CN102850427B

CN102850427B - 丹参酮ⅱa衍生物及其制备和应用

Info

Publication number: CN102850427B
Application number: CN201210344390.5A
Authority: CN
Inventors: 李宏; 岳昌林; 杨浦生
Original assignee: JIANGSU JIUXU PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: JIANGSU JIUXU PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2012-09-17
Filing date: 2012-09-17
Publication date: 2014-04-16
Anticipated expiration: 2032-09-17
Also published as: CN102850427A

Abstract

本发明涉及丹参酮ⅡA衍生物及其制备和应用。本发明所提供的丹参酮ⅡA衍生物如式（I）所示

Description

丹参酮ⅡA衍生物及其制备和应用

技术领域

本发明涉及丹参酮ⅡA衍生物及其制备和应用。

背景技术

现代医学临床应用表明，丹参酮ⅡA在心血管疾病的治疗，肝、肾疾病的治疗，呼吸***疾病的治疗，肿瘤的治疗，脑血管疾病的治疗，具有良好的治疗效果。

目前，已有的商品是丹参酮ⅡA磺酸钠注射液，丹参注射液，丹参片，丹参胶囊，丹参酮胶囊，丹参颗粒，丹参膏，丹参冲剂，注射用丹参多酚酸盐等。

丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的缺陷主要有：在丹参酮ⅡA在溶液中对光极敏感，会发生光化反应，生成多种产物，丹参酮ⅡA磺酸钠注射液在较低温度贮藏下会有析出结晶的倾向，这对于注射用药，特别是静脉注射用药来说，存在一定的安全隐患。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供一种丹参酮ⅡA衍生物及其制备和应用。

本发明涉及一种丹参酮ⅡA衍生物，如式（I）所示：

本发明还涉及制备上述参酮ⅡA衍生物的方法，所述方法包括如下步骤：

（1）取1重量份的丹参酮ⅡA，与15～50重量份，优选15～20重量份，最优选15重量份的二氯甲烷，和1.5～4重量份，优选1.5～2.5重量份，最优选2重量份的锌粉混合，得溶液1；

（2）在10～40重量份的水中溶解1～4重量份，优选1～2重量份，最优选1.2重量份的氢氧化钾和0.5～1.5重量份，优选0.5～1重量份，最优选0.8重量份的四丁基硫酸氢铵，得溶液2；

（3）将溶液1和溶液2混合，密封条件下，加热条件下反应，反应温度优选为60～100℃，更优选为80～90℃，反应时间优选为4～6小时，更优选为5～6小时；

（4）取反应液中的有机相，用水洗至中性，蒸干，得残留物1。

以上方法还可包括步骤（5）：取步骤（4）得到的残留物1，加溶剂溶解，脱色过滤，经冷却、析晶、过滤、洗涤后干燥。所述溶剂优选乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷或其任意比混合溶剂，更优选四氢呋喃或四氢呋喃和乙醇的混合溶剂。

本发明涉及上述方法制备的化合物，如式（I）所示：

本发明还涉及上述丹参酮ⅡA衍生物在制备治疗心血管疾病药物，治疗肝、肾疾病药物，治疗呼吸***疾病药物，***药物以及治疗脑血管疾病药物中的应用。

具体实施方式

以下列举实施例具体说明本发明的制备方法及其应用。但本发明并不限于下述实施例。

实施例1

本实施例的的制备方法，包括如下步骤：

（1）在5升高压反应釜中加入120克丹参酮ⅡA，1800克二氯甲烷，240克锌粉，搅拌溶解；

（2）在3000毫升烧杯中加入1200克水，144克氢氧化钾，96克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，密闭高压反应釜，加热升温，于80～90℃下强力搅拌反应5-6小时；

（4）反应结束，将反应液冷却至35℃以下，打开釜盖，抽出反应液，过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用1200毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有机层蒸干，加500毫升四氢呋喃加热溶解，加8克活性炭回流脱色40分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品103克。

