CN103059030B

CN103059030B - 一种具有粘着斑激酶抑制作用的嘧啶类化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN103059030B
Application number: CN201210591932.9A
Authority: CN
Inventors: 张华北; 赵凌舟; 卢霞; 薛甜
Original assignee: Beijing Normal University
Current assignee: Beijing Normal University
Priority date: 2012-12-28
Filing date: 2012-12-28
Publication date: 2015-04-29
Anticipated expiration: 2032-12-28
Also published as: CN103059030A

Abstract

本发明提供一种嘧啶类化合物，其结构如下式（I）、（II）所示，其中，R为取代的苯基或取代的吡啶基；R₁为-NO₂、-Br、-COOH或-OCH₃；n为1-3的整数；X为-Br或Cl；R₈、R₉和R₁₀为相同或不相同的-H、-OCH₃、-COOMe、-Br、-COOEt、-CH₂COOMe、-NO₂或(CH₂)_1-4OH。本发明所述的化合物是具有FAK抑制作用的化合物，该化合物能够有效的进入肿瘤细胞，对肿瘤细胞具有很好的抑制作用并能较好地滞留。本发明还提供所述化合物的制备方法和该类化合物在制备肿瘤抑制剂中的应用。

Description

一种具有粘着斑激酶抑制作用的嘧啶类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及放射性药物化学领域，尤其涉及一系列具有粘着斑激酶抑制作用的嘧啶类衍生物。

背景技术

局部粘着斑激酶（Focal Adhesion Kinase，FAK）是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶^[1]，1992年被鉴定为是一种与癌基因v-src相关的高度磷酸化蛋白，位于正常细胞的富含整合素黏着斑区域。FAK是细胞内重要的骨架蛋白和多种信号通路的关键分子，对细胞存活、增殖迁移和侵袭都有重要作用^[2-7]。FAK在肿瘤发生、发展过程中起着非常重要的作用，使其可能作为一种是否存在肿瘤侵袭和预测恶性肿瘤预后的标志分子，并且FAK可能会成为肿瘤治疗的一个有效靶点可能成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。因此，FAK具有在肿瘤的特异性诊断、靶向分子治疗和肿瘤预后评估中发挥作用的巨大潜力。目前，主要的FAK抑制剂有诺华公司的TAC544和TAE226，辉瑞公司的PF-562,271和PF-573,228，葛兰素史克的GSK2256098，以及Sigma公司的Y15和CureFAKtor制药公司的CFAK-C4^[8]。

目前诊断恶性肿瘤常用的检查方法都有一定的局限性，或有假阳性，或特异性差，或灵敏度低；B超、CT、核磁共振检查等是基于疾病的形态学变化，很难在癌变早期尚未有结构形态变化时提供诊断信息。放射性核素标记化合物显像及靶向分子治疗的最突出的优点是其功能成像及靶向分子治疗优势，在反映脏器或组织的血流、受体密度和活性、代谢、功能变化等生物化学过程方面具有独特的优势，是当今临床诊治疾病的最先进技术之一。

