CN103097380A

CN103097380A - 酪蛋白激酶1δ 及酪蛋白激酶1ε 抑制剂

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Publication number: CN103097380A
Application number: CN2011800394277A
Authority: CN
Inventors: 冈本雅子; 高山喜好
Original assignee: NB HEALTH LABORATORY Co Ltd; PharmaDesign Inc Japan
Current assignee: NB Health Laboratory Co. Ltd.
Priority date: 2010-08-09
Filing date: 2011-08-08
Publication date: 2013-05-08
Anticipated expiration: 2031-08-08
Also published as: JP5181156B2; RU2013107659A; IL224612A; US20130137730A1; CN103097380B; EP2604606A4; CN104803997A; JPWO2012020726A1; AU2011290238A1; HK1211926A1; CA2807359A1; EP2604606A1; KR20140000666A; AU2011290238B8; EP2604606B1; KR101856266B1; US8710231B2; CA2807359C; WO2012020726A1; AU2011290238B2

Abstract

本发明提供对酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε具有抑制活性的新型唑酮衍生物。另外，通过抑制酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε，该抑制剂提供了对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药。尤其是，该抑制剂提供了对于昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗有用的医药。一种酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂，作为有效成分，含有通式（1）表示的

唑酮衍生物或其盐、或者它们的溶剂化物或它们的水合物。式（1）中，X表示卤原子（可为氟原子、氯原子、溴原子或碘原子中的任一种）。

Description

酪蛋白激酶1δ 及酪蛋白激酶1ε 抑制剂

技术领域

本发明涉及含有

唑酮衍生物或其盐、或它们的溶剂化物或它们的水合物作为有效成分的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂。本发明涉及用于治疗酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶的活化与其疾病状态相关联的疾病的医药。本发明涉及含有在酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活化与其疾病状态相关联的疾病中尤其是对于治疗和/或预防昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌有用的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂的医药。

背景技术

酪蛋白激酶1属于丝氨酸/苏氨酸激酶（在某种情况下也将酪氨酸残基磷酸化），作为哺乳类中的其亚型（isoforms），已知有α、β、γ1、γ2、γ3、δ及ε这7种。已知这些亚型通过将各种不同的底物蛋白质磷酸化，使该蛋白质的功能活化或者失活或者稳定化或者不稳定化，从而参与各种不同的生物体功能的调节。就哺乳类的酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε而言，作为其结构，具有与其它亚型类似的激酶结构域，但是在N端及C端结构域与其它亚型不同。即，认为在C端结构域中具有多个自磷酸化部位而参与自身酶活性的调节。另外，在激酶结构域中，存在被认为与核内移行相关的序列（NLS：nuclear location signal）和驱动蛋白样结构域（KHD：kinesin homology domain）。

已知酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε与昼夜节律周期障碍相关，另外，酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε与中枢神经退行性疾病相关，另外，酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε与癌相关，在针对与对应的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε发生底物蛋白质等相互作用的对象蛋白质与酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε的相互作用的研究中，与这些疾病状态相关的详细情况逐渐变成已知的事情。具体而言，作为酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε进行磷酸化的底物蛋白质，如果进行例示，则可列举出节律蛋白（Per）、Tau蛋白（tau）、p53、β-连环蛋白（β-catenin）等。

作为昼夜节律发生核心装置（central generator of the circadianrhythm）的核心体内生物钟（the core of the biological clock），如今被认为由大约10种所谓被称为生物钟基因（clock genes）的基因的相互作用网络构成。在上述10种基因组中，Per1、2、3（Period1、2、3）及Cry1、2（cryptochrome1，2）及Bmal1（brain and muscle ARNT-like1）及Clock（circadian locomotor output cycles kaput）编码转录因子，另外，CK1δ、ε编码将这些转录因子磷酸化的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε。已知这些生物钟基因的功能异常对包括人类在内的各种动物的昼夜节律表现型造成影响。该体内生物钟的分子机制超越物种而得到保存，因此对于人类中的昼夜节律表现型的异常，具有在体外试验中也能够进行生物钟基因的研究的优点。Clock在体内生物钟相互作用网络中负责发出活化信号的程序，将Per、Cry其它下游靶基因进行活化。另一方面，负责发出调节性信号的程序的Per及Cry以抑制Clock活性的方式起作用。酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε通过将Per及Cry磷酸化而促进Per的细胞质内分解。另外，这些磷酸化的结果与这些转录因子的核内移行及核内的稳定性的控制相关。这样，认为负责生物体内的内源性分子振动节律。哺乳类中的中枢体内生物钟位于视交叉上核（SCN：suprachiasmatic nucleus），但是该SCN体内生物钟与SCN以外的中枢及末梢组织的基因表达体内生物钟联动。

已知Per为生物体内的昼夜节律调节蛋白质。Per的mRNA及蛋白质水平对昼夜节律响应而振动，与体内生物钟的控制密切相关。例如在具有人类Per2磷酸化部位变异（S662G）的基因疾病中，已知与酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ所致的磷酸化下降相伴成为家族性睡眠期提前综合症（FASPS：familial advanced sleep phase syndrome），这显示出Per对睡眠调节发挥重要的作用。已知Per的细胞内蛋白质量的变化被酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ所致的磷酸化控制。即，若Per被这些激酶磷酸化，则蛋白质的稳定性显著下降。

由Xu，Y.等进行了如下报告：在人类Per2磷酸化部位变异（S662G）转基因小鼠中确认了与在人类中确认的FASPS同样的表现型，但是该研究人等进一步对该转基因小鼠与酪蛋白激酶1δWT（WT：wild type，野生型）及酪蛋白激酶1δ+/-（heterozygous knockout）小鼠的杂交小鼠的酪蛋白激酶1δ表达量的变化所造成的影响进行了研究，结果报告了该表现型受到影响，在野生型中确认的昼夜节律表现型的异常在+/-小鼠中被纠正，显示出Per2的磷酸化状况与参与磷酸化的酪蛋白激酶1δ的参与的重要性（非专利文献5）。另外，Badula，Loi等报告如下：通过将酪蛋白激酶1ε抑制化合物4-[3-环己基-5-（4-氟-苯基）-3H-咪唑-4-基]-嘧啶-2-基胺（PF-670462）对大鼠进行皮下给药，能够显著地延迟昼夜节律的相位（非专利文献4）。这样Per的磷酸化的状况与昼夜节律相关，酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的抑制剂提供了调整昼夜节律的新方法。可期待通过转移或者重设昼夜节律的相位，从而有助于各种各样的包括睡眠障碍的昼夜节律障碍的治疗。然而，以PF-670462为代表的以往抑制剂对于有可能表达副作用的激酶（例如p38α等）也显示出抑制作用，因此作为医药品而言尚未完成。

在现有技术中，几乎未听说以直接治疗昼夜节律障碍为目的的医药，另外，作为现有技术中的睡眠障碍治疗药，开发了睡眠导入剂而在临床上投入使用。另一方面，尚未完成改善昼夜节律性睡眠障碍（轮班睡眠障碍、时差综合症、睡眠相提前综合症及睡眠相延迟综合症）等的药物。另外，对于以将其它睡眠障碍（失眠症、睡眠相关呼吸障碍、中枢性过度睡眠症、睡眠期间相关疾病、睡眠相关运动障碍）中的昼夜节律的相位转移或重设为基础的药物治疗也尚未完成。