103克湿品加400毫升四氢呋喃加热溶解，加6克活性炭回流脱色30分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品76克，真空干燥，得微红色干品58克。收率46%。熔点：180～182℃。高效液相色谱面积归一化法纯度99.2%。

经核磁共振检测、质谱检测、红外检测、紫外检测和元素分析，确定该微红色干品的结构式如式（I）所示，命名为3,8,8-三甲基3,4-亚甲二氧基5,6,7,8四氢菲并[1,2a]呋喃。

实施例2

本实施例的的制备方法，包括如下步骤：

（1）在5升高压反应釜中加入120克丹参酮ⅡA，2400克二氯甲烷，300克锌粉，搅拌溶解；

（2）在3000毫升烧杯中加入2400克水，240克氢氧化钾，120克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（4）反应结束，将反应液冷却至35℃以下，打开釜盖，抽出反应液，过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用1200毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有机层蒸干，加500毫升四氢呋喃加热溶解，加8克活性炭回流脱色40分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品101克。

101克湿品加400毫升四氢呋喃加热溶解，加6克活性炭回流脱色30分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品73克，真空干燥，得微红色干品56克。收率44%。熔点：180～182℃。高效液相色谱面积归一化法纯度99.1%。

实施例3

本实施例的制备方法，包括如下步骤：

（1）在5升高压反应釜中加入50克丹参酮ⅡA，2500克二氯甲烷，200克锌粉，搅拌溶解；

（2）在3000毫升烧杯中加入2000克水，200克氢氧化钾，75克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，密闭高压反应釜，加热升温，于110～120℃下强力搅拌反应8小时；

（4）反应结束，将反应液冷却至35℃以下，打开釜盖，抽出反应液，过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用1000毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有几层蒸干，加2500毫升乙醇加热溶解，加12克活性炭回流脱色40分钟，过滤，滤液蒸去1800毫升乙醇，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品60克。

60克湿品加400毫升二氯甲烷加热溶解，加4克活性炭回流脱色30分钟，过滤，滤液中加入乙醇2000毫升，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品32克，真空干燥，得微红色干品22克。收率42%。熔点：179～182℃。高效液相色谱面积归一化法纯度99.0%。

实施例4

本实施例的制备方法，包括如下步骤：

（1）在5升高压反应釜中加入60克丹参酮ⅡA，900克二氯甲烷，90克锌粉，搅拌溶解；

（2）在1000毫升烧杯中加入600克水，60克氢氧化钾，30克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，密闭高压反应釜，加热升温，于60～100℃下强力搅拌反应4～6小时；

（4）反应结束，将反应液冷却至35℃以下，打开釜盖，抽出反应液，过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用800毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值8为止，有几层蒸干，加2500毫升甲醇加热溶解，加10克活性炭回流脱色40分钟，过滤，滤液蒸去2000毫升甲醇，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品60克。

60克湿品加2500毫升甲醇加热溶解，加6克活性炭回流脱色30分钟，过滤，滤液蒸去2000毫升甲醇，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品48克，真空干燥，得橙红色干品37克。收率58％。熔点：155～157℃。高效液相色谱面积归一化法纯度96.7%。

实施例5

本实施例的制备方法，包括如下步骤：

（1）在1000毫升四口反应瓶中加入10克丹参酮ⅡA，200克二氯甲烷，30克锌粉，搅拌溶解；

（2）在500毫升烧杯中加入100克水，12克氢氧化钾，8克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，30～120℃搅拌反应4～8小时；

（4）反应结束，将反应液过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用200毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有几层蒸干，加200毫升四氢呋喃加热溶解，加4克活性炭回流脱色45分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品6克。

6克湿品加60毫升四氢呋喃加热溶解，加2克活性炭回流脱色35分钟，过滤，滤液冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品3克，真空干燥，得微红色干品2.5克。收率24%。熔点：180～183℃。高效液相色谱面积归一化法纯度99.0%。

