CN102970997B - 抗肥胖剂、抗肥胖用饮食品、糖耐量改善剂和糖耐量改善用饮食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗肥胖剂或糖耐量改善剂等,所述抗肥胖剂或糖耐量改善剂以双歧杆菌属细菌作为有效成分,其特征在于,上述双歧杆菌属细菌具有10%以下的从亚油酸向共轭亚油酸的转化率。根据本发明,能够提供对于肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善有效、安全性也优异的抗肥胖剂和糖耐量改善剂以及含有它们的饮食品。另外,根据本发明,能够提供对于肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善有效、安全性也优异的双歧杆菌属细菌、特别是短双歧杆菌和含有其的医药组合物。
Description
技术领域
本发明涉及以特定的短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)作为有效成分的抗肥胖剂、抗肥胖用饮食品、糖耐量改善剂和糖耐量改善用饮食品。
本申请基于2009年9月17日在日本提交的日本特愿2009-215836号而要求优先权,并将其内容援引于此。
背景技术
伴随着日本人的生活方式的西洋化和老龄化的快速发展,缺血性心脏疾病、脑血管疾病、糖尿病等生活习惯病患者正在增加。作为这样的生活习惯病的最大诱因,可列举出肥胖,因而提倡预防和改善肥胖的重要性。另外,从姿容、美容等方面出发,也具有不希望肥胖的潮流,对于以节食为目的的肥胖的预防和改善的关注也高。
这样,在对于肥胖的意识高涨的情况下,总结了将来患生活习惯病的概率高的“代谢综合征”的诊断基准,在体检制度中,为了预防和改善代谢综合征,测定腰围尺寸。
作为一直以来进行的肥胖的消除法,可列举出饮食疗法(限制饮食或绝食)、运动疗法(利用运动来促进能量消耗)、药物疗法等。作为药物疗法中使用的药剂,目前正在使用抑制肠道中的脂肪吸收的奥利司他(例如罗氏公司制“Xenical(注册商标)”、Glaxo SmithKline公司制“Alli(注册商标)”等)、作为糖分解酶(α葡糖苷酶)抑制剂的阿卡波糖(拜耳公司制“Glucobay(注册商标)”等)等。
但是,这些疗法若过度进行则会产生以下问题:有害健康、因反弹而使体重反而增加、或者难以持续、长期进行等等。特别是,在药物疗法的情况下,容易产生副作用的问题。另外,用于药物疗法的药剂是医药品,并不能轻易地使用。
迄今为止,尝试了利用乳酸菌等微生物来抑制肥胖。例如非专利文献1中报道:对食饵性高脂血症(ExHC)大鼠、肥胖(Wistar fatty)大鼠、肥胖·糖尿病(KK-Ay)小鼠喂食混合了10%的活的干燥的两歧双歧杆菌(Bifidobacterium Bifidum)G9-1株的食物时,血中和肝中的甘油三酯和胆固醇降低。但是使用该菌株的情况下,为了获得效果而需要在食物中大量混合菌,难以日常地、持续地摄取有效量。
另外,已知共轭亚油酸(conjugated linoleic acid(CLA))具有抗肥胖作用等生理活性。例如非专利文献2中报道:在动物实验中,向食物中混入0、0.25、0.5、1%的CLA时,在0.5%以上的情况下体重和体脂依赖于浓度而减少。
关于CLA,已知双歧杆菌属菌等细菌具有将亚油酸(linoleic acid(LA))转化成CLA的能力(CLA转化能力),还提出了各种利用该细菌的技术。例如专利文献1中公开了短双歧杆菌CBG-C2株、假链状双歧杆菌(Bifidobacteriumpseudocatenulatum)CBG-C4株、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)CBG-C5株具有高CLA转化能力,表1中记载了短双歧杆菌CBG-C2株以54.7%的高CLA转化率将LA转化成CLA。另外,专利文献1中还公开了将以这些细菌的菌体作为有效成分的CLA生成用组合物用于预防或治疗通过CLA而抑制的疾病(癌、动脉硬化、糖尿病、肥胖等)。
但是,在以用于治疗肥胖或防止肥胖的节食等为目的而投与CLA或具有高CLA转化能力的细菌时,有可能会产生副作用。
关于CLA的副作用,例如非专利文献3中报道:若在小鼠的食物中混合1%的CLA并投与8个月,则发现脂肪组织的萎缩、胰岛素值的上升、糖耐量的降低。另外非专利文献4中报道:若人每天持续摄取3g左右的CLA,则胰岛素感受性降低,尿中的氧化标记上升等,糖耐量变差。
另外,日本人的平均LA摄取量为11g左右(参见非专利文献5),因此投与具有高CLA转化能力的细菌时,CLA大量生成。例如,若11g的LA以上述的54.7%的转化率转化成CLA,则生成6.02g的CLA。若这样生成大量的CLA,则可能会引起上述那样的副作用。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2005-522216号公报
非专利文献
非专利文献1:“ビフイズス菌の肥満·糖尿病疾患モデル动物に对する効果”、医学のあゆみ、205(4),273-274(2003)
非专利文献2:"Conjugated linoleic acid rapidly reducesbody fat content in mice without affecting energy intake",TheAmerican Journal of Physiology,276,1172-1179(1999)
非专利文献3:"Conjugated Linoleic Acid SupplementationReduces Adipose Tissue by Apoptosis and DevelopsLipodystrophy in Mice",DIABETES,49,1534-1541(2000)