以下，对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε与中枢神经退行性疾病、特别是阿尔茨海默氏病的关联性进行叙述。

熟知阿尔茨海默氏病病变部位中的Tau蛋白质的凝集是疾病状态的重要标记。而且，还熟知该Tau蛋白质的过度磷酸化对凝集发挥重要的参与作用。因此，作为将该Tau蛋白质磷酸化的候选激酶，可考虑属于在该病变部位过度表达的酶的酪蛋白激酶1族，因此，其中，对于酪蛋白激酶1δ，Li，Guibon等进行了使用HEK-293细胞表达***的研究。其结果是，使用非选择性酪蛋白激酶1抑制化合物3-[（2，3，6-三甲氧基苯基）次甲基]-吲哚-2-酮（IC261）而显示出：首先，酪蛋白激酶1δ与Tau蛋白质在原位缔合，酪蛋白激酶1δ直接将Tau蛋白质磷酸化，然后，通过酪蛋白激酶1δ的过度表达，Tau蛋白质的与体外磷酸化的部位相同的部位的磷酸化增加等（非专利文献6）。另一方面，Hanger，Diane P.等将由阿尔茨海默氏病患者的病变部位得到的极度磷酸化而凝集的所谓不溶性Tau即PHF-tau（paired helical filaments-tau）及正常人类的Tau的磷酸化部位利用质量分析进行比较，鉴定在阿尔茨海默氏病患者的病变部位所特有的磷酸化部位，并且由该磷酸化部位的特征启示：作为对象候选激酶，酪蛋白激酶1δ与糖原合成酶激酶3β（glycogensynthase kinase3β）一起参与病变发生过程的可能性高（非专利文献7）。

以下，对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε与中枢神经退行性疾病、特别是阿尔茨海默氏病的关联性进行进一步叙述。

在阿尔茨海默氏病中，认为对神经细胞显示出毒性的β淀粉样蛋白（amyloid-β：Aβ）的蓄积与其病变相关。另一方面，同时已知在阿尔茨海默氏病患者的病变部位酪蛋白激酶1的表达增加的事实。考虑到Aβ是APP（amyloid precursor protein）被β分泌酶（aspartyl proteaseβ-secretase）及γ分泌酶（presenin-dependent proteaseγ-secretase）切断而形成的，因此Flajolet，Marc等研究了被利用in silico解析而认为在这些APP、β分泌酶、γ分泌酶的亚单位的序列中存在的酪蛋白激酶1共同磷酸化的部位。接着，参考这些结果报告了，对稳定地表达APP的N2A细胞（N2A-APP695cells），过度表达了持续稳定活性的（constitutively active）酪蛋白激酶1ε，结果Aβ40及Aβ42的量与对照相比，分别成为约2倍与2.5倍。进而，报告了在该***中，在添加非选择性酪蛋白激酶1抑制化合物IC261之际Aβ40及Aβ42的量下降，进而，利用另外两种非选择性酪蛋白激酶1抑制化合物CKI-7及D4476也可得到同样的结果（非专利文献8）。

上述报告（非专利文献6、7及8）很大地启示了酪蛋白激酶1、特别是酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε与阿尔茨海默氏病的发病相关，可通过抑制该酶活性来进行阿尔茨海默氏病的治疗。

另外，从假定存在阿尔茨海默氏病的致病基因的第21染色体在唐氏综合症患者的体细胞中成为3倍体等出发，考虑唐氏综合症能够成为阿尔茨海默氏病的遗传背景或者发病研究等的模型。特别是，在两者中共同发现的特定蛋白质的异常蓄积被认为是与其发病机制相关的重要的病理学、生化学指标之一而被进行研究。实际上，已知唐氏综合症患者中，中年期（35岁左右）以后，阿尔茨海默氏症样脑病变多发。这些事实很大地启示了关于以唐氏综合症为背景的神经退行性疾病，也可通过抑制酪蛋白激酶1、特别是酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活性来治疗以唐氏综合症为背景的神经退行性疾病。

在现有技术中，完全不知道以直接的Tau蛋白质或者β淀粉样蛋白的凝集抑制为作用点并以包括阿尔茨海默氏病在内的中枢神经退行性疾病的治疗为目的的医药，另外，在现有技术中，对于阻碍基于本机制的中枢神经退行性疾病的发展的药物治疗也尚未完成。

以下，对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε与癌、特别是胰腺癌的关联性进行叙述。

酪蛋白激酶1族参与细胞内的各种各样的重要生理活性的调整，其磷酸化的底物蛋白质涉及很多方面。例如，癌抑制因子p53及癌基因mdm2均为控制癌化的重要蛋白质，同时也为酪蛋白激酶1的底物。认为因它们的磷酸化的状况而使细胞的癌化亢进，但是在酪蛋白激酶1的亚型中，其中关于酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ所致的p53的磷酸化及作为其结果的p53与mdm2的相互作用的变化及p53的稳定化与活化等，也受到很大的重视。进而，还已知酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ与在细胞***时形成中心体、纺锤体之际参与的调整蛋白质相关的事实，或者与介由TRAIL（tumor necrosis factor-related apoptosisinducing factor）及Fas的细胞凋亡相关的事实。

但是，胰腺导管腺癌（PDACs：pancreatic ductal adenocarcinomas）被认为是难治性癌，但Brockschmidt，C.等研究了在PDACs中酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ强烈表达的事情。基于该结果，确认了对人类胰腺癌细胞株体外添加非选择性酪蛋白激酶1抑制化合物IC261，结果抑制其细胞增殖。另外，报告了同样将胰腺癌细胞株移植于小鼠的皮下，给予非选择性酪蛋白激酶1抑制化合物IC261，结果确认了与吉西他滨给予组同样显著的肿瘤细胞的增殖抑制效果（非专利文献9）。

在现有技术中尚未知道作为以酪蛋白激酶1ε或者酪蛋白激酶1δ的抑制为基础的抗癌剂的医药品，另外，特别是，在现有技术中，对于基于本机制的难治性胰腺癌的药物治疗也尚未完成。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2008-510712

专利文献2：日本特表2008-510704

非专利文献

非专利文献1：Uwe Knippschild et al.，Cellular Signaling，17，675-689（2005）

非专利文献2：Takashi Ebisawa，J.Pharmacol.Sci.，103，150-154（2007）

非专利文献3：Caroline H.Ko et Jpseph S.Takahashi，Hu.Mol.Genetics，15（2）R271-R277（2006）

非专利文献4：Lori Badura et al，J.Pharmacol.Exp.Therapy，322，730-738（2007）

非专利文献5：Xu，Y.et al.，Cell128，59-70（2007）

非专利文献6：Li，Guibin et al.，J.Biol.Chem.，279（16），15938-15945（2004）

非专利文献7：Hanger，Diane P.Et al.，J.Biol.Chem.，282（32），23645-23654（2007）

非专利文献8：Flajolet，Marc et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.，104（10），4159-4164（2007）

非专利文献9：Brockschmidt，C.et al.：Gut，57，799-809（2008）

非专利文献10：Mashhoon，Neda et al.，J.Biol.Chem.，275（26），20052-20060（2000）

非专利文献11：Rena，Graham，et al.，EMBO Rep.，5（1），60-65，（2004）

非专利文献12：Godl，Klaus，et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.，100（26），15434-15439（2003）

