CN103113336A

CN103113336A - 一种橙酮类化合物及其制备方法与应用

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Publication number: CN103113336A
Application number: CN2013100379009A
Authority: CN
Inventors: 杜刚; 高雪梅; 杨海英; 黄相忠; 李干鹏; 胡秋芬
Original assignee: Yunnan Minzu University
Current assignee: Yunnan Minzu University
Priority date: 2013-01-31
Filing date: 2013-01-31
Publication date: 2013-05-22
Anticipated expiration: 2033-01-31
Also published as: CN103113336B

Abstract

本发明公开了一种橙酮类化合物及其制备方法与应用，所述的橙酮类化合物是从玫瑰花中提取出来的，其4′和6位为甲氧基，结构式为：命名为：5-羟基-6，4′-甲氧基橙酮（5-hydroxy-6，4′-methoxyaurone）。所述橙酮类化合物制备方法包括原料处理、超声提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离、凝胶柱层析。所述橙酮类化合物在制备抗烟草花叶病毒中的应用。本发明的橙酮类化合物是首次从玫瑰花中分离出来，能够确认其分子式和结构。本发明以乙醇为溶剂，对环境污染小、安全环保；化合物结构简单，人工合成也易于实现。经半叶法试验测试，本化合物对烟草花叶病毒的相对抑制率为22.2%，接近对照宁南霉素的28.9%，IC₅₀值为62.5μM，说明该橙酮类化合物可以作为抗烟草花叶病毒药物的先导性化合物。

Description

一种橙酮类化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种橙酮类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

蔷薇属植物是世界上最重要的观赏植物类群之一。蔷薇属的有些种类如中国玫瑰、突蕨蔷薇和百叶蔷薇是有名观赏花卉和香料植物，因其可用以提取玫瑰油或作为观赏花卉，具备较高的商业价值，现已在云南省的多个地区广泛种植。同时，其花瓣和花蕾也可作为食物，或作为药物用于治疗腹痛、腹泻和妇科疾病，以往的植物化学成分的研究表明单宁酸、黄酮类及萜类是从蔷薇属植物分离出来的主要化学成分。黄酮是一类自然界中广泛存在的生物活性物质，由于植物中黄酮成分结构类型多，立体化学复杂，具有多种生物活性，国内外对该领域的研究十分活跃；橙酮属于稀有黄酮类化合物，由于其显著的生物活性，无论是天然存在的，还是人工合成得到的橙酮类化合物，都引起了化学家的广泛关注。因此，深入研究蔷薇属植物中橙酮的类型，对提升蔷薇属植物的利用价值更具深远意义。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种橙酮类化合物；第二目的在于提供该化合物的制备方法；第三目的在于提供该化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的橙酮类化合物是从玫瑰花中分离得到的，其分子式为C₁₇H₁₄O₅，结构式为：

该化合物命名为：5-羟基-6，4′-甲氧基橙酮（5-hydroxy-6，4′- methoxyaurone）。

本发明的第二目的是这样实现的，所述的橙酮类化合物制备方法包括原料处理、超声提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离、凝胶柱层析，具体为：

A、原料处理：取原料玫瑰花，粗粉碎过20~40目筛；

B、超声提取：以60~80%的乙醇为溶剂，超声提取2~4次，每次4~8h，将提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏；

C、硅胶柱层析：将浸膏用重量比1.5~3倍量的纯甲醇溶解，用浸膏重量1~3倍的80-100目硅胶拌样后上硅胶柱，以体积配比为20:1~10:10的氯仿-甲醇溶液梯度洗涤，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC监测合并相同的部分；

D、高压液相色谱分离：取体积配比9:1部分的洗脱液，以45~50%的甲醇为流动相，以规格为21.2mm×250mm、7μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为12ml/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样200μL，收集35.8min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到本发明化合物的粗品；

E、凝胶柱层析：粗品用重量比1~2倍量的纯甲醇溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用纯甲醇进行洗脱，分瓶收集，洗脱流出液的0.8-0.9 L部分浓缩即为所述的橙酮类化合物。

