CN102669432A - 一种鹅用复合益生菌制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鹅用复合益生菌制剂，由蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物按照重量比为1∶1∶1构成，其中，蜡样芽孢杆菌固体培养物中的活菌数为2.5×1011cfu/g，嗜酸乳杆菌固体培养物中的活菌数为3.7×1010cfu/g、产朊假丝酵母固体培养物中的活菌数为1.05×1010cfu/g。本发明还提供了鹅用复合益生菌制剂的制备方法。本发明为复合菌剂，可以显著提高提高鹅的各项生理指标；另外对固体发酵的条件进行了进一步优化，使得该方法可以大大提高微生态制剂的稳定性以及活菌数。
Description
技术领域
本发明属于微生物饲料添加剂领域，涉及一种鹅用复合益生菌制剂及其制备方法。
背景技术
目前，抗生素在动物产品和环境中造成残留问题日益受到人们的重视。为了从根本上把抗生素从配合饲料中清除出去，世界各国的相关领域科学工作者都在探索抗生素的替代品，力图找到一种无停药期，无污染，无残留，无毒副作用，安全的新型饲料添加剂。微生态制剂正是在这种情况下被应用在饲料添加剂中的。光辉的抗生素时代之后，将是一个崭新的微生态制剂时代。
近年来，微生态制剂的开发和应用对促进我国畜牧业的发展已发挥了积极的作用，且潜力很大。它不仅具有营养保健作用，而且还避免了抗菌药物等兽药在动物体内的残留，也是一类绿色环保产品。活菌微生态制剂可分为单一制剂和复合制剂，依微生物的种类有乳酸菌制剂、酵母菌制剂、芽孢杆菌制剂及光合细菌制剂等。目前，动物用微生态制剂的生产方式有两种：液态发酵和固态发酵。液态发酵易实现纯种培养，产品浓度高，但能耗高；固体发酵能耗低，产率较高，但劳动强度大。
我国固态发酵历史悠久，但大多应用于醋和酒的发酵生产。固态发酵技术在饲料行业的应用，是在最近几年才发展起来的，且工艺不是很复杂，较容易应用，但目前推广不好，主要存在几个问题有待解决：一方面，目前微生态制剂大多都停留在单一菌种的研究，复合菌制剂很少，应用效果欠佳；另一方面，已有的微生态制剂多用工业原料制备，很少有利用饲料原料做载体，且优化制备条件，即调制原料和发酵条件过程还不成熟，不能达到提高微生态制剂稳定性和活菌数量的目的。不同的微生态制剂，其作用机理、途径、解决的问题各不相同。生产“绿色”的畜牧产品，依靠单一菌种制备的微生态制剂很难完全实现，选择几种菌种，优化条件，联合配伍，才能取得较好的效果。目前，微生态制剂已经广泛应用于家禽饲养中，对提高产蛋率、提高生长速度效果明显，但是多为单一菌剂，蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus.acidophilus）、产朊假丝酵母（Candida utilis）都为单一菌剂，具有促进消化、增强肠道蠕动等功能，但目前尚未将蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus.acidophilus）、产朊假丝酵母（Candida utilis）作为复合菌剂的报道。
发明内容
本发明的目的是提供了一种鹅用复合益生菌制剂，解决目前鹅用的益生菌添加剂多为单一菌剂，作用比较单一，无法使家禽的各项生理机能得到综合改善的问题。
本发明的另一目的是提供了上述鹅用复合益生菌制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案来实现：
一、一种鹅用复合益生菌制剂，该制剂由蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物按照重量比为1∶1∶1构成，其中，蜡样芽孢杆菌固体培养物中的活菌数为2.5×1011cfu/g，嗜酸乳杆菌固体培养物中的活菌数为3.7×1010cfu/g、产朊假丝酵母固体培养物中的活菌数为1.05×1010cfu/g。
该制剂按照1%（w/w）的添加量添加到鹅饲料中，使饲料中总益生菌活菌数达到108cfu/g以上。
