CN103012009B - 一种有机酸植物土壤调节剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种有机酸植物土壤调节剂的制备方法,其是将白酒发酵副产物黄水进行过滤、蒸发浓缩处理;黄水处理完毕后加入葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3充分混合溶解后进行高温灭菌;灭菌结束后的发酵母液接入混合菌种发酵液发酵24~48h,通过无菌灌装机进行装瓶;所述的混合种菌种发酵液由沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌分别按发酵母液重量的2~5%、2~5%、2~5%、5~10%、5~10%混合组成。
Description
技术领域
本发明是关于一种有机酸植物土壤调节剂及其制备方法,属于微生物有机肥技术领域。
背景技术
在白酒发酵过程中,含水量在52~55%的入窖酒醅经微生物代谢后产生大量的游离水。这些水与酒醅中未被微生物所利用的水逐渐沉降,将酒醅中的酸、可溶性淀粉、酵母溶出物、还原糖、单宁、酒精及香味前体物质溶出,最后沉积于窖池底部而形成棕黄色、呈絮体状的液体,这种液体被称为黄水。据测定,黄水的pH为3.0~3.5,黄水中富含醋酸、丁酸、乳酸、己酸等有机酸类物质及其他醇、醛类物质,还含有乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯等白酒香味物质,及少量的残余淀粉、残糖和酒精、腐殖质和酵母菌体的自溶物、厌氧性微生物等有机质。其COD、BOD远远超过废水排放标准。目前,对黄水的利用途径较少,利用率较低。主要是进一步蒸馏得黄水酒、与酒尾一起回窖发酵、拌糟醅回窖发酵等。开发新的黄水利用途径,提高酒厂废水排放水质、少排废水、变废为宝,是一个急需解决的课题。
随着微生物有机肥技术的不断发展和推广,一些工业和农业副产品被不断被开发利用,如果能得到有效利用,富含有机物质的酿酒副产品黄水同样也不失为是一种优质的生物有机肥原料。
发明内容
本发明的目的在于,针对上述问题,提供一种利用黄水生产有机酸植物土壤调节剂的方法。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种有机酸植物土壤调节剂的制备方法,其特征在于,
(1)将白酒发酵副产物黄水进行过滤、蒸发浓缩处理;
(2)黄水处理完毕后加入葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3充分混合溶解后进行高温灭菌;
(3)灭菌结束后的发酵母液接入混合菌种发酵液发酵24~48h,通过无菌灌装机进行装瓶;
所述的混合种菌种发酵液由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌液组成;
所述混合菌种发酵液中沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌的接种量分别为发酵母液重量的2~5%、2~5%、2~5%、5~10%、5~10%。
如上所述的方法,优选地,步骤(1)中所述的白酒发酵副产物黄水采用多袋式过滤器进行过滤,去除其中较大的杂质,然后再通过蒸发浓缩罐将发酵母液蒸发浓缩为总固形物含量为15%的液体。
如上所述的方法,优选地,所述的葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3分别按1~2%、0.5~1%、0.01~0.02%、0.01~0.02%、0.001~0.005%、0.01~0.02%和1~2%的重量比添加到发酵母液中;
所述高温灭菌是在115℃~121℃、0.07MPa~0.11MPa条件下蒸煮灭菌20~30min。
如上所述的方法,优选地,所述的沼泽红假单胞菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:K2HPO40.78g、KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O0.2g、NaCl0.5g、CaCl20.05g、(NH4)2SO40.05g、酵母膏2.5g、醋酸钠1.65g、硼酸钠0.38g、钼酸铵0.22g,蒸馏水1000mL,pH 6.7~7.2,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入种子培养基中,温度25~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度25~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以80~100r/min机械搅拌,培养24~48h。
如上所述的方法,优选地,所述的荧光假单胞菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏3g、NaCl 5g,蒸馏水1000mL混合均匀,pH6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入种子培养基中,温度28~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌,培养24~48h。
如上所述的方法,优选地,所述的褐球固氮菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:K2HPO40.8g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、NaCl0.5g、CaCl20.1g、甘露醇20g、酵母膏0.5g、FeCl30.005g、Na2MoO4.2H2O0.002g,蒸馏水1000mL,pH 7.0~7.2,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接种入一级种子培养基中,温度28~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌,培养24~48h。