基于上述背景技术，有必要开发一种能够被放射性核素标记的FAK抑制剂，在肿瘤分子显像剂和恶性肿瘤放射免疫治疗等方面起到更大的推动作用。

发明内容

本发明的一个目的在于：提供一种具有FAK抑制作用的嘧啶类化合物，该化合物能够有效的进入肿瘤细胞，对肿瘤细胞具有很好的抑制作用并能较好地滞留。

本发明的另一个目的在于：提供所述的嘧啶类化合物在药学上可接受的盐。

本发明的再一个目的在于：提供所述嘧啶类化合物的制备方法。

本发明的再一个目的在于：提供所述嘧啶类化合物的应用。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

提供一种嘧啶类化合物，其结构如下式（I）所示：

其中，R为取代的苯基或取代的吡啶基；R₁为-NO₂、-Br、-COOH或-OCH₃；n为1-3的整数。

本发明一个优选的方案中，式（I）中的R为取代的苯基，n=1，其结构如式（I-1）所示：

其中，R₂、R₃、R₄和R₅是相同或不同的-H、-COOMe、Br、-COPh或(CH₂)_1-4OH。

本发明的上述式（I-1）所示的化合物中，进一步优选的化合物包括：

化合物1，结构如下：

化合物2，结构如下：

本发明另一个优选的方案中，式（I）中的R为取代的吡啶基，n=1，其结构如式（I-2）所示：

其中，R₆和R₇取相同或不相同的-H、-COOMe、-Br、-NO₂或(CH₂)_1-4OH。

上述式（I-2）所示的化合物中，进一步优选的化合物为化合物3，结构如下：

本发明还提供一种嘧啶类化合物，其结构如下式（II）所示：

其中，X为-Br或Cl；R₁为-NO₂、-Br、-COOH或-OCH₃；n为1-3的整数；R₈、R₉和R₁₀为相同或不相同的-H、-OCH₃、-COOMe、-Br、-COOEt、-CH₂COOMe、-NO₂或(CH₂)_1-4OH。

本发明的再一个优选方案中，式（II）中的X为Br，R₁为-COOH或-OCH，R₈、R₉和R₁₀为相同或不相同的-H、-OCH₃、-Br或-COOEt。

本发明上述式（II）所示的化合物中，进一步优选以下化合物：

化合物4，结构如下：

化合物5，结构如下：

化合物6，结构如下：

化合物7，结构如下：

化合物8，结构如下：

化合物9，结构如下：

化合物10，结构如下：

化合物11，结构如下：

化合物12，结构如下：

化合物13，结构如下：

化合物14，结构如下：

本发明还提供所述化合物的制备方法。

其中，式（I-1）所示的化合物制备方法包括以下步骤：

如以下合成路线所示，10mmol2-氯-7H-吡咯[2,3-d]并嘧啶，30mmol无水磷酸钾，少量CuI和反式-1,2-环己二胺与10ml二氧六环加入到三口瓶中，然后缓慢加入12mmol化合物A，在110℃，N₂保护下搅拌回流5h。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量二氧六环冲洗固体3次，然后加入饱和NaHCO₃溶液，有机相用3×10mL的饱和食盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤，旋干二氧六环，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：10-1：2过硅胶柱，最后得浅白色固体B。消解罐中加入化合物B，化合物C，浓盐酸，正丁醇，密封好后，140℃反应24h。把反应液倒入100ml烧瓶中，加50ml水，用饱和碳酸钠溶液调节PH=6-7，3×50ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干乙酸乙酯，得到固体用水洗3次，再用正己烷洗涤3次，过滤，收集滤饼，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1:10-1：1过硅胶柱，最后得化合物D。即为本发明式（I-1）所示化合物。合成路线如下，其中的R1-R5的各取代基定义同前：

本发明的式（I-2）所示的化合物制备方法可以参考上述式（I-1）化合物的制备方法完成。

本发明式（II）所示的化合物制备方法包括以下步骤：

如以下合成路线所示，10mmol的B’，12mmol化合物A’，30mmo碳酸钾，25ml异丙醇和25ml水，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入烧杯中，加入25ml水室温搅拌，过滤，得化合物E。取化合物E10mmol溶于二氧六环，加入化合物C，15mmol对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到灰色固体。加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后化合物F，即为本发明式（II）所示的化合物。合成路线如下，其中的各取代基定义同前：

上述制备方法中所使用的所有原料化合物及制剂均为现有产品。

本发明还提供所述的嘧啶类化合物在药学上可接受的盐。

所述的盐是所述嘧啶类化合物与酸形成的加成盐，所述的酸可以是盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或精氨酸。

上述本发明化合物的加成盐均可使用所述的各种酸与本发明的各化合物为原料，参照现有的方法制备得到酸加成盐。

本发明提供的所述嘧啶类化合物与酸形成的加成盐，可根据不同的理化性质被用于不同剂型的药物的制备。

本发明还提供所述化合物在制备肿瘤细胞抑制剂中的应用。

经过初步的细胞毒性实验和放射性核素标记实验显示，本发明化合物具有显著的FAK抑制作用，对肿瘤细胞具有很好的抑制作用；生物分布实验结果表明本发明化合物能够有效的进入肿瘤细胞，并能较好地滞留。

所述的肿瘤细胞以肝癌细胞为例，在目前合成的14个化合物中，已经测得其中的5个化合物对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用。4个化合物具有较好的细胞毒性效果：1号化合物对HepG2肝癌细胞有较强的生长抑制作用，浓度在1umol时可以抑制80%以上细胞的生长，图中5umol浓度的数据，可能由于操作等其它原因导致实验结果错误；3号化合物只有在10umol浓度下对HepG2肝癌细胞有较强的生长抑制作用，其它浓度无明显效果；5号化合物在2umol对HepG2肝癌细胞明显的抑制作用，能够抑制40%左右的细胞的生长，5umol可以抑制90%以上细胞的生长；13号化合物在5-50umol范围内对细胞有生长抑制作用，且具有良好的量效关系。