以上述方法制备的橙酮类化合物的结构是通过以下方法测定出来的：

本发明化合物为黄色胶状物，紫外光谱（溶剂为甲醇），UV (MeOH), l _max(log e)370 (3.92), 309 (3.68), 250 (3.56), 230 (4.18)nm；红外光谱（溴化钾压片）_max 3354, 2962, 2907, 1679, 1615, 1542, 1482, 1262, 1148, 1056, 876, 753 cm^-1；高分辨质谱给出准分子离子峰m/z 321.0733 [M+Na]⁺ (C₁₇H₁₄NaO₅计算值321.0739)。结合¹H和¹³C NMR谱给出一个分子式C₁₇H₁₄O₅，不饱和度为11。

化合物的¹H和¹³C NMR数据（见表1）显示化合物中有17个碳信号和14个氢信号，包括1个芳香环信号[C-4 (δ _C 105.2 d), C-5 (δ _C 145.8 s), C-6 (δ _C 148.7 s), C-7 (δ _C 101.0 d), C-8 (δ _C 156.3 s), C-9 (δ _C 126.0 s)]及所带的2个芳香质子信号[H-4 (δ _H 7.15 s) and H-7 (δ _H 6.82 s)]；另1个芳香环信号[C-1′ (δ _C 123.5 s), C-2′,6′ (δ _C 130.9 d), C-3′,5′ (δ _C 117.2), C-4′ (δ _C 160.0 s)]及所带的4个芳香质子信号[H-2′,6′ (δ _H 7.76, d, J=8.6) and H-3′,5′ (δ _H 6.99, d, J=8.6)]，1个羰基碳信号(C-10, δ _C 186.5 s)，1对碳碳双键信号[C-2 (δ _C 152.0 s) 和 C-3 (δ _C 118.9 d); H-3 (δ _H 7.58 s)]，2个甲氧基信号(δ _C 55.9 和 56.0; δ _H 3.89 和 3.82)，1个酚羟基信号(δ _H 9.27)。红外光谱显示有羟基（3354 cm^-1）、羰基（1679 cm^-1）和芳环（1615, 1542, 1482 cm^-1）的吸收峰。紫外光谱在370, 309, 250 和230 处有吸收峰也证实有芳环存在。化合物中存在H-3 (δ _H 7.58, s)和C-2 (d _C 152.0)、C-3 (d _C 118.9)、C-10 (d _C 186.5), H-3 (δ _H 7.58)和C-2(δ _C 152.0)/C-4(δ _C 105.2)/C-8(δ _C 156.3)/C-9(δ _C 126.0)/C-10 (δ _C 186.5)，H-4 (δ _H 7.15)和 C-3 (δ _C 118.9)以及H-2′,6′ (δ _C 130.9)与 C-10 (δ _C 186.5)的HMBC相关也证实化合物为橙酮类结构，且在C-2和C-8间以呋喃环连接。核磁共振氢谱中4个偶合的氢信号δ _H 7.03 (d, J=8.6 Hz, 2H) and 7.74 (d, J=8.6, 2H)，证实化合物中C环为4′-取代；2个单峰δ _H 7.29 (s, 1H) 和 δ _H 6.69 (s, 1H)信号可推测化合物的B-环为C-5/C-6 取代。酚羟基信号(δ _H 9.27) 和C-4 (δ _C 105.2), C-5 (δ _C 145.8), and C-6 (δ _C 148.7)的 HMBC 相关证实酚羟基取代在 C-5 位。甲氧基信号(δ _H 3.89 和 3.82) 与 C-6 (δ _C 148.7) / C-4′ (δ _C 160.0)的HMBC相关证实甲氧基取代在化合物的C-6位and C-4′位。另一方面，酚羟基信号(δ _H 9.27) (δ _H 9.27) 和 C-4 (δ _C 105.2)、 C-5 (δ _C 145.8)及 C-6 (δ _C 148.7) HMBC相关也支持酚羟基在C-5位。NOESY谱上(δ _H 3.89 and 3.82) 与 H-7 (δ _H 6.82 )/H-3′,5′ (δ _H 6.99)相关支持甲氧基在C-6位和C-4′位。因此化合物的结构得以确定。

表1 化合物的 ¹H 和¹³C NMR 数据（CD₃OD，500和 125 M Hz）

本发明的第三目的是这样实现的，所述的橙酮类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。

本发明的橙酮类化合物是首次从中国玫瑰中分离出来，采用核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱等波普数据确认了其分子式和结构。本发明橙酮类化合物提取方法简单易行，化合物结构简单，人工合成也易于实现。该化合物通过半叶法试验测试其抗烟草花叶病毒的活性，结果证明本化合物对烟草花叶病毒的相对抑制率为22.2%，高于对照宁南霉素的28.9%，说明该化合物有很好的抗烟草花叶病毒活性，可作为抗烟草花叶病毒活性的先导性化合物。

