CN103153989A - 组织蛋白酶s抑制剂化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式（I）化合物：

Description

组织蛋白酶S抑制剂化合物
本发明涉及蛋白水解酶组织蛋白酶S的抑制剂化合物，以及包括给药所述化合物的治疗方法。本发明具体涉及立体异构体。更具体而言，本发明提供具有两个手性中心的有效、选择性且可逆性的立体异构体抑制剂化合物。
组织蛋白酶S是溶酶体半胱氨酸蛋白酶。它属于更大的组织蛋白酶家族，包括L、B、K、V和F。对组织蛋白酶S的选择性可避免不希望的后果，诸如副作用。组织蛋白酶S由炎症细胞诸如树突细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞产生。它参与包括动脉粥样硬化和腹主动脉瘤（AAA）的若干病况的病变（J. Clin. Invest. 1999，104（9），1191-1197）（Am. J. Path. 2007，170（3），809-817）。
动脉壁内皮细胞可因引致动脉壁中斑块形成和增长的若干因素而功能失常，所述因素包括高胆固醇水平、应激、总体健康和遗传。这一功能失常导致由血产生和募集炎症细胞，所述炎症细胞透过动脉壁以防止损伤。这些炎症细胞最终产生组织蛋白酶S。组织蛋白酶S的效果是降解细胞外基质蛋白诸如构成动脉壁的弹性蛋白和胶原。虽然细胞的细胞外重塑正在进行以修复受损动脉壁，但倘若与基质蛋白的沉积相比出现过多的蛋白水解性基质降解，不平衡可能导致动脉壁内所形成的斑块的不稳定性。过度的斑块不稳定性（plaque instability）可导致斑块破裂，并可能导致与血栓形成相关的事件。因此，抑制组织蛋白酶S提供了治疗动脉粥样硬化的手段。
有时，腹主动脉的细胞外基质也可因过度降解而弱化，导致被称为AAA的病况。目前，AAA在导致55岁以上男性死亡的原因中排第十位。没有已知获准指向AAA的药物治疗。抑制组织蛋白酶S提供了寻求解决这一未满足的医疗需求的备选项。
此外，组织蛋白酶S通过在免疫应答开始时的细胞内传输介入，其参与到自身免疫病症中，自身免疫病症可包括类风湿性关节炎、狼疮和牛皮癣（Immunity，2001，15，909-919）（Eur. J. Immunol. 2005，35，2552-2562）。具体而言，组织蛋白酶S裂解B淋巴细胞和树突细胞中的Iip10（p10），生成CLIP（II类关联的Ii-肽）。这使得抗原呈递细胞的细胞表面上肽片段例如自身抗原的加载以及后续II类主要组织相容性复合物（MHC）分子的呈递。由此，随后不成熟T细胞的活化导致产生自身免疫应答。因此，对组织蛋白酶S的抑制阻断p10加工和T细胞抗原的表面呈递，由此提供了治疗自身免疫相关病症诸如类风湿性关节炎、牛皮癣和狼疮的手段。
据此，本发明提供式（I）化合物：
Figure 310574DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，
其中Z是-CH2-、-CH2CH2-、-OCH2-、-CH2CH2CH2-或-OCH2CH2-；
R1是H、F或Cl；
R2是H、甲基、乙基、丙基或异丙基。
本发明的一个方面提供药物组合物，该药物组合物包含式（I）化合物或其可药用盐以及可药用稀释剂或载体。
本发明的另一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗AAA的方法。本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗哺乳动物AAA的方法，所述哺乳动物诸如为人、狗、猫、牛、马、羊或猴。本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗人AAA的方法，所述人的主动脉直径比标准直径大约3厘米但小于约5厘米且不需要手术上或血管内修复。本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗人AAA的方法，所述人的主动脉直径大于约5厘米但手术上或血管内修复不是治疗备选项。
本发明的另一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗哺乳动物斑块不稳定性的方法，所述哺乳动物诸如为人、狗、猫、牛、马、羊或猴。
本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗哺乳动物动脉粥样硬化的方法，所述哺乳动物诸如为人、狗、猫、牛、马、羊或猴。
本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗需要其的哺乳动物自身免疫病症的方法，所述哺乳动物诸如为人、狗、猫、牛、马、羊或猴。本发明的再一方面提供通过给药治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐或者包含本发明化合物或其可药用盐的药物组合物来治疗人牛皮癣、类风湿性关节炎或狼疮的方法。
本发明的再一方面提供用于治疗的化合物或其可药用盐。本发明的另一方面提供用于治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化或自身免疫病症诸如类风湿性关节炎、牛皮癣和狼疮的化合物或其可药用盐。本发明的再一方面是化合物或其可药用盐用于制备治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化或自身免疫病症诸如类风湿性关节炎、牛皮癣和狼疮的药物的用途。
本发明的另一方面提供药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物或其可药用盐以及一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂和任选一种或多种其它治疗剂。
本发明的再一方面提供用于治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣和狼疮的本发明化合物或其可药用盐。
本发明的再一方面提供本发明化合物或其可药用盐用于制备治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣和狼疮的药物的用途。
本发明中抑制剂化合物和包括给药所述抑制剂化合物的治疗方法的实施方案包括上述R1、R2和Z的任何组合。具体而言，本发明的实施方案涉及式（I）化合物或其可药用盐，其中R1是H或F。更具体而言，本发明的实施方案涉及式（I）化合物或其可药用盐，其中R1是F。
本发明的另一实施方案是式（I）化合物或其可药用盐，其中R2是甲基或乙基。具体而言，本发明的实施方案是式（I）化合物或其可药用盐，其中R2是甲基。
本发明的再一实施方案涉及式（I）化合物或其可药用盐，其中Z是-CH2-、-CH2CH2-、-OCH2-、-CH2CH2CH2-或-OCH2CH2-。具体而言，本发明的实施方案是式（I）化合物或其可药用盐，其中Z是-CH2CH2-或-OCH2-。本发明的进一步实施方案由其中R1是H或F，R2是甲基或乙基，且Z是-CH2CH2-或-OCH2-的组合组成。
本发明的优选化合物示例如下：
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯，
N-甲基氨基甲酸[(1S,2S)-1-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]萘满-2-基]酯，
N-甲基氨基甲酸[(1S,2S)-1-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]茚满-2-基]酯，
N-甲基氨基甲酸[(8S,9S)-9-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-8-基]酯，和
N-甲基氨基甲酸[(4S,5S)-5-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 227714DEST_PATH_IMAGE002
-4-基]酯。
更优选的本发明化合物是：
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯，
N-甲基氨基甲酸[(1S,2S)-1-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]萘满-2-基]酯，和
N-甲基氨基甲酸[(8S,9S)-9-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-8-基]酯。
最优选的本发明化合物是：
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯。
除另有指明外，上文和本发明说明书各处所使用的以下术语具有以下含义：
本文所用的术语“腹主动脉瘤”（或“AAA”）意指哺乳动物中腹主动脉的局部化扩张或膨隆，其引起至少一区段腹主动脉的尺寸超过其他被认为正常状态的尺寸。腹主动脉可利用任何测量尺寸来度量和比较，包括但不限于腔直径、腔周长和腔面积。测量和诊断手段可通过使用超声、CT扫描或其它成像技术来进行。例如，当主动脉直径大于其标准直径约3厘米时人出现AAA。然而，倘若主动脉直径大于约5厘米，为避免破裂和可能的致命性，立即手术或血管内修复（支架或移植）是标准治疗。然而，倘若得不到这样的治疗，或因任何原因例如年龄而不是备选项，则这一人群也可利用本发明进行治疗。
本文所用的术语“需要其的”意指已经或被诊断出患有需要治疗的病况，例如动脉粥样硬化、AAA、自身免疫病症诸如牛皮癣、狼疮或类风湿性关节炎。
本文所用的术语“哺乳动物”意指人或非人哺乳动物诸如狗、猫、牛、马、羊或猴。
术语“其可药用盐”指的是本发明化合物的盐。实例和它们的制备方法是本领域那些技术人员所熟知的知识。参见例如，Stahl等，“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use”，VCHA/Wiley-VCH，2002。
术语“治疗有效量”指的是用以实现治疗的式（I）化合物或包含式（I）化合物的组合物的量或剂量。主治医师，作为一类本领域技术人员，经考虑本领域技术人员所知的若干因素诸如患者的体重、身高、年龄、一般健康状况、病况严重程度、给药方式、用药方案等，可容易地确定治疗有效量。
