CN103040864B

CN103040864B - 磷酸硒盐复合物的医药用途

Info

Publication number: CN103040864B
Application number: CN201210572201.XA
Authority: CN
Inventors: 李福初; 彭锋
Original assignee: SHENZHEN FUSHAN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: SHENZHEN FUSHAN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2012-12-25
Filing date: 2012-12-25
Publication date: 2014-07-30
Anticipated expiration: 2032-12-25
Also published as: CN103040864A

Abstract

本发明提供一种磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O在制备用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症的药物中的用途，其中，X=0~4，n为1或2，当n=1时，M为碱金属或铵离子；当n=2时，M为碱土金属。另外，本发明提供上述磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O在制备用于预防和/或治疗与缺硒有关的人类疾病，例如克山病或白内障的药物中的用途。本发明提供的磷酸硒盐复合物可用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症，包括多种癌症及肿瘤，且没有不良反应和副作用，提高了病人的生存质量，具有极好的依从性。

Description

磷酸硒盐复合物的医药用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及磷酸硒盐复合物的医药用途。

背景技术

自1957年发现硒是人类和动物必需的微元素以来，科学家先后发现了14种硒酶和硒蛋白，分别是4种谷胱甘肽过氧化物酶、3种甲状腺素脱碘酶、3种硫氧还蛋白还原酶、硒代磷酸合成酶2、硒蛋白w、硒蛋白p和15KDa硒蛋白，这些硒酶和硒蛋白除了硒蛋白p外，序列都只含一个硒代半胱氨酸残基（这是酶的活性中心位点）。硒酶和硒蛋白在调节细胞还原状态，清除体内产生的过量活性氧物质等方面发挥着重要作用。

目前，越来越多的证据表明，硒在防癌抗癌方面有着重要意义。根据对许多不同地区的研究，发现肿瘤引发的死亡率与硒的地理分布存在着负相关的关系。1969年，Shamberger等首先报导了美国一些城市和地区土壤及谷物中的硒水平与人类癌症的发病率之间存在着负相关关系。将美国的州和城市分成高、中、低硒地区，发现膳食中硒水平与几种消化道的死亡率呈负相关关系。Shamberger将这方面的研究工作扩展到27个国家和地区，结果表明，癌症的死亡率与这些国家中主食的硒含量呈负相关关系。该研究中包括的癌有乳腺癌、子宫癌、直肠癌、***癌及血癌等。

大量流行病学研究和干预实验显示，硒化合物在预防***癌、肝癌、皮肤癌、食管癌、肺癌、直肠癌等癌症方面发挥着重要作用。中国医学院于树玉等从1982年起对肝癌高发的启东县居民进行补硒预防肝病的实验，历时三年，结果表明，补硒能降低人群肝炎和肝癌的发病率。Yohizawa等在1998年报道趾甲硒水平（1987年测定）较高的人群患***癌危险（1989年至1994年期间诊断）仅是趾甲硒水平较低的人群的一半。Clark等最先通过临床研究发现补硒（硒酵母）能预防***癌。

目前美国正在进行一个硒和维生素E癌症预防试验（简称SELECT）。这个随机的、前瞻性的、双盲实验从2001年开始，预计到2013年结束。研究者试图通过对32400名健康男性进行跟踪调查，考察单独使用硒、单独使用维生素E，以及两者结合使用能否降低健康人患***癌的风险。

流行病学的发现已将硒缺乏与癌症风险增加相关连。硒的保护作用是各种机制的结合。例如Naithani的综述（Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, 8(7), Page 657-668，2008）认为硒剂至少在以下分子生物学方面的作用与防癌抗癌相关：（a）硒蛋白/硒酶的保护作用；（b）诱导细胞凋亡；（c）免疫***的影响；（d）拮抗金属的解毒作用；（e）灭活核转录因子；（f）调节脂氧合酶；（g）对晚期癌症的作用；（h）氧化应激的还原作用；（i）诱导II相酶；（j）下调雄激素受体；（k）抑制加合物的形成；及（l）细胞周期停滞等。

