CN103053792A - 一种复合益生菌的生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合益生菌的生产工艺，具体步骤为：（1）育种：①配制培养液，加热溶解后糖化，得到糖化液；②将糖化液高温灭菌，冷却后得到育种培养基；③将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种接入育种培养基内进行培养，得到四种成熟菌液；（2）发酵：①将豆粕和麸皮混合后灭菌，得到固体物料；②将四种成熟菌液分别加入到稀释液中，稀释后得到四种稀释菌液；③将四种稀释菌液分别接种到固体物料中进行发酵，得到四种发酵物料；（3）干燥、包装：①将四种发酵物料混合后进行第一次干燥；②第二次干燥；③第三次干燥；④粉碎、输出、包装，得到复合益生菌产品。本发明工艺可实现大规模、连续化生产，适于工业生产。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种复合益生菌的生产工艺。
背景技术
随着目前饲料工业的迅猛发展，各种饲料添加剂也呈现多样化趋势，由于抗生素的多种弊端逐渐显现，复合益生菌以其可调节动物肠道菌群结构、改善动物体内消化酶活性、改善动物生产性能、提高动物机体免疫能力的优良特性逐渐成为畜牧养殖业不可或缺的饲料添加组分。
目前，我国复合益生菌的研制开发和应用尚处于初级阶段，绝大多数复合益生菌的生产方法仅为实验室制备方法的简单扩大化，不适于大规模、连续化的工业生产，而且对温度、发酵时间的控制不够严格，导致存在保质期短、益生菌种群结构演变、生物活性低的问题。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有技术中存在的问题，提供一种复合益生菌的生产工艺。
本发明为实现上述目的采用的技术方案为：一种复合益生菌的生产工艺，包括以下步骤：
（1）育种：
①将配制好的培养液加入配料罐中，加热至沸腾后，调节pH值至4.5-5.0后转入糖化罐中，向糖化罐中加入糖化酶，60℃下保温糖化2-4h，得到糖化液，其中，糖化酶的加入量为300-400U/g大麦芽；
②将糖化液转入流体加热器内，在5-8s内升温至95-100℃，保温1-1.5h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，5-8s内降温至30-40℃，得到育种培养基；
③将育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别接入四个恒化器中，30-40℃下恒温搅拌培养3天，分别得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液，其中，乳酸菌的接种量为2-4%，双歧杆菌、枯草芽孢杆菌的接种量为4-6%，产朊假丝酵母的接种量为5-7%，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的豆粕、麸皮按5:1的重量比混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.5-1h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液分别转入均盛有等量稀释液的四个稀释罐中，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液，其中，稀释液总重量与四种成熟菌液的总重量的重量比为1:1-2，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.025-0.03%，磺胺嘧啶0.002-0.007%，氯化锰0.01-0.02%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠1-5%，余量为蒸馏水；
③将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有固体物料的立体发酵罐中，29-35℃下发酵36-48h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度110-120℃，干燥3-5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为80-100℃，干燥3-4s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为60-80℃，干燥2-4s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到复合益生菌。
育种阶段步骤①中所述的培养液的重量配比为：大麦芽7.0-12.0g/L, 蛋白胨6.0-8.0g/L，琼脂10.0-12.0 g/L，柠檬酸钠3.0-4.0 g/L，磷酸二氢钾1.5-1.8 g/L，硫酸镁0.075-0.095 g/L，碳酸氢钠2.0-3.0 g/L ，蒸馏水补足。
发酵阶段步骤③中所述乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液总重量与固体物料的总重量的重量比为1:1.2-2。
本发明的一种复合益生菌的生产工艺，具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将2.85kg大麦芽、 2.1kg蛋白胨、3.3kg琼脂、1.05kg柠檬酸钠、0.495kg磷酸二氢钾、0.0255kg硫酸镁、0.75kg碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至300L，加热至沸腾后，调节pH值至4.8后转入糖化罐中，向糖化罐中加入9.98×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化3h，得到311.9kg糖化液；
②将311.9kg糖化液转入流体加热器内，在6s内升温至98℃，保温1.3h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，7s内降温至35℃，得到310.08kg育种培养基；
③将310.08kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按3%、5%、5%、6%的接种量接入四个恒化器中，35℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的1054.4kg豆粕、210.88kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.8h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有143.93kg稀释液的四个稀释罐中，得到221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.028%，磺胺嘧啶0.0045%，氯化锰0.015%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠3%，余量为蒸馏水；
