CN102920785A - 一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，涉及一种从原料中提取总黄酮的方法。本发明是要解决传统的提取方法存在的成本高，获得的提取物中总黄酮含量低的技术问题。方法如下：一、将番石榴叶用水煎煮后浓缩得到清膏；二、将清膏与水进行混合静置收集上层液体即得到提取液；三、聚酰胺树脂的预处理；四、将提取液进行聚酰胺树脂纯化收集乙醇洗脱液；五、减压蒸馏回收乙醇洗脱液，再对洗脱液浓缩，减压干燥，即得到番石榴叶提取物。本发明方法的提取物中总黄酮含量超过80％，可作为药用活性部位用于临床应用和市场开发。本发明应用于番石榴叶提取物的制备领域。

Description

一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法

技术领域

本发明涉及一种从原料中提取总黄酮的方法。

背景技术

番石榴叶为桃金娘科植物番石榴Psidium Guajaua L的干燥叶及带叶嫩茎。收载于《广西中药材标准》，在布朗语称“麻果”。气清香，味涩、微甘苦，具有收敛止泻，消炎止血。用于久痢，泄泻，糖尿病，创伤出血，皮肤湿疹，搔痒，热痱，牙痛，现代药理研究表明，番石榴叶具有降血糖、抗菌、抗病毒、抗氧化作用。

文献对番石榴叶研究有很多，药理学研究显示，番石榴叶中提取的有效成分对2型糖尿病患者有效，并提示其药理作用并非直接改善人体胰岛素β细胞的分泌功能，而是提高了人体周围组织对糖的利用。植物化学研究表明，番石榴叶提取的有效成分属于黄酮类化合物。具有降血糖、抗菌、抗病毒、活血化瘀的作用；因此，现在研究较多的番石榴叶总黄酮作为药用活性部位具有极大的临床应用价值和市场开发价值。

黄酮类成分的提取方法有很多，包括溶剂提取、微波提取、超临界萃取、酶浸渍萃取、超声波提取、回流、索氏提取、煎煮法和渗滤等。先进的提取技术已经应用到中药材提取加工的各个领域，但是，对于番石榴叶活性部位总黄酮的提取相关报道和相关专利中，多数仍然采取传统的提取方法。传统的提取方法成本高，获得的提取物中总黄酮含量低，以芦(C₂₇H₃₀O₁₆)计在70％以下。

发明内容

本发明是要解决传统的提取方法存在的成本高，获得的提取物中总黄酮含量低的技术问题，从而提供了一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法。

本发明的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法是按下述步骤进行：

一、取50～60kg番石榴叶，然后用水煎煮至少2次，过滤，合并煎煮液，然后在温度为60～80℃条件下浓缩至相对密度为1.12～1.14g/cm³的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴叶质量的14～20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴叶质量的10～14倍，每次煎煮水的用量依次递减20％～30％，每次煎煮耗时1～3小时；

二、向步骤一获得的清膏内加水至体积为150～200L，然后用2～4mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～7.0，浸泡12～24小时，收集上清液，用4～5mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至2.0～3.0后，静置12～24小时，收集上层液体即得到提取液；

三、聚酰胺树脂的预处理：取聚酰胺树脂装入色谱柱中，用5～8BV的丙酮以0.3～0.5BV/h流速冲洗至洗出液无色，最后用5～8BV的体积浓度为95％～97％的乙醇溶液冲洗，流速为0.3～0.5BV/h，倒出，置于烘箱中80～90℃烘干；

四、将步骤二得到的提取液用聚酰胺树脂柱进行纯化，聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2～4，再用水进行洗脱，洗脱用的水体积为6～10BV，再使用9～11BV的体积浓度为50％～75％的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集乙醇洗脱液；