非专利文献13：Cozza，Giorgio et al.，Bioorg.Medicinal Chem.Lett.，18（20），5622-5675（2008）

非专利文献14：Protein Data Bank[online]，<URL：http：//www.rcsb.org/pdb/>，ID号；2CMW（CK1gamma1），2C47（CK1gamma2），2CHL，2IZR，2IZS，2IZT，2IZU（CK1gamma3），1CKI，1CKJ（CK1delta）

发明内容

本发明的目的在于提供含有

唑酮衍生物或其盐、或它们的溶剂化物或它们的水合物作为有效成分的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂。

另外，本发明的目的在于提供含有本发明的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε的选择性抑制剂作为医药上的有效性成分并通过调节酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε在生物体内的功能而对酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活化与疾病状态的发生过程相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药。本发明的目的在于提供对在酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活化与疾病状态的发生过程相关联的疾病中的昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗和/或预防有用的医药。进而，本发明的目的在于提供使用了上述医药的昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗和/或预防方法。

进而，本发明的目的在于提供新型

唑酮衍生物及其药剂上容许的盐以及它们的水合物。

迄今为止，已知有作为对酪蛋白激酶1亚型具有非特异性的酪蛋白激酶1抑制作用的研究用试剂的化合物，若列举其代表性的化合物，可示出IC261、D4476、SB203580等（非专利文献10、11及12）。这些化合物还不具有对于解决课题而言充分的性质。就这些化合物而言，当初只是单纯期待酪蛋白激酶1选择性抑制作用，以作为其亚型的酪蛋白激酶1δ为对象。另一方面，作为期待酪蛋白激酶1ε选择性抑制作用的结果而得到的化合物，有PF-670462，但是该化合物对其它激酶具有抑制作用，只不过是偶然地注意到对酪蛋白激酶1δ也具有抑制作用的情况在药理学上是有意义的（非专利文献4）。进而，虽然示出同样标榜酪蛋白激酶1ε选择性抑制作用的化合物，但是对于其亚型抑制的选择性的叙述是暧昧的（专利文献1、2）。另外，存在实施了在构建基于对象蛋白质的立体结构信息的模型的基础上的所谓虚拟筛选的报告，但是就所得化合物的作用而言，停留于对以酪蛋白激酶1δ为对象的抑制作用进行叙述（非专利文献13）。即，迄今为止，尚不知道如下事实：像本发明人等这样，着眼于对酪蛋白激酶1选择性高的抑制作用而且对于其亚型抑制的选择性而言具有酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε的选择性抑制作用的情况在治疗上有意义，为了探索目标化合物，进行了深入研究。

本发明人等为了解决上述课题，出于发现针对酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε的磷酸化能力具有抑制作用的各种化合物的目的，在构建基于包含有酪蛋白激酶1δ的其它类似蛋白质的立体结构信息的复合体模型的基础上，对市售化合物数据库实施使用了导入有共识性评分的DOCK4的虚拟筛选（关于酪蛋白激酶1δ的立体结构信息，已知向Protein Data Bank进行登录等（非专利文献14）），进行化合物限制。购入这些化合物，或者进行新型地合成，实际实施生物活性筛选。

其结果是，发现下述通式（1）表示的化合物对酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε的磷酸化能力具有抑制作用。进而，发现了该化合物以迄今为止未知的程度具有选择性高的抑制作用。由此，可知该化合物作为用于治疗上述疾病的医药的有效成分而言是有用的。本发明是基于上述见解而完成的。

即，本发明是对酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε具有抑制作用的通式（1）表示的

唑酮衍生物及其药剂上容许的盐以及它们的溶剂化物或者水合物。

[式（1）中，X表示卤原子（氟原子、氯原子、溴原子、或碘原子中的任一种）]

另外，本发明是含有上述通式（1）表示的

唑酮衍生物或其药剂上容许的盐或者它们的溶剂化物或者水合物作为有效成分的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂。

另外，本发明是含有上述通式（1）表示的唑酮衍生物或其药剂上容许的盐或者它们的溶剂化物或它们的水合物作为有效成分且对酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活化与疾病状态的发生过程相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药。另外，本发明是含有上述通式（1）表示的唑酮衍生物或其药剂上容许的盐或者它们的溶剂化物或它们的水合物作为有效成分且用于昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗和/或预防的医药。

进而，本发明是包括将上述医药给予患者的、酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的酶活化机制与疾病状态相关的疾病的治疗方法。

本发明的化合物能够抑制酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε活性。其结果是，能够使酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关的疾病得到治愈。

本发明的化合物及含有其作为药学有效成分的医药能够用于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关的疾病的治疗。

本发明的化合物及含有其作为药学有效成分的医药与以往的具有酪蛋白激酶1抑制活性的化合物相比，对于酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε具有更高的选择性。其结果是，本发明的化合物及含有其作为药学有效成分的医药，对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关的疾病的治疗，与现存化合物比较，能够期待进一步的临床有效性，同时与现存化合物比较，能够期待更高的安全性。

具体实施方式

本发明的优选方式是通式（1）表示的

唑酮衍生物及其药剂上容许的盐以及它们的溶剂化物或者水合物。该化合物对酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε具有抑制作用。

通式（1）表示的化合物是在本发明中新合成的化合物。进而，通式（1）表示的化合物具有酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε活性的抑制活性的事实是由本发明首次公开的。本发明的通式（1）表示的新型

唑酮衍生物能够用后述实施例中示出的化学合成方法来制造。

只要没有特别说明，本发明的酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε抑制剂及作为医药有效成分而含有的通式（1）表示的

唑酮衍生物中还包括其互变异构体、几何异构体（例如，E构型、Z构型等）。另外，关于对映异构体，在存在的情况下，也被包含在本发明的范围中。

作为通式（1）表示的化合物及其盐以及水合物，没有限定，例如可列举出如下化合物。

4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-氟-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮及其被容许的盐以及水合物，

4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-氯-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮及其被容许的盐以及水合物，

4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-溴-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮及其被容许的盐以及水合物，

4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-碘-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮及其被容许的盐以及水合物。

进而，根据本发明的其它优选方式，提供了含有通式（1）表示的

唑酮衍生物、或其药剂上被容许的盐或者它们的溶剂化物或水合物作为有效成分的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂。另外，根据本发明的进一步的优选方式，提供了含有该化合物作为药理学上有效的成分且用于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化与其疾病状态相关联的疾病尤其是昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗的医药。

本发明中的酪蛋白激酶1δ有时被称为“酪蛋白激酶1德尔塔”、“Casein Kinase1delta”、“酪蛋白激酶1亚型德尔塔”、“CK1（-）delta”、“CK1d”、“HCKID”、“Casein Kinase1δ”、“酪蛋白激酶1亚型δ”、“CK1（-）δ”等类似名或者别名，是含有与在National Center forBiotechnology Information（NCBI）所公开的NCBI Reference Sequences（RefSeq）的数据库内作为氨基酸序列登记的右记序号NP_001884.2、NP_620693.1、NP_620690.1、NP_082150.1相同或实质上相同的氨基酸序列的蛋白质。