本文所用的术语“治疗”意指使疾病状态的速率或进展减缓。它还可包括中止疾病状态。术语可进一步地不仅包括中止疾病，而且包括减轻任何已出现的疾病状态。例如，就AAA而言，术语“治疗”可意指减缓腹主动脉瘤的扩展速率。它还可包括停止腹主动脉瘤的扩展。此外，它可包括减轻任何已出现的扩展。
标识“”指的是向前凸出于页平面的键。
标识“
Figure 966442DEST_PATH_IMAGE004
”指的是向后凸出于页平面的键。
“Z”定义内的术语“-OCH2-”和“-OCH2CH2-”应理解为意指氧与稠合的苯并环(benzo ring)邻接。
本发明化合物优选配制为药物组合物。实例和它们的制备方法是本领域那些技术人员所熟知的知识。参见例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy（A. Gennaro等编著，第19版，Mack Publishing Co.，1995）。
可经本领域已知的各种程序，以及以下方案、制剂和实施例中所述的程序来制备式I化合物或其盐。每一种路线的具体合成步骤可以不同的方式组合，以制备式I化合物或其可药用盐。
以下制剂和实施例进一步示例本发明，并代表如上概述的式（I）化合物（包括任何新化合物）的典型合成。试剂和起始原料是本领域普通技术人员很容易得到的，或可很容易由本领域普通技术人员合成。应理解，制剂和实施例是作为示例而非限定来阐述的，本领域普通技术人员可进行各种改进。
可经由标准技术诸如X射线分析和与手性HPLC保留时间的相关性来确定本发明化合物的R或S构型。以下制剂和实施例的命名一般采用Symyx Isentris® 3.2.3版中的IUPAC命名特征来完成。
如本文所用的，以下术语具有所指明的含义：“AcOH”指乙酸；“BCA”指二辛可宁酸（bicinchoninic acid）； “b.i.d.”指每日两次； “盐水”指饱和NaCl水溶液；“cat.”指催化剂的量；“CD74”指恒定链（Ii）；“CDI”指1,1'-羰基二咪唑；“DMAP”指4-二甲基氨基吡啶；“DMSO”指二甲亚砜；“DTT”指二硫苏糖醇；“EDTA”指乙二胺四乙酸；“EtOH”指乙醇；“hr.”指小时；“IC50”指产生试剂所可能产生的最大抑制反应之50%的试剂浓度，亦或产生与受体结合的配体50%置换的试剂浓度；“IMAC”指固定化金属亲和层析；“IPA”指异丙醇；“LC ES/MS”指液相色谱电喷雾质谱；“MCPBA”指间氯过氧苯甲酸；“MeOH”指甲醇；“min.”指分钟；“NBS”指N-溴代琥珀酰亚胺；“NMP”指N-甲基吡咯烷；“N/A”指不可用；“p10”指恒定链CD74的片段；“PBS”指磷酸盐缓冲盐水；“PWBC”指外周血白细胞；“RFU”指相对荧光单位；“SFC”指超临界流体层析；“STAB”指三乙酰氧基氢硼化钠；“SDS”指十二烷基硫酸钠；“THF”指四氢呋喃；“t-boc”或“boc”指叔丁氧基羰基；“Triton® X-100”指聚乙二醇对(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基醚。
除另有指明外，取代基如前定义。
方案1
Figure 780815DEST_PATH_IMAGE005
可依照方案1所示反应来进行中间体（3）的形成。
在方案1、步骤A中，用NBS处理6-溴-2H-色烯，以形成溴代醇（1）。优选的条件是使用DMSO/水溶剂混合物，在约0～50℃但更优选在室温下。
在步骤B中，用氢氧化铵处理溴代醇（1），以提供氨基醇（2）。例如，在室温至60℃下，使溴代醇与氢氧化铵在THF/EtOH溶剂混合物中反应4-24小时。
在方案1、步骤C中，将外消旋氨基醇拆分成其3R,4S和3S,4R对映异构体，以提供手性氨基醇（3）。拆分方法是本领域那些技术人员公知的，包括作为手性酸的盐结晶，或经手性色谱分离对映异构体。
6-溴-2H-色烯是市售可得的，或可经本领域公知的方法制备。例如，可将6-溴-4-色满酮还原成醇，随后消除得到6-溴-2H-色烯。
方案2
Figure 665594DEST_PATH_IMAGE006
方案2中描绘了式（7）中间体的合成。
在方案2、步骤A中，将式（4）环状烯用MCPBA氧化，得到式（5）环氧化物。所述反应在卤化溶剂诸如二氯甲烷与碱水溶液诸如碳酸氢钠水溶液的双相混合物中进行。在-10～10℃下分批加入MCPBA，在搅拌下使反应温热至室温，用时1-8小时。如果需要，加入额外的MCPBA。
在步骤B中，将式（5）环氧化物用氨处理，以形成式（6）外消旋氨基醇。优选的条件是使用密封容器，该密封容器装有惰性溶剂诸如THF，其中加入了氨/甲醇。将反应在50-100℃下加热1-4天，必要时加入额外的氨。
在方案2、步骤C中，按先前路线1、步骤C中所述，将外消旋氨基醇（6）拆分成式（7）手性氨基醇。例如，1-氨基-7-溴-萘满-2-醇（Y＝-CH2-）通过与(+)-二-1,4-甲基苯甲酰基-D-酒石酸结晶得以拆分。可通过用碱水溶液处理盐以得到其中Y＝-CH2-的(1S,2S)-氨基醇，从而得到游离的胺。可选择地，可将外消旋材料（6）带到最终产品，并通过手性色谱分离对映异构体。
本领域技术人员将理解为，式（4）环状烯很容易购得或通过文献已知方法获得。例如，可将相应的酮还原成醇，随后消除得到烯。
方案3
可依照方案3所示反应来进行中间体（11）的形成。
在方案3、步骤A中，根据针对1R,2R对映异构体的文献（US 7,326,731 B2）中所含有的程序，通过用5%钯/碳氢化，从硝基茚满（8）得到氨基茚满（9）。
在步骤B中，利用Sandmeyer反应，使氨基茚满（9）转化为碘代茚满（10）。利用对甲苯磺酸和亚硝酸钠水溶液，在溶剂诸如乙腈中原位形成重氮盐。随后，在0-30℃温度下用碘化钾水溶液处理重氮盐0.5-6 h，以提供碘代茚满（10）。
在步骤C中，在酸性条件诸如HCl或三氟乙酸下，boc保护的碘代茚满（10）转变成碘代氨基茚满（11）。引入和移除氮保护基的方法在本领域中是众所周知的（参见例如，Greene and Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley and Sons，New York,（1999））。优选的条件是使用HCl/二氧六环，在0～25℃下，用时0.5-4 h。
N-[(1S,2S)-6-氨基-2-羟基-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯（8）可通过本领域已知的方法制得。例如，可在六个步骤中由茚得到外消旋-反式-1-氨基-6-硝基茚满-2-醇（Adv. Synth. Catal. 2005，347，255-265）。将外消旋材料拆分，分离为(+)-L-扁桃酸的1R,2R和1S,2S盐。1S,2S盐释放为1S,2S-反式-1-氨基-6-硝基茚满-2-醇，随后将胺随后以氨基甲酸叔丁酯的方式进行保护，如通过手性HPLC所分析，得到ee大于97%的材料。
方案4
可依照方案4所示的反应来进行式I的本发明化合物的形成。
在方案4、步骤A中，将式（12）氨基醇（手性或外消旋的）酰化，得到式（13）酰胺。各种使用羧酸或酰氯的酰化方法在本领域中是众所周知的。优选的条件是使用适当的苯甲酰氯，在THF与碳酸氢钠水溶液的溶剂混合物中，在0-25℃温度下，用时1-8小时。如果起始氨基醇以手性酸的盐的形式使用，则使用足够的碱来生成游离胺。
在步骤B中，利用碘化铜（I）和配体诸如均二甲基乙二胺，将式（13）溴代或碘代酰胺与保护的2-氧代哌嗪偶联，以提供式（14）氧代哌嗪。优选在惰性气氛下、在无机碱诸如碳酸钾存在下，于密封容器中进行该反应。该反应在惰性溶剂诸如NMP中于80-150℃温度下进行。
在方案4、步骤C中，在苯甲酰胺存在下使氧代哌嗪选择性还原，以提供式（15）哌嗪。利用还原剂诸如甲硼烷(borane)-二甲硫醚络合物在惰性溶剂诸如THF中于0-40℃温度下进行1-4小时，来完成该反应。可使用额外的甲硼烷-二甲硫醚络合物来驱使反应完成。
可选择地，在步骤D中，在偶联反应中，利用N-叔丁氧基羰基哌嗪使哌嗪与碘代或溴代酰胺（13）直接反应。该反应在Pd催化剂诸如氯化烯丙基钯（II）二聚体和配体诸如三叔丁基鏻四氟硼酸盐的存在下进行。在20-120℃的温度下，在惰性溶剂诸如DMSO中，使用碱诸如叔丁醇钠，用时0.5～8小时，以提供式（15）哌嗪。
在步骤E中，移除boc保护基，以给出式（16）未保护的哌嗪。用于移除boc基团的酸性条件，诸如HCl/二氧六环，在本领域中是众所周知的。
随后，在步骤F中，使未保护的胺（16）与3-氧杂环丁酮还原胺化，以提供式（17）氧杂环丁烷基哌嗪。用于实现还原胺化的各种方法在本领域中是众所周知的。优选的条件是使用还原剂诸如三乙酰氧基氢硼化钠，在惰性溶剂诸如乙腈中。该反应在0-40℃下进行约0.5-4小时。可加入额外的三乙酰氧基氢硼化钠和3-氧杂环丁酮以驱使反应完成。可选择地，可在分子筛存在下，在溶剂混合物诸如MeOH和冰醋酸中，利用还原剂诸如氰基硼氢化钠来完成该反应。该反应在0-60℃温度下进行约1-24小时。
在方案4、步骤G中，使氧杂环丁烷基哌嗪的醇（17）转化为式I氨基甲酸酯。对于熟练的技术人员，现有多种可用于合成氨基甲酸酯的手段，诸如三光气/胺，氯甲酸4-硝基苯酯/胺，CDI/胺，或直接与适当取代的异氰酸酯反应。用于其中Z＝-CH2-的本发明化合物的优选方法使用适当的异氰酸酯（O＝C＝N-R2）。例如，在非质子溶剂诸如二氯甲烷、二氧六环或优选THF中，在有机碱诸如DMAP或优选4-吡咯烷子基吡啶存在下，用异氰酸甲酯处理醇（17）。该反应在20-70℃下于密封容器中进行约2-16小时。其中氨基甲酸酯部分是伯氨基甲酸酯（R2＝ H）的本发明化合物可利用CDI/氨、氰酸钠或异氰酸氯磺基酯来合成。其它方法使用非质子溶剂中的异氰酸三氯乙酰基酯。随后，利用中性Al2O3或有机酸诸如对甲苯磺酸裂解三氯乙酰基。用于合成式I的氨基甲酸酯的优选方法是使用CDI，在惰性溶剂诸如THF中，于0-25℃下，用时4-20小时，以原位形成咪唑N-甲酸酯。随后与适当胺（H2NR2）的反应提供式I氨基甲酸酯。
本领域技术人员将意识到，上述中间体可作为外消旋混合物一直进行，并在最后一步拆分，优选通过手性HPLC拆分，以提供对映体纯的化合物。
制剂1
6-溴色满-4-醇
Figure 862723DEST_PATH_IMAGE009