二、一种鹅用复合益生菌制剂的制备方法，将蜡样芽孢杆菌ATCC 11778、嗜酸乳杆菌ATCC 4356、产朊假丝酵母ATCC 22023分别经过活化培养、一级培养、二级扩大培养、固体发酵四个步骤分别得到固体培养物，然后将蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物按比例混合制备而成；
其中，固体发酵步骤中蜡样芽孢杆菌ATCC 11778的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠57.45%，玉米面7.5%，豆粕7.5%，DDGS（Distillers Dried Grains with Solubles，玉米干酒糟，简称为DDGS）22.5%，稻壳5%，硫酸镁0.05%；固体发酵条件是发酵温度37℃，厚度31cm，发酵初始pH 7.5，料水比1.2∶1（w/w），发酵料接种量6%（w/w），发酵时间为72h；
固体发酵步骤中嗜酸乳杆菌ATCC 4356的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠48.875%、玉米10%、豆粕20%、DDGS 20%、柠檬酸二铵0.1%、乙酸钠1%，硫酸镁0.025%；固体发酵条件是发酵温度31℃，发酵料厚度35cm，发酵料初始pH值6.5，料水比为1.4∶1（w/w），发酵料接种量8%（w/w），发酵时间为60h；
固体发酵步骤中产朊假丝酵母ATCC 22023的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠42.4%，玉米粉15%，稻壳5%，豆粕粉15%，DDGS 22.5%，磷酸二氢钾0.1%；固体发酵条件是发酵温度33℃，发酵料厚度25cm，发酵料初始pH值5.5，料水比为1∶1（w/w），发酵料接种量4%（w/w），发酵时间为72h。
采用上述技术方案的积极效果：本发明将蜡样芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母三种菌的固体培养物按比例联合应用，可以显著提高仔鹅日增重、促进免疫器官（法氏囊、胸腺、脾脏）的发育、提高免疫力、促进机体产生血清白蛋白和球蛋白、降低仔鹅盲肠pH值、促进盲肠有益菌群生长，综合提高鹅的各项生理指标；本发明还利用饲料原料用于固体培养基的原料，天然无污染，改变了现有技术中多用工业原料制备固体发酵培养基的现状，另外对固体发酵的条件进行了进一步优化，使得该方法可以大大提高微生态制剂的稳定性以及活菌数。
具体实施方式
本发明中使用的生物材料的来源说明：
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）ATCC 11778、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus.acidophilus）ATCC 4356、产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC 22023均购自黑龙江省科学院微生物研究所。
在本发明中，cfu为细菌菌落数。
下面通过实施例、试验例对本发明做进一步说明，但不应理解为对本发明的限制：实施例1蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物的制备
1、菌种活化
将蜡样芽孢杆菌ATCC 11778转接到牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基（配方），30℃培养24h，备用。
2、一级培养
将活化的斜面菌种，每管分别加入10ml的无菌水稀释成悬浊液，转接到装有100ml营养肉汤培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置摇床中，30℃、130rpm振荡培养24h。
3、二级扩大培养
分别取10ml一级种子液，接入盛有115ml营养肉汤培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置摇床中，30℃，130rpm摇床振荡培养24h。
4、固体发酵