在此，“含有实质上相同的氨基酸序列的蛋白质”，是包含与上述RefSeq号NP_001884.2、NP_620693.1、NP_620690.1、NP_082150.1表示的氨基酸序列具有约60%以上、优选约70%以上、更优选约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、最优选约99%的氨基酸同源性的氨基酸序列，且具有蛋白质磷酸化酶活性的蛋白质。

或者，作为包含与RefSeq号NP_001884.2、NP_620693.1、NP_620690.1、NP_082150.1表示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列的蛋白质，是由RefSeq号NP_001884.2、NP_620693.1、NP_620690.1、NP_082150.1表示的氨基酸序列中缺失、取代或者添加1个或数个（优选为1～30个左右，更优选为1～10个左右，进一步优选为1～5个）氨基酸而成的氨基酸序列构成且具有蛋白质磷酸化酶活性的蛋白质。

本发明中的酪蛋白激酶1ε有时也被称为“酪蛋白激酶1艾普西隆”、“Casein Kinase1epsilon”、“酪蛋白激酶1亚型艾普西隆”、“CK1（-）epsilon”、“CK1e”、“HCKIE”、“Casein Kinase1ε”、“酪蛋白激酶1亚型ε”、“CK1（-）ε”等类似名或者别名，是包含与在National Center forBiotechnology Information（NCBI）公开的NCBI Reference Sequences（RefSeq）的数据库内作为氨基酸序列而登记的右记序号NP_001885.1、NP_689407.1、NP_038795.3相同或实质上相同的氨基酸序列的蛋白质。

在此，“包含实质上相同的氨基酸序列的蛋白质”是包含与上述RefSeq号NP_001885.1、NP_689407.1、NP_038795.3表示的氨基酸序列具有约60%以上、优选约70%以上、更优选约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、最优选约99%的氨基酸同源性的氨基酸序列且具有蛋白质磷酸化酶活性的蛋白质。

或者，作为包含与RefSeq号NP_001885.1、NP_689407.1、NP_038795.3表示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列的蛋白质，是由在RefSeq号NP_001885.1、NP_689407.1、NP_038795.3表示的氨基酸序列中缺失、取代或添加1个或数个（优选为1～30个左右，更优选为1～10个左右，进一步优选为1～5个）氨基酸而成的氨基酸序列构成且具有蛋白质磷酸化酶活性的蛋白质。

作为酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与其疾病状态相关联的疾病，没有限定，例如可列举出昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、神经退行性疾病、癌等。

本说明书中，所谓昼夜节律周期障碍，没有限定，包括情绪障碍及睡眠障碍，该睡眠障碍为昼夜节律性睡眠障碍，其中，昼夜节律性睡眠障碍包括选自轮班睡眠障碍、时差综合症、睡眠相提前综合症及睡眠相延迟综合症中的疾病。而且，睡眠障碍包括选自失眠症、睡眠相关呼吸障碍、中枢性过度睡眠症、睡眠期间相关疾病、睡眠相关运动障碍中的疾病。进而，上述记载的情绪障碍选自抑郁障碍或双相情感障碍，抑郁障碍为重度抑郁障碍，另外，情绪障碍选自抑郁障碍或双相情感障碍，双相情感障碍包含选自双相情感I型障碍及双相情感II型障碍中的疾病。进而，例如，可列举出失眠症、睡眠相关呼吸障碍、中枢性过度睡眠症、昼夜节律性睡眠障碍、睡眠期间相关疾病、睡眠相关运动障碍、由其它原因所致的睡眠障碍等。

本说明书中，作为失眠症，可列举出压力等所致的精神生理性失眠、内科疾病所致的失眠等。作为睡眠相关呼吸障碍，可列举出中枢性睡眠呼吸暂停综合症、阻塞性睡眠呼吸暂停综合症、睡眠相关低换气·低氧血综合症等。作为中枢性过度睡眠症，可列举出嗜睡病、特发性过度睡眠症、反复性过度睡眠症等。作为昼夜节律性睡眠障碍，可列举出轮班睡眠障碍、时差综合症、睡眠相提前综合症及睡眠相延迟综合症等。作为睡眠期间相关疾病，可列举出梦游症、REM睡眠行为障碍等。作为睡眠相关运动障碍，可列举出不宁腿综合症、周期性四肢运动障碍等。

本说明书中，作为神经退行性疾病，没有限定，例如，作为中枢性神经退行性疾病，可列举出以阿尔茨海默氏病、帕金森病、唐氏综合症为背景的神经退行性疾病，起因于神经物理性损伤（有脑挫伤等脑组织损伤、头部外伤等产生的神经损伤）的神经退行性，由缺血或缺血再灌流后的神经损伤（由脑中风、脑梗塞、脑出血、脑缺血、蛛网膜下出血、动脉瘤出血、心肌梗塞、低氧血症、缺氧血症所致的外部发作/由大脑缺血等产生的神经损伤）神经退行性等。

本说明书中，作为从胰脏发生的癌，没有限定，例如可列举出胰腺导管癌及浸润性胰腺导管癌、胰腺内分泌肿瘤、胰腺导管内***粘液性肿瘤、粘液性囊肿肿瘤、腺泡细胞癌、转移性胰腺癌等。

作为本发明的医药的有效成分，除了上述通式（1）表示的化合物以外，可使用生理学上容许的它的盐。作为盐，例如，在存在酸性基团的情况下，可形成锂、钠、钾、镁、钙等的碱金属及碱土类金属盐；氨、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、二环己基胺、三（羟甲基）氨基甲烷、N，N-双（羟乙基）哌嗪、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、乙醇胺、N-甲基葡萄糖胺、L-葡萄糖胺等胺的盐；或与赖氨酸、δ-羟基赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的盐。在存在碱性基团的情况下，可列举出盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸的盐；与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、丙酸盐、酒石酸、富马酸、马来酸、苹果酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、肉桂酸、乳酸，乙醇酸、葡萄糖醛酸、抗坏血酸、烟酸、水杨酸等有机酸的盐；或者与天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸的盐等。

进而，作为本发明的医药的有效成分，也可使用通式（1）表示的化合物或其盐的溶剂化物或者水合物。

就本发明的医药而言，可以给予属于有效成分的通式（1）表示的化合物及药理学上容许的其盐、或它们的溶剂化物或它们的水合物本身，但是一般而言，优选以包含属于有效成分的上述物质和1种或2种以上的制剂用添加物、药理学上容许的载体的医药组合物的形态给予。作为本发明的医药有效成分，可以将上述物质的2种以上组合使用，在上述医药组合物中，还可配合针对酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与其疾病状态相关联的疾病的治疗和/或预防的其它医药有效成分。在这些疾病中，也可配合针对昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗和/或预防的其它医药有效成分。