从硒与癌症之间的联系来看，硒化合物对于治疗性发明是一个有吸引力的目标。然而，迄今为止还没有适当的硒剂被批准用于治疗癌症。

Sugie对几种新合成的有机硒的抗癌作用进行了综述（Journal of Health Science, 46(6), 422-425 (English) 2000），新合成的有机硒分别是甲氧基苯硒酚（MBS）、苯甲硒氰（BSC）和对苯二亚甲基硒化合物（p-XSC）。其中，MBS可减少苯唑芘诱导的CD-1雌鼠前胃肿瘤，以及氧化偶氮甲烷（AOM）诱导的F344雌性大鼠的结肠、肝、肾肿瘤；BSC对AOM诱导的F344雄性大鼠结肠癌和肝癌前变以及二甲基苯[a]并三苯（DMBA）诱导的SD雌性大鼠的乳腺癌有效；p-XSC可减少A/J雌性小鼠的AOM诱导的结肠癌和4-（甲基）-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（NNK）诱导的肺癌、DMBA诱导的SD雌性大鼠的乳腺癌和4-硝基氧化物（4-NQO）诱导的F344雄性大鼠的舌癌。另外，BSC可增加肾、结肠和小肠的硒依赖的谷胱甘肽过氧化物酶，已发现用BSC处理的大鼠的肝脏细胞色素P450总量增加。用AOM处理后，采用BSC喂饲的实验组小鼠结肠DNA的O6-甲基鸟嘌呤和7-甲基鸟嘌呤比对照组明显减少，上述结果显示喂饲BSC可诱导酶对致癌物的羟化或氧化，减少DNA的烷化。p-XSC抑制NNK诱导的A/J小鼠和F344大鼠的肺氧化损害、大鼠乳腺组织的DMBA-DNA加合物和诱导细胞凋亡。

尽管硒剂在预防和治疗癌症方面显示出前景，但只有极少数的硒剂具有实验性抗癌活性，到目前为止，仅有美国SELECT计划的p-XSC进入临床研究，我国有硒化卡拉胶和乙烷硒啉申请临床研究。目前全球还没有一种硒剂被批准用于癌症的防治。普遍硒剂的药效剂量与安全剂量方便还存在缺憾，还不能满足医药产品的属性要求，因此开发具有防癌抗癌功效的硒剂具有重要意义。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O在制备用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症的药物中的用途，其中，X=0~4，n为1或2，当n=1时，M为碱金属或铵离子；当n=2时，M为碱土金属。

优选地，所述磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O中，n=1，M为锂、钠、钾或铵离子；或者n=2，M为镁、钙或钡。

进一步地，上述过度增殖性病症为：肿瘤，例如癌症；癌变前的非肿瘤性增殖性病症或非恶性过度增殖性病症；

优选地，所述肿瘤选自乳腺癌；骨肉瘤；血管肉瘤；纤维肉瘤；白血病；淋巴瘤；窦瘤；卵巢癌；尿道癌；膀胱癌；泌尿生殖器癌，优选***癌；胃肠道癌症，优选结肠癌、食道癌及胃癌；肺癌；骨髓瘤；胰腺癌；肝癌；肾癌；内分泌癌；皮肤癌；平滑肌癌；食管癌；非小细胞肺癌；脑或中枢神经***和外周神经***的恶性或良性肿瘤，优选胶质瘤和神经母细胞瘤；非霍奇金淋巴瘤；卵巢肿瘤；***肿瘤；乳腺肿瘤；肾脏肿瘤；结肠肿瘤；胰腺肿瘤；脑肿瘤；黑素瘤；肺肿瘤及胃肿瘤中的一种或多种；

优选地，所述癌变前的非肿瘤性增殖性病症或非恶性过度增殖性病症选自骨髓增生异常病症；原位***；家族性肠息肉，优选加德纳综合征；口腔白斑；组织细胞增生病；瘢痕疙瘩；血管瘤；子宫肌瘤；良性***增生症；过度增殖性动脉狭窄；炎性关节炎；角化过度和丘疹鳞屑性疹；及病毒诱发的过度增殖性疾病，优选疣和疱疹病毒诱发的疾病以及瘢痕形成，进一步优选感染性单核细胞增多症中的一种或多种。

优选地，本发明的磷酸硒盐复合物可以非常有效地对抗多种过度增殖性疾病（包括肿瘤），并且可用作抗肿瘤剂。例如，本发明的磷酸硒盐复合物可有效对抗卵巢肿瘤、***肿瘤、乳腺肿瘤、肾脏肿瘤、结肠肿瘤、胰腺肿瘤、脑肿瘤和黑素瘤等。

所述用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症的药物包含磷酸硒盐复合物和药学上可接受的辅料。

所述药学上可接受的辅料选自固体载体、液体载体、调味剂、粘合剂、溶解剂、崩解剂、润湿剂、甜味剂、助溶剂、乳化剂、等渗剂、吸收剂、降解剂、抗氧化剂、防腐剂、润滑剂、填充剂、染料、抗菌剂、等渗剂、缓冲剂及延缓吸收剂中的一种或多种；

优选地，所述辅料选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、天冬甜素、甘露醇、山梨醇、纤维素、甘氨酸、硬脂酸、硬脂精、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硅酸镁铝、淀粉、明胶、黄蓍胶、***胶、蜡、虫胶、玉米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、甘氨酸、二氧化硅、藻酸、藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、琼脂、水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油、无毒甘油酯、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、氯化钾、柑橙香精、草莓香精、香草香料、樱桃调味剂、薄荷、冬青油、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞、氯化钠、单硬脂酸铝、磷酸二钙、植物油、三醋精、滑石、粘土、微晶纤维素、氧化铝及无毒的聚合物纳米颗粒或微粒中的一种或多种。

