CN102940768A - 一种改善睡眠的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种改善睡眠的组合物，以及它的制备方法和应用。本发明所述组合物，包括以下重量份的组分：茯苓400~700份，酸枣仁350~650份，百合250~550份，人参100~250份和五味子40~200份。本发明将上述五种中药原料进行合理搭配，给出的成分配比使得原料起到了很好的协同作用，即每个中药发挥出其功效，组合起来在改善睡眠方面效果显著，优于现有技术，即处方更优化，工艺更合理，将有效组分提取的更完全，更好地发挥组合物的疗效；且无不良反应，安全性很高；所涉及的设备简单，成本较低，能够实现工业化生产。

Description

一种改善睡眠的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药品或保健品组合物领域，具体地，涉及一种改善睡眠的组合物，以及它的制备方法和应用。

背景技术

睡眠障碍指睡眠量不正常以及睡眠中出现异常行为的表现，是睡眠和觉醒正常节律***替紊乱的表现。可由多种因素引起，常与躯体疾病有关，包括睡眠失调和异态睡眠。睡眠与人的健康息息相关，长期失眠会导致大脑功能紊乱，对身体造成多种危害，严重影响身心健康。根据调查显示，很多人都患有睡眠方面的障碍或者和睡眠相关的疾病，成年人会出现睡眠障碍的比例高达30%。专家指出睡眠是维持人体生命的极其重要的生理功能，对人体必不可少。因此，睡眠障碍必须引起足够的重视。

目前，市面流行的各类改善睡眠产品，大都从镇静、催眠和调节昼夜差方面去寻求配方。以褪黑素为主要原料的保健产品只适应于夜班工作者，需要倒时差，中老年（因褪黑素分泌减少）人群如果药物白天残留较大，会有头晕和走路不稳等副作用，可能会给年纪大、身体较弱者带来危险。然而，造成睡眠障碍有来自多方面的因素，比如病痛、大脑连续的过度兴奋或疲劳、精神压力、情感挫折、恐惧、神经衰弱、精神受刺激等等。而大多数情况下，昼夜差规律被打乱只是睡眠障碍在发展初期的一种表现形式，并非病因。更何况昼夜差规律混乱造成的睡眠障碍毕竟不在多数，而恢复昼夜差规律并不能解决睡眠障碍的根本原因。因此，不能得到消费者的长期青睐。因此，结合中医药理论，开发出从根本上解决睡眠障碍、改善睡眠的组合物势在必行。

中国专利申请CN 03135481.5公开了一种改善睡眠的纯天然保健品。该保健品的药物原料有人参、黄芪、五味子、薏苡仁、百合、枸杞子、茯苓、夜交藤、柏子仁、远志、浮小麦、大枣、白芍、丹参，其配制包括制备原料药提取液、制取浸膏、制备保健品干料和包装四个步骤。

中国专利申请CN 201010532922.9公开了一种舒缓减压组合物及其制备方法，该组合物主要由下述重量份数的原料制成：炒酸枣仁5-30份、当归5-30份、云苓5-30份、炙远志1-15份、川芎5-30份、五味子1-15份、百合10-45份、丹参10-45份、夜交藤10-45份、柏子仁5-30份、石菖蒲1-15份、合欢皮10-45份；其制备方法是将上述配方用量的药材经过水提醇沉后浓缩。以上组合物处方量大，制备工艺繁琐。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种改善睡眠的组合物。

本发明的另一目的在于提供一种所述组合物的制备方法。

本发明的又一目的在于提供所述组合物在制备改善睡眠的药物或/和保健品中的应用。

本发明提供的一种改善睡眠的组合物，包括以下重量份的组分：茯苓400~700份，酸枣仁350~650份，百合250~550份，人参100~250份和五味子40~200份。

本发明提供的改善睡眠的组合物，优选地，包括以下重量份的组分：茯苓500~600份，酸枣仁450~550份，百合350~450份，人参120~220份和五味子80~160份。