按照重量比为米糠57.45%，玉米面7.5%，豆粕7.5%，DDGS 22.5%，稻壳5%，硫酸镁0.05%的配方配制发酵原料，混合均匀后，放于灭菌锅121℃高压灭菌30min，按料水比1.2∶1（w/w）加入无菌水，发酵物料的厚度31cm，加入6%（w/w）的二级种子液混合均匀，放入37℃恒温培养箱开始发酵，发酵初始pH 7.5，发酵72h，45℃低温烘干即得蜡样芽孢杆菌固体培养物。用平板计数法测定活菌数为2.5×1011cfu/g。
其中，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的配制：营养肉汤10g，牛肉膏2g，蛋白胨2g，NaCl 0.5g，琼脂粉5g，水200ml，pH 7.0～7.2。在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl和琼脂粉，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
营养肉汤培养基的配制：营养肉汤10g，水200ml，pH 7.0～7.2。在烧杯中加水，将营养肉汤培养基加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
实施例2嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物的制备
1、菌种活化
将嗜酸乳杆菌ATCC 4356转接到MRS琼脂斜面培养基（配方），30℃厌氧培养箱培养24h，备用。
2、一级培养
将活化的斜面菌种，每管分别加入10ml的无菌水稀释成悬浊液，转接到装有100ml营养肉汤培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置厌氧摇床中，30℃、130rpm振荡培养24h。
3、二级扩大培养
分别取10ml一级种子液，接入盛有115ml MRS培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置厌氧摇床中，30℃，130rpm摇床振荡培养24h。
4、固体发酵
按照重量比为米糠48.875%、玉米10%、豆粕20%、DDGS 20%、柠檬酸二铵0.1%、乙酸钠1%，硫酸镁0.025%的配方配制发酵原料，混合均匀后，放于灭菌锅121℃高压灭菌30min，按料水比1.4∶1（w/w）加入无菌水，发酵物料的厚度35cm，加入8%（w/w）的二级种子液混合均匀，放入31℃恒温培养箱开始发酵，发酵初始pH 6.5，发酵60h，45℃低温烘干即得蜡样芽孢杆菌固体培养物。用平板计数法测定活菌数为3.7×1010cfu/g。
其中，营养肉汤培养基的配制：营养肉汤10g，水200ml，pH 7.0～7.2。在烧杯中加水，将营养肉汤培养基加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
MRS培养基的配制：胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，乙酸钠5g，吐温-801g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.2g，琼脂20g蒸馏水1000mL，pH 6～6.5。
实施例3产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物的制备
1、菌种活化
将产朊假丝酵母ATCC 22023转接到PDA琼脂斜面培养基（配方），30℃培养24h，备用。
2、一级培养
将活化的斜面菌种，每管分别加入10ml的无菌水稀释成悬浊液，转接到装有100ml营养肉汤培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置摇床中，30℃、130rpm振荡培养24h。
3、二级扩大培养
分别取10ml一级种子液，接入盛有115ml PDA培养基（配方）的250ml的三角瓶中，置摇床中，30℃，160rpm摇床振荡培养24h。
4、固体发酵
按照重量比为米糠42.4%，玉米粉15%，稻壳5%，豆粕粉15%，DDGS 22.5%，磷酸二氢钾0.1%的配方配制发酵原料，混合均匀后，放于灭菌锅121℃高压灭菌30min，按料水比1∶1（w/w）加入无菌水，发酵物料的厚度25cm，加入4%（w/w）的二级种子液混合均匀，放入37℃恒温培养箱开始发酵，发酵初始pH 5.5，发酵72h，45℃低温烘干即得蜡样芽孢杆菌固体培养物。用平板计数法测定活菌数为1.05×1010cfu/g。
