CN103074281A - 一株粪肠球菌fjl19及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）FJL19，其保藏编号为CGMCC No.6995。本发明还提供了上述粪肠球菌FJL19具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。本发明从笼养成年蛋鸡空肠中分离出粪肠球菌FJL19，此菌株生长旺盛，18小时培养菌数就可达5.1×10⁹cfu/ml，且具有抑菌作用，可以利用培养基生产抑菌蛋白，降低雏鸡肠道大肠杆菌数量；通过此乳酸菌制备菌制剂饲喂雏鸡，可以提高雏鸡的生长；因此粪肠球菌FJL19在动物饲养尤其是家禽新型饲料添加剂开发和抗生素替代品研究上具有重大的社会意义和经济价值。

Description

一株粪肠球菌FJL19及其应用

技术领域

本发明属于动物微生物领域，涉及一株粪肠球菌FJL19及其应用，特别涉及一株从鸡肠道中分离出来的粪肠球菌FJL19及其应用。 

背景技术

乳酸菌是一类重要的益生菌，是动物肠道中一类重要的优势菌群。乳酸菌制剂作为一种新型的绿色动物微生态制剂，因其无毒、无抗药性、无残留、无副作用而备受饲料界的广泛关注。 

采用乳酸菌作为益生菌饲喂动物，除了由于乳酸菌具有一定的营养作用和对肠道的粘附作用外，主要在于乳酸菌对于一些腐败菌和有害菌具有抑制作用。第一，乳酸菌可以产生乳酸，创造酸性环境抑制有害菌及不耐酸的腐败菌生长；第二，乳酸菌产生H₂O₂，激活过氧化氢酶—硫氰酸***，抑制和杀灭革兰氏阴性菌、过氧化氢酶阳性细菌等；第三，部分乳酸菌可以产生抑菌性的细小蛋白质或肽类，称为细菌素，对大肠杆菌等致病菌有拮抗作用。而且，有了产生抑菌蛋白的乳酸菌，就可以生产细菌素，可以替代抗生素，使动物生产更安全。分离筛选可以产生细菌素的乳酸菌成为现在益生菌开发的研究热点。 

产生细菌素的乳酸菌来源很多，购买的工业菌株和标准菌株，有很多也可以产生细菌素，环境、土壤、泡菜、酸奶中都可以分离乳酸菌。然而益生菌最后要饲喂动物，那么相对于其他来源的菌株，动物无疑是乳酸菌的最好来源。来自动物肠道的乳酸菌可以适应动物肠道环境，耐受动物的胃酸和胆盐的消化，无疑是最好的益生菌来源。可见，通过从动物肠道分离和筛选能够产生细菌素的乳酸菌将是动物用益生菌筛选的重要研究方向。 

发明内容

本发明的目的是提供一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）FJL19，其保藏编号为CGMCC No.6995。 

本发明的第二个目的是提供上述粪肠球菌FJL19具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。 

本发明通过以下技术方案来实现： 

一、一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）FJL19，其保藏编号为CGMCC No.6995。 

本发明中粪肠球菌FJL19为革兰氏阳性，形态为球形，是从笼养成年蛋鸡盲肠内容物中分离的乳酸菌菌株，经过产抑菌蛋白等特性测定筛选得到的目标菌株。 

筛选的具体步骤如下： 

1、乳酸菌分离纯化： 

采用无菌操作，用载玻片刮取笼养成年蛋鸡盲肠内容物1g，置于盛有9mL无菌生理盐水的玻璃试管中，充分震荡摇匀，然后吸取0.5mL混合液于盛有4.5mL无菌生理盐水的试管中，此稀释度为10^-1，重复以上过程作10倍比稀释，至10^-6稀释浓度，选择10^-4、10^-5、10^-6三个稀释度，吸取0.lmL菌液滴于MRS培养基平板上，平板涂布后采用厌氧培养法（5%CO₂）将涂好的培养皿置37℃培养箱培养48h。采用四分区划线法，用接种环挑取形态不同的菌落在MRS琼脂培养基上进行划线分离培养，经48h培养后，在四分区中挑取分离效果好的菌落用接种环接种于MRS斜面培养基上作纯培养，重复传代纯培养3次，而后置于4℃冰箱保存备用。 