③将221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有352.8kg固体物料的立体发酵罐中，32℃下发酵42h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度115℃，干燥5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为90℃，干燥3s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为70℃，干燥3s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到2185.12kg复合益生菌。
本发明的一种复合益生菌的生产工艺实现生产连续化，便于控制各阶段物料投放、温度、时间等工艺参数，能够有效保证温度、时间等对产品活菌数量及生物有效性的影响。育种阶段采用流动瞬时高温灭菌，有效杀菌，防止育种培养基的污染；发酵阶段稀释液中加入的营养物质能够促进菌种的进一步增值，聚丙烯酸钠起到良好的凝固作用，以保持产品剂型；后期采用阶梯式降温干燥，保证在有效去除产品水分含量的同时不破坏复合益生菌的内部结构，特别适用于大规模工业化生产。
另外，本发明的一种复合益生菌的生产工艺在益生菌进行发酵培养的同时可分泌杆菌肽、乳链菌肽等多种天然抗菌肽，具有良好的抑菌、杀菌活性。多种天然抗菌肽配合复合益生菌作用能够达到一定的增效作用。
以本发明工艺生产的复合益生菌产品的益生菌总数达450亿/g，活菌数量大于4×109cfu/g，抗菌肽含量达80wu/g，具有较好的抗菌效果，既可作为饲料添加剂有效替代抗生素来预防动物疾病，对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用，同时也可直接用作药品有效治疗动物腹泻。
以本发明所述的一种复合益生菌的生产工艺生产的复合益生菌产品，以泰州某猪场断奶仔猪为实验对象，采用以复合益生菌与抗生素等量混合为对照组、全部为复合益生菌为实验组的试验方法，进行动物喂养试验，仔猪腹泻率：实验组为5.2%，对照组为17%；仔猪死亡率：试验组为0，对照组为2.44%。试验结果表明，以本发明的生产工艺生产的复合益生菌具有较强的抗菌活性。
具体实施方式
本发明的一种复合益生菌的生产工艺，包括以下步骤：
（1）育种：
①将配制好的培养液加入配料罐中，加热至沸腾后，调节pH值至4.5-5.0后转入糖化罐中，向糖化罐中加入糖化酶，60℃下保温糖化2-4h，得到糖化液，其中，糖化酶的加入量为300-400U/g大麦芽；
②将糖化液转入流体加热器内，在5-8s内升温至95-100℃，保温1-1.5h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，5-8s内降温至30-40℃，得到育种培养基；
③将育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别接入四个恒化器中，30-40℃下恒温搅拌培养3天，分别得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液，其中，乳酸菌的接种量为2-4%，双歧杆菌、枯草芽孢杆菌的接种量为4-6%，产朊假丝酵母的接种量为5-7%，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的豆粕、麸皮按5:1的重量比混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.5-1h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液分别转入均盛有等量稀释液的四个稀释罐中，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液，其中，稀释液总重量与四种成熟菌液的总重量的重量比为1:1-2，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.025-0.03%，磺胺嘧啶0.002-0.007%，氯化锰0.01-0.02%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠1-5%，余量为蒸馏水；
③将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有固体物料的立体发酵罐中，29-35℃下发酵36-48h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度110-120℃，干燥3-5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为80-100℃，干燥3-4s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为60-80℃，干燥2-4s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到复合益生菌。
育种阶段步骤①中所述的培养液的重量配比为：大麦芽7.0-12.0g/L, 蛋白胨6.0-8.0g/L，琼脂 10.0-12.0 g/L，柠檬酸钠3.0-4.0 g/L，磷酸二氢钾1.5-1.8 g/L，硫酸镁0.075-0.095 g/L，碳酸氢钠 2.0-3.0 g/L ，蒸馏水补足。优选的培养液的配方最终制得的培养基能够为本发明工艺中的四种益生菌提供优良的生长环境，使扩大增值最大化。
发酵阶段步骤③中所述乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液总重量与固体物料的总重量的重量比为1:1.2-2。优选的重量比能够保证本发明工艺的复合益生菌产品中的蛋白质含量保持在合适的范围，有利于接受喂养的动物吸收益生菌、抗菌肽后达到最优效果。
本发明的一种复合益生菌的生产工艺还可将各阶段物料称重、投放及温度、时间的控制等多处操作设置为微机控制***进行控制，实现自动化生产，从而进一步简化工艺流程。
本发明的一种复合益生菌的生产工艺可以有以下具体的实施例：其中，本发明实施例所采用的箭式接种机为200型箭式接种机。
实施例1，具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将700g大麦芽、600g蛋白胨、1000g琼脂、300g柠檬酸钠、150g磷酸二氢钾、7.5g硫酸镁、200g碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至100L，加热至沸腾后，调节pH值至4.5后转入糖化罐中，向糖化罐中加入2.1×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化2h，得到104.6kg糖化液；
②将104.6kg糖化液转入流体加热器内，在5s内升温至95℃，保温1h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，5s内降温至30℃，得到103.8kg育种培养基；