其中，营养肉汤培养基的配制：营养肉汤10g，水200ml，pH 7.0～7.2。在烧杯中加水，将营养肉汤培养基加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
PDA培养基的配制：马铃薯200g去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，滤液加蔗糖20g，琼脂粉18g，加水至1000mL。
实施例4鹅用复合益生菌制剂的制备
将实施例1、实施例2、实施例3制备的蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物按照重量比为1∶1∶1混合即可。使用时，该制剂按照1%（w/w）的添加量添加到鹅饲料中，使饲料中总益生菌活菌数达到108cfu/g以上即可。
试验例1鹅用复合益生菌制剂对仔鹅生长性能的影响
1、试验设计与分组
试验鹅品种，为莱×（莱×籽）杂种鹅，由为大庆种鹅基地提供。选取1日龄仔鹅210只，按性别和体重随机分成5组，每组3个重复，每重复14只鹅，公母各半。试验从1日龄开始，28日龄结束。
对照组：基础日粮；
试验组Ⅰ：基础日粮＋蜡样芽孢杆菌；
试验组Ⅱ：基础日粮＋嗜酸乳酸杆菌；
试验组Ⅲ：基础日粮＋产朊假丝酵母菌；
试验组Ⅳ：基础日粮＋蜡样芽孢杆菌、嗜酸乳酸杆菌和产朊假丝酵母菌复合菌。
2、测定指标
分别在试验开始后第2周末和第4周末，称量各组仔鹅空腹4小时体重，并根据以下公式计算各组仔鹅的采食量、日增重及料重比。
平均日采食量ADFI(g)=总采食量/(试验天数×鹅羽数)
平均日增重ADG(g)=总增重/(试验天数×鹅羽数)
耗料增重比FCR=平均日采食量/平均日增重
3、试验结果
鹅用复合益生菌制剂对仔鹅生长性能的影响结果如表1所示。
由表1可以看出，在整个试验期，各试验组与对照组相比平均日采食量之间差异不显著。
在初始的1～2周，试验组的日增重较对照组都有增加趋势，其中试验组Ⅳ与其他四组相比，显著增加仔鹅的日增重（p<0.05）；在试验的3～4周，菌制剂体现出了较好的促生长效果，各单菌制剂组仔鹅日增重较对照组分别增加了4.41%，7.29%，6.30%，而复合菌制剂试验组Ⅳ表现尤为突出，显著提高仔鹅日增重14.81%（p<0.05）。整个试验期来看，对雏鹅日增重影响最大的是试验组Ⅳ（p<0.05），较对照组增加了10.16%，其它试验组也较对照组增加了5%左右。
在试验开始的1～2周，添加菌制剂的各试验组的料重比均低于对照组，分别降低了4.29%，5.71%，4.29%，7.86%，其中复合菌制剂试验组Ⅳ较对照组差异显著（p<0.05），各试验组之间差异不显著。在试验的3～4周，各试验组的料重比也都低于对照组，降低3.83%，6.56%，7.65%，12.57%，其中试验组Ⅳ显著低于对照组（p<0.05）。整个试验期，添加复合菌制剂各试验组与对照组相比，均能显著降低料重比（p<0.05），分别降低4.73%，7.1%，7.1%，10.06%，且试验组Ⅳ在整个试验期对仔鹅生长性能影响最大。
表1菌制剂对雏鹅生长性能的影响
其中，1.表中数据采用平均数±标准差(X±SD)，下表同。
2.表中同一行数字肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，下表同。
试验例2鹅用复合益生菌制剂在促进免疫器官发育方面的影响
1、试验设计与分组
同试验例1
2、测定指标
第四周末，每个重复中选取接***均体重的仔鹅1只，空腹12小时后于第二天上午屠宰，分离脾脏、法氏囊、胸腺称鲜重，计算其免疫器官指数（易力等，2004）。
3、试验结果
鹅用复合益生菌制剂对仔鹅免疫器官发育的影响结果如表2所示。
表2制剂对雏鹅免疫器官指数的影响