如上所述的方法,优选地,所述的巨大芽孢杆菌菌液是按以下方法制成的:
配制一级种子培养基:蛋白胨10.0g,牛肉浸膏3.0g,NaCl 5.0g,葡萄糖5.0g,蒸馏水1000mL,pH 6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
配制二级种子培养基:玉米粉10kg、黄豆粉10kg、K2HPO41.5kg,MgSO4·7H2O 1.5kg、CaCO31.5kg,蒸馏水1000L,pH 6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入一级种子培养基中,温度28~30℃、转速130~150r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:1~1.2的条件下、以130~150r/min机械搅拌,培养24~48h。
如上所述的方法,优选地,所述的胶冻样芽孢杆菌菌液是按以下方法制成的:
配置种子培养基:K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、CaCO35g、NaCl0.2g、蔗糖10g、CaSO4·2H2O0.1g,蒸馏水1000mL,pH 6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接种入一级种子培养基中,温度25~28℃、转速130~150r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度25~28℃、通风量体积比为1:1~1.2的条件下、以130~150r/min机械搅拌,培养24~48h。
如上所述的方法,优选地,步骤(3)中所述发酵母液灭菌、接种后,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌培养24~48h,然后通过无菌灌装机进行装瓶。
如上所述方法制备得到的有机酸植物土壤调节剂。
按照本发明所述方法制备得到的有机酸植物土壤调节剂,该产品中总固形物≥17.00%、有机酸钙含量≥1.00%、有机酸总量≥30.00g/L、N+P+K+Mg+Mn+S≥11.00g/L、沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.50×108、荧光假单胞菌≥1.00×109、褐球固氮菌(CFU/g)≥2.00×108、巨大芽孢杆菌(CFU/g)≥1.55×109、胶冻样芽孢杆菌(CFU/g)≥1.20×109。
本发明的有益效果为:
本发明选用性能优良的生物有机肥生产菌种,采用先进的微生物液态深层发酵技术,以白酒发酵副产物黄水作为发酵母液,经过滤、浓缩处理后加入一定比例葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3充分混合溶解后进行高温灭菌,然后接种由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和胶冻样芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)组成的混合菌种,经深层液态发酵,可制得一种富含有机酸、有益微生物和植物生长必须有机微量元素的植物土壤调节剂。
本发明所用原料黄水中含有丰富的有机酸和残糖,可以为微生物生长繁殖提供良好的营养条件。选用优良的微生物有机肥生产菌,采用先进的微生物液态发酵技术,对黄水中残存的有机质和糖类进行深层发酵,在发酵过程中加入一些植物生长所必须的微量元素,通过菌体发酵分解和有机螯合作用生成生物有机质,能使农作物更易于吸收和利用。同时,通过微生物发酵还产生了大量的有益微生物和丰富的微生物代谢产物及有机酸。使黄水发酵生产的生物有机肥既能均衡、协调农作物的生长发育和刺激根系生长,改善土壤盐碱性,增加作物产量和土壤肥力,改善作物品质;又能增强作物的免疫力,提高抗病、抗旱、保水、抗寒能力。同时还减少了废水的排放,使制酒副产物得到有效的回收和利用,变废为宝,减少了环境污染,具有很好的生态效益、经济效益以及开发前景。
更具体地说,本发明提供的有机酸植物土壤调节剂的制备方法具有以下优点:
1、本发明的产品中富含的有机酸钙可通过生物络合、置换反应,置换清除土壤团粒上多余的Na+,活化盐碱土壤中难利用的P5+、Fe2+、Ca2+、Mg2+等离子及微量元素,使其转变为可利用状态被植物吸收,解除植物生理缺素症状。同时通过Na+降低,活化Ca2+、Mg2+等离子之后,可使土壤水传导能(HC)增高,使土壤水分更易流动,从而有效地改善了土壤的盐碱性和作物根系环境,促进根系生长,保证作物苗齐、苗壮,使植物能够在盐碱地上生长和提高产量。
2、本发明的产品富含的有机酸,可有效中和和缓解土壤盐碱性。
3、本发明的产品中的有益微生物能产生糖类物质,占土壤有机质的0.1%,与植物粘液,矿物胚体和有机胶体结合在一起,可以改善土壤团粒结构,增强土壤的物理性能和减少土壤颗粒的损失,在一定的条件下,还能参与腐殖质形成。所以施用微生物肥料能改善土壤物理性状,有利于提高土壤肥力。
4、本发明的产品可取代化学肥料和农药,缓和或减少农产品污染,而且能够改善农产品的品质。
5、本发明的产品中富含的有益微生物菌群能促进土壤物质转化,改善土壤结构,提高土壤肥力,促进作物生长。通过微生物固氮作用,能提高土壤氮素水平,通过其代谢活动能有效地提高土壤中某些有机成分、硫化物和氨态氮,并促进有害污染物如农药等的转化。同时能促进有益微生物的增殖,使之共同参与土壤生态的物质循环。
