CN102894186A - 一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及其制备方法和饲料添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及其制备方法和饲料添加剂。所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉，由包括如下步骤的方法制备得到：（1）饲养成蝇，诱集产卵，孵化后，以饲料喂养幼虫；（2）对幼虫进行超声诱导；（3）继续饲养，收集幼虫，经清洗，消毒处理后，进行组织匀浆捣碎；（4）过滤，滤液经0~5℃处理，去除表面脂类成分，干燥后即得蛋白粉；蛋白粉经加入辅料，制粒即得饲料添加剂。本发明采用特定条件下的超声刺激方式对幼虫进行诱导，使得家蝇体内小分子抗菌肽类活性成分含量显著升高，饲料添加剂对凡纳滨对虾、鲫鱼等有一定的促生长、增强抗病作用。

Description

一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及其制备方法和饲料添加剂

技术领域

本发明属于蝇蛆蛋白粉制备领域，一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及其制备方法和饲料添加剂。

背景技术

随着现代水产养殖业规模化和集约化的发展，使用绿色无公害水产饲料添加剂得到了人们的高度重视。20世纪80年代后期，全国一些大城市开始研究和开发“无公害食品”。各级政府制定了相应的法律、法规。我国加入WTO以后，各地掀起了“无公害”、“绿色”水产品热潮。鱼粉一直以来是水产饲料中不可缺少的优质蛋白源，但其使用存在价格高、使用量大等诸多问题。另外，水产养殖中还存在诸多用药问题，造成鱼体及水体中抗生素、重金属等的残留和蓄积，严重的影响了我国无公害水产养殖的发展。因此，寻找一种蛋白来源丰富、质量良好，同时可减少或取代抗生素使用的新型绿色饲料添加剂具有很大的实用意义。

蝇蛆蛋白是一种重要的蛋白质资源且极具开发潜力。大量的营养分析结果表明，蝇蛆的蛋白质含量丰富，干蛋白质含量高达43.62％ ~ 55.26％，各种氨基酸含量均要高于鱼粉，必需氨基酸含量是鱼粉的2.3倍。另外，蝇蛆具有独特的免疫功能，其体内含有一种很强杀菌作用的“抗菌活性肽”，这种活性肽只要万分之一浓度就足以杀死入侵的病菌。但是这种活性肽在蝇蛆里的含量很低，因此制备得到的蝇蛆蛋白粉中抗菌活性肽的含量也很低。目前对其产品的开发研究较少，陆婕等人（家蝇蛆抗菌肽提取工艺研究，2007，昆虫学报）利用加热-层析发提取抗菌肽提取得率仅为0.26%。

发明内容

为了克服现有技术中蝇蛆蛋白粉中抗菌肽含量的不足，本发明所要解决首要技术问题在于提供一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种由上述富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法制备得到的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉。

本发明所要解决的再一技术问题在于提供一种饲料添加剂。

本发明所要解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：（1）饲养成蝇，诱集产卵，孵化后，以饲料喂养幼虫；（2）对幼虫进行超声诱导；（3）继续饲养12~48小时，收集幼虫，经清洗，消毒处理后，进行组织匀浆捣碎；（4）过滤，滤液经0~5℃处理，去除表面脂类成分，干燥后即得；

步骤（2）所述的幼虫为3龄幼虫；步骤（2）所述的超声诱导，其条件为：30~40千赫兹，40~60瓦处理1~2分钟，间隔5~15分钟，重复处理2~4次。

本发明所述的蝇优选为家蝇，其学名为Musca domestica Linnaeus。

作为一种优选方案：步骤（1）中所述的诱集产卵是通过将交尾后的成蝇，放入集卵杯，在诱集产卵物质的作用下进行的；所述的诱集产卵物质为：麦麸+猪血+0.01重量%氨水。

作为一种优选方案：步骤（1）中所述的饲料为麦麸+猪血+酵母。

作为一种优选方案：步骤（2）中所述的超声诱导，条件为：35千赫兹，50瓦处理1分钟，间隔10分钟，重复处理3次。

作为一种优选方案：步骤（3）中所述的饲养时间为24小时。收集幼虫可利用负趋光性收集。

作为一种优选方案：步骤（4）中所述的过滤为80目纱网过滤；滤液经0℃处理。

一种由上述制备方法制备得到的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉。

一种饲料添加剂，包含本发明所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及辅料。

所述的辅料优选为玉米淀粉。

所述的玉米淀粉，其含量为添加剂总重量的5%。

本发明所述的饲料添加剂的制备方法，由如下步骤制备得到：将本发明所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉，加入辅料，制粒即得。

作为一种优选方案：一种饲料添加剂的制备方法，由如下步骤制备得到：将本发明所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉，加入5 重量%的玉米淀粉进行冷制粒，加工成颗粒型添加剂。