本发明提供的改善睡眠的组合物，优选地，包括以下重量份的组分：茯苓530~570份，酸枣仁480~520份，百合380~420份，人参150~190份和五味子100~140份。

本发明提供的改善睡眠的组合物，更优选地，包括以下重量份的组分：茯苓550份，酸枣仁500份，百合400份，人参170份和五味子120份。

本发明所述的改善睡眠的组合物，还包括辅料。

本发明组合物所用辅料，为本领域的常规辅料。

本发明所述的改善睡眠的组合物，其剂型为药学或保健品上可接受的剂型。

其中，药学或保健品上可接受的剂型为：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或丸剂。优选胶囊剂。

本发明提供的所述组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将所述比例中部分人参粉碎成细粉，备用；

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的酸枣仁、五味子，用乙醇溶剂提取，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用；

3）取所述比例的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮，滤液浓缩成清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，减压干燥，粉碎，过筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

本发明所述的组合物的制备方法，进一步地，包括以下步骤：

1）取所述比例中50%~65%的人参，干燥后粉碎，过90~110目筛成细粉，备用；

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的酸枣仁、五味子用乙醇回流提取2~4次，每次加人参、酸枣仁和五味子5~7倍量的乙醇，每次提取1~2小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述比例的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2~4次，每次加茯苓、百合和醇提药渣6~10倍量的水，每次煎煮1~2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于50~80℃减压干燥，粉碎，过70~90目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

上述制备方法中：

所述步骤1）中，粉碎人参优选过100目筛。

所述步骤1）中，干燥人参的温度为50~70℃，优选60℃。

所述步骤1）中，采用钴60照射灭菌粉碎的细粉。

所述步骤2）所用乙醇的含醇量达65~75%（体积百分数），优选70%。

所述步骤2）优选提取2次，每次加6倍量的乙醇，每次提取1.5小时。

所述步骤3）优选6~8倍量的水，更优选煎煮2次，每次加8倍量的水，每次煎煮1.5小时。

所述步骤4）优选于60~70℃减压干燥，更优选65℃。

所述步骤4）优选过80目筛，得干膏粉。

本发明所述组合物若制成胶囊剂，所述步骤5）中，得到干膏粉后，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，即得胶囊成品。

本发明的制备方法，能够最大化提取各药味的有效成分，从而提高药效。茯苓水煎剂具有较好的镇静催眠作用；酸枣仁醇提后水提，有显著的镇静和催眠以及抗惊厥作用；百合水提液可明显延长戊巴比妥钠睡眠时间，并使阈下剂量戊巴比妥睡眠率显著提高；为了防止制备后的产品吸潮，同时人参属贵重药材，故采用部分粉碎，部分醇提后水提的方法，更好地利用其中皂苷、糖类等对中枢神经***有作用的活性成分；五味子醇提后水提，可以明显减少小鼠自主活动次数，增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间，使其在组方中更好地发挥其镇静、催眠作用。

本发明提供的所述组合物制备成药物或保健品，可用来改善睡眠。

本发明提供的组合物中：茯苓：性味甘淡平，入心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿，健脾，宁心的功效。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。

酸枣仁：性味甘、酸、平，归肝、胆、心经。具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津的功效。用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴。

百合：味甘，性寒，归心、肺经。具有养阴润肺，清心安神的功效。用于阴虚燥咳，劳嗽咳血，虚烦惊悸，失眠多梦，精神恍惚。

人参：味甘、微苦，微温。归脾、肺、心、肾经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。用于体虚欲脱，肢冷脉微，气血亏虚，惊悸失眠等。

五味子：味酸、甘，温，归肺、心、肾经。具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效。用于久嗽虚喘，津伤口渴，心悸失眠等。

也就是说，本发明的组合物中，茯苓健脾宁心；酸枣仁补心养肝而宁心安神；百合养阴润肺清心安神；人参补气宁心；五味子益气生津、补肾宁心；诸药合用，共奏宁心安神、益气养阴之功。通过全面调整人体机能，从而达到协同的改善睡眠的作用，实现提高失眠人群睡眠质量和生活质量的目的。