6、本发明的产品中的有益微生物菌群能增强作物抗病防病能力,能促进放线菌等有益微生物的繁殖,抑制丝状真菌等有害菌群生长,从而有效地抑制某些植病的发生与蔓延。
7、本发明产品中的微生物具有解磷、解钾、固氮的作用,可提高肥料利用率10%~30%以上。这种肥料的大量生产和推广使用,可以节约肥料资源以及与之相关的煤炭、天然气、石油等资源,对缓解能源危机有一定的帮助。
8、应用本发明方法及制得的产品,可降低农民生产成本、提高作物产量,增加农民收入。
9、本发明提供的有机酸植物土壤调节剂中,总固形物≥17.00%、有机酸钙含量≥1.00%、有机酸总量≥30.00g/L、N+P+K+Mg+Mn+S≥11.00g/L、沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.50×108、荧光假单胞菌≥1.00×109、褐球固氮菌(CFU/g)≥2.00×108、巨大芽孢杆菌(CFU/g)≥1.55×109、胶冻样芽孢杆菌(CFU/g)≥1.20×109。
附图说明
图1为本发明方法的流程示意图。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的技术及特点,但这些实施例并非用以限定本发明的保护范围。
本发明以下实施例中所用沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和胶冻样芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)是分别购买于中国工业微生物保藏管理中心(CICC)、中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)和中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)的野生菌种。保藏号分别为:ACCC 10649、CICC 21461、CGMCC 1.175、CICC 21694、CICC 23575。
实施例1
参见图1,按照以下方法制备本实施例的有机酸植物土壤调节剂:
1.称取白酒发酵副产物黄水1000L,采用多袋式过滤器进行过滤,去除其中较大的杂质。然后再通过蒸发浓缩罐将发酵母液蒸发浓缩为总固形物含量为15%的液体。
2.黄水处理完毕后,将葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3分别按1%、1%、0.02%、0.02%、0.005%、0.02%和2%的重量比添加到发酵母液中,然后在121℃、0.11MPa条件下蒸煮灭菌30min。
3.将沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)分别按以下方法进行增菌培养:
(1)沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)
A.制备种子培养基:K2HPO40.78g、KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O0.2g、
NaCl 0.5g、CaCl20.05g、(NH4)2SO40.05g、酵母膏2.5g、醋酸钠1.65g、硼酸钠0.38g、钼酸铵0.22g,蒸馏水1000mL,pH 6.7,在温度121℃下灭菌30min。
B.培养条件:
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50mL的比例接入一级种子培养基中,温度30℃、转速100r/min、振荡培养24h。
二级种子培养:100L自动种子发酵罐装种子培养基50L,将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中,温度30℃、通风量体积比1:0.5、机械搅拌100r/min、培养24h。
(2)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)
A.制备种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏3g、NaCl 5g,蒸馏水1000mL混合均匀,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.培养条件:
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50mL的比例接入一级种子培养基中,温度30℃、转速100r/min、振荡培养24h。
二级种子培养:100L自动种子发酵罐装种子培养基50L,将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中,温度30℃、通风量体积比1:0.5、机械搅拌100/min、培养24h。
(3)褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)
A.制备种子培养基:K2HPO40.8g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O 0.2g、
NaCl0.5g、CaCl20.1g、甘露醇20g、酵母膏0.5g、FeCl30.005g、Na2MoO4.2H2O0.002g,蒸馏水1000mL,pH 7.2,在温度121℃下灭菌30min。
B.培养条件:
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50mL的比例接入一级种子培养基中,温度30℃、转速120r/min、振荡培养24h。