优选地，所述药物为适于口服、吸入或喷洒、或注射或输注的药物剂型；优选为片剂、胶囊、锭剂、丸剂、混悬剂、咀嚼片、***片、酏剂、糖浆、粉末或溶液；进一步优选为灌肠液、无菌粉末、无菌水溶液或分散液。

所述药物为适于注射或输注的药物剂型，例如通过胃肠外、静脉内、肌肉内或皮下途径，或者直接注射入过度增殖性组织或细胞内的注射剂；

优选地，所述适于注射或输注的药物剂型注射或输注时溶液的pH值为4.0~7.5，优选6.0~6.5。

优选地，所述药物还可包含其他抗癌剂，所述抗癌剂选自化疗剂、放疗剂、免疫治疗剂、基因治疗剂、激素或生物治疗剂中的一种或多种。

优选地，所述化疗剂选自烷化剂，优选环磷酰胺、卡氮芥、顺铂；抗代谢物，优选氨甲喋呤、5-FU、吉西他滨；细胞毒性抗生素，优选阿霉素、丝裂霉素；及植物衍生物，优选紫杉醇、长春新碱或依托泊苷中的一种或多种。

另外，本发明提供一种磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O在制备用于预防和/或治疗与缺硒有关的人类疾病，例如克山病或白内障的药物中的用途，其中，其中，X=0~4，n为1或2，当n=1时，M为碱金属或铵离子；当n=2时，M为碱土金属。

以下对本发明的技术方案进行详细说明：

本发明的磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O可根据公告号为CN100548931C的中国发明专利中提供的方法制备，该专利中的磷酸硒盐复合物的性质和特征与本发明中描述的一致，其全文通过引用并入本文。

具体地，本发明的磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O可通过以下方法制备，以K₃SeP₃O₁₀的制备为例进行说明。

1、H₂SeO₃的制备

Se+2HNO₃→SeO₂+H₂O+N2O₃

SeO₂+H₂O→H₂ScO₃

2、K₅P₃O₁₀的制备

6H₃PO₄+5K₂CO₃→4K₂HPO₄+2KH₂PO₄+5H₂O+5CO₂

4K₂HPO₄+2KH₂PO₄→2K₅P₃O₁₀+4H₂O

3、K₃SeP₃O₁₀的制备

2K₅P₃O₁₀+2H₂SeO₃→2K₃SeP₃O₁₀+4KOH+O₂

另外，上述K₃SeP₃O₁₀也可直接通过市售的三聚磷酸钾和二氧化硒按以下方法合成制得：

K₅P₃O₁₀+SeO₂+H₂O→K₃SeP₃O₁₀+2KOH+1/2O₂

三聚磷酸的碱金属和碱土金属的盐，如钠、锂、镁、钙、钡、和铵等的三聚磷酸盐可很方便地从市场获得，参照以上方法可方便地制备得到相应的磷酸硒盐。如Ca₃(SeP₃O₁₀)₂可通过下列反应制备：

Ca₅(P₃O₁₀)₂+2SeO₂+2H₂O→Ca₃(SeP₃O₁₀)₂+2Ca(OH)₂+O₂

本发明的磷酸硒盐复合物均可参照上述方法制备。

为使本发明的磷酸硒盐复合物更适宜在人类和动物体上施用，通过上述方法制备得到的磷酸硒盐复合物溶于水后，可采用磷酸将溶液调节到适宜药物应用的pH值（如下式反应），例如pH值4.0~7.5，优选6.0~6.5。除磷酸外，药学上适用的其他酸，如盐酸、硫酸、硝酸、乙酸均可应用于本发明。

H₃PO₄+KOH→KH₂PO₄+H₂O

通过上述方法得到的磷酸硒盐复合物粗品可能含有一定量的水，一般可通过干燥的方法除去部分或全部的水；例如，本领域技术人员可以方便地采用五氧化二磷、氢氢化钠、浓硫酸等作为干燥剂，将上述磷酸硒盐复合物粗品在真空条件下脱水干燥，得到方便存放且适宜制药工业使用的含0~4个结合水或吸附水的磷酸硒盐复合物。

上述磷酸硒盐复合物可通过本领域技术人员熟悉的手段来表征，本发明采用³¹PNMR来表征磷酸硒盐复合物。按照一般性的指引，以磷酸的³¹PNMR来确定相对磷信号的δ值，即设定磷酸的³¹PNMRδ=0ppm，尽管实验条件不同时，化学位移有些改变，但所述磷酸硒盐复合物在3.0~2.2ppm和-5.6~-6.8ppm有峰。