附图说明

图1为本发明的制备方法工艺流程图；

图2 为本发明化合物的核磁共振氢谱（¹H NMR）图。

图3 为本发明化合物的核磁共振碳谱（¹³C NMR）图。

图4 为本发明化合物的主要HMBC相关图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。

本发明所述的橙酮类化合物是从玫瑰花中分离得到的，其分子式为C₁₇H₁₄O₅，结构式为：

Figure 2013100379009100002DEST_PATH_IMAGE004

本发明所述的橙酮类化合物制备方法包括原料处理、超声提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离、凝胶柱层析，具体为：

A、原料处理：取原料玫瑰花，粗粉碎过20~40目筛；

所述的纯甲醇作为洗脱剂，分瓶收集，如以每瓶100 mL算，那么发明化合物在第8到第9瓶中，即流出液的0.8~0.9 L。

B步骤所述的乙醇浓度为70%，超声提取3次，每次6h。

C步骤所述的浸膏用其重量比2倍量的纯甲醇溶解。

C步骤所述的浸膏在甲醇溶解后用浸膏重量比1~2倍的80~100目硅胶拌样。

C步骤所述的氯仿-甲醇体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5。

C步骤所述的硅胶柱用浸膏重量1~2倍的200～300目硅胶装柱。

D步骤所述的流动相为48%的甲醇。

E步骤所述的粗品用重量比1.5倍量的纯甲醇溶解。

本发明所述的橙酮类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。

本发明的橙酮类化合物是首次从中国玫瑰花中分离出来，采用核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱等波普数据确认了其分子式和结构。本发明橙酮类化合物提取方法简单易行，化合物结构简单，人工合成也易于实现。本发明的高压液相色谱可以选择安捷仑1100半制备高压液相色谱，凝胶柱层析步骤采用了Sephadex LH-20凝胶柱，其他类型的凝胶柱同样可以实现本发明的目的。

本发明烟草所用原料不受地区和品种限制，均可以实现本发明，下面以来源于云南玉溪市的中国玫瑰花样品对本发明做进一步说明：

实施例1

中国玫瑰花样品采自于云南玉溪市，将中国玫瑰花样品5.5kg粉碎至20目。将粉碎后的样品置于60%乙醇中超声提取2次，每次4h，将提取液合并、过滤，减压浓缩得到浸膏260g。在浸膏中加入450 mL纯甲醇，溶解后用450g的80目粗硅胶拌样，然后上硅胶柱，硅胶柱中装入800 g 的200目硅胶；以体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗涤，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC监测合并相同的部分。取体积配比9:1部分的洗脱液，以48%的甲醇为流动相，以规格为21.5×250mm、7μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为18 ml/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样200μL，收集35.8min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到本发明化合物的初产物0.96 g。在粗产物中加入2.5 mL的纯甲醇，溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱流出液的0.8-0.9 L部分浓缩即得本发明化合物的纯品0.43 g。

实施例2

中国玫瑰花样品采自于云南玉溪市，将中国玫瑰花样品6kg粉碎至40目。将粉碎后的样品置于80%乙醇中超声提取4次，每次8h，将提取液合并、过滤，减压浓缩得到浸膏252g。在浸膏中加入500 mL纯甲醇，溶解后用500 g的100目粗硅胶拌样，然后上硅胶柱，硅胶柱中装入1000 g 的300目硅胶；以体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗涤，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC监测合并相同的部分。取体积配比9:1部分的洗脱液，以48%的甲醇为流动相，以规格为21.5×250mm、7μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为18ml/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样200μL，收集35.8min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到本发明化合物的初产物0.72 g。在粗产物中加入2.5 mL的纯甲醇，溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱流出液的0.8-0.9 L部分浓缩即得本发明化合物的纯品0.56 g。

