CN102961389A - 一种含有氨基葡萄糖的组合物及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明的含有氨基葡萄糖的组合物，其活性成分为氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐和利多卡因或其药学上可接受的盐，本发明的组合物可以制备成注射剂，优选为注射液，更优选小容量注射剂。所述注射液进一步包含抗氧化剂、pH调节剂和碱性溶媒。本发明克服现有技术氨基葡萄糖的冻干制剂的冻干时间长、耗能高、不利于生产，且同一批次的冻干制剂在形态及复溶性存在较大差异的缺陷。实现了对注射液稳定性和相关物质的控制，减少了降解产物带来的副作用，从而达到注射液安全性、稳定性的要求。因此，本发明所提供的氨基葡萄糖注射液能够满足工业化生产，并且可以安全、可靠地应用于医药领域。

Description

一种含有氨基葡萄糖的组合物及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，主要具体涉及含有氨基葡萄糖组合物的制备方法及其应用。

背景技术

氨基葡聚糖是来源于甲壳素的一种天然糖类，为软骨基质中的主要成份，通过改变其侧链结构，在关节软骨中更易与水结合，保持关节腔润滑和缓冲压力的作用，对受损的软骨细胞具有一定的保护作用，可以人工合成应用，现有常用的有氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐或氯化钾复盐等。氨基葡萄糖是组成聚氨基葡萄糖的最小单位之一，它和糖醛酸组成了聚氨基葡萄糖，包括硫酸软骨素、硫酸角质素、硫酸皮肤素以及透明质酸。

氨基葡聚糖是来源于甲壳素的一种天然糖类，为软骨基质中的主要成份，通过改变其侧链结构，在关节软骨中更易与水结合，保持关节腔润滑和缓冲压力的作用，对受损的软骨细胞具有一定的保护作用，可以人工合成应用，现有常用的有氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐或氯化钾复盐等。氨基葡萄糖是组成聚氨基葡萄糖的最小单位之一，它和糖醛酸组成了聚氨基葡萄糖，包括硫酸软骨素、硫酸角质素、硫酸皮肤素以及透明质酸。

抗炎类药物仅可以改善骨性关节炎的症状，而氨基葡聚糖还可控制症状发展，有利于软骨的修复。在美国氨基葡聚糖和硫酸软骨素的制剂已添加至食品中，具有非常高的安全信度。口服该类药物即可达到治疗目的，对于一些伴有循环***疾病、肝肾功能差、肺部疾病、糖尿病的患者，同样具有安全性，对于服用添加镁、锌、硒等金属元素的制剂，应注意这些金属电解后产生的对心血管的抑制作用。每日口服剂量达到1500mg即可达到治疗效果，对于肥胖或长期口服利尿剂的患者还要追加剂量至2000～2500mg，实验中证实服用4～6周后才可达到治疗效果，因此应坚持服用至少1个月。长期服用后的副反应较小，也较温和。

CN201010270516中公开了氨基葡萄糖冻干及注射液制剂及其生产方法，但是该冻干制剂和生产方法还存在以下缺陷：由于冻干制剂在制备工艺放大生产之后，冻干机在不同位置上的温度、真空度不同，导致同一批药品形成冰晶形态和干燥速度存在差异，而干燥时间由干燥速率最慢的制品确定，因而，目前氨基葡萄糖的冻干制剂的冻干时间长，耗能高，不利于实际生产，且同一批次的冻干制剂在形态及复溶性存在较大差异；另外其中的注射液制剂在加热灭菌以及在贮存过程易产生降解产物5-羟甲基糠醛等糠醛类产物、N-乙酰氨基葡萄糖和2，6-二甲基苯胺，而这些降解物质不仅影响药物的疗效，并相应带来各种毒副作用，影响了注射液的安全性和有效性。

发明内容

针对目前氨基葡萄糖的组合物等相关制剂存在的缺陷，本发明提供一种生产工艺稳定的组合物，并进一步提供一种生产工艺稳定的氨基葡萄糖注射剂，并更进一步提供一种生产工艺稳定、疗效高、安全性高的的氨基葡萄糖注射液。

本发明的技术方案如下：

本发明的含有氨基葡萄糖的组合物，其活性成分为氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐和利多卡因或其药学上可接受的盐，其中氨基葡萄糖的药学上可接受的盐选自盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐、硫酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐，其中利多卡因的药学上可接受的盐选自盐酸利多卡因、硫酸利多卡因、醋酸利多卡因，但不仅限于此。