总之，本发明将上述五种中药原料进行合理搭配，给出的成分配比使得原料起到了很好的协同作用，即每个中药发挥出其功效，组合起来在改善睡眠方面效果显著，优于现有技术，即处方更优化，工艺更合理，将有效组分提取的更完全，更好地发挥组合物的疗效，同时又减少了服用量；且无不良反应，安全性很高；药性缓和，不会引起药物依赖性，可长期放心服用。所涉及的设备简单，成本较低，能够实现工业化生产。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明实施例所用原料均可以从市场上购得。本发明所用乙醇和水的倍数均为重量倍数。

本发明所用辅料的种类和用量可以是本领域的常规选择。

实施例1：胶囊剂

1、组合物组成：

茯苓550g，酸枣仁500g，百合400g，人参170g，五味子120g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取人参100g，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（70g）及上述重量的酸枣仁、五味子用70%乙醇回流提取2次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和6倍量的溶剂乙醇，每次提取1.5小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和8倍量的水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于65℃减压干燥，粉碎，过80目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品：制成1000粒，每粒装0.4g；标志性成分及含量：每100g含总皂苷0.7g。

实施例2：片剂

1、组合物组成：

茯苓530g，酸枣仁520g，百合380g，人参190g，五味子100g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取95g的人参，50℃干燥后粉碎，过90目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（95g）及上述重量的酸枣仁、五味子用75%乙醇回流提取3次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和7倍量的乙醇，每次提取1小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮4次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和7倍量的水，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于65℃减压干燥，粉碎，过85目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加入淀粉、糊精、羟甲基淀粉钠（分别为人参细粉和干膏粉总重量的3%，1%和1%），混匀，用75%乙醇制粒，干燥，加硬脂酸镁（为人参细粉和干膏粉总重量的2%），混匀，制粒，压片。

实施例3：颗粒剂

1、组合物组成：

茯苓570g，酸枣仁480g，百合420g，人参150g，五味子140g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取97.5g的人参，55℃干燥后粉碎，过110目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（52.5g）及上述重量的酸枣仁、五味子用65%乙醇回流提取4次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和5倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮3次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和6倍量的水，每次煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于65℃减压干燥，粉碎，过75目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加入75%乙醇做粘合剂，加入甜菊甙和可溶性淀粉（分别为人参细粉和干膏粉总重量的2%和5%），混匀，压制成颗粒。

实施例4：丸剂

1、组合物组成：

茯苓500g，酸枣仁450g，百合450g，人参120g，五味子170g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取72g的人参，65℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（48g）及上述重量的酸枣仁、五味子用70%乙醇回流提取2次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和6倍量的乙醇，每次提取1.5小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和8倍量的水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于65℃减压干燥，粉碎，过80目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加人参细粉和干膏粉总重量1.0~1.2倍的炼蜜制丸。

实施例5：胶囊剂

1、组合物组成：

茯苓600g，酸枣仁550g，百合350g，人参220g，五味子70g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取132g的人参，70℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（88g）及上述重量的酸枣仁、五味子用70%乙醇回流提取2次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和6倍量的乙醇，每次提取1.5小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和8倍量的水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于65℃减压干燥，粉碎，过80目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品。

实施例6：胶囊剂

1、组合物组成：

茯苓400g，酸枣仁650g，百合250g，人参250g，五味子40g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取210g的人参，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（140g）及上述重量的酸枣仁、五味子用70%乙醇回流提取2次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和6倍量的乙醇，每次提取1.5小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和8倍量的水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于60℃减压干燥，粉碎，过90目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品。