实施例3

中国玫瑰花样品采自于云南玉溪市，将中国玫瑰花样品4.5kg粉碎至30目。将粉碎后的样品置于70%乙醇中超声提取3次，每次6h，将提取液合并、过滤，减压浓缩得到浸膏185g。在浸膏中加入370 mL纯甲醇，溶解后用350 g的90目粗硅胶拌样，然后上硅胶柱，硅胶柱中装入600 g 的250目硅胶；以体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗涤，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC监测合并相同的部分。取体积配比9:1部分的洗脱液，以48%的甲醇为流动相，以规格为21.5mm×250mm、7μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为18ml/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样200μL，收集35.8min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到本发明化合物的初产物0.66 g。在粗产物中加入2.2 mL的纯甲醇，溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱流出液的0.8-0.9 L部分浓缩即得本发明化合物的纯品0.52 g。

实施例4

取实施例3制备的橙酮类化合物进行质谱、红外光谱、紫外光谱分析和核磁检测，结果为：该化合物为黄色胶状物，紫外光谱（溶剂为甲醇），UV (MeOH), l _max(log e)370 (3.92), 309 (3.68), 250 (3.56), 230 (4.18)nm；红外光谱（溴化钾压片）_max 3354, 2962, 2907, 1679, 1615, 1542, 1482, 1262, 1148, 1056, 876, 753 cm^-1；高分辨质谱给出准分子离子峰m/z 321.0733 [M+Na]⁺ (C₁₇H₁₄NaO₅计算值321.0739)。结合¹H和¹³C NMR谱给出一个分子式C₁₇H₁₄O₅，不饱和度为11。

实施例5

取实施例1、2制备的橙酮类化合物按照实施例4的方法进行检测，得到了相同的结构。

实施例6

以实施例3制备的橙酮类化合物为原料，采用半叶法进行抗烟草花叶病毒活性检测。

在药剂的质量浓度均为50μg/L时对本发明化合物进行抗烟草花叶病毒活性测定。在5~6龄烤烟的植株上，选取适用于测试的叶片（叶行正常，无病无虫），先将叶片均匀撒上细金刚砂，用毛笔将备用的烟草花叶病毒源（3.0×10-3）均匀抹在撒有金刚砂的叶片上，待所有中选的叶片接毒结束后，立即放在盛有药液的培养皿中处理20min，取出，洒去叶片上水珠和约液，将两个半叶复原排放在铺有卫生纸保湿的搪瓷衙内加盖玻璃，控温（23±2）℃，放在温室自然光照射，2~3d即可见枯斑。每个处理都设另一半叶为对照，另外设有1组为商品宁南霉素的处理作为对比，按下公式计算相对抑制率：

XI%=（CK-T）/CK×100%

其中：

X为相对抑制率（%）；

CK为浸泡于清水中半片接毒叶的枯斑数（个）；

T为浸泡于药液中半片接毒叶的枯斑数（个）。

结果表明：本化合物的相对抑制率为22.2%，接近对照宁南霉素的相对抑制率28.9%，说明化合物有很好的抗烟草花叶病毒活性。

Claims

1.一种橙酮类化合物，其特征在于所述的化合物是从玫瑰花中分离得到的，其分子式为C₁₇H₁₄O₅，结构式为：

该化合物命名为5-羟基-6，4′-甲氧基橙酮（5-hydroxy-6，4′- methoxyaurone）。

2.一种权利要求1所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于包括原料处理、超声提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离、凝胶柱层析，具体包括：

A、原料处理：取原料玫瑰花，粗粉碎过20~40目筛；

C、硅胶柱层析：将浸膏用重量比1.5~3倍量的纯甲醇溶解，用浸膏重量比1~3倍的80-100目硅胶拌样后上硅胶柱，以体积配比为20:1~10:10的氯仿-甲醇溶液梯度洗涤，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC监测合并相同的部分；

3.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于B步骤所述的乙醇浓度为70%，超声提取3次，每次6h。

4.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于C步骤所述的浸膏用其重量比2倍量的纯甲醇溶解。

5.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于C步骤所述的浸膏在甲醇溶解后用浸膏重1~2倍的80~100目硅胶拌样。

6.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于C步骤所述的氯仿-甲醇体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5。

7.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于C步骤所述的硅胶柱用浸膏重量1~2倍量200~300目的硅胶装柱。

8.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于D步骤所述的流动相为48%的甲醇。

9.根据权利要求2所述的橙酮类化合物制备方法，其特征在于E步骤所述的粗品用重量比1.5倍量的纯甲醇溶解。

10.一种权利要求1所述的橙酮类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。