实施例6

本实施例的制备方法，包括如下步骤：

（1）在1000毫升四口反应瓶中加入10克丹参酮ⅡA，500克二氯甲烷，40克锌粉，搅拌溶解；

（2）在1000毫升烧杯中加入400克水，40克氢氧化钾，15克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，加热升温，强力搅拌，回流反应8小时；

（4）反应结束，将反应液过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用300毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有几层蒸干，加2000毫升乙醇加热溶解，加5克活性炭回流脱色45分钟，过滤，滤液蒸去乙醇1500毫升，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品8克。

8克湿品加1000毫升乙醇加热溶解，加3克活性炭回流脱色35分钟，过滤，滤液蒸去乙醇800毫升，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品6克，真空干燥，得橙红色干品5克。收率47%。熔点：151～153℃。高效液相色谱面积归一化法纯度94.8%。

实施例7

本实施例的制备方法，包括如下步骤：

（1）在1000毫升四口反应瓶中加入10克丹参酮ⅡA，150克二氯甲烷，15克锌粉，搅拌溶解；

（2）在500毫升烧杯中加入100克水，10克氢氧化钾，5克四丁基硫酸氢铵，搅拌溶解；

（3）将步骤（2）制成的溶液加入到步骤（1）制成的溶液中，加热升温，强力搅拌，回流反应4小时；

（4）反应结束，将反应液过滤，滤液静置分层，分去水层，要有机层，有机层每次用100毫升水洗涤，测水层PH值，直至洗涤水中PH值7为止，有几层蒸干，加2000毫升乙醇加热溶解，加5克活性炭回流脱色45分钟，过滤，滤液蒸去乙醇1700毫升，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品9克。

9克湿品加1200毫升乙醇加热溶解，加4克活性炭回流脱色35分钟，过滤，滤液蒸去乙醇1000毫升，冷却、析晶、过滤、洗涤得湿品7克，真空干燥，得橙红色干品6克。收率57%。熔点：148～157℃。高效液相色谱面积归一化法纯度87.6%。

实施例8

对本发明所提供的式（I）所示化合物进行各种效果验证实验。

对大鼠肢体缺血再灌注损伤的影响

方法：

健康雄性Wistar大鼠48只，体重（210±20）g，由山西医科大学动物实验中心提供，动物合格证号为医动字第070101。将大鼠随机分为三组，每组16只，分别为试验组、对照组、假手术组。试验组于术前3、2、1d及术前30min，给予腹腔注射丹参酮I IA衍生物注射液（20mg/kg）；同时对照组及假手术组给予腹腔注射等量生理盐水。术前大鼠禁食12h，自由饮水，采用乌拉坦（40mg/100g）腹腔注射麻醉，取腹部正中切口，分离出腹主动脉，在髂总动脉分叉处上方0.5cm处用动脉夹阻断腹主动脉，以远端动脉变扁及搏动消失为标准，阻断2h后，再灌注4h。假手术组不做腹主动脉阻断，其他步骤同试验组。

结果：

丹参酮对血清SOD(超氧化物歧化酶)活性和MDA(丙二醛)含量的影响如下：缺血2h及再灌注4h，与对照组比较，假手术组血清SOD活性均升高（P<0.05），MDA含量均减少（P<0.05）。对照组大鼠再灌注4h与缺血2h比较，血清SOD活性进一步降低（P<0.05），MDA含量进一步增多（P<0.05）；而试验组大鼠再灌注4h与缺血2h血清SOD活性和MDA含量无明显变化（P>0.05）。结果见表1。

表1：各组大鼠血清SOD活性和MDA含量比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与缺血2h比较，^ΔP<0.05

以上试验结果表明,本化合物对心血管疾病具有一定的疗效.