在室温下，用3小时向7-溴-3,4-二氢萘-1(2H)酮（3.95 kg，17.4 mol）于乙醇（20 L）的悬浮液中分批加入氢硼化钠（221 g，5.84 mol）。浓缩澄清的红色溶液。将残留物加入冰（约3 kg）中以形成悬浮液，然后在搅拌下将冰冷却的0.5M HCl（10 L）加入上述悬浮液中。用甲基叔丁基醚（20 L和5 L）萃取该混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液（10 L）和盐水（2×10 L）洗涤合并的有机相，在减压下浓缩溶剂，并在空气中将湿固体干燥过夜，得到标题化合物，为浅黄色固体（4.10 kg，定量）。LC-ES/MS m/z 211 [M-H2O+H]+。
基本上按照制剂1中所述的程序，利用适当的酮制备下表中的醇。
制剂 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z（79Br/81Br）
2 7-溴萘满-1-醇
Figure 918404DEST_PATH_IMAGE010
 209/211 [M-H2O+H]+
3 2-溴-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-9-醇
Figure 672733DEST_PATH_IMAGE011
 GC/MS 222/224 [M+]
4 7-溴-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂-5-醇
Figure 496912DEST_PATH_IMAGE012
 265/267 [M+Na]+
制剂5
6-溴-2H-色烯
Figure 926756DEST_PATH_IMAGE013
在室温下，向6-溴色满-4-醇（3.98 kg，17.4 mol）于甲苯（18 L）的溶液中加入对甲苯磺酸一水合物（95 g，499.42 mmol）。连接Dean-Stark分水器，回流3小时50分钟。使混合物在空气中冷却至50℃，并在搅拌下倾入饱和碳酸氢钠水溶液（10 L）和冰（约3 kg）中。将两层分离。用甲基叔丁基醚（4 L）反萃取水层。用饱和碳酸氢钠水溶液（10 L）和盐水（1×10 L）洗涤有机层，在减压下蒸发溶剂，得到标题化合物，为棕色油（4.90 kg，>100%，含有甲苯）。LCMS m/z（79Br）209 [M+H]+。
基本上按照制剂5中所述的程序，利用适当的醇制备下表中的烯。
制剂 化学名称 结构 GC/MS m/z（79Br/81Br）
6 6-溴-1,2-二氢萘
Figure 230699DEST_PATH_IMAGE014
 208/210 [M+]
7 2-溴-6,7-二氢-5H-苯并[7]轮烯
Figure 505822DEST_PATH_IMAGE015
 222/224 [M+]
8 7-溴-2,3-二氢-1-苯并氧杂
Figure 211610DEST_PATH_IMAGE002
Figure 546776DEST_PATH_IMAGE016
 N/A
制剂9
外消旋-反式-3,6-二溴色满-4-醇
Figure 338015DEST_PATH_IMAGE017
在室温下向DMSO（16 L）和水（2.5 L）的溶液中加入6-溴-2H-色烯（4.90 kg，23.2 mol）。用3.5小时分批加入NBS（3.47 kg，19.5 mol）。把混合物倾入甲基叔丁基醚（12 L）和水（18 L）中，将两层分离。用饱和碳酸氢钠（7 L）、水（8 L）和盐水（2×8 L）洗涤有机层。用甲基叔丁基醚（4 L）反萃取水层，并在减压下蒸发合并的有机层的溶剂，得到标题化合物，为红棕色固体（5.10 kg，71%）。
制剂10
(3R,4S)-4-氨基-6-溴-色满-3-醇
Figure 416829DEST_PATH_IMAGE018
在室温下，向外消旋-反式-3,6-二溴色满-4-醇（5.10 kg，16.6 mol）于四氢呋喃（5.0 L）和乙醇（5.0 L）的溶液中一次性加入氢氧化铵（13.0 L）并用2小时缓慢加热至43℃，继续加热14小时。在减压下浓缩该混合物以移除约9 L溶剂。将甲基叔丁基醚（10 L）加入残余淤浆中，并在25℃下搅拌该混合物3小时。经过滤收集沉淀物，用水（2×2 L）洗涤，然后用甲基叔丁基醚（3×1.5 L）洗涤，得到湿固体。在室温下在空气中干燥过夜，得到标题化合物，为浅黄色固体（2.78 kg，69%）。LC-ES/MS m/z（79Br）244 [M+H]+。通过以100 g每份在11×33 cm CHIRALPAK® AD 20 μm柱上用含0.2%二甲基乙基胺的100%甲醇（稳态再循环纯化）洗脱，来分离对映异构体，得到3S,4R对映异构体（异构体1，1362.5 g，97.4% ee）和标题化合物（异构体2，1323.7 g，97.5% ee）。分析性手性HPLC分析条件：4.6×150 mm CHIRALPAK® AD-H 5 μm柱，含0.2%二甲基乙基胺的100%甲醇，流速0.5 mL/分钟，异构体1 TR＝4.69分钟，异构体2 TR＝6.27分钟。
制剂11
外消旋-顺式-6-溴-1a,2,3,7b-四氢萘并[1,2-b]环氧乙烯
向6-溴-1,2-二氢萘（250 g，1.20 mol）于二氯甲烷（3.75 L）的溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液（1250 mL）并冷却至0-5℃。分批加入MCPBA（77%，275 g，1.23 mol，1.03 eq）。在0-5℃下机械搅拌该混合物1.5小时，使之温热至室温。在室温下搅拌约1.5小时，在室温下加入额外的MCPBA（77%，15.0 g，67 mmol，0.05 eq）并搅拌约1小时。用二氯甲烷（3750 mL）稀释混合物，分离各层。用饱和碳酸氢钠水溶液（3 L）洗涤有机层。将10%亚硫酸氢钠水溶液（3750 mL）和饱和碳酸氢钠水溶液（1250 mL）混合，制得最终pH约7的溶液。将该溶液加入二氯甲烷层中，在室温下搅拌约10分钟。分离各层，用饱和碳酸氢钠水溶液（3 L）和盐水（3 L）洗涤有机层。在真空中浓缩，得到标题化合物，为油（263 g，98%）。GC/MS m/z（79Br/81Br）224/226 [M+]。
基本上按照制剂11中所述的程序，利用适当的烯制备下表中的环氧化物。
制剂 化学名称 结构 GC/MS m/z（79Br/81Br）
12 2-溴-6,7-二氢-5H-苯并[7]轮烯氧化物
Figure 250235DEST_PATH_IMAGE020
 238/240 [M+]
13 7-溴-2,3-二氢-1-苯并氧杂
Figure 200874DEST_PATH_IMAGE002
氧化物
Figure 145696DEST_PATH_IMAGE021
 LC-ES/MS m/z（79Br/81Br）241/243 [M+H]+
制剂14
外消旋-反式-1-氨基-7-溴-萘满-2-醇
在装有机械搅拌器的2L压力反应器中，将外消旋-顺式-6-溴-1a,2,3,7b-四氢萘并[1,2-b]环氧乙烯（67.0 g，298 mmol）溶于四氢呋喃（200 mL）中。加入7M氨/甲醇（350 mL），密封反应器，在70℃下搅拌2天。加入额外的7M氨/甲醇（140 mL），密封反应器，在70℃下搅拌1天。在真空中浓缩反应淤浆，得到残留物（68.1 g）。加入***（760 mL），在室温下搅拌淤浆约5小时。经过滤收集固体，用***（2×215 mL）冲洗，干燥过夜，得到标题化合物（58.1 g，81%）。GC/MS m/z（79Br/81Br）224/226 [M-NH2]+。
基本上按照制剂14中所述的程序，利用适当的环氧化物制备下表中的氨基醇。
制剂 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z（79Br/81Br）
15 外消旋-反式-5-氨基-3-溴-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-6-醇
Figure 440728DEST_PATH_IMAGE023
 256/258 [M+H]+
16 外消旋-反式-5-氨基-7-溴-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 940980DEST_PATH_IMAGE002
-4-醇
Figure 361597DEST_PATH_IMAGE024
 258/260 [M+H]+
制剂17
(1S,2S)-1-氨基-7-溴-1,2,3,4-四氢萘-2-醇(2S,3S)-2,3-双(4-甲基苯甲酰氧基)琥珀酸酯
将(+)-二-1,4-甲基苯甲酰基-D-酒石酸（2.30 kg，5.95 mol）一次性加入外消旋-反式-1-氨基-7-溴-1,2,3,4-四氢萘-2-醇（1.40 kg，5.78 mol）于乙腈（16.0 L）和水（3.50 L）的溶液中。在氮气下，将浓悬浮液加热至回流（77℃）持续30分钟。直至约46℃，搅拌器才开始搅拌。关掉对油浴的加热，在搅拌下让混合物冷却至室温。5小时后，经布氏漏斗过滤浓淤浆，用乙腈（2 L）冲洗。继续过滤1小时，直至不再收集到溶剂。在室温下在空气中干燥湿滤饼过夜，得到所希望的盐，为黄色固体（1.70 kg）。将固体加入乙腈（15 L）和水（3.3 L）中，在搅拌下在氮气下将所得浓淤浆加热至回流（77℃），持续30分钟。关掉对油浴的加热，在搅拌下使其冷却至室温。5小时后，经布氏漏斗过滤浓淤浆，用乙腈（2 L）冲洗。继续过滤30分钟，直至不再收集到溶剂。在室温下干燥湿滤饼48小时，得到所希望的盐，为浅黄色固体（800 g，22%）。LC-ES/MS m/z（79Br）242 [M+H]+（对于游离碱）。99.0% ee。通过超临界流体层析（SFC）进行对映异构体过量测定的分析条件：柱：CHIRALPAK® AD-H（0.46×250 mm，5 μm），二氧化碳流速：2.55 mL/min.，助溶剂：含0.1%二乙基胺的甲醇，助溶剂流速：0.45 mL/min.，反压：150 bar，柱温：40.9℃。异构体1 TR＝7.36分钟，0.5%面积；异构体2（标题化合物）TR＝8.46分钟，99.5%面积。
制剂18
N-[(1S,2S)-6-氨基-2-羟基-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure 9933DEST_PATH_IMAGE026
基本上按照文献程序（Kozhushkov，S.I. 等. Adv. Synth. Catal. 2005，347，255-265），得到>97% ee的N-[(1S,2S)-2-羟基-6-硝基-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯。利用与针对1R,2R对映异构体所述（US 7,326,731 B2）相同的程序还原硝基，得到标题化合物。