上述组合物包含抗氧化剂、pH调节剂和碱性溶媒；所述抗氧化剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸中的一种或几种的混合，优选亚硫酸氢钠，所述碱性溶媒为二乙醇胺，三乙醇胺或乙二胺，优选二乙醇胺；所属pH调节剂选自盐酸、硫酸、醋酸、磷酸等，但不仅限于此；

上述组合物制备成注射剂，所述的注射剂选自注射液，优选小容量注射剂。

本发明提供一种含有氨基葡萄糖的组合物，其活性成分为氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐和利多卡因或其药学上可接受的盐；所述氨基葡萄糖的药学上可接受的盐选自氨基葡萄糖的复盐；所述氨基葡萄糖的药学上可接受的盐选自盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐、硫酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐。

进一步，本发明提供一种含有氨基葡萄糖的组合物，其中所述利多卡因的药学上可接受的盐选自盐酸利多卡因、硫酸利多卡因、醋酸利多卡因。

进一步，本发明提供一种含有氨基葡萄糖的组合物，其中所述组合物制备成注射剂，所述的注射剂选自注射液，优选小容量注射液。所述注射剂包含抗氧化剂、pH调节剂和碱性溶媒。

进一步，本发明提供一种注射剂，所述注射剂由氨基葡萄糖注射液和专用溶媒组成，临用时将氨基葡萄糖注射液和专用溶媒配对使用；

所述的氨基葡萄糖注射液是由下列重量配比的组分组成：

氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐        100-600份，

利多卡因或其药学上可接受的盐          5-20份，

pH调节剂适量；

所述的专用溶媒为0.5-10毫升，其组成为碱性溶媒和注射用水，所述碱性溶媒为二乙醇胺，三乙醇胺或乙二胺，优选二乙醇胺；所述的氨基葡萄糖注射液装入棕色安瓿，所述的专用溶媒装入无色安瓿。

本发明还提供一种制备上述注射剂的方法，其包括以下步骤：其中，取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐并在50-60℃下搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，在70-80℃下搅拌15～30min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的利多卡因或其药学上可接受的盐，在40-50℃下搅拌10～15min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至15-25℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.5-4.8，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌15-20min。

进一步，本发明还提供一种制备上述注射剂的方法，包括以下步骤：其中，取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐并在55℃下搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，在75℃下搅拌20min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的盐酸利多卡因，在45℃下搅拌10min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至20℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.6，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌17min。

本发明还提供一种上述含有氨基葡萄糖的组合物的含量检测方法，包括以下测定方法：

1)、氨基葡萄糖的含量测定方法

色谱条件：色谱柱：Hypersil  ODS柱，柱  温：室温，检测波长：340nm，流动相：以乙酸钠水溶液：甲醇=900：100作为流动相，所述乙酸钠水溶液按下述方法制得：6.80g三水合乙酸钠，加入700 ml水使溶解，用醋酸调pH至5.9，加水至1000ml，摇匀；

对照液的配制：精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加水制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液，

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试液，

衍生化试剂  称取50mg邻苯二甲醛置14ml聚丙烯试管中，加入1.25ml无水甲醇使溶解，再加入3-巯丙酸50μl和0.2M硼酸盐缓冲液11.2ml，缓慢混匀，置暗处放置30分钟，

衍生化方法：取0.2mol/L的硼酸盐缓冲液400μl，置一小瓶中，加入100μl衍生化试剂和100μl对照液或供试液，混合，衍生化1分钟后进样，以β-异构体的峰面积计算盐酸氨基糖的标示含量；

2)、利多卡因的含量测定，色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液：乙腈=50：50，并用用磷酸调pH至8.0为流动相；检测波长为254nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，理论板数按利多卡因峰计算不低于2000，精密量取本品适量，置量瓶中，加2 mol/L NaOH溶液调pH至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪；另取盐酸利多卡因对照品，精密称定，置量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。

本发明还提供一种上述含有氨基葡萄糖的组合物有关物质的含量检测方法，包括以下测定方法：

1)、5-羟甲基糠醛的含量测定

色谱条件：色谱柱Alltima C8柱；柱温30℃，检测波长284nm，进样量  20μl；以甲醇：水=5：95为流动相，

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液；

对照液的配制：精密称取5-羟甲基糠醛适量，加流动相定量稀释至刻度，作为5-羟甲基糠醛对照溶液；

取供试液及对照液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至5-羟甲基糠醛峰保留时间的3.0倍，供试品溶液的色谱图中与5-羟甲基糠醛峰保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积0.1%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积0.1%，总杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍；

