CN102895187B - 注射用本芴醇脂肪乳的制备及其在疟疾治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种本芴醇脂肪乳注射制剂，含有0.03~35wt%的本芴醇，10.0~30.0wt%的注射用油，0.6~30.0wt%的乳化剂，0~10wt%的增溶剂，0~5wt%的助乳化剂，2.25~7wt%的等渗剂，0.002~0.075wt%的抗氧化剂，其余为注射用水。还公开了上述本芴醇脂肪乳注射制剂的制备方法、药效学及安全性评价。本发明本芴醇脂肪乳具有生物相容性好、物理稳定性高、便于制备、安全性好、载药量高等特色，粒径小于200μm，非常适合于注射，如静脉注射、肌肉注射。同时可以利用大豆油脂肪乳抑制镰状疟原虫、恶性疟原虫生长的特性，增强药物的抗疟效果，提高它们的生物利用度并降低毒副作用。还能为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。

Description

注射用本芴醇脂肪乳的制备及其在疟疾治疗中的应用

技术领域

本发明属于药学领域，涉及一种脂肪乳注射剂，特别涉及一种本芴醇脂肪乳注射剂及其制备方法。

背景技术

青蒿素是我国学者在20世纪70年代初从青蒿中分离提纯出的一种有效的抗疟单体，它是含有过氧桥结构的新型倍半萜内酯化合物，具有快速、高效、无抗药性、低毒性的特点，被世界卫生组织称为“治疗疟疾的最大希望”，可视为我国药学工作者对人类社会的最大贡献。它的发现成为世界抗疟史继奎宁之后又一个重要的里程。但研究表明，长期单独服用青蒿素制剂易使病原虫产生抗药性，而将青蒿素与其它抗疟药品联合制成复合制剂，也能对非并发型的疟疾有近95%的疗效。因此，2004年2月，WHO对疟疾治疗用药政策进行了改革，提出停止使用青蒿素类单方抗疟疾药，而提倡采用以青蒿素类药物为基础的联合药物（Artemisinin-based combination therapies,简称ACTs疗法）。目前，这种以青蒿素类药物为基础的联合药物主要有：蒿甲醚-苯芴醇、青蒿琥酯－氨酚喹、青蒿琥酯－周效磺胺-乙嘧啶、青蒿琥酯－甲氟喹、氨酚喹和周效磺胺-乙嘧啶联合用药等，其中蒿甲醚-苯芴醇联合用药的效果最好。这是因为蒿甲醚-苯芴醇联合用药可以增效互补：青蒿素类衍生物蒿甲醚对疟原虫裂殖体有较强的杀灭作用，对于多种抗药性疟疾和抗氯喹恶性疟疾疗效显著。但是它又存在作用时间短，复发率高等缺点。本芴醇杀灭疟原虫干净彻底，有效率达到95%以上，复发率低于5%，但起效慢。所以将两药复方后可以同时克服蒿甲醚复发率高和本芴醇作用慢的缺点。具有控制症状快、杀灭疟原虫彻底、对抗性虫株有效、延缓产生抗药性等优点。并且，此复方与现有其它抗疟药无交叉抗性，使用方便、安全。此复方口服片剂已于2009年4月8日获得美国FDA的上市批准。但是，目前，蒿甲醚与本芴醇的复方剂型只有口服制剂，如“专利申请号是90106722.9的中国专利”公开了蒿甲醚/本芴醇复方口服片剂、复方口服糖浆、 复方栓剂等。“专利申请号是200610037383.5的中国专利”公开了蒿甲醚/本芴醇复方的自乳化剂。“专利申请号是200710057537.1的中国专利”公开了蒿甲醚/本芴醇复方的滴丸剂。“专利申请号是200710057538.6的中国专利公开了一种治疗疟疾的本芴醇滴丸剂的制备方法”。这些都是口服剂型，在临床使用时不能用于疟疾的紧急治疗，同时虽然它们在不同程度上提高了本芴醇的口服生物利用度，但是由于本芴醇的脂肪依赖性（即本芴醇的口服吸收受食物的影响，患者服用药物时吃高脂肪食物，才能有较高的药物吸收率和较高的血药浓度杀灭疟疾虫）使得本芴醇在口服时需要增加服用剂量及次数来保障药物的临床治疗效果。所以，本芴醇在临床使用时剂量高达1840mg，甚至达到2880mg，这样长期高剂量的服用会加速抗药性的产生，从而大大缩短本芴醇的使用寿命，降低使用效果。另外从患者的角度，高剂量、频繁服药无疑增加经济负担，实际上，费用高目前已经成为疟疾患者治疗的主要屏障。为了克服上述缺陷，有必要开发本芴醇的新剂型。

