CN102895669B - 一种顺铂配合物及其制备方法 - Google Patents
一种顺铂配合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明以顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物为原料，制备得到顺铂配合物。其中，具有式（Ⅰ）结构的聚合物分子内含有聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段，使得制备的顺铂配合物具有良好的生物相容性，可降解；同时，其聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段还可保护顺铂配合物在水性介质中，免受血液循环***的影响，使其具有良好的稳定性；并且本发明提供的顺铂配合物，其支链末端含有氨基，因而具有良好的溶解性。另外，本发明制备的顺铂配合物含有羧基，其具有良好的pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及高分子药物技术领域，尤其涉及一种顺铂配合物及其制备方法。
背景技术
顺式-二胺二氯铂，简称顺铂（CDDP）是一种具有抗癌活性的金属配合物，由B.Rosenborg等人在1965年首次发现。顺铂具有抗癌谱广、作用强、与多种抗肿瘤药物有协同作用、且无交叉耐药性等特点，因此顺铂是联合化疗中最常用的药物之一。目前，顺铂对治疗生殖***肿瘤、头颈部癌、膀胱癌、肺癌、恶性淋巴瘤等具有良好效果。顺铂口服无效，临床使用方法多为以静脉滴注的方式给药。但是静脉注射后，顺铂迅速溶于血浆中并分布全身，尤其是肝、肾、大小肠及皮肤中，导致其毒副作用大，会引起肾毒性、骨髓抑制及胃肠道副作用等。同时，顺铂在血液中的半衰期短，达到病灶部位的比例很低，药效较差。
为了延长药物在血液中的半衰期，并减少药物与蛋白间的非特异性吸附作用，从而提高顺铂药效，研究人员经常采用高分子材料作为药物输送的载体。近期迅速发展起来的有微米和纳米尺度的高分子载体，如：胶束、囊泡和纳米颗粒等，这类高分子载体可以使药物分子有效的分散于载体中，然后利用载体的各种响应方式，实现药物的输送和控制释放。肿瘤细胞的内环境主要表现为“三低一高”，即：低氧、低糖、低pH值和高谷胱甘肽浓度，其中尤为显著的是低pH值，晚期内涵体和溶酶体的pH值可低至5.0（Advanced FunctionalMaterials，19(22):3580~3589），而且肿瘤部位具有血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失等特点，会造成大分子类物质和脂质颗粒具有高通透性和滞留性。因此，纳米至微米尺寸的药物载体具有显著的EPR效应，即“增强的渗透和滞留效应”。利用EPR效应这种被动靶向方式，可使药物在肿瘤部位有效聚集，同时减小非病灶部位的毒副作用。
研究者利用聚合物载体担载药物的方式开发了顺铂制剂，但目前还没有上市的产品。其中，研究最为深入的是Kataoka等人，他们制备得到的聚乙二醇-b-聚谷氨酸复合顺铂胶束（NC-6004），已进入临床二期研究。但所得胶束是由聚氨基酸侧链间的交联作用形成的，得到的复合物经冻干后形成的冻干粉难以复溶。Stenzel等利用“巯基-炔基”和“巯基-烯基”Click反应在聚合物侧链引入巯基乙酸和巯基丁二酸，得到了复合物（Biomacromolecules 12(5):1738-1751），该复合物具有良好的溶解性，但是其作为载体的聚合物生物相容性差，无法降解，限制了其进一步的应用。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种顺铂配合物及其制备方法，制备得到的顺铂配合物具有良好的生物相容性及溶解性。
本发明提供了一种顺铂配合物，由顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物配合而成：
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
优选的，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为5~20：1。
优选的，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为8~16：1。
本发明提供了一种顺铂配合物的制备方法，包括以下步骤：
将顺铂与具有式（Ⅰ）结构的聚合物混合，发生配合反应，得到顺铂配合物；
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
优选的，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为5~20：1。
优选的，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为8~16：1。
优选的，所述配合反应为在水性介质中进行。
优选的，所述水性介质选自双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液和体液中的任意一种或几种。
优选的，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物按照以下方法制备：
A）将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体与引发剂混合，进行无规共聚反应，得到具有式（Ⅳ）结构的聚合物，所述引发剂具有式（Ⅴ）结构；
B）将具有式（Ⅳ）结构的聚合物进行脱保护，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物；
CH3(CH2)rNH2（Ⅴ），其中，3≤r≤7；
式（Ⅳ）中，R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7；
m和n为聚合度，20≤m≤100，20≤n≤100。
优选的，所述引发剂选自正丁胺、正己胺和正辛胺中的任意一种或几种。
与现有技术相比，本发明以顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物为原料，制备得到顺铂配合物。其中，具有式（Ⅰ）结构的聚合物分子内含有聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段，使得制备的顺铂配合物具有良好的生物相容性，可降解；同时，其聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段还可保护顺铂配合物在水性介质中，免受血液循环***的影响，使其具有良好的稳定性；并且本发明提供的顺铂配合物，其支链末端含有氨基，因而具有良好的溶解性。另外，本发明制备的顺铂配合物含有羧基，其具有良好的pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。