2)、N-乙酰-D氨基葡萄糖的含量测定

色谱柱：Shodex Suger SH1011色谱柱，柱温：50℃，检测波长：202nm，流动相为0.006 mol/L H2SO4溶液；

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

对照液的配制：另取N-乙酰-D氨基葡萄糖适量，加流动相适量使溶解并稀释至刻度；

分别吸取对照溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，供试品溶液色谱图中如有N-乙酰-D氨基葡萄糖，不得大于N-乙酰-D氨基葡萄糖峰面积0.1%；

3)、2，6-二甲基苯胺的含量测定方法：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液：乙腈=50：50，并用磷酸调pH至8.0为流动相；检测波长为254nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，用2mol/L NaOH溶液调pH至中性后加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液；

对照液的配制：另取2，6-二甲基苯胺对照品，精密称定，加流动相并稀释制成对照品溶液；

供试品溶液的色谱图中与2，6-二甲基苯胺保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积的0.04%。

本发明所带来有益技术效果包括通过对注射液制备方法中活性炭的温度、溶液的pH进行调控，实现了对注射液稳定性和相关物质的控制，减少了降解物质带来的副作用，从而达到注射液安全性、稳定性的要求。

本发明克服现有技术氨基葡萄糖的冻干制剂的冻干时间长、耗能高、不利于生产，且同一批次的冻干制剂在形态及复溶性存在较大差异的缺陷。因此，本发明所提供的氨基葡萄糖注射液能够满足工业化生产，并且可以安全、可靠地应用于医药领域。

具体实施方案：

为克服现有氨基葡萄糖复方注射液存在的缺陷，本发明通过大量的实验意外的发现通过对温度、pH值、加入顺序以及灭菌工艺的参数的最佳组合，取得了意料不到的技术效果，并通过以下实施例及实验例证实其意料不到的技术效果：

实施例1 硫酸氨基葡萄糖注射液（以硫酸氨基葡萄糖计0.4g)

配制过程：取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐并在55℃下搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，在75℃下搅拌20min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的盐酸利多卡因，在45℃下搅拌10min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至20℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.6，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌17min。

另配制专用溶媒，如下：二乙醇胺20g 加1000ml注射用水，制成1000支。配制过程：称取上述处方量的碱性调节剂二乙醇胺加水至足量，搅拌均匀，加入0.05％的活性炭，搅拌15～30min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清；按照1ml灌封，121℃灭菌15分钟。

实施例2硫酸氨基葡萄糖注射液（以硫酸氨基葡萄糖计0.4g)

配制过程：取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，常温下搅拌20min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的盐酸利多卡因，在常温下搅拌10min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至20℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.6，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌17min。

专用溶媒同实施例1的方法制备。

实验例1：由于5-羟甲基糠醛的反应历程，认为这一过程是由质子化、脱水和去质子等一系列基元反应组成，其中质子化相对容易，而去质子化反应能垒较高，是转化过程的决速步骤。因此，温度的变化比pH值的变化对氨基葡萄糖的分解影响更大。按照CN201010270516专利申请中的实施例4的制备方法，分别取80％水量配制成盐酸溶液，在活性成分溶解加水足量后，pH分别达到5.5，5.0，4.7，4.4，4.2，4.0，3.5，3.0，2.0，1.0，最后在121℃下灭菌17min。同时比较实施例1在灭菌前pH分别达到5.5，5.0，4.7，4.6，4.4，4.2，4.0，3.5，最后在121℃下灭菌17min。

分别采用常规测定5-羟甲基糠醛的紫外分光光度法测定上述灭菌前后的吸收度，表3、4结果表明较低的pH值能抑制5-羟甲基糠醛的产生，但是在灭菌前后注射液的5-羟甲基糠醛增加5倍以上，改变不明显；而本具体实施方案实施例1的硫酸氨基葡萄糖注射液的5-羟甲基糠醛明显减少，具有显著差异（P<0.05） (注：5-羟甲基糠醛是葡萄糖注射液在制备过程中的降解产物，对人体横纹肌及内脏均有损害) 。