脂肪乳注射剂是一种新的脂溶性药物载体。它是以大豆油为主要成分，用精制卵磷脂为乳化剂，甘油为等渗剂，经高压均质而成。它具有生物相容性好、物理稳定性高、便于制备、安全性好、载药量高等特色，非常适合于注射。同时，它还能改善营养不良病人的淋巴细胞活性，为患者提供营养，非常适用于恶性疟及一般疟疾的紧急治疗。

综上所述，为了保护本芴醇的临床使用寿命，提高本芴醇的生物利用度，本发明公开一种本芴醇脂肪乳的注射剂及制备方法。

发明内容

为了提高本芴醇的生物利用度，满足临床治疗恶性疗疟疾用于注射的需求，本发明提供一种本芴醇注射剂即本芴醇脂肪乳剂。

由于是注射剂，所以它的生物利用度是100%。它在用于注射时无需添加任何助溶剂，因此降低了毒副作用的发生率，并且，它还可以为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。

本发明所述的本芴醇脂肪乳注射剂，由以下成分加工制成：

其余为注射用水。

其中，所述注射用油是大豆油、茶油、麻油、中长链脂肪酸酯、橄榄油、莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、沙棘油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物。

其中，所述乳化剂是蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂中的任一种；

其中，所述助乳化剂是吐温80、F68、油酸钠、油酸钾、油酸中的任一种或任几种；

其中，所述增溶剂是无水乙醇、氯仿、丙酮或异丙醇的任一种；

其中，所述等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇的任一种。

其中，所述抗氧化剂为维生素E。

本发明还提供了本芴醇脂肪乳注射剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：将0.03～35wt%的本芴醇放入0～10wt%的增溶剂中进行溶解，然后与10.0～30.0wt%的注射用油混合，在80℃水浴中蒸发10～120min除去增溶剂；在氮气保护下加入0.6～30.0wt%的乳化剂和0.002～0.075wt%的抗氧化剂， 加热至40～80℃得到形成油相混合物；

步骤2：将2.25～7wt%的等渗剂、0~5wt%的助乳化剂和注射用水在40~80℃下进行混合，形成水相混合物；

步骤3：在氮气保护下将步骤2得到的水相混合物与步骤1得到的油相混合物进行混合，然后在40～80℃，5000～12000r/min条件下高速分散5～30min后，再机械搅拌60～120min，用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH 至6.0～9.0，在压力为90～110MPa条件下进行均质6～9次，得到均匀的乳状溶液；

步骤4：将步骤3所得乳状溶液过滤、通氮气密封，经100～125℃灭菌处理15~50min或经0.22μm无菌滤膜过滤后，25℃以下贮藏。

本发明还提供了本芴醇脂肪乳注射剂在治疗疟疾中的应用。本药物剂型可以是肌肉注射或静脉注射。根据体内抗疟活性检测（详见5.1），实验时各组小鼠腹腔内定量接种含有l×10⁷个被鼠疟原虫寄生的红细胞，接种量0.2ml/只。于接种后第二日按组给药，按WHO规定的4d抑制性试验法，连续给药3天。本芴醇脂肪乳给药组（浓度分别为90、45、22.5 mg/kg/d），尾注射给药。结果显示各个本芴醇脂肪乳注射剂给药组小鼠的转阴率均为100%，说明本芴醇脂肪乳具有很好的抗疟活性，可以用于疟疾治疗。

本发明方法制备的本芴醇脂肪乳注射剂将本芴醇的生物利用度提高到100%。并且，可以利用脂肪乳抑制疟原虫生长、营养供给的特性，增强本芴醇的抗疟效果，同时为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。本发明方法制备的本芴醇脂肪乳注射剂可直接用于注射，不再需要助溶载体，从而降低了对人体的毒副作用，同时能增加药物的稳定性。

附图说明

图1：小鼠血液中含疟原虫（图1A）及转阴后不含疟原虫（图1B）的显微镜照片

具体实施方式

本发明对注射用本芴醇脂肪乳的制剂配方中各种辅料的用量范围进行了验证。下面结合实施例对本发明作详细说明，但不仅限于下列实例。

一、不同油相制备的本芴醇脂肪乳剂注射剂

实施例1：

处方：

将30mg本芴醇放入2mL丙酮中充分溶解成溶液，将此溶液与10g注射用大豆油混合，蒸发除去丙酮后在氮气保护下加入1.2g注射用蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将50mL注射用水、0.4g油酸钠和2.5g甘油于60℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，并加水至100mL，在60℃下，6500r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至7.0后，在压力为105MPa条件下均质8次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经115℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。