附图说明

图1是本发明中化合物1不同浓度时对HepG2肝癌细胞生长的影响。

图2是本发明中化合物3不同浓度时对HepG2肝癌细胞生长的影响。

图3是本发明中化合物5不同浓度时对HepG2肝癌细胞生长的影响。

图4是本发明中化合物13不同浓度时对HepG2肝癌细胞生长的影响。

具体实施方式

实施例1

化合物1的合成，合成路线如下：

具体步骤包括：

1.5g(10mmol)2-氯-7H-吡咯[2,3-d]并嘧啶，3g无水磷酸钾，少量CuI和反式-1,2-环己二胺与10ml二氧六环加入到三口瓶中，然后缓慢加入3.2g(12mmol)3-溴苯甲酮，在110℃，N₂保护下搅拌回流5h。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量二氧六环冲洗固体3次，然后加入饱和NaHCO₃溶液，有机相用3×10mL的饱和食盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤，旋干二氧六环，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：10-1：2过硅胶柱，最后得浅白色固体A，产率为75.5%。消解罐中加入化合物A300mg，对溴苯胺600mg，浓盐酸3ml，正丁醇4ml，密封好后，140℃反应24h。把反应液倒入100ml烧瓶中，加50ml水，用饱和碳酸钠溶液调节PH=6-7，3×50ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干乙酸乙酯，得到固体用水洗3次，再用正己烷洗涤3次，过滤，收集滤饼，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1:10-1：1过硅胶柱，最后得130mg固体，即本发明的化合物1。核磁谱图：6.7785(s,1H);7.4534(d,2H);7.6146(t,2H);7.7279(t,1H);7.8269(m,5H);7.9714(d,2H);8.1716(d,2H);8.8671(s,1H);9.7563(s,1H)。

实施例2

化合物2的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

3.5g2,5-二溴苯甲酸与20ml甲醇加入100ml单口瓶中，室温下搅拌缓慢加入10ml浓硫酸，加完浓硫酸后搅拌10分钟开始加热回流，反应8h，用薄层色谱板检测反应，反应结束后，旋干多余甲醇，加入50ml水，过滤，得到白色固体，产率大于85%。1.5g(10mmol)2-氯-7H-吡咯[2,3-d]并嘧啶，3g无水磷酸钾，少量CuI和反式-1,2-环己二胺与10ml二氧六环加入到三口瓶中，加入3.0g2,5-二溴苯甲酸甲酯，在110℃下搅拌回流6h。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量二氧六环冲洗固体3次，然后加入饱和NaHCO₃溶液，有机相用3×10mL的饱和食盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤，旋干二氧六环，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1:10-1：1过硅胶柱，最后得浅白色固体，产率为75.5%。消解罐中加入化合物B300mg，茴香胺500mg，浓盐酸3ml，正丁醇4ml，密封好后，140℃反应过夜。把反应液倒入100ml烧瓶中，加50ml水，用饱和碳酸钠溶液调节PH=6-7，3×50ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干乙酸乙酯，得到固体用水洗3次，再用正己烷冲洗3次，过滤，收集滤饼，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1:10-1：1过硅胶柱，最后分离得到产物79mg，即本发明的化合物2。核磁谱图：3.812(s,3H);3.970(s,3H);6.675(t,1H);6.93(q,2H);7.261(d,1H);7.378(m,2H);7.585(d,1H);8.167(q,2H);8.272(t,1H);8.376(t,1H);8.600(m,1H)。