非专利文献4:"Effects of cis-9,trans-11 conjugated linoleicacid supplementation on insulin sensitivity,lipid peroxidation,and proinflammatory markers in obese men",The AmericanJournal of Clinical Nutrition,80,279-283(2004)
非专利文献5:“リノ一ル酸摄取量の現状”、脂質栄養学、11,25-31(2002)
发明内容
发明要解决的问题
本发明是鉴于上述情况而完成的,其目的在于提供对于肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善有效、安全性也优异的抗肥胖剂和糖耐量改善剂以及含有它们的饮食品。
用于解决问题的方案
本发明人进行了深入研究,结果发现转化成共轭亚油酸的转化能力低的短双歧杆菌不依赖于共轭亚油酸而具有抗肥胖作用和改善糖耐量作用,并且基于该见解而完成了本发明。
解决上述问题的本发明具有以下方式。
(1)一种抗肥胖剂,其以通过下述步骤求得的从亚油酸向共轭亚油酸的转化率为10%以下的短双歧杆菌作为有效成分。
在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述短双歧杆菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过下式求出从亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)。
转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100
(2)根据(1)所述的抗肥胖剂,其中,上述短双歧杆菌为短双歧杆菌MCC 1274株和/或短双歧杆菌ATCC 15700株。
(3)一种抗肥胖用饮食品,其含有(1)或(2)所述的抗肥胖剂。
(4)一种糖耐量改善剂,其以通过下述步骤求得的从亚油酸向共轭亚油酸的转化率为10%以下的短双歧杆菌作为有效成分。
在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述短双歧杆菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过下式求出从亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)。
转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100
(5)根据(4)所述的糖耐量改善剂,其中,上述短双歧杆菌为短双歧杆菌MCC 1274株和/或短双歧杆菌ATCC 15700株。
(6)一种糖耐量改善用饮食品,其含有(4)或(5)所述的糖耐量改善剂。
另外,本发明具有以下侧面。
<1>一种用于抗肥胖或改善糖耐量用途的双歧杆菌属细菌,其特征在于,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<2>一种双歧杆菌属细菌用于抗肥胖或改善糖耐量的用途,其特征在于,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<3>一种双歧杆菌属细菌在用于抗肥胖或改善糖耐量的组合物、更优选医药组合物的制造中的用途,其特征在于,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<4>一种医药组合物,其特征在于,其含有用于抗肥胖或改善糖耐量用途的双歧杆菌属细菌、和作为医药品可接受的载体,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<5>一种含有双歧杆菌属细菌和作为医药品可接受的载体的医药组合物用于抗肥胖或改善糖耐量的用途,其特征在于,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<6>根据<1>所述的双歧杆菌属细菌,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<7>根据<6>所述的双歧杆菌属细菌,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<8>根据<2>或<3>所述的双歧杆菌属细菌的用途,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<9>根据<8>所述的双歧杆菌属细菌的用途,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<10>根据<4>所述的医药组合物,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<11>根据<10>所述的医药组合物,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<12>根据<5>所述的医药组合物的用途,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<13>根据<12>所述的医药组合物的用途,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<14>一种以双歧杆菌属细菌作为有效成分的抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其特征在于,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<15>根据<14>所述的抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<16>根据<15>所述的抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<17>一种抗肥胖用饮食品或糖耐量改善用饮食品,其含有<14>~<16>的任一项所述的抗肥胖剂或糖耐量改善剂。