对制备的顺铂配合物进行电位翻转点测定，结果表明控制聚合物中谷氨酸和赖氨酸的比例及顺铂担载量，可以改变其电位发生翻转时的pH值。当其电位发生翻转的pH值小于6.8时，聚合物带正电，有利于进入细胞，提高疗效；当其电位发生翻转的pH值为7.4时，聚合物带负点，有利于在体内长时间循环。
附图说明
图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图；
图2是本发明实施例8~10制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图；
图3是本发明实施例8制备的顺铂配合物在pH为5.3时释放顺铂的曲线图；
图4是本发明实施例11~13制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图；
图5是本发明实施例14~16制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。
具体实施方式
本发明提供了一种顺铂配合物，由顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物配合而成：
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
本发明以顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物为原料，制备得到顺铂配合物。其中，具有式（Ⅰ）结构的聚合物分子内含有聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段，使得制备的顺铂配合物具有良好的生物相容性，可降解；同时，其聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段还可保护顺铂配合物在水性介质中，免受血液循环***的影响，使其具有良好的稳定性；并且本发明提供的顺铂配合物，其支链末端含有氨基，因而具有良好的溶解性。另外，本发明制备的顺铂配合物含有羧基，其具有良好的pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。
本发明提供的顺铂配合物由顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物配合而成，其中，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比优选为5~20：1，更优选为8~16：1。
本发明提供的顺铂配合物，可以为顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物配合而成的分子内配合物，也可以为其分子间配合物，本发明对此并无特殊限制。
本发明还提供了一种顺铂配合物的制备方法，包括以下步骤：
将顺铂与具有式（Ⅰ）结构的聚合物混合，发生配合反应，得到顺铂配合物；
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
本发明以顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物为原料，制备得到顺铂配合物。其中，本发明对所述顺铂的来源并没有特殊要求，可以为一般市售。
本发明中，对所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物的形态没有特殊限制，优选为冻干粉。本发明对所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物的来源也没有特殊限制，优选按照以下方法制备：
A）将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体与引发剂混合，进行无规共聚反应，得到具有式（Ⅳ）结构的聚合物，所述引发剂具有式（Ⅴ）结构；
B）将具有式（Ⅳ）结构的聚合物进行脱保护，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物；
CH3(CH2)rNH2（Ⅴ），其中，3≤r≤7；
式（Ⅳ）中，R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7；
m和n为聚合度，20≤m≤100，20≤n≤100。
首先将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体与引发剂混合，进行无规共聚反应，得到具有式（Ⅳ）结构的聚合物。
其中，所述具有式（Ⅱ）结构的单体优选按照以下方法制备：将苄醇保护的谷氨酸（式（a））与三光气进行NCA合成反应，得到具有式（II）结构的单体。本发明对所述苄醇保护的谷氨酸的来源并无特殊限制，可以为一般市售，也可以按照本领域技术人员熟知的苄醇保护谷氨酸的制备方法制备。本发明对所述三光气的来源并无特殊限制，可以为一般市售。本发明对所述NCA反应的条件并无特殊限制，可以为本领域技术人员熟知的NCA合成反应条件。
所述具有式（Ⅲ）结构的单体优选按照以下方法制备：将苄氧羰基保护的赖氨酸（式（b））与三光气进行NCA合成反应，得到具有式（III）结构的单体。本发明对所述苄氧羰基保护的赖氨酸的来源并无特殊限制，可以为一般市售，也可以按照本领域技术人员熟知的苄氧羰基保护赖氨酸的制备方法制备。
所述引发剂优选为正丁胺、正己胺和正辛胺中的任意一种或几种，更优选为正己胺。本发明对所述引发剂的来源并没有特殊要求，可以为一般市售。
本发明首先将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体与引发剂混合，本发明对所述混合方式没有特殊限制，优选为将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体用溶剂溶解后，加入引发剂的溶液，进行无规共聚反应。所述溶剂优选为DMF。所述引发剂的溶液优选为引发剂的DMF溶液。所述无规共聚反应的温度优选为15℃~35℃，更优选为20℃~25℃；所述无规共聚反应的时间优选为1天~5天，更优选为2天~3天。
本发明优选在惰性气体保护的条件下进行所述无规共聚反应，所述惰性气体优选为氩气。
得到具有式（Ⅳ）结构的聚合物后，将其进行脱保护，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物。所述脱保护具体为：