表3  CN201010270516专利申请中的实施例4不同pH灭菌前后的吸收度

表4  本发明不同pH灭菌前后的吸收度

以上结果表明，本发明的制备工艺能显著减少主要成分降解。这可能与本发明先采用加温、pH值较低的条件下溶解，使药物以分子或离子形式充分溶解在水中，再低温脱炭，然后再提高pH值降低药液温度，再最后高温灭菌。由于硫酸氨基葡萄糖通常以分子或离子的形式在水的条件下容易降解成5-羟甲基糠醛，本发明在灭菌前选定了特定范围的pH值并降低药液温度，在此特定的条件下，药物大部分形成了介于分子、离子和结晶沉淀之间的不溶性微粒聚集体的特定状态，从而减少了分子、离子存在的形式，抑制了5-羟甲基糠醛的产生，同时在高温灭菌加热的过程中，不溶性微粒聚集体在受热条件下又逐渐转变成分子、离子，灭菌后pH值也会随之降低，最终使药物处于稳定均匀的溶解状态。

实验例2：由于活性炭的铁盐、锌盐含量比较高，在引入活性炭的同时引入了大量易加速氧化变色的金属离子，因而，采取合理的活性炭工艺是减少金属离子的关键。分别比较实施例1、2的硫酸氨基葡萄糖注射液以及对比例1（按照CN201010270516专利申请中的实施例4制备的硫酸氨基葡萄糖注射液）置于温度40℃±2℃的密闭容器中，放置6个月，分别于第l、2、3、6月取样考察其稳定性。结果见表4。

表4 加速实验

采用硫氰酸钾比色法测定实施例1、2中灭菌后的铁离子含量， 并在480nm下测定吸光度，实施例1、2各取6个样品同法测定，其中实施例1吸光度的平均值为0.05，实施例2吸光度的平均值为0.15。

以上结果表明本发明采用加热多次活性炭吸附能有效的增强活性炭的吸附能力，同时加热溶解硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐，使其以分子或离子形式存在，增强了铁离子与硫酸氨基葡萄糖的络合能力，并在酸性条件下形成细小的微粒从而被活性炭所吸附，铁离子的减少也使药物更加稳定，降低氧化变色的速度。

实验例3：由于灭菌是输液制剂的一个重要环节，在实际大生产的灭菌工作中可以发现灭菌柜内不同位置，具有不同温度、压力，如上下层、四个角及中央之间存在一定的差别，分别比较实施例1的硫酸氨基葡萄糖注射液以及对比例1（按照CN201010 270516专利申请中的实施例4制备的硫酸氨基葡萄糖注射液）灭菌后硫酸氨基葡萄糖的含量差别，在注射液在灭菌柜内排列4 层，由下至上定为h1、h2、h3、h4，每层的四个角定为S 点，每层中心定为M 点，分别对3批注射液在不同的位置抽取样品1 瓶，计算同一批次各点取样的硫酸氨基葡萄糖的含量的平均值及标准方差。

表4 硫酸氨基葡萄糖注射液灭菌工艺的稳定性

以上结果表明，本发明注射液的制备工艺切实可行，易于用于实际生产，工艺具有更好的稳定性和重现性。由于本发明灭菌前的特定工艺使药液形成了特定均匀的溶液，即使在不同温度下仍能保持活性药物含量的稳定均一。

以上实验证明了本发明的温度、pH值、加入顺序以及灭菌工艺的参数实现了最佳组合，取得了意料不到的技术效果。

本发明注射制剂的含量检测方法和有关物质检查方法：

1、氨基葡萄糖的含量测定

实验方法：采用柱前衍生化-HPLC法。

试剂配制:

(1)0.2mol/L硼酸盐缓冲液   称取7.63g硼酸钠， 加80ml水使溶解，用稀盐酸调pH至9.5，加水至100ml，摇匀。（于室温条件下储存，如有结晶析出，加热使溶解。）

(2)衍生化试剂  称取50mg邻苯二甲醛置14ml聚丙烯试管中，加入1.25ml无水甲醇使溶解，再加入3-巯丙酸50μl和0.2M硼酸盐缓冲液11.2ml，缓慢混匀，置暗处放置30分钟。（每两天加入3-巯丙酸10μl以保持试剂浓度，于暗处室温保存，两周内使用）