<18>一种菌株,其为短双歧杆菌MCC 1274株(FERMBP-11175)。
<19>一种用于抗肥胖或改善糖耐量用途的、选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株。
<20>一种选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株用于抗肥胖或改善糖耐量的用途。
<21>一种选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株在用于抗肥胖或改善糖耐量的组合物的制造中的用途。
<22>一种医药组合物,其含有用于抗肥胖或改善糖耐量用途的选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株、以及作为医药品可接受的载体。
<23>一种含有选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERMBP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株、以及作为医药品可接受的载体的医药组合物用于抗肥胖或改善糖耐量的用途
<24>一种抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其以选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株作为有效成分。
<25>一种肥胖的治疗或预防的方法,该方法包括对需要治疗或预防肥胖的对象投与对肥胖的治疗或预防有效的量的双歧杆菌属细菌,其中,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<26>根据<25>所述的肥胖的治疗或预防的方法,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<27>根据<26>所述的肥胖的治疗或预防的方法,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<28>一种糖耐量的改善方法,该方法包括对需要改善糖耐量的对象投与对糖耐量的改善有效的量的双歧杆菌属细菌,其中,
对于上述双歧杆菌属细菌而言,在以500μg/mL的浓度添加了亚油酸的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述双歧杆菌属细菌的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的共轭亚油酸量,通过式子:转化率(%)=(生成的共轭亚油酸量/添加的亚油酸量)×100求出从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率(%)时,具有10%以下的从上述亚油酸向共轭亚油酸的转化率。
<29>根据<28>所述的糖耐量的改善方法,其中,上述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。
<30>根据<29>所述的糖耐量的改善方法,其中,上述短双歧杆菌选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组。
<31>一种肥胖的治疗或预防的方法,该方法包括对需要治疗或预防肥胖的对象投与对肥胖的治疗或预防有效的量的选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株。
<32>一种糖耐量的改善方法,该方法包括对需要改善糖耐量的对象投与对糖耐量的改善有效的量的选自由短双歧杆菌MCC 1274株(FERM BP-11175)和短双歧杆菌ATCC 15700株组成的组中的菌株。
发明的效果
根据本发明,能够提供对于肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善有效、安全性也优异的抗肥胖剂和糖耐量改善剂以及含有它们的饮食品。另外,根据本发明,能够提供对于肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善、抗胰岛素性的改善有效、安全性也优异的双歧杆菌属细菌、特别是短双歧杆菌和含有其的医药组合物。
附图说明
图1是示出试验例2中的对照组和短双歧杆菌ATCC 15700株投与组的体重增加量的推移的曲线图。
图2是示出试验例2中的对照组和短双歧杆菌MCC 1274株投与组的体重增加量的推移的曲线图。
图3是示出试验例2中的附睾附属脂肪组织重量的测定结果的曲线图。
图4是示出试验例2中的HOMA-IR(Homeostasis modelassessment of insulin resistance,稳态模型胰岛素抵抗评价指数)值的测定结果的曲线图。
具体实施方式
本发明中使用的属于双歧杆菌属细菌的短双歧杆菌(以下,记为B.breve。)是通过下述步骤求得的从亚油酸(LA)向共轭亚油酸(CLA)的转化率(以下,有时称为CLA转化率。)为10%以下的B.breve。
在以500μg/mL的浓度添加了LA的液体培养基中以2×107CFU/mL悬浮上述B.breve的菌体,在37℃培养48小时后,测定生成的CLA量,通过下式求出CLA转化率(%)。