制剂19
N-[(1S,2S)-2-羟基-6-碘-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure 935164DEST_PATH_IMAGE027
在冰浴中，将N-[(1S,2S)-6-氨基-2-羟基-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯（25.0 g，94.6 mmol）于乙腈（800 mL）的悬浮液冷却30分钟，一次性加入对甲苯磺酸一水合物（53.97 g，283.7 mmol）。用5分钟将亚硝酸钠（13.05 g，189.2 mmol）于水（30 mL）的溶液分批加入混合物中，搅拌30分钟。在冰浴中，用10分钟将碘化钾（39.25 g，236.5 mmol）于水（50 mL）的溶液逐滴加至混合物中，搅拌20分钟。让混合物温热至室温，并搅拌1.5小时。用10%碳酸钠水溶液使暗红溶液呈碱性。在真空中浓缩所得混合物，以移除乙腈。经过滤收集棕色沉淀，在真空烘箱中在50℃下干燥过夜，得到标题化合物（33.9 g，96%）。LC-ES/MS m/z 320 [M+H]+。
制剂20
N-[(3R,4S)-6-溴-3-羟基-色满-4-基]-4-氟-苯甲酰胺
Figure 723253DEST_PATH_IMAGE028
在17℃下，向(3R,4S)-4-氨基-6-溴-色满-3-醇（692 g，2.84）和碳酸氢钠（476 g，5.67 mol）于四氢呋喃（3.0 L）和水（3.0 L）的悬浮液中，用15分钟经加料漏斗逐滴加入4-氟苯甲酰氯（369 mL，3.12 mol），并搅拌2小时。加入水（2 L）和甲基叔丁基醚（3.5 L），搅拌5分钟。分离有机相，用水（2 L）和盐水（2 L）洗涤。用无水硫酸镁干燥有机部分，在真空中浓缩，得到浅黄色固体（2.3 kg）。在25℃下，在庚烷（5 L）中研磨固体3 h。经过滤收集，在烘箱中在50℃下干燥12小时，得到标题化合物（975 g，94%），为白色固体。LC-ES/MS m/z（79Br/81Br）366/368 [M+H]+。
基本上按照制剂20中所述的程序，利用适当的外消旋或对映体纯的氨基醇游离碱或盐制备下表中的酰胺。当使用氨基醇的盐（制剂21）时，使用饱和碳酸氢钠作为碱。
制剂 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z（79Br/81Br）
21 N-[(1S,2S)-7-溴-2-羟基-萘满-1-基]-4-氟-苯甲酰胺
Figure 784750DEST_PATH_IMAGE029
 362/364 [M+H]+
22 外消旋-反式-N-[2-溴-8-羟基-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-9-基]-4-氟-苯甲酰胺
Figure 69101DEST_PATH_IMAGE030
 376/378 [M+H]+
23 外消旋-反式-N-[7-溴-4-羟基-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂-5-基]-4-氟-苯甲酰胺 380/382 [M+H]+
制剂24
4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-6-碘-茚满-1-基]苯甲酰胺
Figure 815843DEST_PATH_IMAGE032
在室温下，向N-[(1S,2S)-2-羟基-6-碘-茚满-1-基]氨基甲酸叔丁酯（39.6 mmol，14.9 g）于 1,4-二氧六环（200 mL）的溶液中加入4M氯化氢于二氧六环（100 mL）的溶液，搅拌2小时。在真空中浓缩所得悬浮液，并在真空烘箱中干燥48小时。将残余物溶于THF（25 mL），冰浴中冷却30分钟。逐滴加入5 M氢氧化钠水溶液（17.4 mL，87.2 mmol）和4-氟苯甲酰氯（3.78 mL，40.4 mmol）。使溶液温热至室温，并搅拌1小时。在真空中浓缩黑色溶液，用水（50 mL）稀释。经过滤收集固体，在真空烘箱中在40℃下干燥过夜，得到标题化合物（14.4 g，91%）。LC-ES/MS m/z 398 [M+H]+。
制剂25
4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 5516DEST_PATH_IMAGE033
用氮气吹扫4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-6-碘-茚满-1-基]苯甲酰胺（8.70 g，21.9 mmol）、4-N-boc-2-氧代-哌嗪（4.61 g，22.3 mmol）和碳酸钾（6.12 g，43.8）于N-甲基吡咯烷酮（100 mL）的混合物。加入碘化铜（I）（2.11 g，11.0 mmol）和均二甲基乙二胺（2.34 mL，21.9 mmol）。用隔膜密封烧瓶，在100℃下搅拌6小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯（100 mL）稀释。用水（3×100 mL）洗涤有机部分，然后用盐水洗涤，之后经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干。经柱层析（120 g二氧化硅，2-5%甲醇/氯仿）纯化残余物，得到标题化合物（7.63 g，74%）。LC-ES/MS m/z 470 [M+H]+。
制剂26
4-[(3S,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-3-羟基-萘满-6-基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 967656DEST_PATH_IMAGE034
基本上按照针对4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制剂25，使用N-[(1S,2S)-7-溴-2-羟基-萘满-1-基]-4-氟-苯甲酰胺制备标题化合物。LC-ES/MS m/z 484 [M+H]+。
制剂27
4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 533766DEST_PATH_IMAGE035
在冰浴中将4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯（8.85 g，18.9 mmol）于无水四氢呋喃（40 mL）的溶液冷却30分钟，并在氮气下加入甲硼烷-二甲硫醚络合物（2M，37.7 mL，75.40 mmol）。使混合物温热至室温，并搅拌1.5小时。在室温下加入第二份甲硼烷-二甲硫醚络合物（2M，9.42 mL，18.9 mmol），并搅拌1小时。在冰浴中冷却10分钟，小心地逐滴加入水，然后加入饱和碳酸氢钠溶液（50 mL）。用乙酸乙酯（150 mL）稀释所得悬浮液。用盐水洗涤有机部分，经硫酸钠干燥，并在真空中浓缩。经急骤层析（120 g二氧化硅，40-50%乙酸乙酯/己烷）纯化粗制产品，得到标题化合物（6.8 g，79%）。LC-ES/MS m/z 456 [M+H]+。
制剂28
4-[(3S,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-3-羟基-萘满-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 399216DEST_PATH_IMAGE036
基本上按照针对4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制剂27，使用4-[(3S,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-3-羟基-萘满-6-基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯制备标题化合物。LC-ES/MS m/z 470 [M+H]+。
制剂29
4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-7-哌嗪-1-基-萘满-1-基]苯甲酰胺盐酸盐
Figure 759791DEST_PATH_IMAGE037
在室温下，向4-[(3S,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-3-羟基-萘满-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯（19.4 g，41.3 mmol）于1,4-二氧六环（430 mL）的溶液中加入4M氯化氢/二氧六环（135 mL）。在50℃下机械搅拌所得淤浆13小时。在真空中浓缩该反应，得到标题化合物（24.8 g，定量）。LC-ES/MS m/z 370 [M+H]+。
制剂30
4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-哌嗪-1-基-色满-4-基]苯甲酰胺盐酸盐
Figure 146910DEST_PATH_IMAGE038
在室温下，在搅拌下使三叔丁基鏻四氟硼酸盐（16.0 g，54.6 mmol）和氯化烯丙基钯（II）二聚体（5.07 g，27.3 mmol）于DMSO（1.40 L）的悬浮液脱气（将氮气鼓泡穿经混合物）。加入N-叔丁氧基羰基哌嗪（315 g，1.64 mol，97%纯）和N-[(3R,4S)-6-溴-3-羟基-色满-4-基]-4-氟-苯甲酰胺（200.0 g，546 mmol）。在氮气下将混合物搅拌15分钟，然后在80℃下加热。加入叔丁醇钠（179 g，1.80 mol），在93-98℃下加热45分钟。将混合物倾入1M磷酸（2.73 L，2.73 mol，用50%氢氧化钠调节至pH＝2.3）和乙酸乙酯（800 mL）的溶液，搅拌10分钟。分离各层，并用乙酸乙酯（3×300 mL）萃取水层。用半饱和盐水（2×500 mL）洗涤合并的有机层。用活性碳（20 g）和硅胶（200 g）处理有机层，搅拌30分钟。经硅藻土垫过滤，在减压下浓缩，得到深色油。将油溶于甲醇（800 mL），加入4M氯化氢/二氧六环（410 mL），并在40℃下搅拌溶液1小时。在真空中蒸发溶剂，将残余物悬浮于乙腈（1.6 L）中并在室温下搅拌1小时。在氮气下经过滤收集固体以避免盐的水合。用乙腈（500 mL）和甲基叔丁基醚（1 L）洗涤滤液，在真空下干燥，得到标题化合物（262 g，73%）。LC-ES/MS m/z 372 [M+H]+。