将具有式（Ⅳ）结构的聚合物与三氟乙酸、HBr的醋酸溶液混合反应，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物。
其中，本发明对所述三氟乙酸的来源并没有特殊限制，可以为一般市售。本发明对所述HBr的醋酸溶液的来源并没有特殊限制，可以为一般市售。所述具有式（Ⅳ）结构的聚合物、三氟乙酸与HBr的醋酸溶液的质量比优选为1：5~15：1~5。本发明对所述具有式（Ⅳ）结构的聚合物与三氟乙酸、HBr的醋酸溶液的混合顺序并无特殊限制，优选为先用三氟乙酸将具有式（Ⅳ）结构的聚合物完全溶解，再补加三氟乙酸和HBr的醋酸溶液。
得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物后，优选用***沉降并透析至完全没有酸味后，冷冻干燥得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的冻干粉。
得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物后，将其与顺铂混合，发生配合反应，得到顺铂配合物。
本发明中，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物为担载顺铂的载体，顺铂中的Pt与所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物的羧基通过配位键形成顺铂配合物；优选的，全部顺铂分子与所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物形成配位键，但不一定限于全部的顺铂分子和聚合物的羧基形成配位键，也包含部分顺铂分子之间以疏水相互作用或其他任何的物理方式担载于载体材料上。顺铂分子与配合物形成配位键时，可以为分子内配合，也可以为分子间配合，本发明对此并无特殊限制。所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物的羧基与顺铂中Pt的摩尔比优选为5~20：1，更优选为8~16：1。
在本发明顺铂配合物的制备方法中，优选在避光条件下将具有式（Ⅰ）结构的聚合物溶于水性介质中并调节pH值，然后加入顺铂，进行配合反应，透析后得到顺铂配合物胶束。所述水性介质优选为双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液和体液中的任意一种或几种，更优选为双蒸水。所述双蒸水的pH值优选为6.5~8.5，更优选为7.5~8.0。所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物的羧基浓度优选为0.01mM~100mM，更优选为0.05mM~60mM，最优选为0.1mM~20mM。
将具有式（Ⅰ）结构的聚合物溶于水性介质后，优选将其pH值调节至6.5~9.0，更优选调节至7.5~8.5。然后加入顺铂进行配合反应，所述配合反应的时间优选为24小时~72小时，更优选为48小时~72小时；所述配合反应的温度优选为20℃~40℃，更优选为30℃~40℃。配合反应完成后，将其进行透析，所述透析的时间优选为12h~56h，更优选为20h~30h；优选对其换水1~6次后得到顺铂配合物胶束。
按照本发明提供的顺铂配合物的制备方法，得到的顺铂配合物优选以胶束的形式存在于水性介质中，所述胶束的流体力学半径优选为10nm~1000nm，更优选为10nm~200nm。
对制备得到的顺铂配合物进行电位翻转点测定，结果表明，本发明提供的顺铂配合物的电位具有pH敏感性，控制聚合物中谷氨酸和赖氨酸的比例及顺铂担载量，可以改变其电位发生翻转时的pH值。当其电位发生翻转的pH值小于6.8时，聚合物带正电，有利于进入细胞，提高疗效；当其电位发生翻转的pH值为7.4时，聚合物带负点，有利于在体内长时间循环。
本发明以顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物为原料，制备得到顺铂配合物。其中，具有式（Ⅰ）结构的聚合物分子内含有聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段，使得制备的顺铂配合物具有良好的生物相容性，可降解；同时，其聚（L-谷氨酸-co-L-赖氨酸）链段还可保护顺铂配合物在水性介质中，免受血液循环***的影响，使其具有良好的稳定性；并且本发明提供的顺铂配合物，其支链末端含有氨基，因而具有良好的溶解性。另外，本发明制备的顺铂配合物含有羧基，其具有良好的pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的顺铂配合物及其制备方法进行详细描述。
实施例1
取一三口瓶，加入一颗磁子，一瓶口塞入一带鼓泡玻璃管的橡胶塞，一瓶口加塞子密封，另一瓶口接一弯管接头，搭好装置后一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶子中充满氩气，如此反复三次，最后充气状态下冷却至室温。从玻璃管一端持续鼓进氩气，在氩气保护下加入200mL精制过的四氢呋喃（THF），再在鼓泡状态下加入苄醇保护的谷氨酸20g，26摄氏度油浴搅拌，20min后加入8g三光气，继续搅拌30min，自然冷却至室温，期间继续鼓气状态。用2L无水***对反应产物进行沉降，零下80摄氏度冷冻24h，之后抽滤得到白色固体，用600mL乙酸乙酯将得到的固体溶解，转移至1L分液漏斗中，冰水洗三次。有机层转移至1L锥形瓶中，加入足量无水硫酸镁，室温下干燥24h。另取一安瓶，按照上述步骤抽真空烤瓶子并充氩气，将之前干燥的乙酸乙酯有机溶液过滤至此安瓶中，之后加冷阱，真空抽净全部乙酸乙酯，最后得到具有式（II）结构的白色粉末固体，记做BLG-NCA。
实施例2
取一三口瓶，加入一颗磁子，一瓶口塞入一带鼓泡玻璃管的橡胶塞，一瓶口加塞子密封，另一瓶口接一弯管接头，搭好装置后一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶子中充满氩气，如此反复三次，最后充气状态下冷却至室温。从玻璃管一端持续鼓进氩气，在氩气保护下加入300mL精制过的四氢呋喃（THF），再在鼓泡状态下加入苄氧羰基保护的赖氨酸30g，26摄氏度油浴搅拌，20min后加入12g三光气，继续搅拌30min，自然冷却至室温，期间继续鼓气状态。用3L无水***对反应产物进行沉降，零下80摄氏度冷冻24h，之后抽滤得到白色固体，用600mL乙酸乙酯将得到的固体溶解，转移至1L分液漏斗中，冰水洗三次。有机层转移至1L锥形瓶中，加入足量无水硫酸镁，室温下干燥24h。另取一安瓶，按照上述步骤抽真空烤瓶子并充氩气，将之前干燥的乙酸乙酯有机溶液过滤至此安瓶中，之后加冷阱，真空抽净全部乙酸乙酯，最后得到具有式（III）结构的白色粉末固体，记做CBZ-Lys-NCA。