对***受体阴性人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的生长抑制作用

细胞增殖抑制试验（MTT法）：

取对数生长期细胞，细胞浓度为5×10⁵/ml，接种于96孔培养板中，每孔100μl。24h后，加入含不同浓度丹参酮IIA衍生物（终浓度分别为0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0μg/ml）的新培养基100μl，设丹参酮IIA衍生物0μg/ml为空白对照，5-氟尿嘧啶10μg/ml为阳性对照，每浓度4个复孔，分别作用24、48、72、96h后，加入新配置的MTT液，置37℃、5%CO₂培养箱内培养作用6h，加入二甲基亚砜，15min后，酶标仪于570nm处测吸光度值A₅₇₀。取4个复孔平均值，计算细胞抑制率及I C₅₀。根据公式：细胞抑制率（%）=（1-实验组A₅₇₀/对照组A₅₇₀）×100%。实验重复3次。

克隆形成实验：

调整MDA-MB-231细胞浓度，按5×10²/孔接种于6孔板，培养过夜使细胞贴壁，次日分别用不同剂量的丹参酮I IA衍生物(0.0625、0.125、0.25μg/ml)处理细胞，对照组不处理，每个剂量组设4个复孔，置37℃、5%CO₂培养箱内培养作用12d，甲醇固定，Giemsa染色，低倍镜下观察克隆形成（以﹥50个细胞为标准），计数各克隆数，取其平均值，实验重复3次。

结果：

丹参酮IIA衍生物对MDA-MB-231的生长抑制作用与空白对照呈正常对数增长。各实验组丹参酮IIA对MDA-MB-231的增殖有明显抑制作用，呈浓度、时间依赖性（见表2），半效抑制浓度（IC₅₀）为0.125μg/ml。

丹参酮IIA衍生物对肿瘤细胞克隆形成的抑制作用：

对照组MDA-MB-231细胞克隆形成数为236±11，用0.0625、0.125、0.25μg/ml丹参酮IIA衍生物处理后，克隆形成数分别为112±7、63±5、32±3，与空白对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）,其抑制作用呈剂量-效应关系。

表2：各组不同时间点MDA-MB-231抑制率比较

与24h对照组比较^aP﹤0.05；与48h对照组比较^bP﹤0.05

该试验结果表明,本化合物对癌细胞（MDA-MB-231）的生长具有一定的抑制作用.

对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

健康KM小鼠60只，随机分为6组，即为正常对照组，模型组，联苯双酯150mg/kg组，丹参酮I IA衍生物组（30,20,10mg/kg），每组10只。各给药组灌胃（每10g给予0.2ml）给予相应药物，正常对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水，每日1次，15d后，除正常对照组外，其余各组均尾静脉注射20mg/kg刀豆A，禁食12h后，全部动物摘眼球取全血，其中一部分血液经16%肝素钠润过的EP管中制成抗凝血，另一部分离心（3000r/min，离心10min）取血清-20℃冻存备用。采用自动化生化分析仪测定血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性，所有动物取肝脏并置入10%甲醛溶液中固定，进行病理组织学检查。

结果：

（1）对免疫性肝损伤小鼠ALT、AST的影响：

模型组小鼠血清中AST、ALT活性较正常对照组明显升高，与正常组比较差异有显著性（P＜0.01），说明造模成功；与模型组比较，丹参酮I IA衍生物20,30mg/kg组和联苯双酯组AST、ALT活性明显降低（P＜0.05或P＜0.01），而丹参酮I IA衍生物10mg/kg组AST、ALT活性的降低均无统计学意义，说明丹参酮I IA衍生物大和中剂量治疗组能明显降低免疫性肝损伤小鼠ALT和AST活性，见表3。

表3：对免疫性肝损伤小鼠ALT、AST的影响

组别	剂量（mg/kg)	AST(U/L)	ALT(U/L)
				正常组		187.25±50.5	85.06±23.3
模型组		480.21±166.4¹⁾	210.35±117.2¹⁾
				实验组	30	205.16±82.2³⁾	62.63±15.9³⁾
	20	319.94±110.3²⁾	104.16±50.6²⁾
					10	378.29±144.1	123.96±52.2
联苯双酯组	150	257.46±50.2³⁾	78.17±35.9³⁾