基本上按照制剂30中所述的程序，利用适当的外消旋或对映体纯的溴化物制备下表中的胺。
制剂 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z
31 外消旋-反式-4-氟-N-[6-羟基-3-哌嗪-1-基-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-5-基]苯甲酰胺盐酸盐
Figure 579028DEST_PATH_IMAGE039
 384 [M+H]+
32 外消旋-反式-4-氟-N-[4-羟基-7-哌嗪-1-基-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 469624DEST_PATH_IMAGE002
-5-基]苯甲酰胺盐酸盐		 386 [M+H]+
制剂33
4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-4-基]苯甲酰胺
Figure 937831DEST_PATH_IMAGE041
将三乙酰氧基氢硼化钠（20 g，94.4 mmol）加入4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-哌嗪-1-基-色满-4-基]苯甲酰胺盐酸盐（32.0 g，78.5 mmol）和3-氧杂环丁酮（6.87 g，98.1 mmol）于乙腈(300 mL)的淤浆中。将淤浆搅拌20分钟，一次性加入更多的三乙酰氧基氢硼化钠（20 g，94.4 mmol）。在28℃下将棕色混合物搅拌约2小时。加入额外的三乙酰氧基氢硼化钠（10 g，47.2 mmol），将混合物搅拌30分钟。加入3-氧杂环丁酮（2 g，28.6 mmol），在20分钟后加入额外的3-氧杂环丁酮（1 g，14.3 mmol）。搅拌30分钟，将混合物倾入饱和碳酸氢钠水溶液溶液（1 L）中，并加入二氯甲烷（1 L）。分离有机层，在真空中浓缩，得到浅灰色固体。经硅胶柱层析纯化固体，用3-6%异丙醇/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物，为白色固体（19.2 g，73%）。LC-ES/MS m/z 428 [M+H]+。
基本上按照制剂33中所述的程序，利用适当的外消旋或对映体纯的胺制备下表中的氧杂环丁烷。
制剂 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z
34 4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]萘满-1-基]苯甲酰胺
Figure 111323DEST_PATH_IMAGE042
 426 [M+H]+
35 外消旋-反式-4-氟-N-[8-羟基-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-9-基]苯甲酰胺 440 [M+H]+
36 外消旋-反式-4-氟-N-[4-羟基-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 152278DEST_PATH_IMAGE002
-5-基]苯甲酰胺		 442 [M+H]+
制剂37
4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]茚满-1-基]苯甲酰胺
在室温下，向4-[(2S,3S)-3-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-羟基-茚满-5-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯（300 mg，0.659 mmol）于1,4-二氧六环（5.0 mL）的溶液中加入4M氯化氢/二氧六环（5.0 mL），并搅拌1小时。在真空中浓缩悬浮液。向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液（50 mL），并用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，并在真空中浓缩。将残余物溶于甲醇（20 mL）中，加入3-氧杂环丁酮（142 mg，1.98 mmol）、冰醋酸（170 μL，2.96 mmol）和压碎的活性4Å分子筛。在50℃下将所得悬浮液搅拌1小时。在室温下加入氰基硼氢化钠（131 mg，1.98 mmol），搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液（20 mL），搅拌20分钟。用二氯甲烷（3×50 mL）萃取，用水和盐水洗涤合并的有机层。经硫酸钠干燥有机部分，过滤，并浓缩，得到标题化合物（220 mg，81%）。LC-ES/MS m/z 412 [M+H]+。
制剂38
外消旋-反式-3,6-二溴色满-4-醇
Figure 377264DEST_PATH_IMAGE046
将6-溴色满-4-醇（25.0 g，109.1 mmol）于甲苯（500 mL）的溶液加热至100℃。加入对甲苯磺酸一水合物（1.1 g，5.5 mmol），经利用Dean-Stark分水器收集水，在100℃下搅拌2小时。移除热源，用冰冷的0.5N NaOH（250 mL）猝灭反应混合物。进一步将反应混合物冷却至5-10℃，然后分离各层。用水（25 mL）洗涤有机层，并在减压下浓缩有机物至其初始体积的约一半。加入DMSO（100 mL），继续在减压下浓缩直至不再蒸馏出甲苯。
将中间体烯烃的DMSO溶液冷却至0-5℃，加入水（17 mL）并再冷却至0-5℃。用30分钟分五份加入N-溴代琥珀酰亚胺（21.7 g，120.0 mmol）。在0-5℃下搅拌1小时。用乙酸乙酯（100 mL）和水（50 mL）稀释反应混合物，搅拌10分钟，分离各层。用乙酸乙酯（100 mL）反萃取水层。用1:1盐水/水（2×50 mL）洗涤合并的有机物，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到标题化合物，为白色固体（33.0 g，99%）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 4.26（m，1H），4.37（m，2H），4.65（m，1H），6.27（d，1H），6.80（d，1H），7.35（dd，1H），7.46（bd，1H）。GC/MS m/z（79Br/81Br）308/310 [M+]。
制剂39
外消旋-反式-4-氨基-6-溴-色满-3-醇
Figure 578439DEST_PATH_IMAGE047
在环境温度下，向外消旋-反式-3,6-二溴色满-4-醇（30.0 g，97.4 mmol）于异丙醇（300 mL）的溶液中（500 mL），加入氢氧化铵（28-30%水溶液，150 mL，2.2 mol）。缓慢搅拌15小时。过滤反应混合物，用水（200 mL）稀释滤液。在减压下浓缩所得溶液至其初始重量的一半。加入水（100 mL），在环境温度下将混合物搅拌10分钟，然后冷却至0-5℃并再搅拌30分钟。经过滤收集沉淀，用水（25 mL）和庚烷（25 mL）洗涤固体。在40℃下真空干燥物料，得到标题化合物，为浅黄色固体（21.2 g，89.2%）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 1.96（bs，2H），3.53（m，2H），3.87（dd，1H），4.11（dd，1H），5.15（bs，1H），6.66（d，1H），7.19（dd，1H），7.48（dd，1H）。LC-ES/MS m/z（79Br）244 [M+H]。
制剂40
(3R,4S)-4-氨基-6-溴-色满-3-醇
Figure 161867DEST_PATH_IMAGE048
将外消旋-反式-4-氨基-6-溴色满-3-醇（21.1 g，86.4 mmol）、D-(+)-樟脑酸（17.3 g，86.4 mmol）、乙腈（633 mL）和水（47.6 mL）的混合物加热至70-75℃，并搅拌10分钟。用4小时让溶液冷却至环境温度。在环境温度下24小时后，过滤混合物。用7% H2O/乙腈（2×20 mL）冲洗固体。将滤液加热至50℃，加入1N NaOH（216.1 mL）。在减压下浓缩所得混合物，以除去乙腈。加入H2O（211 mL），将溶液加热至70℃。冷却至环境温度，经过滤收集沉淀。用水（25 mL）洗涤，在50℃下真空干燥过夜，得到标题化合物，为白色固体（9.8 g，50%理论重量中的46.4%，98.7% ee）。
将粗制(3R,4S)-4-氨基-6-溴色满-3-醇（1.5 g，6.15 mmol）、乙腈（12.0 mL）和水（3.0 mL）合并，加热至70-75℃。将溶液搅拌30分钟，让溶液冷却至环境温度，然后再搅拌1小时。将混合物冷却至0-5℃，并搅拌30分钟。过滤固体，用冷的4:1乙腈:H2O（10 mL）洗涤。在50℃下真空干燥固体过夜，得到纯化的标题化合物，为白色固体（1.1 g，74.6%，99.7% ee）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 1.96（bs，2H），3.53（m，2H），3.87（dd，1H），4.11（dd，1H），5.15（bs，1H），6.66（d，1H），7.19（dd，1H），7.48（dd，1H）。LC-ES/MS m/z（79Br）244 [M+H]。分析性手性HPLC分析条件：ChiralPak AD-H柱（150×4.6mm，4.6微米）；流速0.6 mL/min；波长290 nm；洗脱液100%甲醇+ 0.2% v/v二甲基乙基胺；运行时间10分钟；柱温30℃；等度洗脱。
制剂41
4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-(哌嗪-1-基)色满-4-基]苯甲酰胺