实施例2：

处方：

将500mg本芴醇放入4mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与10g注射用茶油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入1.2g注射用卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将70mL注射用水、2.5g 木糖醇、0.2g F68于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至100mL，在70℃下，7000r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至7.5后，在压力为90MPa条件下进行均质9次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经120℃灭菌处理25min后，25℃以下贮藏。

二、不同乳化剂制备的本芴醇脂肪乳剂注射剂

实施例3：

处方：

将300mg本芴醇放入6mL丙酮中充分溶解成溶液，将此溶液与20g注射用麻油混合，蒸发除去丙酮后在氮气保护下加入2.4g注射用蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将150mL注射用水、5g甘油、0.02g油酸于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至200mL，在70℃下，7500r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至8.0后，在压力为95MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经125℃灭菌处理10min后，25℃以下贮藏。

实施例4：

处方：

将120mg本芴醇放入3mL异丙醇中充分溶解成溶液，将此溶液与30g注射用中长链脂肪酸酯混合，蒸发除去异丙醇后在氮气保护下加入1.2g注射用氢化蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将50mL注射用水、2.5g甘油、0.4g F68于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至100mL，在70℃下，8000r/min高速分散后机械搅拌15min制成初乳，调节pH至8.0后，在压力为100MPa条件下进行均质8次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经100℃灭菌处理30min后，25℃以下贮藏。

三、不同助乳化剂制备的本芴醇脂肪乳剂注射剂

实施例5：

处方：

将400mg本芴醇放入4mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与200g注射用大豆油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入12g注射用卵磷脂、0.15g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将900mL注射用水、25g甘油、0.4g F68于60℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合,加水至1000mL，在60℃下，8900r/min高速分散后机械搅拌15min制成初乳，调节pH至7.8后，在压力为110MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经125℃灭菌处理10min后，25℃以下贮藏。

实施例6：

处方：

将700mg本芴醇放入8mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与300g注射用茶油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入24g注射用蛋黄卵磷脂、0.21g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将900mL注射用水、25g甘油、0.04g油酸于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在70℃下，9000r/min高速分散后机械搅拌10min制成初乳，调节pH至7.2后，在压力为108MPa条件下进行均质7次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经120℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。

四、不同等渗调节剂制备的本芴醇脂肪乳剂注射剂

实施例7：

处方：

将1200mg本芴醇放入30mL异丙醇中充分溶解成溶液，将此溶液与300g注射用中长链脂肪酸酯混合，蒸发除去异丙醇后在氮气保护下加入30g注射用氢化蛋黄卵磷脂、0.23g的抗氧化剂维生素E，于80℃混合，形成油相混合物。将800mL注射用水、25g葡萄糖、0.2g吐温80于80℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在80℃下， 10000r/min高速分散后机械搅拌5min制成初乳，调节pH至7.8后，在压力为110MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经121℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。

实施例8：

处方：

将2000mg本芴醇放入10mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液加入与150g注射用茶油，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入35g注射用蛋黄卵磷脂、0.29g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将600mL注射用水、25g甘油、0.6gF68于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在70℃下，10000r/min高速分散后机械搅拌10min制成初乳，调节pH至7.4后，在压力为108MPa条件下进行均质7次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经121℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。

实施例9、本芴醇脂肪乳注射制剂的动物实验研究

5.1 本芴醇脂肪乳注射制剂治疗疟疾的药效学研究

5.1.1动物

昆明种小鼠，体重22±1g，雌雄各半，中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK（京）2004-0001；伯氏疟原虫虫株（NK-173，中国军事医学科学院微生物流行病所提供）。

5.1.2方法

试验采用Peters法。取昆明种小鼠，按体重随机分组，每组动物10只，雌雄各半，分为模型对照组、本芴醇脂肪乳给药组（浓度分别为90、45、22.5  mg/kg/d），尾注射给药。模型对照组不作处理。实验时各组小鼠腹腔内定量接种含有l×10⁷个被鼠疟原虫寄生的红细胞，接种量0.2ml/只。于接种后第二日按组给药，按WHO规定的4d抑制性试验法，连续给药3天。