由表2可知，添加菌制剂的试验组其免疫器官指数（胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数）均显著高于对照组（p<0.05）。胸腺指数各试验组较对照组分别提高了18.32%，31.3%，48.09%，61.07%，且复合菌制剂组最高（p<0.05）；法氏囊指数，试验组均显著高于对照组（p<0.05），各试验组较对照组分别提高了36.84%，32.89%，38.16%，43.42%，各试验组之间差异不显著；脾脏指数，各试验组较对照组分别提高了39.44%，29.58%，32.39%，43.66%（p<0.05）。免疫器官指数以复合菌制剂组对仔鹅的影响最大，与对照组相比均显著提高仔鹅的免疫器官指数（p<0.05），且较其它单菌制剂组高。
试验例3鹅用复合益生菌制剂在提高免疫力方面的影响
1、试验设计与分组
同试验例1
2、测定指标
第四周末，每个重复中选取接***均体重的仔鹅1只，称重后颈静脉采血10ml，常规制备血清，用于测定血清免疫蛋白的含量。
血清白蛋白（ALB）、免疫球蛋白（IgA、IgG）含量，由黑龙江省电力医院辅助测定。
3、试验结果
鹅用复合益生菌制剂对仔鹅免疫蛋白水平的影响结果如表3所示。
表3菌制剂对雏鹅ALB、IgA、IgG含量的影响
由表3可见，添加菌制剂的试验组血清ALB含量较对照组都有所提高，分别提高了5.75%，1.19%，2.46%，10.22%。添加复合菌制剂的试验组血清IgA和IgG含量都明显提高，除试验组Ⅲ外，均显著高于对照组（p<0.05）。与对照组相比，各试验组血清IgA含量分别提高了7.00%，6.25%，2.96%，9.86%，各试验组血清IgG含量高于对照组23.40%，14.89%，10.64%，31.91%。菌制剂对雏鹅血清ALB、IgA、IgG含量的影响以添加复合菌制剂的试验组Ⅳ最高，且与对照组差异显著（p<0.05）。
试验例4鹅用复合益生菌制剂在十二指肠消化酶活性方面的影响
1、试验设计与分组
同试验例1
2、测定指标
饲养试验结束后，从每个重复选接***均体重的鹅1只，空腹12小时后于第二天上午屠宰，迅速打开腹腔，立即结扎十二指肠，收集部分十二指肠内容物，用于酶活测定。
样品处理：取十二指肠内容物0.2g加入4mL冷的生理盐水，匀浆，4℃放置24h，6000r/min离心15min，取上清液测定各种酶活。
淀粉酶活性的测定：采用试剂盒法（南京建成生化工程研究所）。酶活单位定义：在37℃条件下，每克食糜与底物作用30min，水解10mg淀粉所需的酶量为1个淀粉酶活性单位(U)。
蛋白酶活性的测定：采用试剂盒法（南京建成生化工程研究所）。酶活单位定义：在37℃条件下，每克食糜每分钟分解蛋白生成1ug氨基酸为1个蛋白酶活性单位(U)。
脂肪酶活性的测定：采用试剂盒法（南京建成生化工程研究所）。酶活单位定义：在37℃条件下，每克食糜与底物反应1分钟，每消耗1u mol底物为1个脂肪酶活性单位(U)。
3、试验结果
鹅用复合益生菌制剂对仔鹅十二指肠消化酶活性的影响结果如表4所示。
由表4可知，对于蛋白酶，添加菌制剂的各试验组除试验组Ⅲ与对照组相比差异不显著，其他试验组均显著高于对照组（p<0.05），分别提高了47.55%，46.35%，6.10%，78.04%。各试验组之间，显著高于试验组Ⅲ（p<0.05），其它差异不显著。
淀粉酶含量，添加菌制剂的各试验组除试验组Ⅲ，均显著高于对照组（p<0.05），分别提高了56.38%，50.00%，31.28%，61.49%，以复合菌制剂组提高淀粉酶含量最高。
添加菌制剂可以提高脂肪酶活性，与对照组相比分别提高了16.0%，24.9%，24.9%，29.5%，但差异不显著（p>0.05）。各试验组之间，差异亦未达到显著水平（p>0.05）。
添加菌制剂对仔鹅十二指肠消化酶活性均有影响，其中以复合菌制剂添加组效果最好。
表4菌制剂对雏鹅十二指肠消化酶活性的影响
试验例5鹅用复合益生菌制剂在盲肠内容物微生物菌落方面的影响
1、试验设计与分组
同试验例1
2、测定指标
饲养试验结束后，从每个重复选接***均体重的鹅1只，空腹12小时后于第二天上午屠宰，迅速打开腹腔，立即结扎盲肠，收集盲肠内容物，0～4℃保存用于检测菌群数。
在无菌条件下，称取内容物0.5g，放入无菌稀释液4.5ml，经震荡器振荡、离心后用生理盐水连续10倍稀释。选择合适稀释度样品，分别接种于乳酸菌琼脂培养基、麦康凯培养基、SS琼脂培养基进行培养，每个稀释度作2个平行，分别测定乳酸杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌菌群数。