在环境温度下，向(3R,4S)-4-氨基-6-溴-色满-3-醇（10.0 g，41.0 mmol）于THF（50 mL）的悬浮液中，加入碳酸氢钠（5.2 g，61.4 mmol）和水（50 mL）。搅拌5分钟，将混合物冷却至0-5℃。用10分钟经加料漏斗逐滴加入4-氟-苯甲酰氯（6.5 g，41.0 mmol）。将混合物在0-5℃下搅拌30分钟，使混合物温热至15-20℃，再搅拌2小时。用盐水（50 mL）和THF（50 mL）稀释混合物，并搅拌20分钟。分离各层，浓缩有机层至其初始体积的一半。将加入THF（50 mL）和浓缩至一半体积重复三次或直至溶液的Karl Fisher水分析<0.1%。加入DMSO（100 mL），继续在50℃下在减压下浓缩混合物直至不再蒸馏出THF。
用DMSO（200 mL）和甲苯（45 mL）稀释所得酰胺中间体的DMSO溶液，并利用氮气表面下喷射(sub-surface sparge)来脱气30分钟。加入哌嗪（16.6 g，192.7 mmol），对溶液脱气30分钟。将溶液加热至40℃，在氮气覆盖层下加入氯化烯丙基钯（II）二聚体（0.72 g，2 mmol）和三叔丁基鏻四氟硼酸盐（1.19 g，4 mmol）。将混合物搅拌10分钟，在氮气覆盖层下加入叔丁醇钠（13.0 g，135.3 mmol）。提高内部温度至70℃，将混合物搅拌4小时。将反应器内含物冷却至20℃，经15分钟加入水（75 mL）。利用6N HCl将混合物的pH调节至6-7，加入乙酸乙酯（150 mL）。将反应器内含物搅拌30分钟，然后分离各层。用乙酸乙酯（2×150 mL）反萃取水层。弃去乙酸乙酯萃取液，利用NaOH（40%水溶液）将水层的pH调节至11-12。用乙酸乙酯（3×150 mL）萃取水层。合并有机萃取液，在减压下浓缩至其初始体积的约一半。加入活性碳（1.5g），将混合物加热至50-55℃。在50-55℃下搅拌1小时，将混合物冷却至20℃，过滤除去固体。用盐水（2×300 mL）洗涤滤液，在减压下浓缩有机物至约2体积（基于初始的起始原料）。将混合物冷却至0-5℃，并再搅拌3小时。经过滤分离固体，用甲基叔丁基醚（30 mL）洗涤，在50℃下真空干燥固体。回收标题化合物，为灰白色固体（7.9 g，52%）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 2.40-2.80（bm，8H），3.65-3.95（bm，2H），4.13（d，1H），4.95（m，1H），5.35（bs，1H），6.63（dd，1H），6.69（d，1H），6.80（d，1H），7.27（m，2H），7.96（m，2H），8.72（bd，1H）。LC-ES/MS m/z 372 [M+H]。
制剂42
4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-4-基]苯甲酰胺
将4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-(哌嗪-1-基)色满-4-基]苯甲酰胺（8.2 g，22.0 mmol）和3-氧杂环丁酮（2.4 g，33.0 mmol）合并至THF（164 mL）中。加入乙酸（1.3 mL，22.0 mmol），将所得混合物加热至35-40℃。1小时后，加入三乙酰氧基氢硼化钠（8.4 g，39.6 mmol），在35-40℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至15℃，用30分钟加入2N NaOH（81.6 mL）。加入盐水（81.6 mL），将混合物搅拌30分钟。分离各层，用2N NaOH（81.6 mL）和盐水（81.6 mL）稀释有机层。将所得混合物搅拌30分钟。分离各层，并移除水层。向有机层中加入活性碳（1.0 g），将温度提高至50-55℃，搅拌1小时。过滤混合物以除去固体，在减压下浓缩滤液至约初始体积的十分之一。加入乙酸乙酯（164 mL），在减压下浓缩至约初始体积的四分之一。用乙酸乙酯（2×164 mL）重复该过程两次。浓缩有机物至约3体积（基于起始原料），提高内部温度至70-75℃，搅拌2小时。将混合物冷却至10℃，用15分钟加入庚烷（82 mL），再搅拌2小时。经过滤分离工业级标题中间体，在50-55℃下真空干燥固体（回收10.1 g）。
纯化：将工业级4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-4-基]苯甲酰胺（10.0 g，23.4 mmol）悬浮于乙腈（700 mL）中，加热混合物至回流。在回流下搅拌2小时，冷却至50-55℃，并加入活性碳（1.0 g）。在50-55℃下搅拌2小时，过滤以移除固体。在减压下浓缩滤液至约5体积（基于起始工业级原料）。提高内部温度至75-80℃，并搅拌1小时。将混合物冷却至20℃，并再搅拌4小时。经过滤分离标题化合物，得到白色固体（6.8 g，72%）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 2.33（m，4H），2.94（m，4H），3.40（m，1H），3.85（m，1H），3.93（d，1H），4.14（d，1H），4.40（dd，2H），4.49（dd，2H），4.94（m，1H），5.34（d，1H），6.65（d，1H），6.70（d，1H），6.84（dd，1H），7.27（m，2H），7.97（m，2H），8.75（bd，1H）。LC-ES/MS m/z 428 [M+H]。
实施例1
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯
Figure 768932DEST_PATH_IMAGE051
向4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-4-基]苯甲酰胺（72.0 g，168 mmol）于THF（648 mL）的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑（35.5 g，219 mmol），在室温下将溶液搅拌过夜。将混合物冷却至5℃，用15分钟的时间逐滴加入2M甲胺于THF的溶液（210 mL，421 mmol，2.5 eq）。搅拌30分钟，倾入水（720 mL）和甲基叔丁基醚（216 mL）的混合物中。将混合物搅拌30分钟，滗析各相。用二氯甲烷（3× 216 mL）萃取水相。用盐水（3×100 mL）洗涤合并的有机相，经无水硫酸钠干燥，并在真空中浓缩。将残余物悬浮于乙酸乙酯（720 mL）中，在回流下加热2小时，冷却至10℃。经过滤收集固体，在真空下干燥过夜，得到标题化合物（64.0 g，78%），为白色固体。LC-ES/MS m/z 485 [M+H]+。
基本上按照实施例1中所述的程序，利用适当的对映体纯的醇制备下表中的氨基甲酸酯。
实施例 化学名称 结构 LC-ES/MS m/z
2 N-甲基氨基甲酸[(1S,2S)-1-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]萘满-2-基]酯
Figure 901973DEST_PATH_IMAGE052
 483 [M+H]+
实施例3
N-甲基氨基甲酸[(8S,9S)-9-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-8-基]酯
Figure 955379DEST_PATH_IMAGE053
基本上按照上述实施例1的程序，利用外消旋-反式-4-氟-N-[8-羟基-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-9-基]苯甲酰胺，制备外消旋氨基甲酸酯。LC-ES/MS m/z 497 [M+H]+。将N-甲基氨基甲酸 外消旋-反式-9-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-2-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-8-基]酯（1.03 g）溶于二氯甲烷（8 mL）和甲醇（3 mL）中。在CHIRALPAK® AD-H柱（2.1×25 cm，5 μm）上通过SFC分离300 μL每份的对映异构体。流动相：含0.2%异丙胺的30%异丙醇/二氧化碳。流速：70 mL/min。检测：225 nm。得到标题化合物，为异构体1（333 mg，99% ee）；和8R,9R对映异构体，为异构体2（359 mg，97.5% ee）。利用含0.2%异丙胺的30%异丙醇/二氧化碳，在CHIRALPAK® AD-H（4.6×150 mm，5 μm）柱上通过SFC测定对映异构体过量。流速：5 mL/min。检测：225 nm。异构体1（标题化合物）TR＝1.76分钟。异构体2 TR＝2.30分钟。
实施例4
N-甲基氨基甲酸[(4S,5S)-5-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂-4-基]酯
Figure 839601DEST_PATH_IMAGE054
通过基本上按照上述实施例1的程序，利用外消旋-反式-4-氟-N-[4-羟基-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 132042DEST_PATH_IMAGE002
-5-基]苯甲酰胺，制备外消旋氨基甲酸酯。LC-ES/MS m/z 499 [M+H]+。将N-甲基氨基甲酸 外消旋-反式-[5-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-7-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2,3,4,5-四氢-1-苯并氧杂
Figure 51456DEST_PATH_IMAGE002
-4-基]酯（100mg）溶于甲醇（3 mL）中，滤掉不溶性固体。在CHIRALPAK® AD-H柱（3×25 cm，5 μm）上通过层析分离1.5 mL每份（2次注入）的对映异构体。流动相：95%乙醇/5%乙腈。流速：18 mL/min。检测：225 nm。得到标题化合物，为异构体1（42 mg，99% ee）；和4R,5R对映异构体，为异构体2（40 mg，99% ee）。利用含0.2%二甲基乙基胺的95%乙醇/5%乙腈，在CHIRALPAK® AD-H（4.6×150 mm，5 μm）柱上通过HPLC测定对映异构体过量。流速：1.0 mL/min。检测：225 nm。异构体1（标题化合物）TR＝3.58分钟。异构体2 TR＝5.13分钟。