实施例3
取一安瓶，加入一颗磁子，一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶中充氩气，如此反复三次，最后抽成真空，将瓶子快速转移至手套箱中，并分别加入1.552g实施例1制备的BLG-NCA和0.448g实施例2制备的CBZ-Lys-NCA，将瓶子密封之后取出，然后在瓶中加入12mL DMF将其中固体完全溶解，用注射器打入浓度为0.0975mmol/g的正己胺的DMF溶液0.756g，之后补加3mLDMF，室温下搅拌反应3天，然后将反应产物用200mL无水***进行沉降，得到白色浑浊物，零下80摄氏度冷冻过夜，第二天对其进行离心后得到白色固体，然后对其进行真空干燥得到聚合物。将得到的聚合物转移至烧杯中，加入适量三氟乙酸将其完全溶解，之后补加一定量三氟乙酸和HBr的醋酸溶液（33wt%）使样品：三氟乙酸：HBr/醋酸的质量比为1:10:3，一个小时后用10倍量的无水***沉降，之后得到白色固体，真空干燥24h后，将样品用水溶解，于3500mL的透析袋中透析，至完全没有酸味之后，冷冻干燥，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的白色冻干粉末。
对上述具有式（Ⅰ）结构的聚合物进行核磁共振测试，计算结果表明，式（Ⅰ）中，m=70，n=19，R1为CH3(CH2)5NH-，记为PGA70-co-PLys19。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例3制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA70-co-PLys19的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图1，图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线a是本发明实施例3提供的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA70-co-PLys19的电位翻转点的变化趋势图。由图1可知，聚合物PGA70-co-PLys19具有pH值敏感性。
实施例4
取一安瓶，加入一颗磁子，一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶中充氩气，如此反复三次，最后抽成真空，将瓶子快速转移至手套箱中，并分别加入1.130g实施例1制备的BLG-NCA和0.870g实施例2制备的CBZ-Lys-NCA，将瓶子密封之后取出，然后在瓶中加入12mL DMF将其中固体完全溶解，用注射器打入浓度为0.0975mmol/g的正己胺的DMF溶液0.734g，之后补加3mLDMF，室温下搅拌反应3天，然后将反应产物用200mL无水***进行沉降，得到白色浑浊物，零下80摄氏度冷冻过夜，第二天对其进行离心后得到白色固体，然后对其进行真空干燥得到聚合物。将得到的聚合物转移至烧杯中，加入适量三氟乙酸将其完全溶解，之后补加一定量三氟乙酸和HBr的醋酸溶液（33wt%）使样品：三氟乙酸：HBr/醋酸的质量比为1:10:3，一个小时后用10倍量的无水***沉降，之后得到白色固体，真空干燥24h后，将样品用水溶解，于3500mL的透析袋中透析，至完全没有酸味之后，冷冻干燥，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的白色冻干粉末。
对上述具有式（Ⅰ）结构的聚合物进行核磁共振测试，计算结果表明，式（Ⅰ）中，m=60，n=40，R1为CH3(CH2)5NH-，记为PGA60-co-PLys40。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例4制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA60-co-PLys40的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图1，图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线b是本发明实施例4提供的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA60-co-PLys40的电位翻转点的变化趋势图。由图1可知，聚合物PGA60-co-PLys40具有pH值敏感性。
实施例5
取一安瓶，加入一颗磁子，一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶中充氩气，如此反复三次，最后抽成真空，将瓶子快速转移至手套箱中，并分别加入0.9277g实施例1制备的BLG-NCA和1.0723g实施例2制备的CBZ-Lys-NCA，将瓶子密封之后取出，然后在瓶中加入12mL DMF将其中固体完全溶解，用注射器打入浓度为0.0975mmol/g的正己胺的DMF溶液0.723g，之后补加3mLDMF，室温下搅拌反应3天，然后将反应产物用200mL无水***进行沉降，得到白色浑浊物，零下80摄氏度冷冻过夜，第二天对其进行离心后得到白色固体，然后对其进行真空干燥得到聚合物。将得到的聚合物转移至烧杯中，加入适量三氟乙酸将其完全溶解，之后补加一定量三氟乙酸和HBr的醋酸溶液（33wt%）使样品：三氟乙酸：HBr/醋酸的质量比为1:10:3，一个小时后用10倍量的无水***沉降，之后得到白色固体，真空干燥24h后，将样品用水溶解，于3500mL的透析袋中透析，至完全没有酸味之后，冷冻干燥，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的白色冻干粉末。
对上述具有式（Ⅰ）结构的聚合物进行核磁共振测试，计算结果表明，式（Ⅰ）中，m=45，n=50，R1为CH3(CH2)5NH-，记为PGA45-co-PLys50。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例5制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA45-co-PLys50的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图1，图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线c是本发明实施例5提供的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA45-co-PLys50的电位翻转点的变化趋势图。由图1可知，聚合物PGA45-co-PLys50具有pH值敏感性。