实施例7：胶囊剂

1、组合物组成：

茯苓700g，酸枣仁350g，百合250g，人参100g，五味子200g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取60g的人参，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（40g）及上述重量的酸枣仁、五味子用70%乙醇回流提取2次，每次加人参、酸枣仁和五味子原材料之和6倍量的乙醇，每次提取1.5小时，滤过（药渣保存），合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取上述重量的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2次，每次加茯苓、百合和醇提药渣原材料之和8倍量的水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于70℃减压干燥，粉碎，过70目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品。

实验例1：功能试验

1材料和方法

1.1样品：由实施例1的胶囊，规格0.4g/粒。人口服推荐用量为每人（成人）每日2次，每次3粒，成人体重按60kg计算，折合剂量为40mg/kg BW。取胶囊内容物进行试验。

1.2实验动物与分组：选用广东省医学实验动物中心繁殖的SPF级健康成年NIH种雌性小鼠192只，体重为18~22克。每48只小鼠为1组，共4组，分别进行直接睡眠试验、延长戊巴比妥钠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验、巴比妥钠睡眠潜伏期试验。

1.3实验环境条件：实验动物室温度：22~25℃，相对湿度：55~70%。

1.4剂量选择及样品处理：根据该样品的人体推荐用量，设200、400、800mg/kg BW（分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍）3个剂量的试验组，同时设一个阴性对照组，每组12只动物。分别称取2.0、4.0、8.0g样品，各加蒸馏水至200mL，混匀、配成10、20、40mg/mL浓度的混悬液，分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃体积为0.2mL/10g BW，对照组给予等体积的蒸馏水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

1.5主要仪器与试剂：

仪器：动物台秤、电子分析天平、秒表等。

试剂：戊巴比妥钠、巴比妥钠，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.6实验方法：

1.6.1直接睡眠试验：在给末次样品后观察小鼠的睡眠情况，以动物的翻正反射消失超过60秒判为进入睡眠，翻正反射恢复即为动物觉醒。结果用X2检验进行统计分析。如试验组入睡动物数及睡眠时间增加并与阴性对照组有显著差异，即判定该项试验结果为阳性。

1.6.2延长戊巴比妥钠睡眠时间试验：在给末次样品20分钟后，各组动物经腹腔注射戊巴比妥钠45mg/kg BW，注射量为0.2mL/20g BW。以动物的翻正反射消失为指标，观察受试物能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。结果用方差分析进行统计分析。如试验组小鼠的睡眠时间比阴性对照组延长并有统计学意义，即判定该项试验结果为阳性。

1.6.3戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验：在给末次样品20分钟后，各组动物经腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg BW。观察30分钟内小鼠的睡眠情况，以翻正反射消失60秒以上者为入睡，记录各组的入睡动物数，计算入睡动物发生率。结果用X2检验分析。如试验组入睡动物发生率高于阴性对照组并有统计学意义，即判定该项试验结果为阳性。

1.6.4巴比妥钠睡眠潜伏期试验：各组动物在给末次样品后20分钟经腹腔注射巴比妥钠300mg/kg BW，注射量为0.2mL/20g BW。以翻正反射消失为指标，观察受试动物能否缩短巴比妥钠睡眠潜伏期。结果用方差分析进行统计分析。如试验组小鼠的睡眠潜伏期比阴性对照组缩短并有统计学意义，即判定该项试验结果为阳性。

1.7结果判定

若延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验三项实验中二项阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定该受试样品具有改善睡眠功能作用。

2结果

2.1样品对小鼠体重的影响

表1：本发明胶囊改善睡眠功能试验小鼠体重

*注：P值表示各剂量组实验初始、中期和末期的小鼠体重及增重与对照组比较，差异均无显著性。

表2：本发明胶囊改善睡眠功能试验小鼠体重

*注：P值表示各剂量组实验初始、中期和末期的小鼠体重及增重与对照组比较，差异均无显著性。

由表1、表2可见，实验初、实验中期，实验末期样品各剂量组的小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与阴性对照组间比较，差异均无显著性（P>0.05），表明该样品对小鼠的体重增长无明显影响。