医药组合物的种类没有特别限定，作为剂型，可列举出片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、混悬剂、栓剂、软膏、霜剂、凝胶剂、贴剂、吸入剂、注射剂等。这些制剂可按照常规方法制备。应予说明，在为液体制剂时，可以是在使用时溶解或混悬于水或其它适当的溶剂中的形式。另外，片剂、颗粒剂可由公知的方法进行包衣。在为注射剂的情况下，使本发明的化合物溶解于水而进行制备，但是根据需要可溶解于生理盐水或者葡萄糖溶液中，另外，也可添加缓冲剂、保存剂。以经口给药用或非经口给药用的任意制剂型态提供。例如，可制备成颗粒剂、细粒剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂或液剂等形态的经口给药用医药组合物；静脉内给药用、肌肉内给药用、或者皮下给药用等的注射剂，点滴剂、经皮吸收剂、经粘膜吸收剂、点鼻剂、吸入剂、栓剂等形态的非经口给药用医药组合物。注射剂、点滴剂等可制备成冻干形态等粉末状剂型，在使用时溶解于生理盐水等适宜的水性介质中来使用。另外，也可将用高分子等覆盖的缓释制剂直接给予至脑内。

就医药组合物的制造中所使用的制剂用添加物的种类、制剂用添加物相对于有效成分的比例、或医药组合物的制造方法而言，本领域技术人员可根据组合物的形态而而适宜选择。作为制剂用添加物，可使用无机或有机物质、或固体或液体的物质，一般而言，可以在相对于有效成分重量为1重量%～90重量%之间进行配合。具体而言，作为这样的物质的例子，可列举出乳糖、葡萄糖、甘露醇、糊精、环糊精、淀粉、蔗糖、偏硅酸铝镁、合成硅酸铝、羧甲基纤维素钠、羟丙基淀粉、羧甲基纤维素钙、离子交换树脂、甲基纤维素、明胶、***胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、轻质无水硅酸、硬脂酸镁、滑石、西黄耆胶、膨润土、蜂胶、氧化钛、脱水山梨醇脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、甘油、脂肪酸甘油酯、纯化羊毛脂、甘油明胶、聚山梨酯、聚乙二醇、植物油、蜡、液体石蜡、白色矿脂、碳氟化合物、非离子性表面活性剂、丙二醇、水等。

在制造经口给药用固体制剂时，将有效成分与赋形剂成分例如乳糖、淀粉、结晶纤维素、乳酸钙、无水硅酸等混合而制成散剂，或者进而根据需要添加白糖、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等粘结剂、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等崩解剂等并进行湿式或干式造粒而制成颗粒剂。在制造片剂时，将这些散剂及颗粒剂直接压片，或者添加硬脂酸镁、滑石等润滑剂而进行压片即可。也可将这些颗粒或片剂用羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯聚合物等肠溶剂基剂覆盖而制成肠溶剂制剂，或者用乙基纤维素、巴西棕榈蜡、氢化油等覆盖而制成长效制剂。另外，在制造胶囊剂时，可将散剂或颗粒剂填充于硬胶囊中，或者将有效成分直接或者溶解于甘油、聚乙二醇、芝麻油、橄榄油等后用明胶膜覆盖而制成软胶囊。

在制造注射剂时，根据需要将有效成分与盐酸、氢氧化钠、乳糖、乳酸、钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠等pH调整剂、氯化钠、葡萄糖等等渗剂一起溶解于注射用蒸馏水并进行无菌过滤而填充于安瓿中，或者进一步添加甘露醇、糊精、环糊精、明胶等并真空冻干而制成用时溶解型注射剂。另外，也可在有效成分中添加卵磷脂、聚山梨酯80、聚氧乙烯氢化蓖麻油等并在水中乳化而制成注射剂用乳剂。

在制造直肠给药剂时，将有效成分与可可脂、脂肪酸三甘油酯、脂肪酸双甘油酯及脂肪酸单甘油酯、聚乙二醇等栓剂用基材一起进行加湿并溶解而后流入模具中进行冷却，或者将有效成分溶解于聚乙二醇、大豆油等后用明胶膜覆盖即可。

在制造皮肤用外用剂时，将有效成分添加到白色矿脂、蜜蜡、液体石蜡、聚乙二醇等中根据需要加湿并捏合，制成软膏剂，或者与松香、丙烯酸烷基酯聚合物等粘合剂捏合后延展于聚烷基类等无纺布而制成带状制剂。

本发明的医药的给药量及给药次数没有特别限定，可以根据治疗对象疾病的恶化·进展的防止和/或治疗的目的、疾病种类、患者体重、年龄等条件，由医师的判断来适当选择。一般而言，经口给药时成人每天的给药量为0.01～1000mg（有效成分重量）左右，可分成一天1次或数次，或者可每隔数日给予。在用作注射剂的情况下，优选对于成人，将一天量0.001～100mg（有效成分重量）连续给药或间歇给药。

就本发明的医药而言，作为植入片及被封入微囊而成的传递***等缓释性制剂，能够使用可防止从体内即刻除去的载体来制备。例如，可使用乙烯-乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、及聚乳酸等生物降解性、生物相容性聚合物。这样的材料可由本领域技术人员容易地制备。另外，脂质体的混悬液也可用作药剂上可接受的载体。就有用的脂质体而言，没有限定，制成含有磷脂酰胆碱、胆固醇及PEG衍生化磷脂酰乙醇胺（PEG-PE）的脂质组合物，以成为适于使用的尺寸的方式，通过适当孔径大小的过滤器来制备，通过反相蒸发法来纯化。

本发明的医药作为医药组合物，能够以试剂盒的形态，一起包含在容器、包装中给予的说明书。本发明的药剂组合物以试剂盒的方式供给的情况下，该药剂组合物中的不同构成成分可包装在不同的容器中，在使用前才混合。这样将构成成分分别包装是为了可在不失去活性构成成分的功能的情况下长期贮存。

试剂盒中含有的试剂可被供给于构成成分长期有效地保持活性、不被容器材质所吸附、不受到变质这样的任何种类的容器中。例如，密封的玻璃安瓿包含在氮气之类的中性且非反应性气体存在下包装的缓冲液。安瓿由玻璃、聚碳酸酯、聚苯乙烯等有机聚合物、陶瓷、金属、或通常可被用于保持试剂的其它任何恰当的材料等构成。在其它恰当的容器的例子中，包括由与安瓿等类似的物质制成的简单的瓶子，及内部用铝或合金等的箔片内衬的包装材料。其它容器包括试管、小瓶、烧瓶、瓶子、注射器、或其类似物。容器具有瓶子等的无菌接入端口，该瓶子具有用皮下用注射针可贯通的塞子。

另外，试剂盒中还附加使用说明书。由该医药组合物构成的试剂盒的使用说明可被印刷于纸或其它材质上，和/或以Floppy（注册商标）盘、CD-ROM、DVD-ROM、Zip盘、录像带、录音带等可电或电磁地读取的介质的方式供给。详细的使用说明可实际附加在试剂盒内，或者登载于由试剂盒的制造者或分销商指定或用电子邮件等通知的网址。

另外，本发明提供了通过将含有本发明的通式（1）表示的化合物及药理学上容许的其盐、或它们的溶剂化物或它们的水合物作为有效成分的医药或医药组合物给予患者来治疗对象的疾病的治疗方法。

本发明的治疗方法中，包括涉及酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与其疾病状态相关而发病的疾病或患有疾病的哺乳动物的该疾病的治疗方法。

在此，“治疗”是指在可能患有疾病或患病的哺乳动物中阻止或缓和该疾病的疾病状态的进展及恶化，由此，作为出于阻止或缓和该疾病的各症状等的进展及恶化的目的而治疗处置的含义使用。