实施例6
取一安瓶，加入一颗磁子，一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶中充氩气，如此反复三次，最后抽成真空，将瓶子快速转移至手套箱中，并分别加入0.7316g实施例1制备的BLG-NCA和1.2684g实施例2制备的CBZ-Lys-NCA，将瓶子密封之后取出，然后在瓶中加入12mL DMF将其中固体完全溶解，用注射器打入浓度为0.0975mmol/g的正己胺的DMF溶液0.713g，之后补加3mLDMF，室温下搅拌反应3天，然后将反应产物用200mL无水***进行沉降，得到白色浑浊物，零下80摄氏度冷冻过夜，第二天对其进行离心后得到白色固体，然后对其进行真空干燥得到聚合物。将得到的聚合物转移至烧杯中，加入适量三氟乙酸将其完全溶解，之后补加一定量三氟乙酸和HBr的醋酸溶液（33wt%）使样品：三氟乙酸：HBr/醋酸的质量比为1:10:3，一个小时后用10倍量的无水***沉降，之后得到白色固体，真空干燥24h后，将样品用水溶解，于3500mL的透析袋中透析，至完全没有酸味之后，冷冻干燥，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的白色冻干粉末。
对上述具有式（Ⅰ）结构的聚合物进行核磁共振测试，计算结果表明，式（Ⅰ）中，m=40，n=56，R1为CH3(CH2)5NH-，记为PGA40-co-PLys56。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例6制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA40-co-PLys56的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图1，图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线d是本发明实施例6提供的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA40-co-PLys56的电位翻转点的变化趋势图。由图1可知，聚合物PGA40-co-PLys56具有pH值敏感性。
实施例7
取一安瓶，加入一颗磁子，一边抽真空一边烤瓶子，之后在瓶中充氩气，如此反复三次，最后抽成真空，将瓶子快速转移至手套箱中，并分别加入0.356g实施例1制备的BLG-NCA和1.644g实施例2制备的CBZ-Lys-NCA，将瓶子密封之后取出，然后在瓶中加入12mL DMF将其中固体完全溶解，用注射器打入浓度为0.0975mmol/g的正己胺的DMF溶液0.693g，之后补加3mLDMF，室温下搅拌反应3天，然后将反应产物用200mL无水***进行沉降，得到白色浑浊物，零下80摄氏度冷冻过夜，第二天对其进行离心后得到白色固体，然后对其进行真空干燥得到聚合物。将得到的聚合物转移至烧杯中，加入适量三氟乙酸将其完全溶解，之后补加一定量三氟乙酸和HBr的醋酸溶液（33wt%）使样品：三氟乙酸：HBr/醋酸的质量比为1:10:3，一个小时后用10倍量的无水***沉降，之后得到白色固体，真空干燥24h后，将样品用水溶解，于3500mL的透析袋中透析，至完全没有酸味之后，冷冻干燥，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物的白色冻干粉末。
对上述具有式（Ⅰ）结构的聚合物进行核磁共振测试，计算结果表明，式（Ⅰ）中，m=20，n=65，R1为CH3(CH2)5NH-，记为PGA20-co-PLys65。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例7制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA20-co-PLys65的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图1，图1是本发明实施例制备的具有式（Ⅰ）结构的聚合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线e是本发明实施例7提供的具有式（Ⅰ）结构的聚合物PGA20-co-PLys65的电位翻转点的变化趋势图。由图1可知，聚合物PGA20-co-PLys65具有pH值敏感性。
实施例8
将30mg实施例3中制备的PGA70-co-PLys19溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入5.5mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照以下公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC）；
得到的顺铂配合物的包封效率为88.6%，包封量为0.43mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例8制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图2，图2是本发明实施例8~10制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线a是本发明实施例8制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图2可知，本发明实施例8提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
对本发明实施例8提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。在37摄氏度的条件下，称取5mg实施例8制备的顺铂配合物，溶解在5mL 0.01mol/L pH值为5.3的磷酸盐缓冲溶液中，然后将此溶液转移至透析袋，所用透析袋的截留分子量为3500，用40mLpH值为5.3的磷酸盐缓冲液进行透析，在5h、12h、24h、48h、72h、96h分别取样3mL，并加入3mL pH值为5.3的磷酸盐缓冲溶液；利用电感耦合等离子体质谱进行定量分析，得到累计释放百分比随着时间增加的变化关系，释放结果见图3，图3是本发明实施例8制备的顺铂配合物在pH为5.3时释放顺铂的曲线图。由图3可知，本发明实施例8提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例9