本发明的磷酸硒盐复合物可以全身施用，例如与药学上可接受的辅料（如惰性稀释剂或可吸收的食用性载体）一起口服或者通过吸入或喷洒而施用，如磷酸硒盐复合物及药学上可接受的辅料可被包封入硬壳或软壳明胶胶囊中，或压入片剂中，或者可被直接掺入患者膳食的食物中。对于口服治疗施用而言，所述磷酸硒盐复合物可与一种或多种赋形剂组合并且可以咀嚼片、***片、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆等的形式使用。所述磷酸硒盐复合物可以与微细的惰性粉末载体一起组合并由对象吸入或喷洒。甚至可以制备成灌肠液由腔门或结肠给药。这些组合物和制剂应包含至少0.1%的磷酸硒盐复合物。当然，所述组合物和制剂中磷酸硒盐复合物的百分数可以变化，通常可以是给定单位剂型重量的约1%至约80%。在此可用于治疗的组合物中磷酸硒盐复合物的量是“治疗有效量”或“药用有效量”的量。

所述片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可包含以下物质中的一种或多种：粘合剂比如黄蓍胶、***胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂比如磷酸二钙；崩解剂比如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂比如硬脂酸镁；甜味剂比如蔗糖、果糖、乳糖或天冬甜素；或者调味剂比如薄荷、冬青油或者樱桃调味剂。当所述单位剂型是胶囊时，除了上述类型物质以外，其还可包含液体载体，比如植物油或聚乙二醇。多种其它物质可用作包衣或修饰所述固体单位剂型的物理形式。例如，可利用明胶、蜡、虫胶或糖等将片剂、丸剂或胶囊等包衣。糖浆或酏剂可包含活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂（比如樱桃或柑橙风味的调味剂）等。当然，在制备任何单位剂型中所使用的任何物质都应当是药学上可接受的，并且在所施用量下是基本上无毒的。此外，可将所述磷酸硒盐复合物掺入持续释放制剂和装置中。

另外，还可通过输注或注射静脉内或腹膜内施用所述磷酸硒盐复合物。可在水中（任选地与无毒的表面活性剂混合）制备所述磷酸硒盐复合物的溶液。还可以在甘油、液体聚乙二醇、三醋精、其混合物以及油中制备分散液。在通常的贮存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂以防止微生物的生长。

适于注射或输注的药物剂型可包括含有磷酸硒盐复合物的无菌水溶液或分散液或无菌粉末，其适于即时制备任选地包封在脂质体中的无菌注射溶液或输注溶液或分散液。在所有情形下，最终剂型都应当是无菌流体并且在生产和贮存条件下都应当是稳定的。所述液体载体或运载体可以是溶剂或液体分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等）、植物油、无毒甘油酯以及其合适的混合物。可以例如通过形成脂质体、通过在分散体情形下保持所需粒度或者通过使用表面活性剂来保持合适的流动性。可通过多种抗菌剂和抗真菌剂来防止微生物的作用，所述抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在多种情况下，优选包含等渗剂例如糖、缓冲剂或氯化钠。可通过在组合物中使用延缓吸收剂（例如单硬脂酸铝和明胶）来实现注射用组合物的延长吸收。

通过将所需量的所述磷酸硒盐复合物与多种上述列举的其它成分（如果需要的话）掺入到合适的溶剂中然后过滤除菌而制备无菌注射溶液。在制备无菌注射溶液的无菌粉末时，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，得到存在于前述无菌过滤溶液中的磷酸硒盐复合物和任何其它所需成分的粉末。

对于局部施用而言，可以纯形式施用所述磷酸硒盐复合物。然而，将其与皮肤学可接受的载体（固体或液体载体）一起作为组合物或制剂而施用于皮肤通常是所期望的。可用的固体载体包括微细固体，比如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。其它的固体载体包括无毒的聚合物纳米颗粒或微粒。可用的液体载体包括水、一元醇或二元醇中的任意两种或三种混合物（二元醇包括乙二醇和丙二醇），所述磷酸硒盐复合物可以以有效水平（任选地借助无毒表面活性剂）溶解或分散在液体载体中。另外可加入辅助剂（比如香料和其它抗微生物剂）以优化针对给定用途的性质。所得的液体组合物可以用于浸渍绷带和其它敷料的吸收垫形式施用，或者利用泵式喷雾器或气雾喷雾器喷到感染区域上。

本发明的磷酸硒盐复合物可与其他抗癌剂结合使用，以进行各种治疗。本文中使用的“抗癌剂”能够对对象的癌症造成不利影响，例如，通过杀死一种或多种癌细胞、诱导一种或多种癌细胞的细胞凋亡、减少一种或多种癌细胞的生长速率、减少转移的发生率或数量、减小肿瘤大小、抑制肿瘤生长、减少向肿瘤或者一种或多种癌细胞的血液供应、促进抗一种或多种癌细胞或肿瘤的免疫应答、预防或抑制癌症的发展，或增加患有癌症对象的寿命。抗癌剂是本领域熟知的，包括：化疗剂、放疗剂、免疫治疗剂、基因治疗剂、激素或生物治疗剂，和/或其它治疗剂，另外本发明的磷酸硒盐复合物也可应用于外科手术中。