实施例3

化合物3的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

1.5g(10mmol)2-氯-7H-吡咯[2,3-d]并嘧啶，3g无水磷酸钾，少量CuI和反式-1,2-环己二胺与10ml二氧六环加入到三口瓶中，然后缓慢加入4.5g2,5-二溴吡啶，在110℃搅拌回流5h。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量二氧六环冲洗固体3次，然后加入饱和NaHCO₃溶液，有机相用3×10mL的饱和食盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤，旋干二氧六环，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：10-1：2过硅胶柱，最后得浅白色固体950mg。消解罐中加入化合物C300mg，茴香胺600mg，浓盐酸3ml，正丁醇4ml，密封好后，140℃反应过夜。把反应液倒入100ml烧瓶中，加50ml水，用饱和碳酸钠溶液调节PH=6-7，3×50ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干乙酸乙酯，得到固体用水洗3次，再用正己烷冲洗3次，过滤，收集滤饼，用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1:10-1：1过硅胶柱，最后得70mg固体，即本发明的化合物3。核磁谱图：6.617(d,4H);6.944(t,2H);7.528(d,2H);7.903(d,1H);8.115(s,3H);8.528(d,2H); 8.565(s,1H);8.622(s,1H)。

实施例4

化合物4的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

3g(22mmol)5-溴-2,4-二氯嘧啶，4.0g苯胺，4.0g碳酸钾，30ml水和30ml异丙醇加入到100ml三口瓶中，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入100ml烧杯中，加入50ml水室温搅拌，过滤，最后得白色固体，烘干固体，产率90%以上。用50ml二氧六环溶解浅1g黄色固体，加入2.5g3,4,5-三甲氧基苯胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次。旋干，得到灰白色固体，加入30ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，得灰白色固体。用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：2过硅胶柱，最后得灰白色固体，即本发明的化合物4，产率为67.7%。核磁谱图：1.433(t,3H);3.758(s,6H);3.849(s,3H);4.445(m,2H);6.776(s,2H);7.084(t,1H);7.262(d,1H);7.436(t,1H);8.071(d,1H);8.207(s,1H);8.743(d,1H);8.764(s,1H)。

实施例5

化合物5的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

1）3g(22mmol)5-溴-2,4-二氯嘧啶，4.5g（35mmol）茴香胺，4.0g碳酸钾，30ml水和30ml异丙醇加入到100ml三口瓶中，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入100ml烧杯中，加入50ml水室温搅拌，过滤，最后得淡黄色固体，烘干固体，产率90%以上。

2）取出1g步骤1）得到的该浅淡黄色固体溶于50ml二氧六环溶解，加入2.5g3,4,5-三甲氧基苯胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次。旋干，得到淡黄色固体，加入30ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，得淡黄色固体。用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：2过硅胶柱，最后得灰白色固体，即本发明的化合物5，产率为56.7%。核磁谱图：3.658(s,5H);3.813(5H,m);6.728(s,2H);6.884(d,2H);7.212(s,1H);7.409(d,2H);8.053(s,1H)。

实施例6

化合物6的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

用50ml二氧六环溶解1.5g实施例5中步骤1）得到的浅黄色固体，加入2.1g3,4-二甲氧基苯胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到深红色固体。用展开剂二氯甲烷过硅胶柱，最后得淡白色固体，即本发明的化合物6，产率为85.2%。核磁谱图：3.600(s,3H);3.77(s,3H);6.70(s,3H);6.81(d,1H);6.91(t,3H);7.02(s,1H);7.08(d,1H);7.19(s,1H);7.36(t,2H);8.02(s,1H)。

实施例7

化合物7的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

用50ml二氧六环溶解实施例5中步骤1）得到的浅黄色固体1.5g，加入1.5g茴香胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到深红色固体。加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，得淡红色固体。用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：2过硅胶柱，最后得乳白色固体，即本发明的化合物7，产率为78.1%。核磁谱图：3.816(q,5H);6.811(t,2H);6.896(q,2H);7.114(s,1H);7.368(q,2H);7.425(m,2H);8.025(s,1H)。

实施例8

化合物8的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

取邻氨基苯甲酸2.5g溶于50ml二氧六环，加入实施例5中步骤1）得到的浅黄色固体1g，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到灰色固体。加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后得浅黄色固体，即本发明的化合物8，产率为71.5%。核磁谱图：3.771(s,3H);6.922(s,2H);7.214(q,2H);7.466(q,3H);7.933(s,1H);8.048(s,1H);8.199(s,1H);8.542(s,1H);9.438(s,1H)。

实施例9

化合物9的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

1）取间氨基苯甲酸乙酯16g，加入15g5-溴-2,4-二氯嘧啶，30g碳酸钾，80ml异丙醇和80ml水，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入250ml烧杯中，加入150ml水室温搅拌，过滤，最后得淡黄色固体，烘干固体，产率90%以上。