转化率(%)=(生成的CLA量/添加的LA量)×100
上述“生成的CLA量”例如可以通过以下步骤测定。
首先,将培养48小时后的上述液体培养基离心分离。
回收其上清,添加上述上清的2倍体积量的异丙醇并混合,然后添加上述上清的1.5倍量的己烷,混合3分钟,静置并回收己烷层。对于上述己烷层,测定233nm的吸光度,通过与标准物质(顺-9,反-11共轭亚油酸)的比较求出上述己烷层中的CLA浓度(μg/mL),计算出上述上清中所含有的CLA酸量(μg)。
另外,在上清的回收后残留的残渣中添加5倍量的蒸馏水,混合并使其悬浮,添加上述悬浮液的2倍体积量的异丙醇,混合后,添加上述悬浮液的1.5倍量的己烷,混合3分钟,静置并回收己烷层。对于上述己烷层,与上述同样地求出CLA浓度(μg/mL),计算出上述残渣中所含有的CLA量(μg)。
上清、残渣中分别含有的CLA的总量为“生成的CLA量”。
作为液体培养基,只要能够培养B.breve则可以从公知的液体培养基中适当选择。具体而言,可列举出MRS(de ManRogossa Sharpe)培养基、ABCM(anaerobic bacterial culturemedium)培养基、RCA(Reinforced clostri dial agar)培养基等。
需要说明的是,此处示出了使用顺-9,反-11共轭亚油酸作为标准物质的例子,但在使用其他异构体、例如反-10,顺-12共轭亚油酸的情况下,计算出的CLA量也大致相同。
上述CLA转化率是示出上述B.breve所具有的CLA转化能力(将LA转化成CLA的能力)的大小的指标。
CLA转化率为10%以下的B.breve(以下,有时称为CLA低转化性B·breve。)具有不依赖于CLA的抗肥胖作用。
“抗肥胖作用”是指通过体重增加抑制、体脂增加抑制等来预防或改善肥胖的作用。
本发明中的“肥胖”并不仅仅指体重多,还指体构成成分中脂肪组织所占的比例异常增加的状态。
近年来,关于皮下脂肪、内脏脂肪等的蓄积,有以下报道:与堆积在皮下组织的皮下脂肪型肥胖相比,堆积在脏器之间的内脏脂肪型肥胖更容易并发高血压、高脂血症、糖尿病等成人病。如后述的试验例2所示,CLA低转化性B.breve具有体重增加抑制效果,特别是具有抑制内脏脂肪的蓄积的效果。因此,本发明的抗肥胖剂和含有上述抗肥胖剂的饮食品对于这些疾病的预防或治疗有效。
另外,CLA低转化性B.breve将LA转化成CLA的能力低,因此产生CLA所导致的副作用、例如脂肪组织的萎缩、胰岛素值的上升、糖耐量的降低等的可能性小。即,如上述非专利文献5所述,日本人的平均LA摄取量为11g左右,若CLA转化能力高,则在生物体内LA被转化成CLA,有可能因CLA而产生副作用,但本发明中使用的B.breve的上述转化率低,因此推测不会因CLA而产生副作用,非常安全。
因此,本发明的抗肥胖剂能够安全摄取,将上述抗肥胖剂配混到饮食品中,使肥胖患者或需要节食的健康人或宠物日常地摄取或根据需要长期地摄取有效量,能够起到抗肥胖作用。
另外,CLA低转化性B.breve不会产生CLA所导致的副作用之一、即糖耐量的异常,相反地,如后述的试验例2所示,具有糖耐量的改善作用和抗胰岛素性的改善作用。
因此,本发明的糖耐量改善剂能够安全摄取,将上述糖耐量改善剂配混到饮食品中,使糖尿病患者或需要改善糖耐量的健康人或宠物日常地摄取或根据需要长期地摄取有效量,能够起到糖耐量改善作用和抗胰岛素性改善作用。
本发明中使用的CLA低转化性B.breve只要使上述CLA转化率为10%以下即可,例如可以通过上述步骤对从人婴儿的粪便等试样分离和鉴定的新型的B.breve菌株或公知的B.breve菌株求出CLA转化率,适当选择10%以下的B.breve菌株。
作为CLA低转化性B.breve菌株,例如可列举出B.breveMCC 1274株、B.breve ATCC 15700株等。
B.breve MCC 1274株是按照以下所示的步骤由本申请人取得和鉴定的属于双歧杆菌属细菌的菌株,于2009年8月25日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮编305-8566))(保藏号:FERM BP-11175)。
(B.breve MCC 1274株的取得和鉴定)
将日本人婴儿的糞便作为样品,将上述样品用厌氧性稀释液(“肠内菌的世界”(光丘知足著、1980年丛文社发行)的第322页记载的稀释液)稀释,涂布于BL琼脂培养基(上述“肠内菌的世界”的第319页记载)的平板上,在37℃厌氧培养72小时。在所得到的菌落中收集显示出双歧杆菌属细菌特有的形态、且通过涂布标本的显微镜观察为革兰氏阳性、并显示出棒状、棍棒状或分支状的菌形的菌,将其划线涂布到BL琼脂培养基上,利用与上述同样的方法反复进行厌氧培养,得到分离的纯菌株。将上述菌株命名为B.breve MCC 1274株。
作为B.breve MCC 1274株的菌学性质,研究细胞的形态、运动性、孢子形成、革兰氏染色性、过氧化氢酶、来自葡萄糖的气体的产生、糖的发酵性。关于糖的发酵性,使用API50CH(bioMerieux Japan制)根据试剂盒附带的手册记载的方法进行判断。即,将培养1夜后的菌液接种到各基质,使其在37℃的厌氧手套箱中进行培养,在培养第7天判断各基质的糖发酵性状。它们的结果示于表1。
表1
短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)MCC 1274菌株的菌学性质
接下来,为了研究B.breve MCC 1274株的遗传学性质,通过常规方法鉴定了上述菌株的16S rRNA基因碱基序列。关于B.breve MCC 1274株的16S rRNA基因碱基序列,由美国国立生物技术信息中心(NCBI)的数据库通过BLAST分析进行了上述碱基序列的同源性检索,结果与作为B.breve的基准株的B.breveCM1192T株具有99%的同源性,显示出与短双歧杆菌同种。