2、菌体形态的观察 

取干净玻片，用接种环取一环无菌水于玻片上，而后挑取少量细菌，涂匀，待干燥后，固定。革兰氏染色：先用草酸铵结晶紫染液染色1min，用水冲洗，接着滴加卢氏碘液覆盖1min，用水冲洗，然后滴加95%乙醇至乙醇液不呈现紫色时停止约0.5min，最后用番红染液复染1min，水洗。油镜镜检（16×100），选取革兰氏染色为阳性、形态为杆状或球状的菌株做后备菌株留用。 

革兰氏染色试剂配制： 

①草酸铵结晶紫染色液的配制 

A液结晶紫2g  95%酒精20mL 

B液草酸铵0.8g 蒸馏水80mL 

混合A、B液，静置48h之后使用。 

②卢氏碘液 

碘片1g  碘化钾2g  蒸馏水300mL 

先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后加足水即可。 

③95%酒精 

④番红复染液 

番红2.5g  95%酒精100mL 

取上述配好的番红酒精10mL与80mL蒸馏水混匀而成。 

3、抑菌性乳酸菌的筛选： 

（1）菌液的制备：将分离纯化出的乳酸菌活化2-3代后，按2%(v/v)的接种量各自接至新鲜MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h，使其菌液浓度达到10⁸cfu/mL，测定其抑菌活性。将黄色微球菌接种于肉汤培养基中，于37℃摇床培养2代，用无菌水作10倍比稀释，使其菌液浓度达到10⁵cfu/mL，作为指示菌备用。 

（2）产酸能力测定：将分离纯化出的乳酸菌活化2-3代后，按2%(v/v)的接种量接至各自新鲜MRS液体培养基中，37℃厌氧培养，分别于0h、48h两个时间点用酸度计测定各实验菌株5mL发酵液的pH值。每个试验菌株发酵液作3个重复，取平均数。用0h、48h两个时间点各实验菌株发酵液的pH值变化，即△pH值来衡量乳酸菌的产酸能力。选取产酸能力高的菌株进行下一步测定。 

（3）抑菌实验：采用牛津杯法对分离纯化出的乳酸菌进行抑菌效果测定。 

取100μL指示菌液分别滴加到已凝固好的培养基中，用涂布棒涂布均匀。在无菌条件下用无菌镊子夹取4个牛津杯对称放在平皿上，然后分别吸取200μL乳酸菌发酵液于3个牛津杯中，另一个牛津杯中加入等量的MRS培养液作对照，于37℃下恒温培养16-18h。每个乳酸菌发酵液做2个重复，用游标卡尺测其抑菌圈直径的大小，取平均数，选择抑菌环大的乳酸菌。 

为了尽快筛选出所需菌种，初步筛选采用了抑菌和产酸能力2项基本指标加和淘汰法。每项指标中，排在首位的加100分，位居第二的加99分，以此类推，排在最后的加1分。对初筛试验的2项结果各自进行加和并排序，选出总分较高的前10名菌株进行下一步研究。 

4、产细菌素乳酸菌的筛选 

将步骤2中筛选到的乳酸菌进行液体培养，为了减少酸的抑菌效果，对培养液用1mol/L NaOH溶液调整pH值至6.8，然后进行牛津杯法测定抑菌环，方法同上，选择抑菌环最大的乳酸菌。再进行液体培养后，在培养液中加入0.1mg/L的蛋白酶37℃作用2h，取菌液做抑菌试验，筛选没有抑菌环的菌株，为产生抑菌蛋白的目标乳酸菌。 

在上述筛选方法中，培养基为MRS培养基： 

固体平板或斜面培养基：胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，乙酸钠5g，吐温-801g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.2g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH6.8。 

液体培养基：胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，乙酸钠5g，吐温-801g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.2g，蒸馏水1000mL，pH6.8。 

采用上述技术方案的积极效果：本发明从笼养成年蛋鸡空肠中分离出粪肠球菌FJL19，此菌株生长旺盛，18小时培养菌数就可达5.1×10⁹cfu/mL，且具有抑菌作用，可以利用培养基生产抑菌蛋白，降低雏鸡肠道大肠杆菌数量；通过此乳酸菌制备菌制剂饲喂雏鸡，可以提高雏鸡的生长；因此粪肠球菌FJL19在动物饲养尤其是家禽新型饲料添加剂开发和抗生素替代品研究上具有重大的社会意义和经济价值。 