将30mg实施例3中制备的PGA70-co-PLys19溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入11.1mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为63.4%，包封量为0.536mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例9制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图2，图2是本发明实施例8~10制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线b是本发明实施例9制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图2可知，本发明实施例9提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例9提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例9提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例10
将30mg实施例3中制备的PGA70-co-PLys19溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入16.7mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为64.4%，包封量为0.535mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例10制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图2，图2是本发明实施例8~10制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线c是本发明实施例10制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图2可知，本发明实施例10提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例10提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例10提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例11
将40mg实施例4中制备的PGA60-co-PLys40溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入5.5mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为47.3%，包封量为0.246mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例11制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图4，图4是本发明实施例11~13制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线a是本发明实施例11制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图4可知，本发明实施例11提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例11提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例11提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例12
将40mg实施例4中制备的PGA60-co-PLys40溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入11.1mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为33.2%，包封量为0.263mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例12制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图4，图4是本发明实施例11~13制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线b是本发明实施例12制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图4可知，本发明实施例12提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例12提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例12提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例13
将40mg实施例4中制备的PGA60-co-PLys40溶于37ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入16.7mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为30.7%，包封量为0.144mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例13制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图4，图4是本发明实施例11~13制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线c是本发明实施例13制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图4可知，本发明实施例13提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例13提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例13提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例14