本发明所述的饲料添加剂应用水产养殖中。可促进水产品生长，增强水产品抗病能力。

本发明的有益效果：（1）本发明采用特定条件下的超声刺激方式对幼虫进行诱导，使得家蝇体内小分子抗菌肽类活性成分含量显著升高；（2）本发明所使用的超声诱导方法简单，适合于富含抗菌肽蛋白粉的规模化生产；（3）饲料中添加15重量％饲料添加剂对凡纳滨对虾、鲫鱼等有一定的促生长作用，其肉质改善，鲜味氨基酸含量升高，而且对养殖水体不会造成新的污染；（4）体外实验结果显示，本发明所述的饲料添加剂对荧光假单胞菌、鳗弧菌、豚鼠气单胞菌、链球菌等均具有一定的抑制作用；体内实验结果表明，对荧光假单胞菌、鳗弧菌等病原微生物引起的鱼及虾体感染具有一定的防治作用。

附图说明

图1：富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉和饲料添加剂的制备方法工艺流程图；

    图2：饲料添加剂对水体PH、盐度、氨氮含量、亚硝酸氮、总碱度的影响图。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对发明本身不做任何形式的限定。

实施例1 富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及饲料添加剂的制备

家蝇来源于广东省疾病预防与控制中心，并经长时间驯化处理。待成蝇交尾后，放入集卵杯（诱集产卵物质：麦麸+猪血+0.01%氨水），收集蝇卵，孵化后，转入基础饲料（麦麸+猪血+酵母）喂养；幼虫发育至3龄，进行超声诱导，条件如下：35千赫兹，50瓦处理1分钟，间隔10分钟，重复处理3次；继续饲养24小时，利用负趋光性收集幼虫；经清洗、消毒处理后，进行组织匀浆捣碎；80目纱网过滤，滤液经0摄氏度低温预处理40分钟，去除表面脂类成分；喷雾干燥得富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉；然后加入适量辅料（玉米淀粉5重量%）进行冷制粒，加工成颗粒型饲料添加剂。将本实施例得到的饲料添加剂进行实施例3~6所示的实验，结果见具体实施例。

实施例2 

将本发明经特定的超声（35千赫兹，50瓦处理1分钟，间隔10分钟，重复处理3次）诱导处理家蝇幼虫后得到的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉，与不经超声诱导处理步骤得到的蝇蛆蛋白粉，分别经葡聚糖凝胶过滤，用BCA法检测分子量＜30KD的成分，并测定其抑菌活性。结果显示经诱导处理后，＜30KD的成分占蝇蛆蛋白粉的比例由原来的（不经特定超声诱导幼虫步骤得到的蝇蛆蛋白粉）（8.92±0.13）重量%提升到（21.33±1.22）重量%。采用药敏试纸检测的方法进行检验，发现分子量＜30KD的成分在浓度为40μg/ml时对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、幽门螺杆菌等有明显的抗菌作用，抑制率分别为（82.43±2.53）%、（57.23±3.21）%、（45.66±1.87）%，实验证明抗菌活性肽（分子量＜30KD的成分）的含量大大提高。

实施例3 饲料添加剂对无公害海水养殖凡纳滨对虾生长性能及水质的影响

分别以5重量％（A组），10重量％（B组）和15重量％（C组）的饲料添加剂替代D组中的鱼粉，D组为基础饲料对照组（含鱼粉15重量%）。用上述4种饲料进行了一个为期8周的养殖试验。试验期间每天投喂饲料4次。养殖试验结束时，分别计算体长、全长和背甲宽等生长性能。实验组C的体长，全长和背甲宽的增长均大于对照组D，实验组C的体长，全长和背甲宽的增长均大于实验组A和B。ABCD各组对虾的存活率分别为88.0％，90.3％，96.0％和90.0％，AB组与对照组对虾的存活率基本一致，而C组与对照组对虾的存活率具有显著差异，实验组显著高于对照组（P <0.05）。这可以说明使用适量饲料添加剂替代鱼粉饲养对虾可以显著提高对虾的存活率。实验组与对照组对虾生长情况见表1。

通过检测养殖水体的PH、盐度、氨氮含量、亚硝酸氮、总碱度等，发现使用饲料添加剂的三个组，水质情况同对照组没有较大的差别，说明使用饲料添加剂不会对水质增加污染。具体数据见附图2。