另外，“疾病”是指酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关的全部疾病，并没有特别限定，例如，为如下概念：包括失眠症、睡眠相关呼吸障碍、中枢性过度睡眠症、昼夜节律性睡眠障碍、睡眠期间相关疾病、睡眠相关运动障碍等，昼夜节律周期障碍的睡眠障碍为昼夜节律性睡眠障碍，包括轮班睡眠障碍、时差综合症、睡眠相提前综合症及睡眠相延迟综合症，昼夜节律周期障碍的情绪障碍包括抑郁障碍或双相情感障碍，而且，包括以阿尔茨海默氏病、帕金森病、唐氏综合症为背景的神经退行性疾病，起因于脑血管障碍的中枢神经退行性疾病，进而包括没有限定癌种的癌全体及特别包括作为来自胰脏的癌的胰腺导管癌、浸润性胰腺导管癌、胰腺内分泌肿瘤、胰腺导管内***粘液性肿瘤、粘液性囊肿肿瘤、腺泡细胞癌、转移性胰腺癌等。

治疗的对象为“哺乳动物”，是指被分类成哺乳类的任意动物，没有特别限定，例如，除了人类以外，为狗、猫、兔等宠物动物，牛、猪、羊、马等家畜动物等。特别优选的“哺乳动物”为人类。

以下通过具体例说明本发明，但本发明并不由这些例子所限定。

实施例

〔实施例1〕4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-氟-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮

一般而言，非常难以将氟基导入噻吩环，因此通过与日本特愿2009-245477的实施例所例示的合成方法相比包含较多的合成步骤的以下方案1所示的工序，尝试式（2）所示的化合物的合成，结果成功地制得。应予说明，式（2）所示的化合物的合成方法并不限定于方案1所示的工序。

方案1

<第一工序>在三口烧瓶中依次加入5-硝基-2-噻吩甲腈3.0g（化合物3，19.5mmol）、氟化钾5.66g（9.75mmol）、四苯基溴化0.82g（1.95mmol）、环丁砜70ml、邻苯二甲酰氯2.81ml（19.5mmol），在内温180℃加热搅拌2小时。反应结束后冷却至室温，加入300ml水，用200ml二***提取3次。收集有机层，用1N氢氧化钠200ml清洗2次，依次用水200ml、饱和食盐水100ml清洗，用硫酸钠干燥后，减压除去溶剂，用硅胶色谱法（戊烷/二***=2/1）进行纯化，得到150mg的化合物4。

<第二工序>在茄型烧瓶中加入138mg（1.07mmol）化合物4、1N氢氧化钠5ml，在外温100℃加热搅拌2小时。反应结束后冷却至室温，加入5ml水，加入1N盐酸10ml，使pH=1，用二氯甲烷30ml提取2次。收集有机层，用硫酸钠干燥后，减压除去溶剂，得到110mg的化合物5。

<第三工序>在茄型烧瓶中加入100mg（0.68mmol）化合物5、亚硫酰氯3ml、甲酰胺50μl，在外温100℃加热搅拌2小时。反应结束后冷却至室温，减压除去亚硫酰氯，进而用甲苯共沸2次，定量地得到112mg化合物6。

<第四工序>在茄型烧瓶中，加入甘氨酸51mg（0.68mmol）、6N氢氧化钠1ml，在冰冷下搅拌，加入化合物6的二***溶液5ml，在室温搅拌3小时。反应结束后冰冷，加入水10ml，加入1N盐酸10ml，使pH=1，用二氯甲烷30ml提取3次。收集有机层，用饱和食盐水30ml清洗，用硫酸钠干燥后，减压除去溶剂，得到24mg化合物7。

<第五工序>在茄型烧瓶中加入21.7mg（0.107mmol）化合物7、乙酸酐200μl、吡啶65μl，在外温100℃加热搅拌1小时。反应结束后冷却至室温，减压除去溶剂，用制备型薄层色谱法（甲苯/二***=5/1）纯化，得到14mg（0.046mmol，总收率0.3%）化合物2。

MALDI-TOFF MS计算值C₁₄H₉FN₂O₃S，304.03，实测值，304.23

应予说明，用于合成化合物2的工序中，第一工序中的向噻吩环导入氟基是极其困难的，总收率及纯度低。其结果是，虽不能说作为最终产物的化合物2的纯度低且精度高，但是对于通过使用Bruker公司制核磁共振装置AV-500（500MHz）并将化合物2溶解于DMSO-d6而观测得到的峰，如下所示。

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆,δ)8.73(s,1H),8.19(d,1H)，7.72(m,1H)，7.36(d,1H)，7.26(m,1H)，7.19(s,1H),3.91(s,3H)

用上述方案1所示的方法能够合成式（2）所示的化合物，但是存在产物的纯度低的问题。

因此，还研究了其它合成方法，结果通过以下所示的方案2的方法，成功地显著改善产物的总收率及纯度。

方案2

<第一工序>在三口烧瓶中加入5-氟噻吩羧酸1.00g（纯度95%，5.91mmol）、亚硫酰氯1ml（13.8mmol）、苯10ml，在浴温105℃加热搅拌2小时。冷却至室温，蒸馏除去亚硫酰氯，进而用苯、四氯化碳使之共沸，得到褐色油状物。在另行准备的三口烧瓶中加入甘氨酸621.0mg（8.27mmol）、0,5N氢氧化钠30ml，搅拌，加入之前得到的褐色油状物，在室温搅拌1小时。反应结束后，用冰浴冷却，加入6N盐酸1ml，将析出的固体物过滤，用冷水30ml清洗。将固体物中的水用丙酮共沸除去后，在室温减压干燥，得到432.3mg（2.13mmol，36.0%）淡黄色固体的化合物9。在产物的HPLC分析中洗脱时间9.04分钟，纯度为90%。

<第二工序>在三口烧瓶中加入100mg（纯度90.0%，0.44mmol）的化合物9、6-甲氧基-3-吡啶甲醛80.9g（0.59mmol）、乙酸酐102μl（1.08mmol）、吡啶100μl（1.24mmol），在油浴100度加热搅拌15分钟。反应结束后在4℃冷却，将析出的固体物溶于乙醇5ml中，过滤不溶物。将得到的固体物用乙醇清洗，得到40.1mg（0.13mmol，29.5%）黄色固体的化合物2。

化合物2的HPLC纯度（254nm吸收波长）为98.7%。将化合物2用HPLC/ESI-LIT-TOF MS装置（NanoFrontier LD）测定，结果确认m/z=355.0、356.0[M+CH₄O-H]^-。另外，将化合物2用Bruker公司制核磁共振装置AV-500（500MHz）测定，结果关于观测到的峰，如下所示。

¹H-NMR(CDCL₃)δppm(500MHz):4.02(s，3H),6.63(dd，1H,J_HH=8.4Hz，J_HF=1.4Hz)，6.86(d,1H，J_HH=8.8Hz)，7.13(s,1H)，7.25(dd，1H，J_HH=8.4Hz，J_HF=4.1Hz)，8.60(dd,1H,J_HH=8.8Hz,J_HH=2.3Hz),8.67(d,1H,J_HH=2.3HZ)¹³C-NMR(CDCL₃)δppm(125MHz):53.9,110.0,110.1,111.8，117.4,117.5,123.5,127.6,130.6,130.6,131.7,140.9,152.1,158.2,165.3,166.5,169.4，171.8