附图说明

图1是粪肠球菌的革兰氏染色镜检结果； 

图2是粪肠球菌菌液的抑菌效果对比； 

图中，1、2为目的菌株的抑菌圈，3、4为其他分离菌株的抑菌圈； 

图3是蛋白酶处理后粪肠球菌菌液的抑菌效果； 

图中，1为未处理的菌液，2、3和4分别为蛋白酶K，胰蛋白和木瓜蛋白酶处理的菌液； 

图4是粪肠球菌的PCR扩增结果； 

图中，1Marker，2植物乳杆菌； 

图5是粪肠球菌的生长曲线图。 

本发明所涉及的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）FJL19，于2012年12月17日在中国专利局或国际专利组织承认的保藏中心进行了专利程序保藏，保藏单位全称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.6995。 

具体实施方式

下面结合实施例、试验例对本发明的技术方案做进一步的说明，但不应理解为对本发明的限制： 

本发明中生物材料的来源： 

1、细菌通用引物购自上海博亚生物技术有限公司。 

实施例1 

本实施例用于说明粪肠球菌FJL19的筛选。 

1、乳酸菌分离纯化： 

采用无菌操作，用载玻片刮取笼养成年蛋鸡盲肠内容物1g，置于盛有9mL无菌生理盐水的玻璃试管中，充分震荡摇匀，然后吸取0.5mL混合液于盛有4.5mL无菌生理盐水的试管中，此稀释度为10^-1，重复以上过程作10倍比稀释，至10^-6稀释浓度，选择10^-4、10^-5、10^-6三个稀释度，吸取0.lmL菌液滴于MRS培养基平板上，平板涂布后采用厌氧培养法（5%CO₂）将涂好的培养皿置37℃培养箱培养48h。采用四分区划线法，用接种环挑取形态不同的菌落在MRS琼脂培养基上进行划线分离培养，经48h培养后，在四分区中挑取分离效果好的菌落用接种环接种于MRS斜面培养基上作纯培养，重复传代纯培养3次，而后置于4℃冰箱保存备用。 

2、菌体形态的观察 

取干净玻片，用接种环取一环无菌水于玻片上，而后挑取少量细菌，涂匀，待干燥后，固定。革兰氏染色：先用草酸铵结晶紫染液染色1min，用水冲洗，接着滴加卢氏碘液覆盖1min，用水冲洗，然后滴加95%乙醇至乙醇液不呈现紫色时停止约0.5min，最后用番红染液复染1min，水洗。油镜镜检（16×100），选取革兰氏染色为阳性、形态为杆状或球状的菌株做后备菌株留用。结果如图1所示。 

革兰氏染色试剂配制： 

①草酸铵结晶紫染色液的配制 

A液结晶紫2g  95%酒精20mL 

B液草酸铵0.8g 蒸馏水80mL 

混合A、B液，静置48h之后使用。 

②卢氏碘液 

碘片1g  碘化钾2g  蒸馏水300mL 

先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后加足水即可。 

③95%酒精 

④番红复染液 

番红2.5g  95%酒精100mL 

取上述配好的番红酒精10mL与80mL蒸馏水混匀而成。 

3、抑菌性乳酸菌的筛选： 

（1）菌液的制备：将分离纯化出的乳酸菌活化2-3代后，按2%(v/v)的接种量各自接至新鲜MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h，使其菌液浓度达到10⁸cfu/mL，测定其抑菌活性。将黄色微球菌接种于肉汤培养基中，于37℃摇床培养2代，用无菌水作10倍比稀释，使其菌液浓度达到10⁵cfu/mL，作为指示菌备用。 

（2）产酸能力测定：将分离纯化出的乳酸菌活化2-3代后，按2%(v/v)的接种量接至各自新鲜MRS液体培养基中，37℃厌氧培养，分别于0h、48h两个时间点用酸度计测定各实验菌株5mL发酵液的pH值。每个试验菌株发酵液作3个重复，取平均数。用0h、48h两个时间点各实验菌株发酵液的pH值变化，即△pH值来衡量乳酸菌的产酸能力。选取产酸能力高的菌株进行下一步测定。 

