；
（3）合并每次过滤的滤液得到粗提取液；
（4）将粗提取液进行0-5℃下低温减压浓缩得到粗浸膏；将粗浸膏溶于35-50℃的热水中，粗浸膏与热水的体积比为1∶2-3；
（5）向热水中加入乙酸乙酯进行萃取，浸膏与乙酸乙酯的体积比为1∶2-3，萃取多次，合并乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏；
（6）将含有紫杉醇的乙酸乙酯浸膏同硅胶混合制备干样，填充干样到硅胶200-300目的色谱柱上端，用乙酸乙酯-甲醇（2：1）混合液淋洗，淋洗液流出色谱柱后，分段收集馏分，按段将紫杉醇含量为10-30%之间的淋洗液馏分集中起来，经浓缩、干燥，得到中间产品；
（7）将紫杉醇含量低于10%的淋洗液馏分，集中起来重复步骤（6）；
（8）将步骤（6）得到的中间产品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
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