实施例5
N-甲基氨基甲酸[(1S,2S)-1-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]茚满-2-基]酯
Figure 745743DEST_PATH_IMAGE055
向4-氟-N-[(1S,2S)-2-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]茚满-1-基]苯甲酰胺（220 mg，0.535 mmol）于四氢呋喃（3.0 mL）的溶液中加入4-吡咯烷子基吡啶（16 mg，0.107 mmol），并密封在压力管瓶中。通过注射器向混合物中加入异氰酸甲酯（97 μL，1.60 mmol），在60℃下搅拌过夜。在冰浴中冷却所得悬浮液，经过滤收集白色固体，在40℃真空烘箱中干燥3小时，得到标题化合物（200 mg，80%）。LC-ES/MS m/z 469 [M+H]+。
实施例6
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯
Figure 397304DEST_PATH_IMAGE056
将4-氟-N-[(3R,4S)-3-羟基-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-4基]苯甲酰胺（10.0 g，23.4 mmol）悬浮于THF（200 mL）中，加入1,1羰基二咪唑（4.9 g，30.4 mmol）。在环境温度下搅拌3小时。将反应混合物冷却至-5℃，经15分钟加入2M甲胺（于THF中，21 mL，42.1 mmol）。在-5-0℃下将所得混合物搅拌3小时。加入2N NaOH（100 mL），在10-30℃下将混合物搅拌1小时。分离各层，用2N NaOH（4×100 mL）洗涤有机物。加入水（200 mL），在减压下浓缩混合物至约二十体积（基于起始原料）。加入THF（200 mL），在环境温度下搅拌1小时。过滤混合物，将产品湿滤饼转移回洁净的反应容器中。加入THF（200 mL）和水（200 mL），在环境温度下搅拌1小时。经过滤分离工业级标题化合物，在80℃下真空干燥（9.0g，80%）。
实施例7
N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯的结晶/固体形式转化
在氮气气氛下，将工业级N-甲基氨基甲酸[(3R,4S)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-6-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]色满-3-基]酯（50 g，103.2 mmol）悬浮于THF（1500 mL）中。将混合物加热至50-60℃，并搅拌1小时。加入活性碳（5.0 g），在50-60℃下继续搅拌1小时。将混合物冷却至40-50℃，并过滤以除去固体。在减压下浓缩滤液至约5体积（基于起始原料）。加入乙腈（1000 mL），在减压下浓缩至约5体积。重复4次至移除全部THF，然后浓缩混合物至10-15体积。将混合物加热至70-75℃，并搅拌18小时。将混合物冷却至15℃，并搅拌4小时。经过滤分离白色晶体，在55-60℃下真空干燥，得到标题化合物（42 g，84%）。1H NMR（DMSO-d 6）δ 2.32（m，4H），2.53（d，3H），2.96（m，4H），3.39（m，1H），4.11-4.25（m，2H），4.39（dd，2H），4.51（dd，2H），4.86（m，1H），5.04（m，1H），6.70-6.75（m，2H），6.85（dd，1H），7.17（m，1H）7.28（m，2H），7.96（m，2H），8.90（bd，1H）。LC-ES/MS m/z 485 [M+H]。手性分析：99.9% ee。
在以下体外和体内试验中测试本发明的示例化合物。
体外
人组织蛋白酶S和小鼠组织蛋白酶S的效能试验以及人组织蛋白酶L、B、K、V和F的选择性试验描述如下。每一试验的实验条件和/或材料略有区别，据此，或者将这样的区别直接记录在一般试验条件内，或者紧接在一般试验条件后在表1中利用标识1a至1g、根据相应的酶试验将这样的区别编码。
在DMSO中制备测试化合物，以构成10mM储备溶液。在进行体外酶促试验前，在96孔圆底平板中，将储备溶液在DMSO中连续稀释以得到具有最终化合物浓度范围1a的10点稀释曲线。在紧接下文所述的试验缓冲液（用于整个试验）中将化合物进一步稀释1b：
人组织蛋白酶 S 、 L 、 B 、 F 和小鼠组织蛋白酶 S ：含有2.5 mM DTT和2.5 mM EDTA外加0.01% TRITON® X-100的50 mM磷酸钠（pH 6.5）
人组织蛋白酶 K 和 V ：含有100 mM NaCl、2.5 mM DTT和2.5 mM EDTA外加0.01% TRITON® X-100的100 mM乙酸钠（pH 5.5）。
将10 μL的每一稀释液加入相应的低蛋白结合性半区黑色平板（Costar 3694）的A至H排的每一孔中。将在试验缓冲液中制备的1c量的底物——苄氧基羰基-L-亮氨酰-L-精氨酸-4-甲基-香豆酰(coumaryl)-7-酰胺（Peptide Institute）加入该平板每一孔中，最后浓度为1d。将在试验缓冲液中制备的1e量的相应酶（紧接下文所述的）加入含有底物和测试化合物的平板每一孔中，导致获得最后浓度1f，以引发反应。
人组织蛋白酶 S 、 L 、 K 和 V ：获自Calbiochem。
小鼠组织蛋白酶 S ：简言之，利用含有组氨酸标签的mCathepsin S-pAN51（T760）构建体，在杆状病毒中克隆小鼠组织蛋白酶S。然后用IMAC纯化活性蛋白。
人组织蛋白酶 F ：简言之，如下内部制备人重组组织蛋白酶F。利用含有组氨酸标签的CathepsinF-pAN60（T-2188）构建体，在293E细胞中克隆组织蛋白原F（procathepsin F）。然后用IMAC纯化该蛋白。利用胃蛋白酶消化组织蛋白原F，并利用Mono S柱层析再纯化，产生纯化的活化组织蛋白酶F。
在平板混合器上，将混合物低速短时振摇。在室温下孵育时间1g之后，利用Envision 2103 Multilabel读数器、在激发波长355 nm和发射波长460 nm下，记录混合物的RFU，用时0.1秒。将RFU对抑制剂浓度作图，利用Activity Base（ver. 7.3.2.1），用四参数逻辑斯谛方程对曲线拟合，得到IC50值。对于人组织蛋白酶F，Packard Fusion Alpha 微板读数器（0.5秒读取/孔）用于测量RFU，GraphPad Prism 4.03软件用于将RFU对抑制剂浓度作图。
表1. 体外试验的实验条件
Figure 504937DEST_PATH_IMAGE057
按照基本上如上所述的方案，实施例化合物显示出的人组织蛋白酶S和小鼠组织蛋白酶S酶抑制剂试验中IC50分别低于800 nM和400 nM。详细而言，实施例1和2的化合物显示出的人组织蛋白酶S酶抑制剂试验中IC50分别为约6.4 nM和10.2 nM，小鼠组织蛋白酶S酶抑制剂试验中IC50分别为约1.7 nM和3.9 nM，由此证明本发明范围内的某些化合物是人和小鼠组织蛋白酶S的有效抑制剂。
对于人组织蛋白酶L、B、K和V酶抑制剂试验，实施例1化合物显示出的IC50分别为约>167 μM、5.2 μM、>100 μM和33 μM，实施例2分别为约>167 μM、94 μM、>100 μM和>100 μM。对于人组织蛋白酶F，实施例1化合物没有显示出达到30 μM的抑制性。这些结果证明，本发明范围内的某些化合物是组织蛋白酶S的选择性抑制剂。
体内
CaCl2 诱导的 AAA 动物效能模型
如下所述改变利用CaCl2诱导来研究组织蛋白酶S抑制剂对AAA影响的AAA动物功效模型（J. Clin. Invest.，2002，110（5），625～632）。
使用获自Taconic（Cambridge City，Indiana）的野生型雄性129SvEv小鼠（10周龄），分组如下：实施例1六组，实施例2五组，每组含12只小鼠。分别向实施例1和2的组1-5给药媒介物溶液——1% NATROSOL®（羟乙基纤维素）/0.25% TWEEN® 80（Polysorbate 80）/0.05% Antifoam-1510®（Dow Corning）和1、3、10或30 mg/kg的测试化合物/媒介物溶液，通过每日两次经口强饲给药4周。引入组6（在实施例1的研究中）以建立基线，其中组6代表假手术组（向主动脉施加0.9%盐水来代替CaCl2，并且以媒介物用药）。手术之前一天（下午）给予第一剂量，手术当天上午给予第二剂量。在手术当天，不向动物给予下午剂量。在手术次日，将每日两次用药（上午和下午）继续进行28天。
手术当天，动物在术前10分钟和术后3小时接受皮下止痛（BUPRENEX®，0.1 mg/kg）。通过吸入2%异氟烷使小鼠麻醉，并进行剖腹手术。通过用外科牵开器横向地收回肠并将肠留在腹腔中，而使腹主动脉暴露。利用显微外科技术，将自肾动脉水平至髂分叉处的腹主动脉与下腔静脉和周围的***分离开。一旦分离，将腹主动脉的受关注区用浸泡在0.25M CaCl2水溶液中的预测量无菌棉纱布包裹。在假手术对照动物中，用0.9%盐水代替CaCl2。7分钟后，移除所述纱布，施加第二个CaCl2浸泡的纱布（或者0.9%盐水浸泡过的纱布用于假手术动物中）。第二个7分钟时段后，移除所述纱布，用0.9%盐水冲洗主动脉，闭合腹腔。让动物回到一般居舍，在此将它们单独圈养(house)，并随意获取标准啮齿动物饮食（Purina 2014）和水。
如上所述用药4周后，通过超声（Biosound Ultrasound－7.5 MHz）测定用纱布包裹的主动脉区段的主动脉腔周长、面积和直径，并用JMP® 7软件（Cary，North Carolina）进行统计学分析。通过测量主动脉腔周长（由于与所测主动脉区段关联的不规则几何结构，主动脉腔周长在这种情况中代表更精确的腹主动脉量度）测定的AAA缩减百分比示于下表1中，并以平均值±标准偏差示出。对于实施例1，将媒介物组与假手术组作比较，测试化合物与媒介物作比较。对于实施例2，将测试化合物与媒介物作比较。
表2. 体内AAA缩减百分比（%）
组 实施例1 实施例2
媒介物 0±9 0±8
1 mg/kg 58±10 11±7
3 mg/kg 83±8 32±9
10 mg/kg 87±8 43±9
30 mg/kg 87±7 52±7