由以上结果可以确认,短双歧杆菌MCC 1274株具有短双歧杆菌的菌学性质,是属于短双歧杆菌的菌株。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂作为有效成分含有的CLA低转化性B.breve可以为一种,也可以为两种以上。
另外,本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂可以仅由上述有效成分构成,也可以是配混了上述有效成分和有效成分以外的任意成分的组合物或医药组合物。作为上述任意成分,只要是能够作为医药品可接受的成分则没有特别限定,可以配混以往配混到医药组合物中的添加剂(例如后述的制剂载体等)。
本发明对需要治疗或预防肥胖的对象投与对肥胖的治疗或预防有效的量的本发明的B.breve,由此提供该对象的肥胖的治疗或预防的方法。
另外,本发明对需要改善糖耐量的对象投与对糖耐量的改善有效的量的本发明的B.breve,由此提供该对象的糖耐量的改善方法。
此处,肥胖的“治疗”表示用于减少或维持对象的体重的本发明的抗肥胖剂的投与。作为治疗的一个结果,可列举出与刚开始投与本发明的抗肥胖剂前的对象的体重比较时该对象的体重减少。另外,作为治疗的另一结果,可列举出与刚开始投与本发明的抗肥胖剂前的对象的体重比较时该对象的体重增加得到抑制。
此处,肥胖的“预防”表示用于减少或维持具有肥胖风险的对象的体重的本发明的抗肥胖剂的投与。作为预防的一个结果,可列举出与刚开始投与本发明的抗肥胖剂前的“具有肥胖风险的对象”的体重比较时该对象的体重得到维持或减少。另外,作为预防的另一结果,可列举出与刚开始投与本发明的抗肥胖剂前的对象的体重比较时该对象的体重增加得到抑制。
此处,糖耐量的“改善”表示用于维持或提高对象的糖耐量的本发明的糖耐量改善剂的投与。作为改善糖耐量的一个结果,可列举出与刚开始投与本发明的糖耐量改善剂前的对象的糖耐量比较时该对象的糖耐量得到维持或提高。另外,作为改善糖耐量的另一结果,可列举出与刚开始投与本发明的糖耐量改善剂前的对象的糖耐量比较时该对象的糖耐量的降低得到抑制。
抗肥胖剂或糖耐量改善剂“的投与”和/或“投与”抗肥胖剂或糖耐量改善剂是指对需要治疗、预防或改善的对象提供本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂。
本说明书中,需要治疗、预防或改善的“对象”是指作为治疗、预防、改善、观察、或实验的对象的动物,优选为哺乳类,最优选为人。
需要治疗、预防或改善的“对象”是指研究者、兽医、医师或其他临床医生确定的需要治疗、预防或改善的方法的对象。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂的投与路径可以是经口、非经口的任意一种,优选为经口。作为非经口的投与路径,可列举出经直肠等。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂的投与量没有特别限定,可以根据所期待的抗肥胖效果或糖耐量改善效果并考虑所使用的CLA低转化性B.breve所具有的抗肥胖作用或糖耐量改善作用、投与路径等适当设定。
例如将B.breve MCC 1274株和/或B.breve ATCC 15700株作为有效成分并经口投与的情况下,作为用于治疗或预防肥胖或者改善糖耐量有效的量的1天投与量通常以每1kg体重的菌数(CFU/kg体重)换算优选为1×106CFU/kg体重以上,更优选为1×108CFU/kg以上。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂可以一次投与1天投与量的全部量,也可以分成多次投与。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂可以根据投与方法适当制剂化成规定的剂形。
作为本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂的剂形,例如在经口投与的情况下,可列举出散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等固态制剂;溶液剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂等液剂;等等。另外,在非经口投与的情况下,可列举出栓剂、软膏剂、喷雾剂等。
制剂化可以根据剂形适当利用公知的方法实施。
制剂化时,可以仅将有效成分制剂化,也可以适当配混制剂载体进行制剂化。
配混制剂载体的情况下,本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂中的有效成分的配混量没有特别制限,可以根据散剂、片剂、或胶囊剂等剂形适当决定。作为含有菌量,通常优选为1×106~1×1012CFU/g的范围,更优选为1×108~1×1012CFU/g、特别优选为1×1010~1×1012CFU/g。
作为上述制剂载体,可以根据剂形使用作为医药品可接受的惯用的各种有机载体或无机载体。
例如作为固态制剂时的载体,可列举出赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂等。
作为赋形剂,例如,可列举出乳糖、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖衍生物;玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物;结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物;***胶;葡聚糖;普鲁兰多糖(Pululan);轻质无水硅酸、合成硅酸铝、偏硅酸铝镁等硅酸盐衍生物;磷酸钙等磷酸盐衍生物;碳酸钙等碳酸盐衍生物;硫酸钙等硫酸盐衍生物等。