二级种子培养:100L自动种子发酵罐装种子培养基50L,将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中,温度30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌120r/min、培养24h。
(4)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)
A.制备一级种子培养基:蛋白胨10.0g,牛肉浸膏3.0g,NaCl 5.0g,葡萄糖5.0g,蒸馏水1000mL,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.制备二级种子培养基:玉米粉10kg、黄豆粉10kg、K2HPO41.5kg,MgSO4·7H2O1.5kg、CaCO31.5kg,蒸馏水1000L,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
一级种子培养:1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL,将菌种斜面按环/100mL的比例接入一级种子培养基中,温度30℃、转速150r/min、振荡培养24h。
二级种子培养:200L自动种子发酵罐装二级种子培养基100L,将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中,温度30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌150r/min、培养24h。
(5)胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)
A.制备种子培养基:K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、CaCO35g、NaCl0.2g、蔗糖10g、CaSO4·2H2O0.1g,蒸馏水1000mL,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.培养条件:
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/100mL的比例接入一级种子培养基中,温度25℃、转速150r/min、振荡培养24h。
二级种子培养:200L自动种子发酵罐装种子培养基100L,将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中,温度25℃、通风量体积比1:1~1、机械搅拌150r/min、培养24h。
4.混合菌种发酵液中沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌的接种量分别为发酵母液重量百分比的5%、5%、5%、10%、10%。
5.发酵母液灭菌、接种后,温度30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌120r/min、培养48h通过无菌灌装机进行装瓶。
6.按照以上方法制备得到的有机酸植物土壤调节剂,其中总固形物≥19.25%、有机酸钙含量≥1.50%、有机酸总量≥30.00g/L、N+P+K+Mg+Mn+S≥20.00g/L、沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥5.00×108、荧光假单胞菌≥1.50×109、褐球固氮菌(CFU/g)≥3.00×108、巨大芽孢杆菌(CFU/g)≥3.00×109、胶冻样芽孢杆菌(CFU/g)≥2.50×109。
实施例2
参见图1,按照以下方法制备本实施例的有机酸植物土壤调节剂:
1.称取白酒发酵副产物黄水1000L,采用多袋式过滤器进行过滤,去除其中较大的杂质。然后再通过蒸发浓缩罐将发酵母液蒸发浓缩为总固形物含量为20%的液体。
2.黄水处理完毕后,将葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3分别按1.5%、0.5%、0.01%、0.01%、0.002%、0.01%和1.5%的重量比添加到发酵母液中,然后在121℃、0.11MPa条件下蒸煮灭菌30min。
3.将沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)、荧光假单胞菌(Pseudomonas florescens)、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)分别按如实施例1所述的方法进行增菌培养。
4.混合菌种发酵液中,沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌的接种量分别为发酵母液重量百分比的3%、3%、5%、5%、5%。
5.发酵母液灭菌、接种后,温度30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌120r/min、培养48h通过无菌灌装机进行装瓶。
6.按照以上方法制备得到的有机酸植物土壤调节剂,其中总固形物≥17.00%、有机酸钙含量≥1.00%、有机酸总量≥30.00g/L、N+P+K+Mg+Mn+S≥11.00g/L、沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.50×108、荧光假单胞菌≥1.00×109、褐球固氮菌(CFU/g)≥2.00×108、巨大芽孢杆菌(CFU/g)≥1.55×109、胶冻样芽孢杆菌(CFU/g)≥1.20×109。
Claims (3)
1.一种有机酸植物土壤调节剂的制备方法,其特征在于,