注：与正常组相比，¹⁾P＜0.01；与模型组相比，²⁾P＜0.01，³⁾P＜0.01

（2）对小鼠肝组织病理变化的影响：

光镜下观察显示，与正常对照组比较，刀豆蛋白A注射12h后模型组可见肝小叶内炎症细胞呈围管性浸润，肝窦淤血，肝细胞变性、水肿，少量肝细胞凋亡和坏死；与模型组比较，丹参酮IIA衍生物30mg/kg组和联苯双酯组小鼠肝组织未见明显的病理变化；丹参酮IIA衍生物20、10mg/kg组可见少量炎症细胞围管性浸润及肝窦淤血，肝细胞变性和凋亡较模型组都有不同程度的改善。说明丹参酮IIA衍生物各剂量治疗组肝损伤明显低于模型组，尤其是大剂量比中、小剂量组能明显保护刀豆蛋白A介导的肝组织的损伤。

该试验结果表明,本化合物对肝脏的损伤及疾病具有一定的疗效.

对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

将36只大鼠随机分为对照组(NC组)、糖尿病组（DM组）和丹参酮IIA衍生物治疗组（DMT组），对照组大鼠12只，普通饲料喂养，6周时腹腔注射ph值为4.2的等体积枸橼酸缓冲液。其余大鼠24只予高糖、高脂饲料喂养，6周时腹腔注射30mg/kg链脲佐菌素，8周时口服葡糖糖耐量试验，异常者入选。成模大鼠共20只，其中糖尿病组（DM组）9只，糖尿病治疗组11只。12周时治疗组每日给予丹参酮IIA衍生物注射液1,42mg/kg灌胃，其余两组每日给予等体积的高压消毒水灌胃。24周时，所有大鼠收集24h尿液，保存、待测；麻醉后经腹主静脉取血，迅速取出左肾，滤纸吸干水分，去包膜，称重，制备大鼠肾脏组织标本。采用免疫组化法进行肾脏组织病理学检测。

结果：

血生化指标及尿液检查：对24h尿液和血液进行检测，结果见表4。可见DM组的空腹血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、尿白蛋白分泌率较同期NC组均显著升高，肌酐清除率明显下降（P＜0.01）。治疗组胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、尿白蛋白分泌率较同期DM组均好转（P＜0.05），胰岛素下降程度较大，接近NC组水平。

表4：各组大鼠一般情况及生化指标比较

注：与NC组比较，^*P＜0.05，^ΔP＜0.01；^*与DM组比较，P＜0.05，^ΔP＜0.01

免疫组化结果：

见表5。NC组大鼠近曲小管上皮细胞胞浆内α-SMA和vimentin无表达,TGF-β1在胞浆和间质中微量表达；DM组大鼠近曲小管上皮细胞胞浆内有棕黄色颗粒，α-SMA、vimentin、TGF-β₁呈强阳性；与同期DM组相比，治疗组各项指标表达减轻，范围缩小，表达水平介于NC组与DM组之前。

表5：大鼠肾脏细胞免疫组化结果

组别	α-SMA	TGF-β₁	viment in
				NC(n=12)	0.01±0.02	0.03±0.01	0.02±0.01
DM(n=9)	0.37±0.04^*	0.33±0.06^*	0.39±0.01^*
				DMT(n=11)	0.23±0.05^*#	0.21±0.02^#△	0.22±0.03^#△