本次得到的化合物2的HPLC纯度为98.7%，从质量分析及NMR谱图也支持化合物2的生成。

如上所述，通过使用方案2的合成方法，从而与方案1的情况相比，能够将总工序数从5削减到3，而且总收率约为7倍，作为最终产物的化合物2的纯度也能够显著改善。由此认为对化合物稳定供给的可能性也增大。

〔实施例2〕4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-氯-2-噻吩基）-5（4H）-唑酮

与式（2）所示的导入了氟基的化合物一起，对于式（11）所示的导入了氯基的化合物也实施了制造。应予说明，式（11）所示的导入了氯基的化合物的合成方法并不限于方案3所示的工序。

方案3

<第一工序>在三口烧瓶中加入5-氯噻吩羧酸1.00g（6.15mmol）、亚硫酰氯1ml（13.8mmol）、苯10ml，在浴温105℃加热搅拌2小时。冷却至室温，蒸馏除去亚硫酰氯，进而用苯、四氯化碳使之共沸，得到褐色油状物。

在另行准备的三口烧瓶中加入甘氨酸323.2mg（4.31mmol）、0.5N氢氧化钠15ml，加入之前得到的褐色油状物，在室温搅拌1小时。反应结束后用冰浴冷却，加入6N盐酸1ml，过滤析出的固体物，用冷水30ml清洗。将固体物在室温减压干燥，得到386.2mg（1.76mmol，53%）淡黄色固体的化合物13。在产物的HPLC分析中，洗脱时间为10.06分钟，纯度为99.5%以上。

<第二工序>在三口烧瓶中加入100mg（0.46mmol）化合物13、6-甲氧基-3-吡啶甲醛73.9g（0.54mmol）、乙酸酐102μl（1.08mmol）、吡啶48μl（0.59mmol）、1，4-二

烷1ml，在油浴100度加热搅拌15分钟。反应结束后在4℃冷却，将析出的固体物溶于乙醇5ml，过滤不溶物。将所得到的固体物用乙醇清洗，得到10.1mg（0.031mmol，6.0%）黄色固体的化合物11。

化合物11的HPLC纯度（254nm吸收波长）为99.5%。将化合物11用HPLC/ESI-LIT-TOF MS装置（NanoFrontier LD）进行测定，结果确认m/z=351.0，352.0[M+CH₄O-H]^-。另外，将化合物11用Bruker公司制核磁共振装置AV-500（500MHz）测定，结果关于观测到的峰，如下所示。

¹H-NMR(CDCL₃)δppm(500MHz):4.02(s,3H),6.86(d,1H，J_HH=8.8Hz)，7.03(s，1H)，7.65(d，1H，J_HH=4.lHZ)，8.62(dd,1H，J_HH=8.7Hz，J_HH=2.4Hz)，8.67(d,1H,J_HH=2.4Hz)¹³C-NMR(CDCL3)δppm(125MHz):54.0,111.8，123.6,126.7，126.9,128.0,128.1,131.7，132.2，140.9,152.2,157.7,165.4，166.5

本次得到的化合物11的HPLC纯度为99.5%以上，从质量分析及NMR谱图也支持化合物2的生成。

〔实施例3〕4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（5-溴-2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮

与式（2）所示的导入了氟基的化合物一起，对于式（14）所示的导入了溴基的化合物也实施了制造。应予说明，式（14）所示的导入了溴基的化合物的合成方法并不限于方案4所示的工序。

方案4

<第一工序>在三口烧瓶中加入5-溴噻吩羧酸1.00g（4.83mmol）、亚硫酰氯5ml（68.9mmol）、苯4ml，在浴温105℃加热搅拌2小时。冷却至室温，蒸馏除去亚硫酰氯，进而，用苯、四氯化碳使之共沸，得到褐色油状物。

在另行准备的三口烧瓶中加入甘氨酸412.9mg（5.80mmol）、6N氢氧化钠5ml，进行搅拌，加入之前得到的褐色油状物，在室温搅拌1小时。反应结束后用冰浴冷却，加入6N盐酸1ml，将析出的固体物过滤，用冷水30ml清洗。将固体物中的水用丙酮共沸除去后，在室温减压干燥，得到492.6mg（0.19mmol，39.0%）淡黄色固体的化合物16。在产物的HPLC分析中，洗脱时间为10.39分钟，纯度为99.7%。

<第二工序>在三口烧瓶中加入242.7mg（0.92mmol）的化合物16、6-甲氧基-3-吡啶甲醛138.1mg（1.01mmol）、乙酸酐1ml（10.6mmol）、吡啶350μl（1.24mmol），在油浴100度加热搅拌15分钟。反应结束后在4℃冷却，将析出的固体物溶于乙醇5ml，将不溶物过滤。将所得到的固体物用乙醇清洗，得到32.2mg（0.088mmol，10.0%）黄色固体的化合物14。

化合物14的HPLC纯度（254nm吸收波长）为95.8%。将化合物14用HPLC/ESI-LIT-TOF MS装置（NanoFrontier LD）测定，结果确认m/z=m/z=396.9，397.9[M+CH₄O-H]^-。另外，将化合物14用Bruker公司制核磁共振装置AV-500（500MHz）测定，结果关于观测到的峰，如下所示。

¹H-NMR(CDCL₃)δppm(500MHz):4.02(s,3H),6.86(d,1H,J_HH=8.8Hz),7.17(s，1H)，7.17(d，1H，J_HH=4.0Hz)，7.60(d,1H,J_HH=4.0Hz)，8.63(dd,1H,J_HH=8.8Hz，J_HH=2.4Hz)，8.67(d,1H,J_HH=2.4Hz)¹³C-NMR(CDCL₃)δppm(125MHz):54.0,111.8,121.5,123.6,128.4,129.9,131.7,131.7,132.8，140.9,152.2，157.6,165.4,166.5

本次得到的化合物14的HPLC纯度为95.8%，从质量分析及NMR谱图也支持化合物14的生成。

将式（2）所示的化合物及式（11）、式（14）所示的化合物与式（2）的噻吩环中未导入卤素基团等的化合物（4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮）的对DMSO溶液的溶解性进行比较。式（2）的化合物及式（11）、式（14）的化合物分别在最终浓度35mM、10mM、20mM而容易溶解。另一方面，在为噻吩环中未导入卤素基团等的化合物时，在最终浓度10mM通过剧烈搅拌而溶解。由此可示出：式（2）及式（11）、式（14）的化合物与现有技术的酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε选择性抑制剂相比，溶解性提高。

〔实验例〕

1.