一般地，化疗剂通过干扰细胞***过程中的多个阶段而杀死肿瘤细胞。存在多种类别的化疗剂，包括烷化剂（例如环磷酰胺、卡氮芥、顺铂），抗代谢物（例如氨甲喋呤、5-FU、吉西他滨），细胞毒性抗生素（例如阿霉素、丝裂霉素）和植物衍生物（例如紫杉醇、长春新碱、依托泊苷）。化疗剂用作白血病、其它血液癌症以及不宜进行手术或转移性的实体癌症的主要治疗。

本发明中公开的磷酸硒盐复合物及药物组合物可施用给任何已知或怀疑患有如本发明中所定义的过度增殖性病症或处于形成所述病症风险中的对象。

另外，也可应用本发明中公开的磷酸硒盐复合物补充硒而预防和治疗有关的人类疾病，包括但不限于克山病、白内障等。本发明中公开的磷酸硒盐复合物也可提供补充微量元素硒的保健应用。

以下对本发明中的相关术语进行说明。

术语“过度增殖性病症”指特征在于细胞的异常或病理性增殖的病症，包括肿瘤，例如癌症；癌变前的非肿瘤性增殖性病症或非恶性过度增殖性病症。

本发明提到的对过度增殖性病症的“治疗”指杀死、抑制或延缓过度增殖性细胞或肿瘤个体或群体的生长或体积增加或延缓癌性生长，减少过度增殖性细胞的数目，或者防止增殖性细胞向其它解剖部位传播，以及减小过度增殖性生长的体积或减少过度增殖性细胞的数目的方法。本发明中的“治疗”并非必须旨在包括治愈或完全消除过度增殖性生长。

上述“治疗”可为例如预防、改善和/或抑制过度增殖性病症的症状，和/或可以预防或抑制例如肿瘤（比如恶性肿瘤）中的细胞增殖或生长。本发明的治疗策略至少在可测量的程度上减轻肿瘤负荷，提高患有所述过度增殖性病症的患者的寿命。对本发明的药剂治疗敏感的疾病、病症和病况是肿瘤，更具体地是各种来源的肿瘤（肺癌、结肠癌、胃癌、平滑肌癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌等）。

本发明中的“预防”或“防止”包括∶（1）抑制对象或患者中疾病的发生，该对象或患者可处于该疾病风险中和/或易患该疾病，但还没有经历或表现出该疾病的任何或全部的病变或症状；和/或（2）减缓对象或患者中疾病的病变或症状的发病，该对象或患者可处于该疾病风险中和/或易患该疾病，但还没有经历或表现出该疾病的任何或全部的病变或症状。

“治疗有效量”或“药用有效量”指向对象或患者施用治疗疾病时足以产生对该疾病的治疗作用的量，即指能够有效导致过度增殖性细胞死亡、延缓过度增殖性细胞的生长速率、减小过度增殖性细胞的个体大小、和/或减少过度增殖性细胞的数目的量。

综上，本发明提供的磷酸硒盐复合物可用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症，包括多种癌症及肿瘤，且没有不良反应和副作用，提高了病人的生存质量，具有极好的依从性。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为磷酸硒钾复合物的³¹PNMR图。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

实施例1 磷酸硒盐复合物的制备

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸钾，其中二氧化硒和三聚磷酸钾的摩尔比为1.8：1。将称量的二氧化硒溶于水配制成0.2g/ml的***，并倒入反应器内，然后将三聚磷酸钾缓缓加入***溶液内，调节温度为250~300℃，搅拌，经脱水、脱酸后，生成磷酸硒钾复合物。将反应得到的复合物溶于适量的水中，用磷酸中和至pH6.0~6.5，再加热脱水，得到可施用于人或哺乳动物的磷酸硒钾复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸钠，其中二氧化硒和三聚磷酸钠的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒钠复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸钙，其中二氧化硒和三聚磷酸钙的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒钙复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸铵，其中二氧化硒和三聚磷酸铵的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒铵复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸钡，其中二氧化硒和三聚磷酸钡的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒钡复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸镁，其中二氧化硒和三聚磷酸镁的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒镁复合物。

分别称量一定量的二氧化硒和三聚磷酸锂，其中二氧化硒和三聚磷酸锂的摩尔比为1.8：1，采用与上述相同的方法制备得到磷酸硒锂复合物。三聚磷酸锂可以参照公告号为CN100548931C的中国发明专利中提供的方法制备，用碳酸锂与磷酸反应制备。

实施例2磷酸硒盐复合物的表征

采用核磁共振测量上述实施例中得到的磷酸硒盐复合物的核磁共振谱，以磷酸的³¹PNMR来确定相对磷信号的δ值，即设定磷酸的³¹PNMRδ=0ppm其中磷酸硒钾复合物的³¹PNMR图谱如图1所示。金属离子对磷的信号影响很少，各磷酸硒盐复合物的³¹PNMR图谱相似，在δ=3.0～2.2ppm及δ=-5.6～-6.8ppm处存在磷的信号峰。