实施例3  饲料添加剂对无公害淡水养殖鲫鱼生长性能及水质的影响

鲫鱼鱼苗购自广东佛山某水产养殖场，选取同一批次、健康鱼苗（规格为50～70g），进行12周养殖试验。其中，1组为对照组，投喂基础饲料（含鱼粉）；其余3组为试验组，分别投喂基础饲料中含饲料添加剂5重量%、10重量%和15重量%的试验饲料。通过添加剂对生长的影响效果测定，发现10重量%添加剂组即具有最高的相对增重率和特定生长率，具有最小的饲料系数。以添加剂替代饲料中的鱼粉进行12周养殖试验，可显著提高鲫鱼的相对增重率和特定生长率，降低饲料系数，在一定程度上增强肠和肝胰脏的消化酶活力，提高饲料效率，并在一定程度上提高肌肉的含肉率。此外，该添加剂可显著提高中性粒细胞杀菌功能，显著促进活性氧的产生以提高呼吸爆发能力，并能显著提高溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力，增强鱼体抗病能力。且鱼肉中总游离氨基酸及鲜味氨基酸（主要包括天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸）的含量升高，肉质鲜嫩口感好。具体数据见表2～6。

 

   

通过检测养殖水体的PH、氨氮含量、亚硝酸氮、总碱度等，发现使用蝇蛆粉的三个组，水质情况同对照组没有较大的差别，说明使用蝇蛆粉添加剂不会对水质增加污染。

实施例4  饲料添加剂对鳗弧菌感染凡纳滨对虾生长的影响

水体中接种入鳗弧菌，接种浓度为120cfu/ml，对照组饲喂含有15重量%鱼粉的饲料，实验组饲喂含有15重量%添加剂的饲料。3周后，对照组对虾活动力减弱，食欲减退，个体消瘦，多数对虾附肢变红，死亡率为（56.22±1.49）%，显微镜观察发现其血淋巴肿有大量细菌；添加剂饲喂实验组患病虾的数量较少，病状较轻，死亡率为（7.92±0.71）%。

实施例5  饲料添加剂对荧光假单胞菌感染鲫鱼生长的影响

采用腹腔注射的方式感染鲫鱼，接种量为1.5×10⁵cfu/ml，对照组饲喂含有15重量%鱼粉的饲料，实验组饲喂含有15重量%添加剂的饲料。对照组在感染4天后，游动减少，感染20天后，死亡率达（89.35±2.88）%，表现为体表充血，出血，鳞片向外张开，松动易脱落，腹腔内有红色的腹水，镜下可见大量细菌。添加剂饲喂实验组，感染鱼的生长性能有所提高，死亡率降低为（25.65±1.48）%。

实施例6饲料添加剂水溶性物质在体外对鳗弧菌、荧光假单胞菌、豚鼠气单胞菌、链球菌、鱼乳杆菌等的抑制作用。

适量添加剂与水混匀，3000r/min离心10分钟，取上清，真空干燥。测定其体外对鳗弧菌、荧光假单胞菌、豚鼠气单胞菌、链球菌等的最小抑菌浓度。用LB 液体培养基将干燥后的物质倍比稀释共稀释10 次，各稀释液均为1ml，调整菌体浓度为105CFU/ml，于37℃、150r/min 培养18～20h 后经比色测定大肠杆菌的生长情况，结合probity回归分析，获得80%细菌被抑制的浓度即为最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations，MIC)。结果如表7所示：

Claims (10)

1.一种富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于由包括如下步骤：（1）饲养成蝇，诱集产卵，孵化后，以饲料喂养幼虫；（2）对幼虫进行超声诱导；（3）继续饲养12~48小时，收集幼虫，经清洗，消毒处理后，进行组织匀浆捣碎；（4）过滤，滤液经0~5℃处理，去除表面脂类成分，干燥后即得；

步骤（2）所述的幼虫为3龄幼虫；步骤（2）所述的超声诱导，其条件为：30~40千赫兹，40~60瓦处理1~2分钟，间隔5~15分钟，重复处理2~4次。

2.根据权利要求1所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的诱集产卵是通过将交尾后的成蝇，放入集卵杯，在诱集产卵物质的作用下进行的；所述的诱集产卵物质为：麦麸+猪血+0.01重量%氨水。

3.根据权利要求1所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的饲料为麦麸+猪血+酵母。

4.根据权利要求1所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的超声诱导，条件为：35千赫兹，50瓦处理1分钟，间隔10分钟，重复处理3次。

5.根据权利要求1所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的饲养时间为24小时。

6.根据权利要求1所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的过滤为80目纱网过滤；滤液经0℃处理。

7.由权利要求1～6任一项所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉的制备方法制备得到的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉。

8.一种饲料添加剂，其特征在于包含权利要求7所述的富含抗菌肽蝇蛆蛋白粉及辅料。

9.根据权利要求8所述的饲料添加剂，其特征在于所述的辅料为玉米淀粉。

10.根据权利要求9所述的饲料添加剂，其特征在于所述的玉米淀粉，其含量为饲料添加剂总重量的5%。

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