2.2样品的直接睡眠作用

从表3可见，经口给予小鼠不同剂量的实施例1的胶囊30天，各剂量组均没有动物出现翻正反射消失，即全部动物均没有进入睡眠状态，提示该样品没有直接诱导小鼠睡眠作用。

表3：本发明胶囊小鼠直接睡眠试验结果

2.3样品对戊巴比妥钠睡眠时间的影响

表4：本发明胶囊延长戊巴比妥钠睡眠时间试验结果

经表4可见，经口给予小鼠不同剂量的实施例1的胶囊30天，各剂量组小鼠的睡眠时间均比阴性对照组延长，其中的高、中剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（分别P<0.01和P<0.05），提示该样品具有延长戊巴比妥钠睡眠时间的作用。

2.4样品对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响

从表5可见，经口给予小鼠不同剂量的实施例1的胶囊30天，各剂量组的动物入睡率高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（P<0.05），提示该样品与阈下剂量的戊巴比妥钠有协同催眠作用。

表5：本发明胶囊戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验结果

2.5样品对巴比妥钠催眠潜伏期的影响

表6：本发明胶囊戊巴比妥钠睡眠潜伏期试验结果

从表6可见，经口给予小鼠不同剂量的实施例1的胶囊30天，各剂量组小鼠的睡眠潜伏期均比阴性对照组的缩短，且高、中剂量组与阴性对照组的差异具有非常显著性（P<0.01），提示该样品具有缩短巴比妥钠睡眠潜伏期的作用。

3结果判定

分别以200、400、800mg/kg BW（相当于人体推荐用量的5、10、20倍）剂量的实施例1的胶囊连续给小鼠灌胃30天，能延长戊巴比妥钠睡眠时间、协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用、缩短巴比妥钠睡眠潜伏期，无直接睡眠作用，对小鼠的体重增长无影响，提示该样品具有改善睡眠功能作用。

实验例2：安全性试验

1材料和方法

1.1样品：实施例1的胶囊，规格：0.4g/粒，置阴凉干爽通风处保存。人口服推荐用量为每人（成人）每日2次，每次3粒，成人体重按60kg计算，折合剂量为40mg/kg BW。取胶囊内容物进行试验。

1.2实验动物及环境：清洁级健康昆明种小鼠由广西医科大学医学实验动物中心繁殖，SPF级SD种大鼠由广东省医学实验动物中心繁殖，实验动物质量合格证号分别为：0001069（小鼠）、0042719（大鼠）。实验动物使用许可证号：SYXK桂2007-0003。实验动物室温度：22～25℃，相对湿度：55～70%。

1.3小鼠急性经口毒性试验：采用最大给药量试验法，选体重18～22g的昆明种小鼠20只，雌雄各半。试验前动物禁食16小时，不限饮水。称取40.0g样品，加蒸馏水至100mL，混匀、配成400mg/mL浓度的混悬液，然后给动物灌胃3次（每次间隔4h），每次灌胃量为0.4mL/20g BW，合计剂量为24000mg/kg BW。灌胃后观察、记录动物的中毒表现。每周称重一次，观察两周时间，试验结束解剖动物进行大体观察。按毒性分级标准评价受试物的急性毒性强弱。

1.4Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四种菌株进行试验。在无菌操作条件下，用灭菌蒸馏水将样品分别配成50、10、2、0.4、0.08mg/mL5个浓度作为受试溶液，经高压灭菌(0.103Mpa 20min)处理后供试验用。

以多氯联苯诱导的大鼠肝微粒体酶（S_-9）作为体外代谢活化***。采用平板掺入法，在保温的顶层培养基中依次加入0.1mL试验菌株增菌液、0.1mL受试物溶液和0.5mL S_-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上。5个试验剂量分别为5000、1000、200、40、8ug/皿，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性突变剂对照。自发回变对照除不加样品外，其余条件与样品组相同。溶剂对照用灭菌蒸馏水替代样品，其余条件与样品组相同。每个剂量组的各种菌株均做3个平行皿。在37℃下培养48小时，计数每皿的菌落数。整套试验在相同条件下重复做两次。如果受试物的回变菌落数增加超过自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂量-反应关系者，即为诱变试验阳性。