实施例3磷酸硒钾复合物的急性毒性研究

将SPF级昆明种小鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，雌雄各半。试验设空白对照组（蒸馏水）、磷酸硒钾口服液24.75、19.80、15.84、12.67、10.14mg/kg五组，共6个组，灌胃给药。给药后立即观察动物的反应情况，持续观察12小时，以后每天观察一次，连续观察14天。

实验结果：表1列出了试验中小鼠的体重变化情况，其中空白对照组14天内未见明显异常反应，体重增长良好。采用浓度为24.75mg/kg磷酸硒钾口服液给药后，小鼠即出现活动减少，1-3小时内出现呼吸困难，四肢无力，精神怠倦，嗜睡，翻正反射消失，继而死亡，个别出现短时间挣扎。采用浓度为19.80mg/kg的磷酸硒钾口服液给药后，小鼠活动减少，其中6只小鼠8小时内陆续出现呼吸困难，个别出现短时间挣扎，四肢无力，精神怠倦，嗜睡，翻正反射消失，然后死亡；2只小鼠在给药后活动减少，四肢无力，精

神怠倦，并在给药后第2天晚上死亡；剩余2只小鼠，给药后活动减少，四肢无力，精神怠倦，给药5-7天后体重明显下降（与空白对照组比P＜0.05），给药第7天后逐渐恢复，第14天体重增长状态基本恢复（与空白对照组比P>0.05）。采用浓度为15.84mg/kg的磷酸硒钾口服液给药后，小鼠活动减少，其中5只小鼠8小时内出现呼吸困难，个别挣扎，逐渐四肢无力，精神怠倦，嗜睡，翻正反射消失，然后死亡；1只小鼠在给药后活动减少，四肢无力，精神状态低下，并在给药后第2天晚上死亡；剩余4只小鼠，给药后活动减少，四肢无力，精神状态低下，给药后5-7天体重明显下降（与空白对照组比P＜0.05），给药第7天后逐渐恢复，第14天体重状态基本恢复（与空白对照组比P>0.05）。采用浓度为12.67mg/kg的磷酸硒钾口服液给药后，小鼠活动减少，四肢无力，精神怠倦；其中2只小鼠在给药后第2天晚上死亡；存活小鼠在给药后多天精神状态低下，给药后第7天体重明显下降（与空白对照组比P＜0.05），给药第7天后逐渐恢复，第14天体重增长状态基本恢复（与空白对照组比P>0.05）。采用浓度为10.14mg/kg的磷酸硒钾口服液给药后，小鼠活动减少，四肢无力，精神怠倦，但症状相对服用较高剂量磷酸硒钾口服液的小鼠有所减轻；其中1只小鼠在给药后第2天晚上死亡；存活小鼠在给药后多天精神状态稍低下，给药后第7天体重明显下降（与空白对照组比P＜0.05），给药第7天后逐渐恢复，第14天体重状态基本恢复（与空白对照组比P>0.05）。据以上结果，通过计算得出磷酸硒钾口服液口服给药的半数致死量LD₅₀为15.1mg/kg（95%可信区间为13.4-16.9mg/kg）。

表1 试验中小鼠体重情况（g，）

注：n为存活的小鼠的数量，未标的为n=10，有标注的按标注的数量；与空白对照组相比，*为P＜0.05，**为P＜0.01。

实施例4 磷酸硒钾复合物（以下简称PSO）对H22肝癌体内抑瘤的作用

细胞株：H22肝癌细胞株，复苏后接种于SPF级昆明小鼠腹腔进行传代用于试验；

试验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g。

1．分组：对照组、PSO低剂量组、PSO中剂量组、PSO高剂量组、阳性药物环磷酰胺（以下简称CTX）组、PSO中剂量+CTX、PSO高剂量+CTX，共7组，每组10只小鼠。

2．荷瘤鼠制备：将H22癌细胞进行复苏，细胞计数后调成约5×10⁶/0.2ml接种于小鼠腹腔，将产生的腹水冲洗计数用于试验。

3．肿瘤接种以及给药：抽取接种7d左右种鼠腹水，呈乳白色，采用D-Hanks液洗涤离心（800r/min×5min）3次，调整细胞浓度至1×10⁷/ml，采用台盼蓝拒染法检测存活率≥95%，将细胞悬液注射至健康小鼠右腋皮下, 每只鼠0.1ml，全程严格无菌操作，60min内完成。接种第7天，进行肿瘤大小测量，达100mm³按肿瘤大小均匀分组，每组10-12只，同时进行给药，各组均每日1次，连续14天。