注：与NC组比较，^*P＜0.05，^ΔP＜0.01；^*与DM组比较，P＜0.05，ΔP＜0.01

该试验结果表明,本化合物对肾脏具有保护作用。

对脂多糖性急性肺损伤大鼠组织ACE2表达的影响

45只健康雄性Wistar大鼠，随机分为3组：正常生理盐水对照组（NS组）、急性肺损伤组（LPS组）、丹参酮IIA衍生物干预组（干预组），LPS组和干预组通过股静脉注射LPS（5mg/kg）建立急性肺损伤模型。干预组在注射LPS前30min静脉给药10mg/kg，NS组和LPS组给予等量NS。3组又分为6h、12h、24h3个时间点亚组，每组5只，检测血气分析、肺组织湿/干重比（W/D）、ACE2免疫组织化学表达。

结果：

动脉血气分析结果：LPS注射后大鼠表现为呼吸增快，精神萎靡，对外界反应淡漠。LPS各亚组PaO₂较对照组显著降低（P＜0.05），而干预组PaO₂各时间点较LPS组有明显改善。见表6。

表6：各组动脉血气分析PaO₂结果（㎜Hg）

组别	例数	Ⅰ亚组（6h）	Ⅱ亚组（12h）	Ⅲ亚组（24h）
					NS	5	94.0±1.87	93.6±3.71	94.4±1.14
LPS	5	76.0±2.91^1）	69.2±2.58^1）	62.4±2.07^1）
					干预组	5	82.2±3.34^1)2）	75.2±2.16^1)2）	72.4±3.51^1)2）

与NS对照组比较，¹⁾P＜0.05；与LPS组相应时点比较，2）P＜0.05肺组织湿/干重（W/D）比值测定：

LPS组大鼠肺湿干比W/D值随时间点的延长而上升，较对照组显著升高（P＜0.05），而干预组虽也随时间点延长而上升，但明显低于LPS组同时间点，差异有统计学意义（P＜0.05），见表7。

表7：肺组织湿/干重（W/D）比值的比较

组别	例数	Ⅰ亚组（6h）	Ⅱ亚组（12h）	Ⅲ亚组（24h）
					NS	5	4.39±0.54	4.46±0.29	5.00±0.69
LPS	5	5.64±0.741）	6.22±0.901）	7.47±0.821）
					干预组	5	4.60±0.362）	4.91±0.222）	5.88±0.892）

与NS对照组比较，¹⁾P＜0.05；与LPS组相应时点比较，^2）P＜0.05

肺组织病理改变：

光镜下，正常肺组织结构清晰，肺泡壁完整，肺间质无渗出。LPS组肺泡间隔增宽，部分肺泡内见渗出、水肿、出血，肺间质内见大量炎症细胞浸润，较对照组同时间点明显增多。而干预组肺组织间隔略有增宽，肺间质少量炎症细胞浸润。

肺组织ACE2免疫组织化学的表达：ACE2在正常肺细胞膜上有表达。在肺泡上皮细胞，细支气管上皮细胞，内皮细胞和肺血管平滑肌细胞大致相似。各时间点未见明显区别。LPS组肺组织ACE2表达明显减弱，且以12h为最弱，干预组肺组织ACE2阳性表达较LPS组相同时间点有明显增强。图像分析软件测定的积分光密度值显示，NS Ⅱ亚组是LPS Ⅱ亚组的4.72倍（P＜0.05），干预组Ⅱ亚组是LPS Ⅱ亚组的2.24倍，干预组3个亚组较LPS 3个亚组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表8。

表8：3组大鼠不同时间点肺组织ACE2的免疫组织化学表达（I OD×105）

组别	例数	Ⅰ亚组	Ⅱ亚组	Ⅲ亚组
					NS	5	1.22±0.04	1.18±0.07	1.18±0.07
LPS	5	0.37±0.021）	0.25±0.041）	0.46±0.031）
					干预组	5	0.79±0.031）2）	0.56±0.041）2）	0.85±0.071）2）