五、减压蒸馏回收乙醇洗脱液，再对洗脱液浓缩，减压干燥，即得到番石榴叶提取物。

本发明包括以下效果：

1、本发明采用聚酰胺纯化的方法，聚酰胺树脂是由酰胺聚合而成的一类高分子物质，它对黄酮类化合物有较强的吸附性能，主要通过氢键和范德华力吸附。本发明只采用乙醇、丙酮等价格低廉的洗脱液，因此成本较低，且存在方法简单、效率高、稳定性好和容易再生等特点，得到的产品安全，不存在重金属、有机溶剂毒性残留等问题；

2、按药剂学方法，可以将本发明中番石榴叶有效部位总黄酮制成适用于临床的多种药物制剂。各种剂型包括口服制剂以及非肠道给药的剂型。所述的口服制剂可制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、混悬剂或口服液体制剂，所述的非肠道给药剂型可制成注射剂、气雾剂、栓剂或者皮下给药剂，本发明番石榴叶总黄酮制成各种剂型中，还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等；

3、本发明获得的番石榴叶提取物中总黄酮含量以芦(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不少于80％，单体成分中还有槲皮素、大豆异黄酮等。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式中一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法是按以下步骤进行的：

一、取50～60kg番石榴叶，然后用水煎煮至少2次，过滤，合并煎煮液，然后在温度为60～80℃条件下浓缩至相对密度为1.12～1.14g/cm³的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴叶质量的14～20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴叶质量的10～14倍，每次煎煮水的用量依次递减20％～30％，每次煎煮耗时1～3小时；

二、向步骤一获得的清膏内加水至体积为150～200L，然后用2～4mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～7.0，浸泡12～24小时，收集上清液，用4～5mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至2.0～3.0后，静置12～24小时，收集上层液体即得到提取液；

三、聚酰胺树脂的预处理：取聚酰胺树脂装入色谱柱中，用5～8BV的丙酮以0.3～0.5BV/h流速冲洗至洗出液无色，最后用5～8BV的体积浓度为95％～97％的乙醇溶液冲洗，流速为0.3～0.5BV/h，倒出，置于烘箱中80～90℃烘干；

四、将步骤二得到的提取液用聚酰胺树脂柱进行纯化，聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2～4，再用水进行洗脱，洗脱用的水体积为6～10BV，再使用9～11BV的体积浓度为50％～75％的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集乙醇洗脱液；

五、减压蒸馏回收乙醇洗脱液，再对洗脱液浓缩，减压干燥，即得到番石榴叶提取物。

本实施方式包括以下效果：

1、本实施方式采用聚酰胺纯化的方法，聚酰胺树脂是由酰胺聚合而成的一类高分子物质，它对黄酮类化合物有较强的吸附性能，主要通过氢键和范德华力吸附。本实施方式只采用乙醇、丙酮等价格低廉的洗脱液，因此成本较低，且存在方法简单、效率高、稳定性好和容易再生等特点，得到的产品安全，不存在重金属、有机溶剂毒性残留等问题；

2、按药剂学方法，可以将本实施方式中番石榴叶有效部位总黄酮制成适用于临床的多种药物制剂。各种剂型包括口服制剂以及非肠道给药的剂型。所述的口服制剂可制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、混悬剂或口服液体制剂，所述的非肠道给药剂型可制成注射剂、气雾剂、栓剂或者皮下给药剂，本实施方式番石榴叶总黄酮制成各种剂型中，还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等；

3、本实施方式获得的番石榴叶提取物中总黄酮含量以芦(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不少于80％，单体成分中还有槲皮素、大豆异黄酮等。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中每次煎煮耗时1.5小时。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤一中在温度为80℃条件下浓缩至相对密度为1.14g/cm³的清膏。其它与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤二中用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。其它与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤二中用4mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至3.0。其它与具体实施方式一至四之一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：步骤三中用5BV的体积浓度为95％乙醇溶液冲洗。其它与具体实施方式一至五之一相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：步骤四中聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2。其它与具体实施方式一至六之一相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是：步骤四中用10BV体积浓度为75％的乙醇溶液洗脱树脂柱。其它与具体实施方式一至七之一相同。