唑酮衍生物的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制作用

该化合物的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制活性是将人重组酪蛋白激酶1δ（INVITROGEN公司Cat No.PV3665）或者人重组酪蛋白激酶1ε（INVITROGEN公司Cat No.PV3500）用作酶源，并将Z’-LYTESer/Thr11Peptide（INVITROGEN公司Cat No.PV3671）作为磷酸化底物而测定的。抑制活性测定分析时的组成（最终浓度）如下所述。

酪蛋白激酶1δ的分析

酪蛋白激酶1δ3.0μg/ml，或者1.0μg/ml，该化合物0.3μg/ml，Peptide1.0μM，ATP20μM，HEPES（pH7.4）50mM，MgCl₂10mM，Brij-350.01%，DMSO0.5%

酪蛋白激酶1ε的分析

酪蛋白激酶1ε0.5μg/ml，该化合物0.3μg/ml，Peptide1.0μM，ATP20μM，HEPES（pH7.4）50mM，MgCl₂10mM，Brij-350.01%，DMSO0.5%

首先使该化合物与酶在室温反应15分钟，然后用Z’-LYTE KinaseAssay Kit-Ser/Thr11Peptide（INVITROGEN公司Cat No.PV3670）测定2小时后的残存磷酸化活性。

算出相对于在未添加化合物的情况下的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε酶的磷酸化活性的、由该化合物所致的抑制率。其结果，就通过上述所示的方案1得到的式（2）的化合物而言，纯度低，但在上述条件下对于酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε确认了有意义的抑制活性。就通过方案2得到的高纯度的式（2）的化合物及由式（11）、式（14）所示的化合物而言，如表1所示，对于酪蛋白激酶1δ、酪蛋白激酶1ε显示出高的酶抑制活性。

[表1]

就酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制化合物对各种激酶的抑制特异性而言，可使用Profiler Pro kit（Caliper Life Sciences公司制），按照所附文件的方法进行研究。将式（2）、（11）以及（14）所示的化合物以最终浓度成为10μM、1μM或者0.1μM的方式与各种激酶反应15分钟。反应后，研究酶活性。其结果是，针对有可能表现出因酶抑制所致的细胞增殖抑制等副作用的各种激酶（MAPKAPK2、AurA、PKCζ、RSK1、PRAK、Erk1、PKD2、CHK1、ABL、FYN、LYN、CHK2、MET、LCK、SRC、GSK3β、Erk2、PKA、AKT2、INSR、p38α、AKT1、MSK1、PKCβ2、ROCK2、CDK2、MST2、PKG1α、PAK2、IGF1R、FGFR1、MARK1、CAMK2δ、PIM2、BTK、c-TAK1、CAMK4、AMPK、FLT3、HGK、VEGFR2、KDR、c-RAF、p70S6K、IRAK4、SGK1、SYK），没有看到有意义的抑制活性。能够显示出该化合物是对酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε选择性更高的抑制化合物。

另一方面，就式（2）、（11）以及（14）所示的化合物而言，通过使用Profiler Pro kit（Caliper Life Sciences公司制）的方法，发现虽然与酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε相比抑制效果弱，但是对Dualspecificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase1A（DYRK1A）添加化合物浓度1μM而分别抑制65%、78%、85%的酶活性。已知DYRK1A与酪蛋白激酶1δ同样，为将Tau蛋白质进行磷酸化的候选激酶以及控制昼夜节律周期的激酶。通过分别抑制酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε与DYRK1A，该化合物能够成为更有效的昼夜节律周期障碍治疗药、神经退行性疾病治疗药。

2.关于本发明的化合物的有效性

酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制化合物对昼夜节律周期障碍治疗的有效性能够用以下动物模型进行证明。即，将大鼠在12小时光照期:12小时黑暗期的明暗（light/dark：LD）条件下驯化1周以上。刚好在黑暗期前，将式（11）所示的化合物与溶解助剂混合，以60mg/kg的用量进行腹腔给药。给药后立刻给予式（11）所示的化合物的大鼠与未用化合物处置的大鼠比较，观察到在统计学上有意义的行动量的下降及非快速眼动睡眠量的增加。另一方面，对于在式（2）的噻吩环中未导入卤素基团等的化合物（（4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（2-噻吩基）-5（4H）-唑酮））也进行了同样的试验。其结果是，观察到有意义的行动量的下降及非快速眼动睡眠量的增加，但是式（11）所示的化合物与在噻吩环中未导入卤素基团等的化合物（（4-（（6-甲氧基-3-吡啶基）亚甲基）-2-（2-噻吩基）-5（4H）-

唑酮））相比，药效更飞跃性地提高。显示出式（11）所示的化合物对昼夜节律周期障碍治疗是有效的。

就该化合物对以Tau为底物的酪蛋白激酶1δ的抑制活性而言，可将人重组酪蛋白激酶1δ（Carna Biosciences公司Cat No.03-103）用作酶源，将人重组Tau（Sigma-Aldrich公司Cat No.T0576）作为磷酸化底物来进行研究。抑制活性检测分析时的组成（最终浓度）如下所述。

酪蛋白激酶1δ25μg/ml，Tau10μg/ml，该化合物（25μM～1μM），ATP200μM，HEPES（pH7.4）50mM，MgCl₂10mM，Brij-350.01%，Na₃VO₄200μM，DMSO0.25%

首先使该化合物与酶在室温反应15分钟，然后加入Tau，进行2小时的磷酸化反应。使用磷酸化反应后的反应液，进行West印迹法，用Phos-tag（Nard公司Cat No.BTL-104）并通过化学发光法（ECL Plus，GE Healthcare公司Cat No.RPN2132）检测转印在PVDF膜上的人重组Tau的磷酸化。可将磷酸化反应检测后的PVDF膜按照Phos-tag的规程进行脱探针后，通过抗体反应来检测总Tau蛋白质量。

使之与作为一级抗体的抗Tau抗体（DAKO Cytomation公司，CatNo.A0024）反应后，与IR Dye680LT标记山羊抗兔二级抗体（LI-COR公司，Cat No.926-68021）进行反应，检测红外荧光，作为总Tau蛋白质的信号。

对于利用了化学发光的磷酸化反应检测与利用了红外荧光的总Tau蛋白质的检测，分别使用Typhoon（Amersham Biosciences公司，型号9400）与Odyssey（LI-COR公司，型号9120），求出磷酸化Tau的信号强度相对于总Tau蛋白质的信号强度之比，将其设为Tau的磷酸化率。

在不添加该化合物的反应液与添加该化合物的反应液中比较该磷酸化率，结果在添加了式（2）、（11）所示的化合物的反应液中，可观察到对底物磷酸化有意义的抑制。显示出式（2）、（11）所示的化合物有可能抑制中枢神经退行性疾病（阿尔茨海默氏病等）中的病态的过度Tau磷酸化。

酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制化合物的中枢神经退行性疾病的有效性能够用以下动物模型来证明。使用在脑内过度表达呈现神经原纤维变化的变异Tau蛋白质的转基因小鼠，将抑制化合物通过喂食或者饮水而长期给予。能够通过在病理学上研究与非给予组相比突触消失、产生神经脱落的程度减少的情况而进行证明。

酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制化合物的胰腺癌的有效性可用以下动物模型来证明。即，将人类胰脏癌的细胞株在体外培养约500万个，然后在SCID小鼠的背面进行皮下注射。从14天后起，将抑制化合物与溶解助剂（羧甲基纤维素等）混合，经口或者腹腔给药。经日观察皮下的肿瘤尺寸。进而，在给予后第10天，由皮下摘出肿瘤，测量肿瘤重量，从而可证明抑制剂的有效性。

产业上的可利用性

本发明的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂及含有该抑制剂作为有效成分的医药对于对酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药的开发作出了很大的贡献。尤其是，对于对昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗和/或预防有用的医药的开发作出了很大的贡献。