2）用50ml二氧六环溶解步骤1）得到的浅黄色固体2g，加入3.0g茴香胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到灰色固体。加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后得浅灰色固体，即本发明的化合物9，产率为81.5%。核磁谱图：1.37(s,3H);3.79(s,3H);4.37(s,2H);6.81(s,2H);7.26(t,1H);7.39(q,3H);7.83(s,1H);7.90(s,1H);7.91(s,1H);7.92(s,1H)。

实施例10

化合物10的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

用50ml二氧六环溶解实施例9中步骤1）得到的浅黄色固体2g，加入3.5g3,4-二甲氧基苯胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到深灰色固体。并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后得浅灰色固体，即本发明的化合物10，产率为83.6%。核磁谱图：1.379(t,3H);3.704(s,3H);3.868(s,3H);4.368(t,2H);6.781(m,1H);6.986(s,1H);7.045(q,1H);7.261(s,1H);7.398(q,1H);7.823(t,1H);7.922(s,1H);7.945(s,1H);8.113(s,1H)。

实施例11

化合物11的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

用50ml二氧六环溶解实施例9中步骤1）得到的浅黄色固体2g，加入2.5g3,4-二甲氧基苯胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到淡黄色固体。并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后得淡黄色固体，即本发明的化合物11，产率为65.6%。核磁谱图：1.372(s,3H);3.668(s,5H);3.824(d,3H);4.365(t,2H);6.715(s,2H);7.395(t,3H);7.874(q,1H);7.944(d,1H);8.029(s,1H);8.095(s,1H)。

实施例12

化合物12的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

1）15g对氨基苯甲酸与100g无水乙醇加入到250ml三口瓶中，室温搅拌，缓慢滴加16g浓硫酸，滴加完浓硫酸后，搅拌10min后加热至回流，反应过夜，用薄层色谱板检测反应，反应结束后，反应液由浑浊变澄清。减压除去多余甲醇，加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液，将pH调至8-9，分离得到有机相，水相中加入少量乙酸乙酯反萃，合并有机相，加入无水硫酸镁干燥，过滤，旋干，得到白色固体对氨基苯甲酸乙酯。

2）步骤1）得到的对氨基苯甲酸乙酯16g，加入15g5-溴-2,4-二氯嘧啶，30g碳酸钾，80ml异丙醇和80ml水，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入250ml烧杯中，加入150ml水室温搅拌，过滤，最后得淡黄色固体，烘干固体，产率90%以上。

3）取步骤2）得到的淡黄色固体2.1g溶于50ml二氧六环，加入3,4,5-三甲氧基苯胺2.5g， 1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次，得到灰色固体。加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，最后得浅白色固体，即本发明的化合物12，产率为62.4%。核磁谱图：1.318(s,3H);3.575(s,4H);4.290(d,2H);6.969(t,2H);7.870(s,4H);8.310(s,1H);8.871(s,1H);9.300(s,1H)。

实施例13

化合物13的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

1）1.5g(22mmol)5-溴-2,4-二氯嘧啶，2g（35mmol）间溴苯胺，2g碳酸钾，20ml水和20ml异丙醇加入到100ml三口瓶中，在室温下搅拌过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙醇冲洗固体3次，收集固体放入100ml烧杯中，加入50ml水室温搅拌，过滤，最后得浅黄色固体，烘干固体，产率90%以上。

2）用50ml二氧六环溶解1g步骤1）得到的浅黄色固体，加入1.8g茴香胺，1.5g对甲基苯磺酸，少量DMF，100°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次。旋干，得到黄色固体，加入30ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，得黄色固体。用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：2过硅胶柱，最后得浅黄色固体，即本发明的化合物13，产率为45.5%。核磁谱图：3.824(s,3H);6.874(d,2H);7.138(t,1H);7.260(m,1H);7.374(s,2H);7.436(t,4H);8.107(d,1H)。

实施例14

化合物14的合成，合成路线如下：

具体合成步骤包括：

用50ml二氧六环溶解实施例13中步骤1）得到的浅黄色固体1g，加入2.5g3,4,5-三甲氧基苯胺，1g对甲基苯磺酸，少量DMF，50°C搅拌反应过夜。用薄层色谱板检测反应，反应结束，过滤固体，并用少量乙酸乙酯冲洗固体3次。旋干，得到深黄色固体，加入20ml水，并用3×10ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，旋干，得黄色固体。用展开剂乙酸乙酯：石油醚=1：2过硅胶柱，最后得黄色固体，即本发明化合物14，产率为68.5%。核磁谱图：3.655(s,3H);3,767(d,3H);6.665(d,2H);7.192(s,1H);7.383(s,1H);8.061(s,1H)。