作为结合剂,例如,除了上述赋形剂之外,可列举出明胶;聚乙烯基吡咯烷酮;聚乙二醇等。
作为崩解剂,例如,除了上述赋形剂之外,可列举出交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮等经化学修饰的淀粉或纤维素衍生物等。
作为润滑剂,例如,可列举出滑石;硬脂酸;硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐;胶态二氧化硅;蜂胶(bee gum)、鲸蜡等蜡类;硼酸;乙二醇;富马酸、己二酸等羧酸类;苯甲酸钠等羧酸钠盐;硫酸钠等硫酸类盐;亮氨酸;十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁等十二烷基硫酸盐;无水硅酸、硅酸水合物等硅酸类;淀粉衍生物等。
作为稳定剂,例如,可列举出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类;氯丁醇、苄醇、苯乙醇等醇类;苯扎氯铵;乙酸酐;山梨酸等。
作为矫味矫臭剂,例如,可列举出甜味剂、酸味剂、香料等。
作为经口投与用的液剂的情况下的载体,可列举出水等溶剂、矫味矫臭剂等。
本发明的抗肥胖剂或糖耐量改善剂可以添加到各种医药品、食品、营养剂等中使用。
本发明的抗肥胖用饮食品含有上述本发明的抗肥胖剂。通过摄取上述抗肥胖用饮食品,得到与投与本发明的抗肥胖剂时同样的效果。
本发明的抗肥胖用饮食品对于基于抑制体脂增加、体脂减少等进行的塑身、节食等也有用。
本发明的抗肥胖用饮食品中的抗肥胖剂的含量没有特别制限,优选含有能够合理地摄取用以发挥有效的抗肥胖效果的每天投与量程度的量的CLA低转化性B.breve,通常,优选在1×106~1×1012CFU/g的范围内、更优选为1×108~1×1012CFU/g、特别优选为1×1010~1×1012CFU/g。
本发明的抗肥胖用饮食品可以将抗肥胖剂和允许在饮食品中含有的其他成分作为原料来进行制造,另外,还可以将本发明的抗肥胖剂添加到含有其他成分的现有饮食品中。
例如,本发明的抗肥胖用饮食品为发酵乳的情况下,抗肥胖用饮食品可以是在发酵乳中添加了CLA低转化性B.breve的发酵乳,也可以是使用CLA低转化性B.breve作为发酵剂菌(starter bacteria)的发酵乳。
作为饮食品中所含的其他成分,只要是食品卫生法等食品标准中确认用于饮食品的物质,则可以在不损害抗肥胖作用的情况下无特别限制地使用。例如,可以含有糊精、淀粉等糖类;明胶、大豆蛋白、玉米蛋白等蛋白质;丙氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸等氨基酸类;纤维素、***胶等多糖类;大豆油、中链脂肪酸甘油三酯等油脂类等。
饮食品的形态没有特别制限,包括由CLA低转化性B.breve和作为饮食品可接受的载体构成的可食用性组合物的任何形态。例如,可以制成面包、口香糖、小甜饼干、巧克力、点心、谷类等固态食品、果酱、冰淇淋、酸奶、果冻等果酱状、乳状或凝胶状食品、果汁、咖啡、可可等饮料等所有食品形态。另外,还可以配混到调味料、食品添加剂等中。
本发明的抗肥胖用饮食品为使用CLA低转化性B.breve作为发酵剂菌的发酵乳的情况下,在发酵时,可以单独使用CLA低转化性B.breve,也可以进行CLA低转化性B.breve与其他发酵剂菌的混合培养。
作为其他发酵剂菌,可以使用通常用于发酵乳的制造的发酵剂菌,可列举出例如其他双歧杆菌属细菌(双歧杆菌:假链状双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)等)、作为发酵乳的发酵剂菌公知的乳酸菌。作为该乳酸菌的具体例,可列举出嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)等。
发酵乳可以通过公知的方法制造。以下示出发酵乳的制造方法的一例。
首先,制备含有原料乳的原料混合物。除了原料乳之外,在上述原料混合物中可以根据需要配混油脂、糖类、水等其他成分。例如,作为油脂,可以配混黄油或奶油等含有脂肪的原料。作为糖类,可以配混蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、糊精、还原麦芽糖等通常的甜味剂。在制造硬酸奶的情况下,可以配混预先溶胀的明胶和/或预先溶解的琼脂溶液。在制造软酸奶的情况下,可以配混乳清蛋白质、增粘多糖类。在制造酸奶饮料的情况下,可以添加作为稳定化剂的高甲氧基果胶0~0.3质量%,优选完全不含高甲氧基果胶。
制备原料混合物的方法没有特别限定,例如,可以根据希望在原料乳中添加其他成分,并搅拌混合而得到原料混合物。
此处,原料混合物中的原料乳的配混率以无脂乳固体成分计优选为1~15质量%、更优选为8~15质量%。
接下来,对原料混合物实施加热杀菌处理。杀菌方法和加热条件没有特别限定,优选85~140℃的加热温度,关于加热时间,在间歇式的情况下优选5~15分钟,在HTS T法的情况下优选2秒钟~15分钟。
接下来,将发酵剂菌接种到经加热杀菌的原料混合物中进行发酵。发酵剂菌的接种量、发酵温度、发酵时间等发酵条件可以根据发酵剂菌的种类、想要得到的发酵乳的种类和性状等适当设定。根据制品形态的不同,可以在接种发酵剂后,填充到容器中,然后使其发酵,也可以在发酵罐内发酵。
发酵后,迅速冷却而得到发酵乳。根据制品的种类和性状,进行冷却后均质化的工序、冷却后添加调味液等其他原料并混合的工序。
如此得到的发酵乳可以不进一步实施加热杀菌而制成能够以活菌的方式摄取双歧杆菌的活菌型的制品。活菌型的制品在10℃以下、优选0~5℃的低温下保存、流通和销售。