将40mg实施例5中制备的PGA45-co-PLys50溶于30ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入4.5mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为14.4%，包封量为0.052mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例14制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图5，图5是本发明实施例14~16制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线a是本发明实施例14制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图5可知，本发明实施例14提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例14提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例14提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例15
将40mg实施例5中制备的PGA45-co-PLys50溶于30ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入8.1mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为14.8%，包封量为0.072mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例15制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图5，图5是本发明实施例14~16制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线b是本发明实施例15制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图5可知，本发明实施例15提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例15提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例15提供的顺铂配合物具有缓释能力。
实施例16
将40mg实施例5中制备的PGA45-co-PLys50溶于30ml双蒸水中，调节pH值为8.0，加入9.0mg顺铂，37摄氏度避光振荡72h，纯水透析24h，换水3次，得到顺铂配合物的胶束溶液。
其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例8中提供的公式计算包封效率（DLE）和包封量（DLC），得到的顺铂配合物的包封效率为15.7%，包封量为0.118mmol/g。
利用Zeta-Potential电位仪测试实施例16制备的顺铂配合物的电位翻转点，测定其变化趋势，结果见图5，图5是本发明实施例14~16制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图，其中，曲线c是本发明实施例16制备的顺铂配合物的电位翻转点的变化趋势图。由图5可知，本发明实施例16提供的顺铂配合物具有较好的pH值敏感性。
采用实施例8的检测方法，对本发明实施例16提供的顺铂配合物进行缓释能力检测。检测结果表明，本发明实施例16提供的顺铂配合物具有缓释能力。
由上述实施例可知，本发明提供的顺铂配合物具有较高的载药量和较好的包封效率，并且具有良好的pH敏感性和较好的缓释能力。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种顺铂配合物，其特征在于，由顺铂和具有式（Ⅰ）结构的聚合物配合而成：
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
2.根据权利要求1所述的顺铂配合物，其特征在于，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为5～20：1。
3.根据权利要求1所述的顺铂配合物，其特征在于，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为8～16：1。
4.一种顺铂配合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将顺铂与具有式（Ⅰ）结构的聚合物混合，发生配合反应，得到顺铂配合物；
其中，m为聚合度，20≤m≤100；n为聚合度，20≤n≤100；
R1选自CH3(CH2)rNH-，3≤r≤7。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为5～20：1。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物中羧基与顺铂中Pt的摩尔比为8～16：1。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述配合反应为在水性介质中进行。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述水性介质选自双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液和体液中的任意一种或几种。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述具有式（Ⅰ）结构的聚合物按照以下方法制备：
A）将具有式（Ⅱ）结构的单体和式（Ⅲ）结构的单体与引发剂混合，进行无规共聚反应，得到聚合物，所述引发剂具有式（Ⅴ）结构；
B）将步骤A）得到的聚合物进行脱保护，得到具有式（Ⅰ）结构的聚合物；
CH3(CH2)rNH2（Ⅴ），其中，3≤r≤7。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂选自正丁胺、正己胺和正辛胺中的任意一种或几种。
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