（3）抑菌实验：采用牛津杯法对分离纯化出的乳酸菌进行抑菌效果测定。 

取100μL指示菌液分别滴加到已凝固好的培养基中，用涂布棒涂布均匀。在无菌条件下用无菌镊子夹取4个牛津杯对称放在平皿上，然后分别吸取200μL乳酸菌发酵液于3个牛津杯中，另一个牛津杯中加入等量的MRS培养液作对照，于37℃下恒温培养16-18h。每个乳酸菌发酵液做2个重复，用游标卡尺测其抑菌圈直径的大小，取平均数，选择抑菌环大的乳酸菌。 

为了尽快筛选出所需菌种，初步筛选采用了抑菌和产酸能力2项基本指标加和淘汰法。每项指标中，排在首位的加100分，位居第二的加99分，以此类推，排在最后的加1分。对初筛试验的2项结果各自进行加和并排序，选出总分较高的前10名菌株进行下一步研究。 

4、产细菌素乳酸菌的筛选 

将步骤2中筛选到的乳酸菌进行液体培养，为了减少酸的抑菌效果，对培养液用1mol/L NaOH溶液调整pH值至6.8，然后进行牛津杯法测定抑菌环，方法同上，选择抑菌环最大的乳酸菌。结果如图2所示。再进行液体培养后，在培养液中加入0.1mg/L的蛋白酶37℃作用2h，取菌液做抑菌试验，筛选没有抑菌环的菌株，为产生抑菌蛋白的目标乳酸菌。结果如图3所示。 

在上述筛选方法中，培养基为MRS培养基： 

固体平板或斜面培养基：胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，乙酸钠5g，吐温-801g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.2g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH6.8。 

液体培养基：胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，乙酸钠5g，吐温-801g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.2g，蒸馏水1000mL，pH6.8。 

实施例2 

本实施例用于说明粪肠球菌FJL19的鉴定。 

1、菌株属的鉴定 

过氧化氢酶试验：将3%H₂O₂直接加到斜面的菌苔上，观察是否有气泡的产生。若有气泡产生则为阳性反应。 

硝酸盐还原试验：将细菌接种到培养基上，37℃培养48h，沿管壁加入甲液和乙液，观察。立刻呈现红色、橙红色为阳性反应。 

明胶液化试验：将细菌接种到培养基上，20℃培养48h，观察。接种管液化为阳性反应。 

吲哚试验：接种细菌于MRS培养液中，37℃培养48h。于培养液中加入二甲苯2-3mL，摇匀，静置片刻后，沿管壁加入吲哚试剂2mL，二甲苯下层液体变玫瑰红色者为阳性反应。 

硫化氢试验：将细菌接种于MRS培养液后，用无菌的镊子夹取一乙酸铅纸条悬挂于接种管内。下端接近培养基表面而不接触液面。上端用棉塞塞进。置于37℃培养48h，观察。纸条变黑为阳性反应。 

通过过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验和硫化氢试验，结果显示均为阴性，说明粪肠球菌FJL19为乳酸菌属。 

2、菌株种的鉴定 

发酵糖产酸产气试验：用接种针分别挑取少量细菌接种于乳糖、D-木糖、蔗糖、蜜二糖、棉籽糖、松三糖、核糖醇、山梨醇和甘露醇生化发酵管中，37℃培养48h。生化管中紫色变成黄色表示产酸，为阳性反应。 

15℃和45℃生长试验：挑取几环细菌接种于MRS斜面培养基上，15℃和45℃培养48h，观察细菌是否在斜面上生长。 

精氨酸水解试验：将细菌接种到培养基上，37℃培养48h，观察，呈现红色、橙红色为阳性反应。 

马尿酸盐水解试验：将细菌接种到培养基上，37℃培养48h，观察。呈现红色、橙红色为阳性反应。 

精氨酸产氨试验：接种细菌于含精氨酸的培养基中，37℃培养48h。向培养液中加奈氏试剂数滴，当产氨时出现橙黄或黄褐色沉淀，即为阳性反应。 

通过马尿酸盐水解试验、精氨酸水解试验、15℃和45℃生长试验，及各类糖发酵试验，结果与《常见细菌***鉴定手册》和《乳酸细菌的分类鉴定》对照。鉴定结果显示该菌株为粪肠球菌。 

