CN103130550A - 一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种桑黄菌丝体的培养基及其制备方法，以及用该培养基培养桑黄菌丝体的方法，该培养基包括大米和培养液。本发明的培养基采用大米作为原料不仅材料易取，而且非常经济，操作简单，且效果良好。

Description

一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法

技术领域

本发明涉及食用菌培养领域，具体的说涉及一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法。

背景技术

鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)，俗称桑黄菇、桑耳，是近年来开发的一种多年生药用真菌，最早收载于李时珍《本草纲目》中。传统中医认为桑黄性甘、平，味苦、辛，归肝、膀胱经，用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭经、脾虚泄泻等。众多的实验研究表明，桑黄中的多糖和黄酮类化合物有重要的生物活性，在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复方面有重要作用。

自由基是人体新陈代谢的产物，一般情况下，人体有能力清除自身所产生的自由基，但是随着人体的衰老，清除自由基的能力减弱。如果产生的自由基不能被及时清除，就会加速机体衰老，甚至使人体发生病变等。现有研究表明：药用真菌桑黄中的多糖和黄酮类物质具有很好的抗氧化作用；不过现在的研究多集中在桑黄子实体提取物及液体发酵的研究方面，而对固体发酵桑黄菌丝体及其抗氧化作用的研究较少。野生的子实体主要分布于黑龙江、陕西等林区，资源蕴藏量稀少，由于产量低导致价格昂贵。目前桑黄子实体主要靠人工栽培获得，但是人工栽培周期长，需要较大的人力财力投入。相比之下，发酵技术具有周期短、可控性好、实验环境简单等优点，是获得桑黄次生代谢产物的良好途径。而液体发酵在培养的过程中易污染，在一定培养时间内不能达到预期的生物量，培养过程中不好人为地控制。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种桑黄菌丝体的培养基，该培养基包括如下组分：

大米和培养液，其中大米的重量（g）与培养液的体积（ml）比为x：(x+（0-30），其中x≥10；

其中培养液含：2.5%葡萄糖、0.3%KH₂PO₃和0.15%MgSO₄·7H₂O。

上述培养基是通过如下方法配制的：

配置培养液（2.5%葡萄糖，0.3%KH₂PO₃，0.15%MgSO₄·7H₂O），将大米置于培养液中，高压灭菌。

本发明还提供了一种利用上述培养基培养桑黄菌丝体的方法，该方法包括如下步骤：

将桑黄母种接种于上述培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天；

将培养好的菌丝体连同培养基至于30℃鼓风烘箱中烘干。

经上述米饭培养基发酵后的桑黄菌丝体具有抗氧化的生物活性作用，可作为食品添加剂应用，提高食品的营养价值。

本发明的创新之处：

1、使用本发明的培养基进行培养，相对液体培养具有方便易行、节约能源、不易污染的优点。

2、本发明的培养基，采用大米作为原料不仅材料易取，而且非常经济，效果良好。在液体培养中动力能源消耗很大，而本发明培养菌种只需在一定的温度下静置培养，节省能源，并且生长状态也优于液体培养。同时通过抗氧化实验发现，培养的菌丝体有较强的抗氧化效果。如今食品添加剂受到广泛关注，大米作为一种营养安全的食品，培养的菌丝体可作为添加剂来提高食品的营养价值。

具体实施方式

桑黄菌种（Phellinus baummii Pilat，来自中国微生物菌种保藏中心上海食用菌分中心，编号为：Phellinus baumii Pilat3249）。

实施例1-4配制培养基

配置2.5%葡萄糖，0.3%KH₂PO₃，0.15%MgSO₄·7H₂O的培养液，分别取60ml于250ml培养瓶中，然后分别称取30、40、50、60g的大米置于培养液中，浸泡6小时左右，121℃高压灭菌30min。大米（润庄香粳）由上海润庄农业科技有限公司提供。