4、测定指标：

4.1在给药前以及给药后7天、14天进行体重称量；

4.2在末次给药24h后将肿瘤剥除后马上测重量，计算肿瘤抑制率。

5、结果：

表2 H₂₂肝癌试验剂量

组别	动物数	剂量（/kg体重）
			对照组	10只	溶媒（0.2ml/10g）
PSO低剂量组	10只	215μg/kg
			PSO中剂量组	10只	645μg/kg
PSO高剂量组	10只	960μg/kg
			单独CTX	10只	20mg/kg
PSO中+CTX	10只	645μg/kg+20mg/kg
			PSO高+CTX	10只	960μg/kg+20mg/kg

表3 PSO对小鼠H22肝癌生长的抑制作用 ( )

注：d1、d15：接种后第1、15天；与对照组比较，*为P<0.05 **为P<0.01；与CTX组比较，各合用药组均P＞0.05。

由表2和表3看出，与对照组比较，CTX组对肿瘤小鼠体重有降低，但未达统计学差异；PSO低、中、高剂量组动物体重与对照组比较未见明显差异。

与对照组比较，给药14d，PSO高剂量组、单独CTX组、PSO中剂量+CTX组（645μg/kg+20mg/kg）、PSO高剂量+CTX组（960μg/kg+20mg/kg）均能明显抑制小鼠H22肝癌的生长作用（与对照组比较，P<0.05或P<0.01），抑制率分别为47.4%、51.1%、56.6%、61.3%；PSO低剂量组（215μg/kg）和PSO中剂量组（645μg/kg）也有一定的抑瘤作用趋势，但PSO低剂量组与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），抑瘤率为26.0%各35.6%。PSO低、高剂量与CTX合用，其抑瘤效果比单用CTX略加强，但无明显组间统计学差异（P＞0.05）。单独用PSO或与CTX合用，抑瘤效果均有明显的剂量反应关系，更一步说明PSO对小鼠H22肝癌有明显抑瘤作用。

实施例5 磷酸硒钾复合物（以下简称PSO）对C57小鼠lewis肺癌实体瘤的抑制作用

1、分组：对照组、PSO低剂量（215ug/kg）组、PSO中剂量（645ug/kg）组、PSO高剂量（960ug/kg）组、5-氟尿嘧啶（以下简称5-FU）（39mg/kg）组、PSO中645ug/kg+5-FU 39mg/kg组（简称联合低）、PSO高960ug/kg+5-FU 39mg/kg组（简称联合高），共6组，每组10只C57小鼠。

2、荷瘤鼠制备：复苏的鼠源lewis肺癌细胞5管，每管数量约为1×10 ⁷，接种腋下皮下3只C57小鼠，让其自然生长，约14天，长到直径约1cm以上。

3、肿瘤接种以及给药：

试验方法：选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5mm³左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下。接种到C57小鼠后，约7天，待肿瘤长至100mm³以上，按瘤体积均匀分组。同时灌胃给药，各组均每日1次，连续14天。

4、测定指标：

4.1在给药前以及给药后每周1次进行体重称量；

4.2在末次给药24h后将C57小鼠处死，将肿瘤剥除后马上测重量，计算抑制率。

5、结果：

由表4可见，与对照组比较，给药7天，各组体重未见明显改变；给药14d，PSO低、中、高剂量组体重与对照组比较未见明显改变，含5-FU各给药组体重有轻度减轻的趋势，但与对照组比较无统计学差异（P大于0.05）。

由表5可见，给药14d，从瘤重量看，PSO高剂量（960ug/kg）组、PSO中剂量（645ug/kg）组、5-FU（39mg/kg）组、PSO中（645ug/kg）+5-FU（39mg/kg）组、PSO高（960ug/kg）+5-FU（39mg/kg）组均有明显抑制C57小鼠lewis肺癌的生长的作用（与对照组比较P<0.05或P<0.01），其抑制率分别为37.2%、46.0%、44.9%、52.8%、56.6%。PSO低剂量组对C57小鼠lewis肺癌的生长也有一定的抑制趋势，但与对照组比较无统计学差异（P＞0.05）。

以上结果提示，PSO对C57小鼠lewis肺癌的生长有明显的抑制作用，各剂量间有明显的剂量效应关系，其中高剂量（960ug/kg）组效果较显著（抑制率大于40%），且与阳性对照药5-FU联合使用时有明显促进抑瘤的效果，更一步说明PSO对C57小鼠lewis肺癌有明显抑瘤作用。

表4 PSO对C57小鼠lewis肺癌14天内体重变化影响( ，n=10)

表5 PSO对C57小鼠lewis肺癌瘤重及抑制率的影响( ，n=10)

与对照组比较：*0.01<P<0.05，**P<0.01

实施例6 体外抑瘤试验

1. 癌细胞系的生长

用于测定磷酸硒盐复合物作用的癌细胞系得自以下来源：人MDA-MB-231（乳腺）、PC3（***）、LOVO（结肠）、HePG（肝细胞癌）、MCG803（胃腺癌）、A549（肺小细胞腺癌）、K562（慢性髓原白血病）、OVCAR-3（卵巢）、PANC-1（胰腺）、BT-325（神经胶质瘤）（来自中山大学实验动物中心细胞库）。将以上细胞复苏后，培养于添加有10 %胎牛血清、1 mM丙酮酸钠、10 mM HEPES和100 U/ml 青霉素以及100 μg/ml链霉素的DMEM培养基（StemXVivo）中，在增湿的5%CO₂下、37℃的培养箱中进行孵育增殖。