1.5小鼠骨髓细胞微核试验：采用间隔24小时两次经口灌胃法进行试验。选体重为25～30g的昆明小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。试验组3个剂量分别设12000、6000、3000mg/kg BW，以蒸馏水为阴性对照，42mg/kg BW剂量的环磷酰胺（cp）作阳性对照。分别称取40.0、20.0、10.0g样品，各加蒸馏水至100mL，混匀、配成400、200、100mg/mL浓度的混悬液，然后按0.6mL/20gBW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的蒸馏水，阳性对照组灌给等体积的1.4mg/mL环磷酰胺溶液。第二次给样后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。

在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE），微核率以含微核的PCE千分率计，同时计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（PCE/NCE）。采用泊松分布均数比较法统计处理。如试验组的微核率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.6小鼠***畸形试验：选体重为25～35g的昆明种雄性小鼠50只，随机分成5组，每组10只。试验组3个剂量分别设12000、6000、3000mg/kg BW，以蒸馏水为阴性对照，42mg/kg BW剂量的环磷酰胺（cp）作阳性对照。分别称取40.0、20.0、10.0g样品，各加蒸馏水至100mL，混匀、配成400、200、100mg/mL浓度的混悬液，然后按0.6mL/20g BW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的蒸馏水，阳性对照组灌给等体积的1.4mg/m环磷酰胺溶液。每天灌胃一次，连续5天。末次给样后第30天处死动物，取副睾的***涂片，甲醇固定，伊红染色。在光学显微镜下，每只动物计数完整***1000个，计算***畸形率，采用χ²检验统计处理。如试验组的***畸形率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.7大鼠30天喂养试验

1.7.1剂量选择与受试物给予方式：选SD种大鼠80只，雌雄各半，雄鼠体重69.8±6.3g，雌鼠体重69.2±6.4g。将动物随机分为4组，即阴性对照组和3个试验组，每组20只，雌雄各半。3个试验组剂量分别设为4000、3000、2000mg/kg BW，分别相当于人体推荐剂量的100、75、50倍。分别称取200.0、150.0、100.0g样品，各加蒸馏水至500mL，混匀、配成400.0、300.0、200.0mg/mL浓度溶液，按1.0mL/100g BW的体积给相应剂量组动物灌胃，阴性对照组灌给等量的蒸馏水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

1.7.2实验方法：实验期间所有动物给予普通饲料，单笼饲养，自由摄食饮水。每天观察动物的活动和生长情况，每周加食2次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重，计算每周进食量和食物利用率。第30天动物禁食过夜，第31天称动物空腹体重，然后处死大鼠，采2份血样，一份血抗凝用血球计数仪检测Hb、RBC、WBC及其分类、PLT等；另一份血不抗凝分离血清，用试剂盒和半自动化分析仪检测血清AST、ALT、BUN、Cr、TC、TG、Glu、TP、Alb等项目。采血后解剖动物，进行大体观察，取肝脏、肾脏、脾脏和睾丸等脏器进行称重，计算脏/体比值，取肝脏、肾脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸和卵巢等脏器进行病理组织学检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行高剂量组和对照组动物的主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对中、低剂量组相应器官及组织进行检查。

1.7.3实验数据统计：应用SPSS统计软件进行单因素方差分析。在统计分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett检验进行多个剂量组与对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若转换数据仍未达到方差齐要求，改用秩和检验进行统计分析。

2结果

2.1急性经口毒性试验

表1-1：本发明胶囊对小鼠的急性毒性试验结果

从表1-1可见，以最大给药量（剂量为24000mg/kg BW）的样品给予小鼠灌胃后，动物生长良好，未见体重受到影响。受试小鼠均未见有中毒症状，观察14天无动物死亡。试验结束解剖动物、大体观察，肝、肾、脾、心、肺、胃、肠等主要脏器均未见明显异常改变，根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的急性毒性分级标准，该样品的急性经口毒性属无毒级。