色谱条件：

流动相：以乙酸钠水溶液（6.80g三水合乙酸钠，加入700 ml水使溶解，用醋酸调pH至5.9，加水至1000ml，摇匀）-甲醇（900：100）作为流动相。

色谱柱：Hypersil  ODS柱（4.6mm×5cm）

柱  温：室温            检测波长：340nm

流  速：1.0ml/min       进 样 量：20μl

对照液的配制：精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加水制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

供试液的配制：精密量取本品适量（相当于盐酸氨基葡萄糖20mg），置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试液。

衍生化方法：取0.2mol/L的硼酸盐缓冲液400μl，置一小瓶中，加入100μl衍生化试剂和100μl对照液或供试液，混合，衍生化1分钟后进样。记录色谱图。β-异构体与α-异构体的保留时间之比为1.6～1.7。β-异构体的出峰时间在4分钟左右，以β-异构体的峰面积计算盐酸氨基糖的标示含量。

2、利多卡因的含量测定

色谱条件与***适应性实验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液（取1mol/L NaH2PO4 1.3 ml和0.5 mol/L Na2HPO4 32.5ml，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）-乙腈（50：50）用磷酸调PH至8.0为流动相；检测波长为254nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，理论板数按利多卡因峰计算不低于2000。

精密量取本品适量（约相当于盐酸利多卡因20mg），置10ml量瓶中，加2 mol/L NaOH溶液调PH至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸利多卡因对照品约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。

有关物质检查

1、5-羟甲基糠醛及其相关物质

色谱条件：岛津LC-10AT泵；岛津SPD-10A紫外检测器

色 谱 柱  Alltima C8（250×4.6mm，5μm）    柱  温30℃

检测波长  284nm进样量  20μl

流动相  甲醇：水=5：95

精密量取本品适量（约相当于硫酸氨基葡萄糖400mg），置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液；精密称取5-羟甲基糠醛适量，加流动相定量稀释制成浓度为400μg/ml的溶液。取该溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为5-羟甲基糠醛对照溶液。取供试液及对照液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至5-羟甲基糠醛峰保留时间的3.0倍，供试品溶液的色谱图中如有与5-羟甲基糠醛峰保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.1%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.1%），总杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍（1.0%）。

2、N-乙酰-D氨基葡萄糖（NAG）

色谱柱：Shodex Suger SH1011色谱柱（300mm×8mm）

柱  温：50℃     检测波长：202nm      流动相：0.006 mol/L H2SO4溶液

流  速：1.0ml/min      进 样 量：20μl

精密量取本品适量(约相当于硫酸氨基葡萄糖200mg)，置10ml量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取NAG适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含NAG 20μg的溶液作为对照溶液(0.1%)。分别吸取对照溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，供试品溶液色谱图中如有N-乙酰-D氨基葡萄糖，应不得大于N-乙酰-D氨基葡萄糖峰面积（0.1％）。

2、HPLC法测定本品中利多卡因的有关物质

色谱条件参照盐酸利多卡因项下含量测定方法。

精密量取本品适量（约相当于盐酸利多卡因20mg），置10ml量瓶中，用2mol/L NaOH溶液调PH至中性后加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液，另取2，6-二甲基苯胺对照品，精密称定，加流动相并稀释制成每1ml中约为0.8μg的溶液，作为对照品溶液，取对照液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的10~30%；再精密量取供试液20μl，注入液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如有与2，6-二甲基苯胺保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积（0.04%）。

Claims (11)

1.一种含有氨基葡萄糖的组合物，其特征在于，其活性成分为氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐和利多卡因或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，氨基葡萄糖的药学上可接受的盐选自氨基葡萄糖的复盐。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，氨基葡萄糖的药学上可接受的盐选自盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐、硫酸氨基葡萄糖的氯化钠复盐或氯化钾复盐。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，利多卡因的药学上可接受的盐选自盐酸利多卡因、硫酸利多卡因、醋酸利多卡因。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物制备成注射剂，所述的注射剂选自注射液，优选小容量注射剂。