给药4天后，第5天从小鼠尾巴取血涂薄血膜片，用Giemsa染色法染色，显微镜下观察，并计数1×10³红细胞中原虫数，计算红细胞的感染率（%）。在显微镜下观察50个油镜视野（×1000，约2.5万个红细胞），观察不到疟原虫者定为阴性血片，按公式一计算各给药剂量组小鼠转阴率（%）。

如小鼠转阴，则观察30天内小鼠复燃情况，即隔日涂一次薄血膜(每周三次)，直到30天。到30天后观察仍为阴性血片者则定为治愈，并按公式二计算各给药剂量组小鼠的治愈率(％)。

5.1.3结果

结果分别见表5.1。小鼠血液中疟原虫和小鼠转阴后血液的显微镜照片见图1。由此可以看出本芴醇脂肪乳对疟原虫有明显的杀灭作用，并且可以有效的控制疟原虫的复发。

表5.1 本芴醇脂肪乳药效试验结果

5.2  对本发明本芴醇脂肪乳剂进行安全性试验

5.2.1血管刺激性实验：

试验方法：每日给家兔注射3.0ml/kg供试品（按临床用药量折算），连续三 次后，解剖动物血管作病理切片观察，无组织变性或坏死等显著刺激反应。

5.2.2 溶血性实验：按新药研究安全性试验指导原则的方法进行，无溶血现象出现。

5.2.3 全身过敏性实验：

按《中华人民共和国药典》的方法规定进行试验，试验结果：在首次注射后第14天及21天，经本芴醇脂肪乳激发后30min内动物未出现竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、啰音、抽搐、虚脱等现象，表明本芴醇脂肪乳豚鼠全身过敏性试验结果为阴性，本品无致敏性。

5.2.4 热原检查：

试验方法：参照中国药典2005版附录ⅩⅢ A热原检查法进行试验，结果表明本芴醇脂肪乳对家兔血管和肌肉均无刺激性，对豚鼠试验无过敏性，对大鼠无被动皮肤过敏性，无溶血性与家兔热原检查复合药典规定的标准。表明注射用本芴醇脂肪乳符合安全性指标的要求。

5.2.5 本芴醇脂肪乳的稳定性试验

取新鲜制备的脂肪乳，置于离心管中，13000rpm离心15min后，未发现分层，也未见药物沉淀析出。室温阴凉处储存一年，乳剂外观、粒径、Zeta电位等理化性质以及含量均未发生明显变化，表明乳剂稳定。

Claims (10)

1.一种本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于，由以下成分组成：

其余为注射用水。

2.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述注射用油为大豆油、茶油、麻油、中长链脂肪酸酯、橄榄油、莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、沙棘油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物。

3.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述乳化剂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂或人工合成卵磷脂。

4.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述助乳化剂为吐温80、F68、油酸钠、油酸钾或油酸中的任一种或任几种。

5.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述增溶剂为无水乙醇、氯仿、丙酮或异丙醇。

6.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇。

7.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：所述抗氧化剂为维生素E。

8.根据权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂，其特征在于：由以下成分加工制成：

本芴醇(注射用) 30mg 大豆油(注射用) 10g 卵磷脂(注射用) 1.2g 油酸钠 0.4g 维生素E(注射用) 0.02g 甘油 2.5g 注射用水 加至100mL

9.权利要求1～7所述任一种本芴醇脂肪乳注射剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1：将0.03～35wt％的本芴醇放入0.5～10wt％的增溶剂中进行溶解，然后与10.0～30.0wt％的注射用油混合，在80℃水浴中蒸发10～120min除去增溶剂；在氮气保护下加入0.6～30.0wt％的乳化剂和0.002～0.075wt％的抗氧化剂，加热至40～80℃得到形成油相混合物；

步骤2：将2.25～7wt％的等渗剂、0.01～5wt％的助乳化剂和注射用水在40～80℃下进行混合，形成水相混合物；

步骤3：在氮气保护下将步骤2得到的水相混合物与步骤1得到的油相混合物进行混合，然后在40～80℃，5000～12000r/min条件下高速分散5～30min后，再机械搅拌60～120min，用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至6.0～9.0，在压力为90～110MPa条件下进行均质6～9次，得到均匀的乳状溶液；

步骤4：将步骤3所得乳状溶液过滤、通氮气密封，经100～125℃灭菌处理15～50min或经0.22μm无菌滤膜过滤后，25℃以下贮藏。

10.权利要求1所述的本芴醇脂肪乳注射剂在制备治疗疟疾的药物中的应用。