大肠杆菌、沙门氏菌在电热恒温培养箱36℃培养24h后计数，乳酸杆菌厌氧培养箱中30℃培养48h后计数，细菌数量采用平板菌落计数法进行统计，最后用1g肠道内容物中细菌个数的对数值（lg(cfu)/g）表示。
3、试验结果
鹅用复合益生菌制剂对仔鹅盲肠内容物微生物菌落的影响结果如表5所示。
表5菌制剂对雏鹅盲肠内容物菌群数的影响
由表5可以看出，添加复合菌制剂的试验组盲肠内容物pH值较对照组相比均有所降低，分别下降了5.24%，5.98%，5.98%，10.48%，其中添加复合菌制剂试验组Ⅳ显著低于对照组（p<0.05）。
添加菌制剂能够显著提高盲肠内容物中乳酸杆菌数。各试验组均显著高于对照组（p<0.05），分别提高2.44%，4.52%，3.30%，5.26%，且添加复合菌制剂组提高乳酸菌群数较试验组Ⅰ和试验组Ⅲ均差异显著（p<0.05）。
添加菌制剂对鹅盲肠大肠杆菌数的影响，除试验组Ⅲ外，其他各组与对照组相比差异显著（p<0.05），分别降低了5.44%，4.66%，2.85%，6.48%，尤其以添加复合菌制剂组降低大肠杆菌数最多。
添加菌制剂的各试验组沙门氏菌菌群数均低于对照组，分别降低了6.01%，2.35%，3.96%，7.49%。其中试验组Ⅰ和试验组Ⅳ与对照组差异显著（p<0.05），且添加复合菌制剂组对沙门氏菌菌数降低显著（p<0.05）。
从试验例1-5可以看出，本发明的复合菌剂具有单菌所不能比拟的综合性优势，可用于改善饲养鹅的各项指标。
Claims (3)
1.一种鹅用复合益生菌制剂，其特征在于：该制剂由蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物按照重量比为1∶1∶1构成，其中，蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物中的活菌数为2.5×1011cfu/g，嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物中的活菌数为3.7×1010cfu/g、产朊假丝酵母ATCC 22023固体培养物中的活菌数为1.05×1010cfu/g。
2.根据权利要求1所述的鹅用复合益生菌制剂，其特征在于：该制剂按照1%（w/w）的添加量添加到鹅饲料中，使饲料中总益生菌活菌数达到108cfu/g以上。
3.一种鹅用复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于：将蜡样芽孢杆菌ATCC11778、嗜酸乳杆菌ATCC 4356、产朊假丝酵母ATCC 22023分别经过活化培养、一级培养、二级扩大培养、固体发酵四个步骤分别得到固体培养物，然后将蜡样芽孢杆菌ATCC 11778固体培养物、嗜酸乳杆菌ATCC 4356固体培养物、产朊假丝酵母ATCC22023固体培养物按比例混合制备而成；
其中，固体发酵步骤中蜡样芽孢杆菌ATCC 11778的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠57.45%，玉米面7.5%，豆粕7.5%，DDGS 22.5%，稻壳5%，硫酸镁0.05%；固体发酵条件是发酵温度37℃，厚度31cm，发酵初始pH 7.5，料水比1.2∶1（w/w），发酵料接种量6%（w/w），发酵时间为72h；
固体发酵步骤中嗜酸乳杆菌ATCC 4356的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠48.875%、玉米10%、豆粕20%、DDGS 20%、柠檬酸二铵0.1%、乙酸钠1%，硫酸镁0.025%；固体发酵条件是发酵温度31℃，发酵料厚度35cm，发酵料初始pH值6.5，料水比为1.4∶1（w/w），发酵料接种量8%（w/w），发酵时间为60h；
固体发酵步骤中产朊假丝酵母ATCC 22023的固体发酵培养基配方按照重量比为米糠42.4%，玉米粉15%，稻壳5%，豆粕粉15%，DDGS 22.5%，磷酸二氢钾0.1%；固体发酵条件是发酵温度33℃，发酵料厚度25cm，发酵料初始pH值5.5，料水比为1∶1（w/w），发酵料接种量4%（w/w），发酵时间为72h。
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