在上述筛选方法中，生化培养基及相关试剂配制如下： 

硫化氢试验培养基：胰胨10g；牛肉膏3g；酵母提取物5g；NaCl 5g；半胱氨酸0.4g；葡萄糖2g；蒸馏水1000mL。调pH值于7.2，115℃高压灭菌20min。 

乳糖、D-木糖、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、棉籽糖、松三糖、核糖醇、山梨醇和甘露醇糖发酵鉴定生化管，为海博生物购买。 

吲哚试剂：对二甲基氨基苯甲醛1g，无水乙醇95mL，浓盐酸20mL。 

精氨酸液：L-精氨酸1.5g，半胱氨酸（1g/mL H₂O）0.05mL，蒸馏水10mL，调pH至7.0，灭菌后加3滴至PY基础培养液中。奈氏试剂：将20g KI溶于50mL蒸馏水，并在此溶液中加HgI₂小颗粒，至溶液达饱和为止（约32g），然后再加460mL水和134gKOH。将上清液贮存于暗色瓶中备用。 

糖发酵的实验结果如表1： 

表1糖发酵试验结果 

3.16S rDNA测序鉴定 

采用本领域技术人员公知的方法，用试剂盒提取细菌基因组DNA，反转录为cDNA，根据乳酸杆菌的16S rDNA基因序列的保守区域，采用细菌通用引物，进行基 因常规PCR扩增，其中， 

上游引物5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' 

下游引物5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT3' 

扩增结果电泳检测，电泳显示条带清楚单一，说明扩增成功，结果如图4，同时条带提纯，TA-克隆技术，测序后，在Gene bank的BLAST上进行序列比对，确定为粪肠球菌（Enterococcus faecalis）。 

试验例1 

本试验例用于说明粪肠球菌FJL19的作用。 

1、乳酸菌全菌液制剂制备 

（1）乳酸菌发酵时间测定：将活化后的乳杆菌作为发酵种子液1%（v/v）接种于MRS液体培养基中，37℃，170r/min摇床培养，在前24h每隔2h，24h后在第36和48h取样，按10倍法用0.9%的生理盐水进行梯度稀释后，取10^-4-10^-6稀释度100μl稀释液在MRS琼脂培养基均匀涂布，每个梯度做3个重复，平皿在37℃，5%CO₂条件下培养24h。取菌落数在30-300的稀释度值计算菌液浓度，同时取样，采用牛津杯法测定各时间点菌液的抑菌效果，确定最适发酵时间。 

如图5所示，图中横坐标代表时间，纵坐标代表活菌数，粪肠球菌在接种后10h内活菌数缓慢上升，从10h后则呈现迅速上升的状态，而在18h时即达到了活菌数10⁹以上，此时达到了最高值。而到了36h时活菌数已经下降到10⁸，并呈现逐渐下降状态。主要原因是培养基营养物质的消耗，有害代谢产物积累增加等原因导致菌体生长环境的变化，从而使活菌数量减少。从生长曲线可以看出，粪肠球菌在16-20h时活菌数维持在10⁹数量级，并且比较稳定，所以选择18h这一时间段收获菌体。 

（2）全菌液制备：将试验菌株活化2-3代后，按1%（v/v）的接种量接至经优化的液体培养基中，37℃，170r/min摇床培养18h，4℃，3500rpm离心30min，用一定体积的上清液悬浮菌体，4℃保存备用。 

2、乳酸菌制剂在雏鸡饲养的应用效果 

（1）试验材料：上述全菌液制剂，活菌数为5.1×10⁹cfu/mL（菌个数）；抗生素为4%黄霉素。 

（2）试验动物和试验设计：选用240只1日龄健康的AA肉仔鸡，公母各半，平均体重40.55±0.67g，随机分为4组，Ⅰ组（对照组，基础日粮），Ⅱ组（抗生素组，基 础日粮+0.01%黄霉素），Ⅲ（全菌液制剂组，基础日粮+0.5%的全菌液制剂）、Ⅳ组（全菌液制剂组，基础日粮+1%的全菌液制剂），每组5个重复，每个重复12只鸡，试验期28天。 