本发明的抗肥胖用饮食品优选以标示出抗肥胖用途的饮食品等、例如“标示出抗肥胖用的、具有抗肥胖效果的饮食品”等方式销售。
需要说明的是,用于进行上述标示而使用的文字并不仅限于例如“抗肥胖用”这样的文字,即使是这以外的文字,只要可示出抗肥胖效果,当然也包含在本发明的范围内。例如,可列举出肥胖预防效果、肥胖改善效果、体重增加抑制效果、体脂增加抑制效果、节食效果等,可以以标示出选自其中的一种以上的文字的饮食品等方式销售。
另外,同样地,作为肥胖导致的高脂血症、高血压症、糖尿病等生活习惯病的预防和/或改善用,还可以以标示出预防和/或改善生活习惯病用途的饮食品等方式销售。
本发明的糖耐量改善用饮食品优选以标示出改善糖耐量用途的饮食品等、例如“标示出糖耐量改善用的、具有糖耐量改善效果的饮食品”等方式销售。
需要说明的是,用于进行上述标示而使用的文字并不仅限于例如“糖耐量改善用”这样的文字,即使是这以外的文字,只要可示出糖耐量改善效果,当然也包含在本发明的范围内。
另外,同样地,作为糖耐量的降低或抗胰岛素性导致的糖尿病或生活习惯病的预防和/或改善用,还可以以标示出预防和/或改善糖尿病用途的饮食品、标示出预防和/或改善生活习惯病用途的饮食品等方式销售。
上述“标示”的行为(标示行为)包含用于使需要者获知上述用途的全部行为,只要是使其想起/类推上述用途的标示,则无论其标示目的、标示内容、标示对象物/媒介等如何,均属于本发明的“标示”的行为。但是,优选利用使需要者能够直接认识上述用途的表现方式来进行标示。具体而言,可列举出在与饮食品相关的商品或商品的包装上记载上述用途的行为作为标示行为,此外可例示出将在商品或商品的包装上记载了上述用途的物品转让、交付、用于转让或交付而进行展示、进口的行为;在与商品有关的广告、价格表或交易文件中记载上述用途并展示或颁布,或者在以它们为内容的信息中记载上述用途并通过电磁(互联网等)方法来提供的行为;等等。
另一方面,作为标示的内容(标示内容),优选为被各国的行政等认可的标示(例如,基于各国的行政规定的各种制度而受到认可,并以基于这样的认可的方式进行的标示),优选将这样的标示内容附加到包装、容器、目录、小册子、POP等销售现场的宣传材料、其他文件等。
另外,例如,可例示出作为健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特殊用途食品、保健功能食品、特定保健用食品、营养功能食品、准药品等的标示。特别是,在日本,可例示出被厚生劳动省认可的标示,例如被特定保健用食品制度、与其类似的制度认可的标示。作为后者的例子,可例示出作为特定保健用食品的标示、作为带有条件的特定保健用食品的标示、对身体的构造和功能产生影响的标示、疾病风险降低标示等,详细而言,作为典型的例子,可列举出作为健康增进法施行规则(平成15年4月30日日本国厚生劳动省令第86号)所规定的特定保健用食品的标示(特别是保健的用途的标示)和与其类似的标示。
实施例
接下来,示出试验例和实施例对本发明进行更详细的说明,但本发明并不限定于以下的实施例。
<试验例1:CLA转化率的测定>
在以500μg/mL的浓度添加了LA的MRS培养基(MRS(deMan Rogossa Sharpe)肉汤、Difco(注册商标)制品、Becton,Dickinson and Company制)中以2×107CFU/mL 悬浮B.breve(MCC 1274株或ATCC 15700株)的菌体,在37℃培养48小时。
之后,回收上清,添加上述上清的2倍体积量的异丙醇,混合后,添加上述上清的1.5倍量的己烷,混合3分钟,静置并回收己烷层。对于上述己烷层,测定233nm的吸光度,并使用标准物质(顺-9,反-11共轭亚油酸)制作标准曲线,使用上述标准曲线求出上述己烷层中的CLA浓度(μg/mL),计算出上述上清中所含有的CLA酸量(μg)。
另外,向上清回收后残留的残渣中添加5倍量的蒸馏水并混合,使其悬浮,添加上述悬浮液的2倍体积量的异丙醇,混合后,添加上述悬浮液的1.5倍量的己烷,混合3分钟,静置并回收己烷层。对于上述己烷层,与上述同样地求出CLA浓度(μg/mL),计算出上述残渣中所含有的CLA量(μg)。
将上清、残渣中分别含有的CLA的总量设为“生成的CLA量”,通过下式求出从LA向CLA的转化率(%)。其结果示于表2。
转化率(%)=(生成的CLA量/添加的LA量)×100
如下述结果所示,2株(MCC-1274株、ATCC-15700株)的CLA转化率均为10%以下。
表2
CLA转化率(%) | |
MCC1274 | 10.0 |
ATCC15700 | 5.0 |
<试验例2:CLA低转化能力B.breve在食饵诱导性肥胖模型小鼠中的投与效果的讨论>
C57BL/6J雄小鼠6只为一组,共计使用18只。投与4周45%高脂食物使其肥胖后,对照组在食物中混合10%脱脂奶粉,MCC 1274株投与组在食物中混合悬浮了MCC 1274株的10%脱脂奶粉,ATCC 15700株投与组在食物中混合悬浮了ATCC 15700株的10%脱脂奶粉,摄取8周。此时,MCC 1274株或ATCC 15700株的悬浮量以及在食物中的添加量按每天的B.breve摄取量为每只10亿个的方式进行设定。另外,作为食物,使用脂肪酸含量为22质量%(其中亚油酸量为3.1质量%)的饲料。
试验期间中仅测定体重,试验结束后,将它们屠杀、解剖,测定体重和附睾附属脂肪组织重量。
试验期间中的体重增加量的推移示于图1~2。由图1~2的结果确认:整组的体重均增加,但与对照组相比,投与了MCC 1274株或ATCC 15700株的两组中体重的增加显著被抑制(与对照组相比,试验组中减少约18%以上,具有p<0.05的显著性差异)。