实施例15

化合物1的盐酸盐，合成步骤如下：将10mmol的实施例1制备的化合物1溶解在10ml的四氢呋喃中，通入干燥的氯化氢，常温反应2h，析出白色固体，用20ml的***重结晶，得到化合物1的纯净的盐酸盐。核磁谱图数据：6.7785(s，1H)；7.4534(d，2H)；7.6146(t，2H)；7.7279(t，1H)； 7.8269(m,5H)；7.9714(d，2H)；8.1716(d，2H)；8.8671(s,1H)；9.7563(s，1H)。

实施例16

化合物1的硫酸盐，合成步骤如下：将10mmol实施例1制备的化合物1溶解在10ml的乙醇中，将10mmol硫酸加入到上述溶液中，100摄氏度加热回流，直至溶液澄清，慢慢降至室温，从75摄氏度到室温的时间段维持1-2h,有白色固体析出，即为化合物1的硫酸盐，记作化合物16，核磁谱图数据：6.7785(s,1H)；7.4534(d，2H)；7.6146(t，2H)；7.7279(t，1H)；7.8269(m,5H)；7.9714(d，2H)；8.1716(d，2H)；8.8671(s,1H)；9.7563(s，1H)。

实施例17

化合物2的盐酸盐，合成步骤如下：将10mmol实施例2制备的化合物2溶解在10ml的四氢呋喃中，通入干燥的氯化氢，常温反应2h，析出白色固体，用20ml的***重结晶，得到化合物2的纯净的盐酸盐。

实施例18

化合物2的硫酸盐，合成步骤如下：将10mmol实施例2制备的化合物2溶解在15ml的乙醇中，将10mmol硫酸加入到上述溶液中，100摄氏度加热回流，直至溶液澄清，慢慢降至室温，从75摄氏度到室温的时间段维持1-1.5h，有白色固体析出，即为化合物2的硫酸盐。

细胞毒性实验

实验方法：

取生长状态良好，处于对数生长期的HepG2细胞，铺于96孔板内，分为PBS阴性对照组和加药组。其中加药组包含(0.1,0.2,0.5,1,2,5,10,20,50,100,200,500umol/L)12个不同剂量组，每组4个复孔。给予实验干预后，在体积分数5%CO₂，37℃恒定湿度的细胞培养箱中继续培养24h，弃去旧培养液，每孔内加入100μl无菌PBS和10μlCCK-8试剂，轻轻晃动10min，放入37℃孵育箱继续培养4h，然后弃培养基，在显微镜下观察细胞生长状态，最后用酶标仪于450nm处检测各孔紫外吸光度值，检测给予干预因素后细胞活力的变化。按公式计算细胞存活率：细胞存活率（T/C%）=（干预组OD/未干预细胞组OD）×100。

实验结果概述：

在目前本发明合成的14个化合物中，并已经测得其中的5个化合物对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用，有4个化合物具有较好的细胞毒性效果：1号化合物对HepG2肝癌细胞有较强的生长抑制作用，浓度在1umol时可以抑制80%以上细胞的生长，在5umol浓度的数据，可能由于操作等其它原因导致实验结果错误（如图1所示）；3号化合物在10umol浓度下对HepG2肝癌细胞有较强的生长抑制作用（如图2所示）；5号化合物在2umol对HepG2肝癌细胞明显的抑制作用，能够抑制40%左右的细胞的生长，5umol可以抑制90%以上细胞的生长（如图3所示）；13号化合物在5-50umol范围内对细胞有生长抑制作用，且具有良好的量效关系（如图4所示）。

Claims

1.一类嘧啶类化合物，选自以下化合物中的任意一种：

化合物4，结构如下：

化合物5，结构如下：

化合物6，结构如下：

化合物7，结构如下：

化合物8，结构如下：

化合物9，结构如下：

化合物10，结构如下：

化合物11，结构如下：

2 -->

化合物12，结构如下：

化合物13，结构如下：

或者，

化合物14，结构如下：

2.权利要求1所述的嘧啶类化合物与酸形成的加成盐，其特征在于：所述的酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或精氨酸。