表1大米装量对生物量的影响

注：生物量的回收率是指最终烘干后的菌丝体与大米装量的比值。

实施例5用实施例3的培养基进行培养

将桑黄菌种长于PDA斜面上，生长周期为一周。

取上述桑黄菌种接种于实施例1的培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天。

取出桑黄菌丝体，至于30℃的鼓风烘箱中烘干。

实施例6菌丝体醇提物中黄酮含量的测定

将烘干的菌丝体加入10倍体积的80%乙醇，浸泡24h，过滤；收集滤液，残渣再用10倍体积的80%乙醇浸泡过夜，重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，得到桑黄菌丝体醇提物。

用NaNO₂-Al(NO₃)₃比色法测定黄酮含量，烘干后的菌丝体醇提物中黄酮的重量百分比含量为40%。

实施例7桑黄菌丝体抗氧化活性的测定

桑黄菌丝体醇提物的来源同实施例6中；测定桑黄菌丝体醇提物的抗氧化活性，主要进行清除过氧化氢，超氧阴离子和DPPH实验。

具体方法如下

一、清除H₂O₂自由基实验

将醇提物用70%乙醇配制成四个浓度，分别是1μg/mL，10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL。对H₂O₂的清除实验使用鲁米诺-H₂O₂发光反应体系，用80%乙醇做为空白对照。分别取5μL加入96孔板，由泵1泵入150μL鲁米诺-CBS溶液（pH9.5），泵2泵入10μL6%H₂O₂，在20℃启动发光反应，每0.6s记录一次发光值，连续记录30s。发光程序如表3-1：

表3-1H₂O₂自由基的发光程序

H₂O₂自由基清除率计算公式如下

结果表明，高浓度的桑黄菌丝体醇提物对H₂O₂自由基的清除率达到80%。

二、清除超氧阴离子实验

将醇提物用80%乙醇溶解配制成不同的浓度，即500μg/mL，800μg/mL，1000μg/mL，2000μg/mL，用80%乙醇做空白对照。采用鲁米诺-邻苯三酚-CBS体系的化学发光法。各浓度样品分别取10μL加入96孔板。由泵1泵入6.25×10^-4mol/L邻苯三酚溶液，泵2泵入150μL鲁米诺-CBS溶液（pH10.2）。在20℃启动发光反应，每0.6S收集一次光信号，连续收集30S。

发光程序如表3-2：

表3-2清除超氧阴离子的发光程序

超氧阴离子的清除率公式同清除H₂O₂自由基清除率公式

结果表明，在低浓度0.5mg/mL时，就表现了较高的清除超氧阴离子的能力，浓度在2mg/mL时，清除率接近100%。

三、清除DPPH自由基实验

取6×10^-4mol/L DPPH·的储备液100μL加900μL80%乙醇，稀释成6×10^-5mol/L DPPH·工作液。用80%乙醇将菌丝体醇提物样品配制成不同浓度（1μg/mL、20μg/mL、100μg/mL，200μg/mL）。分别取500μL不同浓度的样品加入1mL DPPH·工作液中，混匀，静置20min后于517nm处测定吸光值，以80%乙醇作为空白。对DPPH·自由基清除率计算如下：

结果表明，高浓度的醇提物对DPPH自由基的清除率达到40%。

Claims (3)

1.一种桑黄菌丝体的培养基，其特征在于该培养基包括如下组分：

大米和培养液，其中大米的重量（g）与培养液的体积（ml）比为x：(x+（0-30），其中x≥10；

其中培养液含：2.5%葡萄糖、0.3%KH₂PO₃和0.15%MgSO₄·7H₂O。

2.一种制备权利要求1所述培养基的方法，其特征在于该方法为：

配置培养液，将大米置于培养液中，高压灭菌。

3.一种利用权利要求1所述培养基培养桑黄菌丝体的方法，该方法为：

将桑黄母种接种于培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天；

将培养好的菌丝体连同培养基至于30℃鼓风烘箱中烘干。