另外,解剖时的附睾附属脂肪组织重量示于图3。由图3的结果确认:解剖时的附睾附属脂肪组织重量为对照组2.66g、MCC 1274株投与组2.17g、ATCC 15700株投与组2.32g,通过MCC 1274株或ATCC 15700株抑制了脂肪重量的增加(与对照组相比,MCC 1274组减少18.4%,ATCC 15700组减少12.8%,具有p<0.05的显著性差异)。
由以上结果可知,B.breve MCC 1274株和ATCC 15700株的各菌株具有体重增加抑制作用、体脂增加抑制作用等抗肥胖作用,尤其抑制体脂的增加(蓄积)。
此外,通过常规方法测定解剖时的血中胰岛素值和血糖值,由其测定值通过下述数学式(1)计算出作为抗胰岛素性的指标的HOMA-IR值。
HOMA-IR值=血糖值(mg/dL)×血中胰岛素值(μIU/mL)÷405…(1)
其结果,如图4所示,对照组为32.10、MCC 1274株投与组为11.87、ATCC 15700株投与组为10.55,通过B.breveMCC 1274株或ATCC 15700株确认到糖耐量的改善、抗胰岛素性的改善(与对照组相比具有p<0.05的显著性差异)。
由以上结果可知,B.breve不仅不具有共轭亚油酸所导致的副作用,而且还可以改善糖耐量和抗胰岛素性。
如上述结果所示,CLA转化能力为10%以下的CLA低转化性B.breve在食饵诱导性肥胖小鼠中显示出体重增加抑制作用、体脂增加抑制作用等抗肥胖作用。
此处,上述试验例2中,通过CLA低转化性B.breve将饲料中的LA(3.1%)转化成CLA时,饲料中的CLA量为0.3%以下。基于CLA的食饵诱导性肥胖小鼠的抗肥胖和体脂减少需要在饲料中混合0.5%以上的CLA(非专利文献5),考虑到这些情况,暗示CLA低转化性B.breve具有不依赖于CLA的抗肥胖作用。
<实施例1:粉末制剂>
将还原脱脂奶粉培养基(含有13重量%脱脂奶粉、0.5重量%酵母浸膏)在95℃杀菌30分钟后,接种B.breve ATCC 15700株的种子培养物,在37℃培养16小时,将所得到的培养物冷冻干燥,得到B.breve ATCC 15700株的粉末制剂。所得到的粉末制剂中含有的B.breve ATCC 15700株的菌数为8.5×1010CFU/g。
该粉末制剂可以直接用作本发明的抗肥胖剂、抗肥胖用饮食品、糖耐量改善剂或糖耐量改善用饮食品。
<实施例2:粉末制剂>
代替B.breve ATCC 15700株而使用B.breve MCC 1274株,除此以外与实施例1同样地得到粉末制剂。所得到的粉末制剂中含有的B.breve MCC 1274株的菌数为5.5×1010CFU/g。
该粉末制剂可以直接用作本发明的抗肥胖剂、抗肥胖用饮食品、糖耐量改善剂或糖耐量改善用饮食品。
<实施例3:酸奶>
将加入0.5%(w/w)酵母浸膏的11%(w/w)脱脂奶粉培养基1000mL在90℃杀菌30分钟,接种100mL B.breve ATCC 15700株的种子培养物,在37℃培养16小时。
另外,将10%(w/w)还原脱脂乳培养基1500mL在90℃杀菌30分钟,接种嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus、科汉森公司制)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus、科汉森公司制)的混合培养物50mL,在42℃培养5小时。
与此不同,将包含乳脂肪3.0%(w/w)、无脂乳固态成分9%(w/w)的鲜奶50L加热至70℃,以15Mpa的压力均质,并在90℃杀菌10分钟,然后冷却至40℃。对该杀菌后的基础培养基接种进行了前培养的B.breve ATCC 15700株的培养物750mL和嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌的混合培养物300mL,填充到夹入有铝的多层容器(500mL容量)中并密封,在37℃培养至pH为4.6为止,然后立即冷却。
所得到的酸奶的乳酸酸度为0.81%,含有1.1×108CFU/mL的B.breve ATCC 15700株。
该酸奶可以直接用作本发明的抗肥胖用饮食品或糖耐量改善用饮食品。
<实施例4:酸奶>
代替B.breve ATCC 15700株而使用B.breve MCC 1274株,除此以外与实施例3同样地得到酸奶。
所得到的酸奶含有8.5×107CFU/mL的B.breve MCC 1274株。
该酸奶可以直接用作本发明的抗肥胖用饮食品或糖耐量改善用饮食品。
产业上的可利用性
根据本发明,能够提供对肥胖的预防或治疗或者糖耐量的改善有效、安全性也优异的抗肥胖剂和糖耐量改善剂以及含有它们的饮食品。另外,根据本发明,能够提供对肥胖的预防或治疗或者对糖耐量的改善和抗胰岛素性的改善有效、安全性也优异的双歧杆菌属细菌、特别是短双歧杆菌和含有其的医药组合物。
保藏号
FERM BP-11175
Claims (5)
1.一种双歧杆菌属细菌,其为以保藏号FERM BP-11175保藏的短双歧杆菌MCC1274株。
2.以保藏号FERM BP-11175保藏的短双歧杆菌MCC1274株在用于抗肥胖或改善糖耐量的组合物的制造中的用途。
3.一种抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其以保藏号FERMBP-11175保藏的短双歧杆菌MCC1274株的双歧杆菌属细菌作为有效成分。
4.根据权利要求3所述的抗肥胖剂或糖耐量改善剂,其进一步含有短双歧杆菌ATCC15700株的双歧杆菌属细菌作为有效成分。
5.一种抗肥胖用饮食品或改善糖耐量用饮食品,其含有权利要求3所述的抗肥胖剂或糖耐量改善剂。
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