（3）测定指标： 

A、生产性能指标：分别于试验第1天、15天、29天早8：00时称量各重复空腹重（禁食12h），并准确记录各重复采食量。计算各组鸡的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和饲料转化比（FCR）。结果如表2： 

表2乳酸菌制剂对雏鸡日增重和料重比的影响 

注：同行比较，不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01），无标记或字母相同者表示差异不显著（p＞0.05）。 

试验结果显示，1～14d和15～28d，1.0%乳酸菌制剂组肉仔鸡平均日增重显著高于对照组（p<0.05），0.5%乳酸菌制剂组平均日增重稍高于对照组，但差异不显著（p>0.05），制剂组间平均日增重差异不显著（p>0.05），1～14d，抗生素组与其它各处理间平均日增重无显著差异（p>0.05）；15～28d，抗生素组平均日增重显著高于对照组（p<0.05），但与其它处理组间差异均不显著（p>0.05）。试验全期，乳酸菌制剂组平均日增重均显著高于对照组（p<0.05），1.0%制剂组显著高于0.5%制剂组（p<0.05），抗生素组平均日增重显著高于对照组和0.5%乳酸菌制剂组（p<0.05），与1%乳酸菌制剂组差异不显著（p>0.05）。 

15～28d，1.0%乳酸菌制剂组料肉比均显著低于对照组（p<0.05），与抗生素组和0.5%制剂组间无显著差异（p>0.05），0.5%制剂组、抗生素与对照组之间料肉比差异均不显著（p>0.05）。试验全期，制剂组料肉比均显著低于对照组（p<0.05），1.0%制剂组料肉比显著低于0.5%制剂组（p<0.05），抗生素组料肉比显著低于对照组（p<0.05），与其它处理组之间差异不显著（p>0.05）。 

总体而言，乳酸菌制剂和抗生素均能改善肉仔鸡的生长性能，且1.0%制剂组优于0.5%制剂组和抗生素组。 

B、盲肠菌群数量：于试验第15、29日，随机在各重复取一只接***均体重的试鸡，颈静脉放血处死，立即解剖，用无菌棉线结扎盲肠后取出，无菌条件下称取盲肠内容物0.5g，10倍稀释，平板涂布法测定盲肠内乳酸菌和大肠杆菌数量。结果如表3： 

表3乳酸菌制剂对雏鸡盲肠中乳酸菌和大肠杆菌数量的影响（log₁₀cfu/g） 

注：同行比较，不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01），无标记或字母相同者表示差异不显著（p＞0.05）。 

2w时，1.0%乳酸菌制剂组肉仔鸡盲肠内乳酸菌菌数显著高于对照组和抗生素组（p<0.05），但与其0.5%乳酸菌制剂组相比，差异不显著（p>0.05）；0.5%乳酸菌制剂组乳酸菌菌数显著高于抗生素组（p<0.05），但与对照组相比无显著差异（p>0.05）；对照组乳酸菌数显著高于抗生素组（p<0.05）。1.0%乳酸菌制剂组大肠杆菌数显著低于其它所有处理组（p<0.05）；0.5%制剂组大肠杆菌数与对照组相比差异不显著（p>0.05），抗生素组大肠杆菌数显著低于对照组（p<0.05），0.5%制剂组和抗生素组间大肠杆菌数差异不显著（p>0.05）。 

4w时，1%和0.5%乳酸菌制剂组乳酸菌数显著高于抗生素组（p<0.05），除抗生素组外，其余各组间乳酸菌数无显著差异（p>0.05）；0.5%和1.0%乳酸菌制剂组大肠杆菌数显著低于其它处理组（p<0.05）。随着乳酸菌制剂添加量的增加，盲肠内乳酸菌数增加，大肠杆菌数减少，这表明，乳酸菌能够优化肠道菌群结构。 

综上，该菌株能够显著抑制鸡肠道内的大肠杆菌数量，同时促进雏鸡生长，可替代传统的抗生素，减少抗生素在动物饲养上的应用，大大提高了生物安全性。 

Claims (2)

1.一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）FJL19，其保藏编号为CGMCC No.6995。

2.权利要求1所述的粪肠球菌FJL19具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。

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