2.2Ames试验

表2-1：本发明胶囊Ames试验结果（第一次）

注：1、以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。

2、阳性对照：TA97a+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-氨基芴（剂量为10ug/皿）；TA98-S9采用柔毛霉素（剂量为6ug/皿）；TA97a-S9、TA102-S9采用敌克松（剂量为50ug/皿）；TA100-S9采用叠氮钠（剂量为1.5ug/皿）；TA102+S9采用1,8-二羟基葸醌（剂量为50ug/皿）。表3-1同。

从表2-1、表3-1可见，对TA97a、TA98、TA100、TA102四种试验菌株，无论是否加入S-9，样品各剂量组的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的两倍，亦无剂量-反应关系，表示该受试物诱变试验结果为阴性。

表3-1：本发明胶囊Ames试验结果（第二次）

注：以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。

2.3小鼠骨髓细胞微核试验

表4-1：本发明胶囊对小鼠的骨髓细胞微核发生率的影响

注：**表示该组与阴性对照组比较，差异具有极显著性（P<0.01）；样品各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）；cp为环磷酰胺。

从表4-1可见，样品各剂量组小鼠的骨髓细胞微核率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P<0.01)。未见该样品对小鼠的骨髓细胞有损伤作用。

2.4小鼠***畸形试验

表5-1：发明胶囊对小鼠***畸形发生率的影响

注：**表示该组与阴性对照组比较，差异具有极显著性（P<0.01）；样品各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）；cp为环磷酰胺。

从表5-1可见，样品对小鼠***畸形发生率未产生明显改变，样品各剂量组的***畸形率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P<0.01)。未见该样品对小鼠***产生畸形作用。

2.5大鼠30天喂养试验

2.5.1动物一般表现：实验期间，各组动物生长发育良好，未见动物有异常行为和中毒表现，各组动物均无死亡。

2.5.2样品对大鼠体重及食物利用率的影响

结果见表6-1～表11-1，以4000、3000、2000mg/kg BW剂量的本发明胶囊给大鼠灌胃30天，实验期间，样品各剂量组雌雄鼠每周的体重、增重量、每周进食量及总进食量、每周食物利用率及总食物利用率与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的体重增长和食物利用率无明显影响。

表6-1：本发明胶囊对大鼠体重的影响

注：*第4周的天数为9天，下同。表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表7-1：本发明胶囊对大鼠第1周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表8-1：本发明胶囊对大鼠第2周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表9-1：本发明胶囊对大鼠第3周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表10-1：本发明胶囊对大鼠第4周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表11-1：本发明胶囊对大鼠总食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

2.5.3样品对大鼠血常规指标的影响

表12-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表13-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

从表12-1、表13-1可见，以4000、3000、2000mg/kg BW剂量的本发明胶囊给大鼠灌胃30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数及其分类、血小板数与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血常规指标无明显影响。

2.5.4样品对大鼠血液生化指标的影响

结果见表14-1、表15-1，以4000、3000、2000mg/kg BW剂量的本发明胶囊给大鼠灌胃30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、总蛋白、白蛋白、血糖与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血液生化指标无明显影响。

表14-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表15-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

2.5.5样品对大鼠脏器重量及脏器/体重比值的影响

结果见表16-1、表17-1，以4000、3000、2000mg/kg BW剂量的本发明胶囊给大鼠灌胃30天，样品各剂量组大鼠的肝、肾、脾、雄鼠睾丸重量和肝/体、肾/体、脾/体、雄鼠睾/体比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的脏器重量及脏器/体重比值无明显影响。

表16-1：本发明胶囊对大鼠脏器重量的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表17-1：本发明胶囊对大鼠脏器/体重比值的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