2. 抗人癌细胞系的体外细胞增殖测试

评价磷酸硒盐复合物对多种人肿瘤细胞的生长抑制作用。

利用磺基罗丹明B法（Skehan et al., J. National Cancer Institute, 82: 1107-1112 (1990)）进行磷酸硒盐复合物对人肿瘤细胞系的生长抑制试验。将按指数规律生长的肿瘤细胞以2000-5000细胞/孔的密度接种到96孔板中并在第二天以不同浓度（2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L）的磷酸硒盐复合物处理，每孔加入200μL用培养基配制的各个浓度的药液，每个浓度做3个复孔。将细胞与不同浓度化合物在37℃下于增湿的5 %CO₂培养箱中孵育72小时。孵育72小时后，以10%三氯乙酸在4℃下孵育1小时将细胞固定，以去离子水清洗5遍，甩干。然后，用1%乙酸配制的0.4%磺基罗丹明B将细胞染色30分钟，以1%乙酸清洗5次，晾干。加入10 mM Tris溶液并结合5分钟后，用酶标仪在530nm测定各孔的吸光度（OD值）。用下式计算对各肿瘤细胞株的抑制率：

抑制率＝（对照组OD值-给药组OD值）/对照组OD值×100%

通过非线性回归分析计算半数抑制浓度（IC₅₀）值。

结果如下表6所示，磷酸硒盐复合物对各种人癌细胞均有较强的抑制作用，IC₅₀在15-30μM间。

表6 磷酸硒盐复合物对人癌细胞细胞生长的抑制作用（IC₅₀，μM）

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims

1.一种磷酸硒盐复合物M₃(SeP₃O₁₀)_n·XH₂O在制备用于治疗和/或预防人或哺乳动物过度增殖性病症的药物中的用途，其中，X=0～4，n为1或2，当n=1时，M为锂、钠、钾或铵离子；当n=2时，M为镁、钙或钡；

其中所述过度增殖性病症为肝癌、肺癌、乳腺癌、***癌、结肠癌、胃腺癌、慢性髓原白血病、卵巢癌、胰腺癌或神经胶质瘤中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物包含所述磷酸硒盐复合物和药学上可接受的辅料。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自固体载体或液体载体。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自调味剂、粘合剂、溶解剂、崩解剂、润湿剂、助溶剂、乳化剂、等渗剂、吸收剂、降解剂、抗氧化剂、防腐剂、润滑剂、填充剂、染料、缓冲剂及延缓吸收剂中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述调味剂为甜味剂。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述辅料选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、天冬甜素、甘露醇、山梨醇、纤维素、甘氨酸、硬脂酸、硬脂精、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硅酸镁铝、淀粉、明胶、黄蓍胶、***胶、蜡、虫胶、二氧化硅、藻酸、藻酸钠、羧甲基纤维素钠、琼脂、水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油、无毒甘油酯、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、氯化钾、柑橙香精、草莓香精、香草香料、樱桃调味剂、薄荷、对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞、单硬脂酸铝、磷酸二钙、植物油、滑石、粘土及氧化铝中的一种或多种。

7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述辅料选自玉米淀粉、马铃薯淀粉、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯及冬青油中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物为适于口服、吸入或喷洒、或注射或输注的药物剂型。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物为片剂、胶囊、锭剂、丸剂、混悬剂、酏剂、糖浆、粉末或溶液。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述药物为灌肠液、无菌粉末、无菌水溶液或分散液。

11.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物为适于注射或输注的药物剂型。

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述适于注射或输注的药物剂型为通过静脉内、肌肉内或皮下途径，或者直接注射入过度增殖性组织或细胞内的注射剂。

13.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述适于注射或输注的药物剂型注射或输注时溶液的pH值为4.0～7.5。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述适于注射或输注的药物剂型注射或输注时溶液的pH值为6.0～6.5。

15.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物还包含其他抗癌剂。

16.根据权利要求15所述的用途，其特征在于，所述抗癌剂选自化疗剂、放疗剂、免疫治疗剂、激素或生物治疗剂中的一种或多种。

17.根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述生物治疗剂为基因治疗剂。

18.根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述化疗剂选自烷化剂、抗代谢物、细胞毒性抗生素及植物衍生物中的一种或多种。

19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述化疗剂选自环磷酰胺、卡氮芥、顺铂、氨甲喋呤、5-FU、吉西他滨、阿霉素、丝裂霉素、紫杉醇、长春新碱或依托泊苷中的一种或多种。