③将103.9kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按2%、4%、4%、5%的接种量接入四个恒化器中，30℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到26.1kg乳酸菌成熟菌液、26.23kg双歧杆菌成熟菌液、26.31kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、26.27kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的209.71kg豆粕、41.94kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.5h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将26.1kg乳酸菌成熟菌液、26.23kg双歧杆菌成熟菌液、26.31kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、26.27kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有26.2kg稀释液的四个稀释罐中，得到52.3kg乳酸菌的稀释菌液、52.43kg双歧杆菌的稀释菌液、52.51kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、52.47kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.025%，磺胺嘧啶0.002%，氯化锰0.01%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠1%，余量为蒸馏水；
③将52.3kg乳酸菌的稀释菌液、52.43kg双歧杆菌的稀释菌液、52.51kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、52.47kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有62.91kg固体物料的立体发酵罐中，29℃下发酵36h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到115.21kg乳酸菌发酵物料、115.34kg双歧杆菌发酵物料、115.42kg枯草芽孢杆菌发酵物料、115.38kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将115.21kg乳酸菌发酵物料、115.34kg双歧杆菌发酵物料、115.42kg枯草芽孢杆菌发酵物料、115.38kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度110℃，干燥3s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为80℃，干燥3s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为60℃，干燥2s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到452.42kg复合益生菌，检测复合益生菌数量达425亿/g。
实施例2，具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将2.4kg大麦芽、1.6kg蛋白胨、2.4kg琼脂、0.8kg柠檬酸钠、0.36kg磷酸二氢钾、0.019kg硫酸镁、0.6kg碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至200L，加热至沸腾后，调节pH值至5.0后转入糖化罐中，向糖化罐中加入9.6×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化4h，得到212.44kg糖化液；
②将212.44kg糖化液转入流体加热器内，在8s内升温至100℃，保温1.5h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，8s内降温至40℃，得到210.18kg育种培养基；
③将210.18kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按4%、6%、6%、7%的接种量接入四个恒化器中，40℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到52.10kg乳酸菌成熟菌液、53.06kg双歧杆菌成熟菌液、52.59kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、53.13kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的1054.4kg豆粕、210.88kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持1h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将52.10kg乳酸菌成熟菌液、53.06kg双歧杆菌成熟菌液、52.59kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、53.13kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有105.44kg稀释液的四个稀释罐中，得到157.54kg乳酸菌的稀释菌液、158.5kg双歧杆菌的稀释菌液、158.03kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、158.57kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.03%，磺胺嘧啶0.007%，氯化锰0.02%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠5%，余量为蒸馏水；
③将157.54kg乳酸菌的稀释菌液、158.5kg双歧杆菌的稀释菌液、158.03kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、158.57kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有316.32kg固体物料的立体发酵罐中，35℃下发酵48h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到473.86kg乳酸菌发酵物料、474.82kg双歧杆菌发酵物料、474.35kg枯草芽孢杆菌发酵物料、474.89kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将473.86kg乳酸菌发酵物料、474.82kg双歧杆菌发酵物料、474.35kg枯草芽孢杆菌发酵物料、474.89kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度120℃，干燥5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为100℃，干燥4s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为80℃，干燥4s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到1872.92kg复合益生菌，检测复合益生菌数量达435亿/g。