通过以下试验验证本发明的有益效果：

试验一：本实验的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法是按以下步骤实现：

一、取50kg番石榴叶，然后用水煎煮2次，过滤，合并两次煎煮液，然后在温度为80℃条件下浓缩至相对密度为1.14g/cm³的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴叶质量的20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴叶质量的14倍，每次煎煮耗时1.5小时；

二、向步骤一获得的清膏内加水至体积为150L，然后用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，浸泡24小时，收集上清液，用4mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至3.0后，静置24小时，收集上层液体即得到提取液；

三、聚酰胺树脂的预处理：取聚酰胺树脂装入色谱柱中，用6BV的丙酮以0.3BV/h流速冲洗至洗出液无色，最后用5BV的体积浓度为95％的乙醇溶液冲洗，流速为0.3BV/h，倒出，置于烘箱中90℃烘干；

四、将步骤二得到的提取液用聚酰胺树脂柱进行纯化，聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2，再用水进行洗脱，洗脱用的水体积为6BV，再使用10BV的体积浓度为75％的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集乙醇洗脱液；

五、减压蒸馏回收乙醇洗脱液，再对洗脱液浓缩，减压干燥，即得到番石榴叶提取物。

本试验得到的番石榴提取物收率≥3％；

本试验采用聚酰胺纯化的方法，只采用乙醇、丙酮等价格低廉的洗脱液，因此成本较低，且存在方法简单、效率高、稳定性好和容易再生等特点，得到的产品安全，不存在重金属、有机溶剂毒性残留等问题；

本试验制备的提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为80％；

本试验制备的番石榴叶提取物中总黄酮的应用如下：

1、番石榴叶总黄酮胶囊的制备

本发明番石榴叶总黄酮200g，药用淀粉320g，混合均匀，装入胶囊，每粒0.25g，即得番石榴叶总黄酮胶囊。

2、番石榴叶总黄酮片的制备

本发明番石榴叶总黄酮200g，药用淀粉335g，微晶纤维素80g，羧甲基纤维素钠10g，混合均匀，用适量乙醇制粒，经整粒机整粒，加入硬脂酸镁适量，压片，每片0.3g，即得番石榴叶总黄酮片。

Claims (8)

1.一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于从番石榴叶中提取总黄酮的方法是按以下步骤进行：

一、取50～60kg番石榴叶，然后用水煎煮至少2次，过滤，合并煎煮液，然后在温度为60～80℃条件下浓缩至相对密度为1.12～1.14g/cm³的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴叶质量的14～20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴叶质量的10～14倍，每次煎煮水的用量依次递减20％～30％，每次煎煮耗时1～3小时；

二、向步骤一获得的清膏内加水至体积为150～200L，然后用2～4mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～7.0，浸泡12～24小时，收集上清液，用4～5mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至2.0～3.0后，静置12～24小时，收集上层液体即得到提取液；

三、聚酰胺树脂的预处理：取聚酰胺树脂装入色谱柱中，用5～8BV的丙酮以0.3～0.5BV/h流速冲洗至洗出液无色，最后用5～8BV的体积浓度为95％～97％的乙醇溶液冲洗，流速为0.3～0.5BV/h，倒出，置于烘箱中80～90℃烘干；

四、将步骤二得到的提取液用聚酰胺树脂柱进行纯化，聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2～4，再用水进行洗脱，洗脱用的水体积为6～10BV，再使用9～11BV的体积浓度为50％～75％的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集乙醇洗脱液；

五、减压蒸馏回收乙醇洗脱液，再对洗脱液浓缩，减压干燥，即得到番石榴叶提取物。

2.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤一中在温度为80℃条件下浓缩至相对密度为114g/cm³的清膏。

3.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤一中每次煎煮耗时1.5小时。

4.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤二中用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤二中用4mol/L盐酸溶液调节上清液pH值至3.0。

6.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤三中用5BV的体积浓度为95％乙醇溶液冲洗。

7.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤四中聚酰胺树脂与番石榴叶的质量比为1∶2。

8.根据权利要求1所述的一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤四中用10BV体积浓度为75％的乙醇溶液洗脱树脂柱。