(1)将白酒发酵副产物黄水采用多袋式过滤器进行过滤,去除其中较大的杂质,然后再通过蒸发浓缩罐将发酵母液蒸发浓缩为总固形物含量为15%的液体;
(2)黄水处理完毕后加入葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl和CaCO3,分别按1~2%、0.5~1%、0.01~0.02%、0.01~0.02%、0.001~0.005%、0.01~0.02%和1~2%的重量比添加,充分混合溶解后进行高温灭菌;所述高温灭菌是在115℃~121℃、0.07MPa~0.11MPa条件下蒸煮灭菌20~30min;
(3)灭菌结束后的发酵母液接入混合菌种发酵液发酵24~48h,通过无菌灌装机进行装瓶;
所述的混合菌种发酵液由沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌菌液组成;
所述混合菌种发酵液中沼泽红假单胞菌、荧光假单胞菌、褐球固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌的接种量分别为发酵母液重量的2~5%、2~5%、2~5%、5~10%、5~10%;
所述的沼泽红假单胞菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:K2HPO40.78g、KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O0.2g、NaCl0.5g、CaCl20.05g、(NH4)2SO40.05g、酵母膏2.5g、醋酸钠1.65g、硼酸钠0.38g、钼酸铵0.22g,蒸馏水1000mL,pH6.7~7.2,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入种子培养基中,温度25~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度25~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以80~100r/min机械搅拌,培养24~48h;
所述的荧光假单胞菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏3g、NaCl5g,蒸馏水1000mL混合均匀,pH6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入种子培养基中,温度28~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌,培养24~48h;
所述的褐球固氮菌菌液是按以下方法制成的:
配制种子培养基:K2HPO40.8g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、NaCl0.5g、CaCl20.1g、甘露醇20g、酵母膏0.5g、FeCl30.005g、Na2MoO4.2H2O0.002g,蒸馏水1000mL,pH7.0~7.2,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接种入一级种子培养基中,温度28~30℃、转速100~120r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌,培养24~48h;
所述的巨大芽孢杆菌菌液是按以下方法制成的:
配制一级种子培养基:蛋白胨10.0g,牛肉浸膏3.0g,NaCl5.0g,葡萄糖5.0g,蒸馏水1000mL,pH6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
配制二级种子培养基:玉米粉10kg、黄豆粉10kg、K2HPO41.5kg,MgSO4·7H2O1.5kg、CaCO31.5kg,蒸馏水1000L,pH6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接入一级种子培养基中,温度28~30℃、转速130~150r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度28~30℃、通风量体积比为1:1~1.2的条件下、以130~150r/min机械搅拌,培养24~48h;
所述的胶冻样芽孢杆菌菌液是按以下方法制成的:
配置种子培养基:K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、CaCO35g、NaCl0.2g、蔗糖10g、CaSO4·2H2O0.1g,蒸馏水1000mL,pH6.8~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
一级种子培养:1000mL三角瓶中装种子培养基500mL,将菌种斜面按环/50~100mL的比例接种入一级种子培养基中,温度25~28℃、转速130~150r/min、振荡培养24~48h;
二级种子培养:将上述经一级种子培养的菌液按照5~10%的重量比接种到二级种子罐中,在温度25~28℃、通风量体积比为1:1~1.2的条件下、以130~150r/min机械搅拌,培养24~48h。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述发酵母液灭菌、接种后,在温度28~30℃、通风量体积比为1:0.5~1的条件下、以100~120r/min机械搅拌培养24~48h,然后通过无菌灌装机进行装瓶。
3.按照权利要求1或2所述方法制备得到的有机酸植物土壤调节剂。
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