2.5.6解剖大体观察及组织学检查结果

实验结束解剖动物，大体观察各组动物均未发现明显病变。故只选择样品的高剂量组和对照组动物的主要脏器进行组织病理切片检查，结果见表18-1～表24-1。结果显示，高剂量组和对照组各有1只雄性大鼠的肝脏汇管区可见轻度的炎症细胞浸润；对照组有1只雌性大鼠的肾脏皮质部可见少量蛋白管型；以上组织病变属动物的自发轻型病变，且两组动物的肝脏组织病变程度相似，故可以排除是样品所致；其他脏器组织未见病理组织学改变，表明该样品对大鼠的上述脏器组织无损害作用。

表18-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠肝脏组织病理学检查结果

表19-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠肾脏组织病理学检查结果

表20-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠脾脏组织病理学检查结果

表21-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠胃组织病理学检查结果

表22-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠十二指肠组织病理学检查结果

表23-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠雄鼠睾丸组织病理学检查结果

表24-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠雌鼠卵巢组织病理学检查结果

3小结

以最大给药量（剂量为24000mg/kg Bw）的样品给予小鼠灌胃后，未见动物有中毒症状和死亡，急性经口毒性属无毒级。三项遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠***畸形试验）结果均为阴性。30天喂养试验，以4000、3000、2000mg/kg BW（分别相当于人体推荐用量的100、75、50倍）3个剂量的样品连续给大鼠灌胃30天，实验期间动物生长发育良好，各剂量组大鼠的体重、增重量、进食量、食物利用率、血常规指标、血液生化指标、脏器重量及脏器/体重比值等与对照组比较，均无显著性差异（P>0.05）；大体解剖观察和组织病理学检查未见与样品有关的异常改变。提示该样品30天喂养对大鼠各项观察指标未产生毒副作用。

采用实施例2~7制备的组合物同法进行上述实验。结果表明：本发明制备的用于改善睡眠的组合物与实施例1的组合物具有相似的作用，其中，以实施例1的效果为最优。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种改善睡眠的组合物，包括以下重量份的组分：茯苓400~700份，酸枣仁350~650份，百合250~550份，人参100~250份和五味子40~200份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：茯苓500~600份，酸枣仁450~550份，百合350~450份，人参120~220份和五味子80~160份；优选地，所述组合物包括以下重量份的组分：茯苓530~570份，酸枣仁480~520份，百合380~420份，人参150~190份和五味子100~140份。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：茯苓550份，酸枣仁500份，百合400份，人参170份和五味子120份。

4.根据权利要求1~3任意一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为药学或保健品上可接受的剂型。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或丸剂；优选胶囊剂。

6.权利要求1~5任意一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将所述比例中部分人参粉碎成细粉，备用；

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的酸枣仁、五味子，用乙醇溶剂提取，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用；

3）取所述比例的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮，滤液浓缩成清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，减压干燥，粉碎，过筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

7.根据权利要求6所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取所述比例中50%~65%的人参，干燥后粉碎，过90~110目筛成细粉，备用；

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的酸枣仁、五味子用乙醇回流提取2~4次，每次加人参、酸枣仁和五味子5~7倍量65~75%的乙醇，每次提取1~2小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35的清膏，备用；

3）取所述比例的茯苓、百合和步骤2）的醇提药渣加水煎煮2~4次，每次加茯苓、百合和醇提药渣6~10倍量的水，每次煎煮1~2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于50~80℃减压干燥，粉碎，过70~90目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

8.根据权利要求7所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2）提取2次，每次加6倍量70%的乙醇，每次提取1.5小时；所述步骤3）煎煮2次，每次加8倍量的水，每次煎煮1.5小时。

9.根据权利要求6~8任意一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，将组合物制成胶囊剂，步骤5）中得到干膏粉后，用75%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，即得胶囊成品。

10.权利要求1~5任意一项所述的组合物在制备改善睡眠的药物或/和保健品中的应用。