6.根据权利要求5所述的注射剂，其特征在于，所述注射剂包含抗氧化剂、pH调节剂和碱性溶媒。

7.根据权利要求6所述的注射剂，其特征在于，该注射剂由氨基葡萄糖注射液和专用溶媒组成，临用时将氨基葡萄糖注射液和专用溶媒液配对使用；

所述的氨基葡萄糖注射液是由下列重量配比的组分组成：

氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐        100-600份，

利多卡因或其药学上可接受的盐          5-20份，

pH调节剂适量；

所述的专用溶媒为0.5-10毫升，其组成为碱性溶媒和注射用水，所述碱性溶媒为二乙醇胺，三乙醇胺或乙二胺，优选二乙醇胺；

所述的氨基葡萄糖注射液装入棕色安瓿，所述的专用溶媒装入无色安瓿。

8.一种制备以上权利要求7所述注射剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：其中，取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入氨基葡萄糖或其药学上可接受的盐并在50-60℃下搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，在70-80℃下搅拌15～30min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的利多卡因或其药学上可接受的盐，在40-50℃下搅拌10～15min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至15-25℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.5-4.8，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌15-20min。

9.一种制备以上权利要求8所述注射剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：其中，取80％水量配制成0.001mol/L盐酸溶液，加入硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐并在55℃下搅拌使其完全溶解，再加入0.02％的活性炭，在75℃下搅拌20min，脱炭后，再往溶液中加入0.01％的活性炭和处方量的盐酸利多卡因，在45℃下搅拌10min，脱炭，经0.45μm、0.22μm微孔滤膜过滤至澄清，药液在冷却至20℃时加水至足量，然后将溶液pH值调至4.6，按照2ml灌封，最后在121℃下灭菌17min。

10.根据权利要求1-9中任意一项所述的含有氨基葡萄糖的组合物的含量检测方法，其特征在于：包括以下测定方法：

1)氨基葡萄糖的含量测定方法

色谱条件：色谱柱：Hypersil  ODS柱，柱温：室温，检测波长：340nm，流动相：以乙酸钠水溶液：甲醇=900：100作为流动相，所述乙酸钠水溶液按下述方法制得：6.80g三水合乙酸钠，加入700 ml水使溶解，用醋酸调pH至5.9，加水至1000ml，摇匀；

对照液的配制：精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加水制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试液，

衍生化试剂  称取50mg邻苯二甲醛置14ml聚丙烯试管中，加入1.25ml无水甲醇使溶解，再加入3-巯丙酸50μl和0.2M硼酸盐缓冲液11.2ml，缓慢混匀，置暗处放置30分钟，

衍生化方法：取0.2mol/L的硼酸盐缓冲液400μl，置一小瓶中，加入100μl衍生化试剂和100μl对照液或供试液，混合，衍生化1分钟后进样，以β-异构体的峰面积计算盐酸氨基糖的标示含量；

2)利多卡因的含量测定，色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液：乙腈=50：50，并用磷酸调pH至8.0为流动相；检测波长为254nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，理论板数按利多卡因峰计算不低于2000，精密量取本品适量，置量瓶中，加2 mol/L NaOH溶液调pH至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪；另取盐酸利多卡因对照品，精密称定，置量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。

11.根据权利要求1-9中任意一项所述的含有氨基葡萄糖的组合物有关物质的含量检测方法，其特征在于：包括以下测定方法：

1)5-羟甲基糠醛的含量测定

色谱条件：色谱柱Alltima C8柱；柱温30℃，检测波长284nm，进样量  20μl；以甲醇：水=5：95为流动相，

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液；

对照液的配制：精密称取5-羟甲基糠醛适量，加流动相定量稀释至刻度，作为5-羟甲基糠醛对照溶液；

取供试液及对照液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至5-羟甲基糠醛峰保留时间的3.0倍，供试品溶液的色谱图中与5-羟甲基糠醛峰保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积0.1%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积0.1%，总杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍；

2)N-乙酰-D氨基葡萄糖的含量测定

色谱柱：Shodex Suger SH1011色谱柱，柱温：50℃，检测波长：202nm，流动相为0.006 mol/L H2SO4溶液；

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

对照液的配制：另取N-乙酰-D氨基葡萄糖适量，加流动相适量使溶解并稀释至刻度；

分别吸取对照溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，供试品溶液色谱图中如有N-乙酰-D氨基葡萄糖，不得大于N-乙酰-D氨基葡萄糖峰面积0.1%；

3)2，6-二甲基苯胺的含量测定方法：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸缓冲液：乙腈=50：50，并用磷酸调pH至8.0为流动相；检测波长为254nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，

供试液的配制：精密量取本品适量，置量瓶中，用2mol/L NaOH溶液调pH至中性后加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液；

对照液的配制：另取2，6-二甲基苯胺对照品，精密称定，加流动相并稀释制成对照品溶液；

供试品溶液的色谱图中与2，6-二甲基苯胺保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积的0.04%。