按照基本上如上所述的方案，实施例1和2的化合物以剂量依赖性方式缩减主动脉腔周长，由此证明本发明范围内的某些化合物缩减了AAA。
p10 聚积试验
使用获自Taconic（Cambridge City，Indiana）的野生型雄性C57B6或129SvEv小鼠（10周龄），分成四组，每组含3只小鼠。通过经口强饲，分别向组1-4给药媒介物溶液—1 % NATROSOL®（羟乙基纤维素）/0.25% TWEEN® 80（Polysorbate 80）/0.05% Antifoam-1510（Dow Corning）和3、10或30 mg/kg的测试化合物/媒介物溶液。4小时后，从每一小鼠抽吸全血（300-500 μL）。移除红细胞的步骤如下进行：加入1 mL Flow Cytometry Lysing Solution™（Santa Cruz Biotechnology，Inc.），室温下保持10分钟，4000 rpm下离心5分钟，然后弃去上清液。将该步骤重复一次，以完全移除红血球。用50 μL CytoBuster™试剂（Novagen）使PWBC球粒再悬浮，并在高功率下超声处理5-10秒。利用BCA试验测定蛋白浓度（Anal. Biochem. 1988，175，231-237）。
利用蛋白质印迹测定p10量。使样品（0.5 μg/μL蛋白浓度）在96℃下变性5分钟，将20 μL/孔样品（10 μg/孔）装载到4-12%NUPAGE® NOVEX® Bis-Tris Midi-凝胶（Invitrogen）上。用NUPAGE® MES SDS运行缓冲液（Invitrogen），使凝胶在120 V下运行60分钟。采用NUPAGE®转移缓冲液（Invitrogen）和20%甲醇（EMD），在100 V下将蛋白转移至0.2 μm硝化纤维素（BIO-RAD）持续30分钟。用PBS短时冲洗印迹，并在室温下以10 mL封闭在ODYSSEY®封闭缓冲液（LI-COR Biosciences）中60分钟。对于p10，在4℃下，采用针对小鼠CD74的一级抗体（1 μg/mL的大鼠抗-CD74抗体）（BD Bioscience）将印迹孵育在封闭缓冲液中过夜。对于微管蛋白对照，在4℃下采用兔抗β微管蛋白pAb（0.2 μg/mL）（Abcam）将印迹孵育在封闭缓冲液中过夜。将印迹用含0.01% Polysorbate20的洗涤缓冲液（DPBS，获自HyClone）洗涤4次，各10分钟。然后，在室温下将印迹用二级抗体孵育60分钟。对于p10，使用ALEXA FLUOR® 680山羊抗大鼠IgG（1:5000稀释度）（Invitrogen）。对于微管蛋白，使用ALEXA FLUOR® 680山羊抗兔IgG（1:5000稀释度）（Invitrogen）。再次如上所述洗涤印迹，置于PBS中进行扫描。
通过在ODYSSEY®红外成像仪（LI-COR Biosciences）上扫描来捕获图像。p10量用ODYSSEY®软件进行分析，并用微管蛋白量归一化。数据用JMP® 7软件（Cary，North Carolina）进行统计学分析。相对于媒介物的相对p10聚积（倍数增加）示于表3中。数值表示为平均值±标准偏差。
表3. 体内PWBC中的相对p10聚积
组 实施例1 实施例2
媒介物 1.0±0.8 1.0±0.2
3 mg/kg 2.1±0.5 1.1±0.7
10 mg/kg 3.9±0.2 2.2±1.3
30 mg/kg 4.6±1.0 4.6±1.2
按照上述方案，实施例1和2的化合物以剂量依赖性方式增加PWBC中的p10，证明了本发明范围内的某些化合物封闭抗原呈递。

Claims (15)

1.式（I）化合物：
Figure 2011800507006100001DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，
其中，
Z是-CH2-、-CH2CH2-、-OCH2-、-CH2CH2CH2-或-OCH2CH2-；
R1是H、F或Cl；
R2是H、甲基、乙基、丙基或异丙基。
2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是H或F。
3.根据权利要求1或2的化合物或其可药用盐，其中R1是F。
4.根据权利要求1-3的任一项的化合物或其可药用盐，其中R2是甲基或乙基。
5.根据权利要求1-4的任一项的化合物或其可药用盐，其中R2是甲基。
6.根据权利要求1-5的任一项的化合物或其可药用盐，其中Z是-CH2CH2-或-OCH2-。
7.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物具有下式结构：
Figure 374722DEST_PATH_IMAGE002
。
8.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物具有下式结构：
Figure 2011800507006100001DEST_PATH_IMAGE003
。
9.药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1-8的任一项的化合物以及可药用稀释剂或载体。
10.治疗需要其的哺乳动物中的腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣或狼疮的方法，该方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的根据权利要求1-8的任一项的化合物或其可药用盐。
11.治疗需要其的哺乳动物中的腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣或狼疮的方法，该方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的根据权利要求9的药物组合物。
12.权利要求10或11的方法，其中所述哺乳动物是人。
13.根据权利要求1-8的任一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗。
14.根据权利要求1-8的任一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣或狼疮。
15.权利要求1-8的任一项所要求保护的化合物或其可药用盐的用途，其用于制备治疗腹主动脉瘤、斑块不稳定性、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣或狼疮的药物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110831926A (zh) * 2017-04-27 2020-02-21 持田制药株式会社 新型四氢萘基脲衍生物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002040462A2 (en) * 2000-11-17 2002-05-23 Medivir Uk Limited Cysteine protease inhibitors
WO2005039496A2 (en) * 2003-10-21 2005-05-06 Irm Llc Inhibitors of cathepsin s
CN101671310A (zh) * 2004-08-17 2010-03-17 诺瓦提斯公司 用作组织蛋白酶s抑制剂的化合物和组合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9703377D0 (sv) 1997-09-18 1997-09-18 Astra Ab New compounds
AP2003002811A0 (en) 2000-11-21 2003-06-30 Vertex Pharma Imidazole and benzimidazole caspase inhibitors and uses thereof
KR20040053130A (ko) 2001-09-21 2004-06-23 일라이 릴리 앤드 캄파니 무스카린성 효능제
WO2008130322A1 (en) 2007-04-23 2008-10-30 Astrazeneca Ab Novel 5-heterocyclyl-chromane derivatives for the treatment of pain

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002040462A2 (en) * 2000-11-17 2002-05-23 Medivir Uk Limited Cysteine protease inhibitors
WO2005039496A2 (en) * 2003-10-21 2005-05-06 Irm Llc Inhibitors of cathepsin s
CN101671310A (zh) * 2004-08-17 2010-03-17 诺瓦提斯公司 用作组织蛋白酶s抑制剂的化合物和组合物

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DARIN J. GUSTIN等: "Discovery and SAR studies of a novel series of noncovalent cathepsin S inhibitors", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *
DAVID C. TULLY等: "Arylaminoethyl carbamates as a novel series of potent and selective cathepsin S inhibitors", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *
姜琛等: "组织蛋白酶 S抑制剂的研究进展", 《国际药学研究杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110831926A (zh) * 2017-04-27 2020-02-21 持田制药株式会社 新型四氢萘基脲衍生物
CN110831926B (zh) * 2017-04-27 2023-11-21 持田制药株式会社 新型四氢萘基脲衍生物

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