实施例3，具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将2.85kg大麦芽、2.1kg蛋白胨、3.3kg琼脂、1.05kg柠檬酸钠、0.495kg磷酸二氢钾、0.0255kg硫酸镁、0.75kg碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至300L，加热至沸腾后，调节pH值至4.8后转入糖化罐中，向糖化罐中加入9.98×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化3h，得到311.9kg糖化液；
②将311.9kg糖化液转入流体加热器内，在6s内升温至98℃，保温1.3h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，7s内降温至35℃，得到310.08kg育种培养基；
③将310.08kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按3%、5%、5%、6%的接种量接入四个恒化器中，35℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的1054.4kg豆粕、210.88kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.8h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有143.93kg稀释液的四个稀释罐中，得到221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.028%，磺胺嘧啶0.0045%，氯化锰0.015%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠3%，余量为蒸馏水；
③将221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有352.8kg固体物料的立体发酵罐中，32℃下发酵42h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度115℃，干燥5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为90℃，干燥3s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为70℃，干燥3s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到2185.12kg复合益生菌，检测复合益生菌数量达450亿/g。
实施例4，具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将2.45kg大麦芽、2.8kg蛋白胨、3.5kg琼脂、1.05kg柠檬酸钠、0.63kg磷酸二氢钾、0.0263kg硫酸镁、1.05kg碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至350L，加热至沸腾后，调节pH值至5.0后转入糖化罐中，向糖化罐中加入7.84×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化2h，得到368.29kg糖化液；
②将368.29kg糖化液转入流体加热器内，在5s内升温至100℃，保温1h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，8s内降温至30℃，得到365.42kg育种培养基；
③将365.42kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按2%、6%、4%、6%的接种量接入四个恒化器中，40℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到90.27kg乳酸菌成熟菌液、89.36kg双歧杆菌成熟菌液、87.15kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、88.54kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的1065.95kg豆粕、213.19kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持1h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将90.27kg乳酸菌成熟菌液、89.36kg双歧杆菌成熟菌液、87.15kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、88.54kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有88.83kg稀释液的四个稀释罐中，得到178.23kg乳酸菌的稀释菌液、175.84kg双歧杆菌的稀释菌液、175.9kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、176.28kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.025%，磺胺嘧啶0.0059%，氯化锰0.02%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠4%，余量为蒸馏水；
③将178.23kg乳酸菌的稀释菌液、175.84kg双歧杆菌的稀释菌液、175.9kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、176.28kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有319.78kg固体物料的立体发酵罐中，30℃下发酵48h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到498.28kg乳酸菌发酵物料、497.18kg双歧杆菌发酵物料、493.25kg枯草芽孢杆菌发酵物料、495.21kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将498.28kg乳酸菌发酵物料、497.18kg双歧杆菌发酵物料、493.25kg枯草芽孢杆菌发酵物料、495.21kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度110℃，干燥5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为80℃，干燥4s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为80℃，干燥2s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到1787.96kg复合益生菌，检测复合益生菌数量达440亿/g。
Claims (4)
1.一种复合益生菌的生产工艺，其特征在于：包括以下步骤：
（1）育种：
①将配制好的培养液加入配料罐中，加热至沸腾后，调节pH值至4.5-5.0后转入糖化罐中，向糖化罐中加入糖化酶，60℃下保温糖化2-4h，得到糖化液，其中，糖化酶的加入量为300-400U/g大麦芽；
②将糖化液转入流体加热器内，在5-8s内升温至95-100℃，保温1-1.5h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，5-8s内降温至30-40℃，得到育种培养基；
③将育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别接入四个恒化器中，30-40℃下恒温搅拌培养3天，分别得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液，其中，乳酸菌的接种量为2-4%，双歧杆菌、枯草芽孢杆菌的接种量为4-6%，产朊假丝酵母的接种量为5-7%，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的豆粕、麸皮按5:1的重量比混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.5-1h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的成熟菌液分别转入均盛有等量稀释液的四个稀释罐中，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液，其中，稀释液总重量与四种成熟菌液的总重量的重量比为1:1-2，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.025-0.03%，磺胺嘧啶0.002-0.007%，氯化锰0.01-0.02%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠1-5%，余量为蒸馏水；
③将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有固体物料的立体发酵罐中，29-35℃下发酵36-48h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料；
（3）干燥、包装：：
①先将乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度110-120℃，干燥3-5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为80-100℃，干燥3-4s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为60-80℃，干燥2-4s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到复合益生菌。
2.根据权利要求1所述的一种复合益生菌的生产工艺，其特征在于：育种阶段步骤①中所述的培养液的重量配比为：大麦芽7.0-12.0g/L, 蛋白胨6.0-8.0g/L，琼脂10.0-12.0 g/L，柠檬酸钠3.0-4.0 g/L，磷酸二氢钾1.5-1.8 g/L，硫酸镁0.075-0.095 g/L，碳酸氢钠2.0-3.0 g/L ，蒸馏水补足。
3.根据权利要求1所述的一种复合益生菌的生产工艺，其特征在于：发酵阶段步骤③中所述乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的稀释菌液总重量与固体物料的总重量的重量比为1:1.2-2。
4.根据权利要求1所述的一种复合益生菌的生产工艺，其特征在于：具体的工艺步骤如下：
（1）育种：
①将2.85kg大麦芽、2.1kg蛋白胨、3.3kg琼脂、1.05kg柠檬酸钠、0.495kg磷酸二氢钾、0.0255kg硫酸镁、0.75kg碳酸氢钠加入配料罐中，蒸馏水补足至300L，加热至沸腾后，调节pH值至4.8后转入糖化罐中，向糖化罐中加入9.98×105 U的糖化酶，60℃下保温糖化3h，得到311.9kg糖化液；
②将311.9kg糖化液转入流体加热器内，在6s内升温至98℃，保温1.3h，高温灭菌，灭菌后的糖化液流经降温管道，7s内降温至35℃，得到310.08kg育种培养基；
③将310.08kg育种培养基平均分配到四个恒化器中，将实验室培养好的乳酸菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的菌种用箭式接种机分别按3%、5%、5%、6%的接种量接入四个恒化器中，35℃下恒温搅拌培养3天，乳酸菌、双歧杆菌密封培养，接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的恒化器的通气量为1.8L/分钟，分别得到74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液；
（2）发酵：
①将洗净、粉碎后的1054.4kg豆粕、210.88kg麸皮混合后装入固体物料灭菌器中，在120℃下保持0.8h，然后将灭菌后的固体物料平均分配到四个立体发酵罐中；
②将74.52kg乳酸菌成熟菌液、76.84kg双歧杆菌成熟菌液、77.5kg枯草芽孢杆菌成熟菌液、77.43kg产朊假丝酵母成熟菌液分别转入均盛有143.93kg稀释液的四个稀释罐中，得到221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液，稀释液的组分及含量为：硫酸亚铁0.028%，磺胺嘧啶0.0045%，氯化锰0.015%，柠檬酸2%，聚丙烯酸钠3%，余量为蒸馏水；
③将221.42kg乳酸菌的稀释菌液、216.45kg双歧杆菌的稀释菌液、219.67kg枯草芽孢杆菌的稀释菌液、221.43kg产朊假丝酵母的稀释菌液分别接种到四个装有352.8kg固体物料的立体发酵罐中，32℃下发酵42h，接种有乳酸菌、双歧杆菌的立体发酵罐密封发酵，接种有枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母的立体发酵罐的通气量为3L/分钟，得到570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料；
（3）干燥、包装：
①先将570.25kg乳酸菌发酵物料、571.54kg双歧杆菌发酵物料、572.14kg枯草芽孢杆菌发酵物料、571.01kg产朊假丝酵母发酵物料加入混合机内混合均匀，混合后输送到第一干燥机内，热风温度115℃，干燥5s；
②第一干燥机输出的物料进入第二干燥机，热风温度为90℃，干燥3s；
③第二干燥机输出的物料进入第三干燥机，热风温度为70℃，干燥3s；
④将干燥完成后的物料粉碎至60目，经降温螺旋输送机输出，包装，得到2185.12kg复合益生菌。
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