该试验结果表明,丹参酮I IA衍生物能减轻LPS导致的肺部急性炎性反应，这种防治作用可能与上调ACE2的表达有关。

光稳定性实验

取本发明所制备式（I）化合物3克于称量瓶中，摊成＜10毫米厚的薄层，放置于4500lx±500lx的强光照射药物稳定性检查仪中，强光连续照射，于第5天和第10天取样检测。结果如表9。

表9：取本发明所制备式（I）化合物的光稳定性实验结果

	外观	熔点	含量	有关物质
					0天	微红色	180～182℃	99.2%	0.8%
5天	微红色	180～182℃	99.1%	0.9%
					10天	微红色	180～182℃	99.2%	0.8%

同样条件下实验，丹参酮IIA强光连续照射实验结果见表10。

表10：丹参酮IIA的光稳定性实验结果

	外观	熔点	含量	有关物质
					0天	橙红色	209～210℃	98.6%	1.4%
5天	***	192～194℃	90.2%	9.8%
					10天	红黑色	186～189℃	86.4%	13.6%

温度稳定性实验

取本发明所制备式（I）化合物3克于称量瓶中，摊成＜10毫米厚的薄层，放置于60℃恒温药物稳定性检查仪中高温试验，于第5天和第10天取样检测。结果如表11。

表11：温度稳定性实验结果

	外观	熔点	含量	有关物质
					0天	微红色	180～182℃	99.2%	0.8%
5天	微红色	180～182℃	99.1%	0.9%

10天

微红色

180～182℃

99.1%

0.9%

酸稳定性实验

取本发明所制备式（I）化合物3克于100毫升烧瓶中，加50毫升四氢呋喃溶解，再加10毫升1N盐酸，于40℃下搅拌，于2小时和4小时取样检测。结果如表12。

表12：算稳定性实验结果

	外观	熔点	含量	有关物质
					0小时(固体)	微红色	180～182℃	99.2%	0.8%
2小时(溶液)	红色	/	99.0%	1.0%
					4小时(溶液)	红色	/	99.0%	1.0%

碱稳定性实验

取本发明所制备式（I）化合物3克于100毫升烧瓶中，加50毫升四氢呋喃溶解，再加10毫升1N氢氧化钠，于40℃下搅拌，于2小时和4小时取样检测。结果如表13。

表13：酸稳定性实验结果

	外观	熔点	含量	有关物质
					0小时(固体)	微红色	180～182℃	99.2%	0.8%
2小时(溶液)	红色	/	99.2%	0.8%
					4小时(溶液)	红色	/	99.1%	0.9%

本发明所提供的丹参酮ⅡA衍生物在心血管疾病的治疗，肝、肾疾病的治疗，呼吸***疾病的治疗，肿瘤的治疗，脑血管疾病的治疗中，均具有良好的治疗效果，且对光、酸、碱、高温均较稳定。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的构思和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims

1.丹参酮ⅡA衍生物，如式（I）所示：

2.制备权利要求1所述丹参酮ⅡA衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）取1重量份的丹参酮ⅡA、15～50重量份的二氯甲烷和1.5～4重量份的锌粉混合，得溶液1；

（2）在10～40重量份的水中溶解1～4重量份的氢氧化钾和0.5～1.5重量份的四丁基硫酸氢铵，得溶液2；

（3）将溶液1和溶液2混合，密封条件下，加热条件下反应，反应温度为60～100℃，反应时间为4～6小时；

3.权利要求2所述方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）取1重量份的丹参酮ⅡA、15～20重量份的二氯甲烷和1.5～2.5重量份的锌粉混合，得溶液1；

（2）在10～20重量份的水中溶解1～2重量份的氢氧化钾和0.5～1重量份的四丁基硫酸氢铵，得溶液2；

（3）将溶液1和溶液2混合，密封条件下，加热反应；

4.权利要求2所述方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）取1重量份的丹参酮ⅡA、15重量份的二氯甲烷和2重量份的锌粉混合，得溶液1；

（2）在10重量份的水中溶解1.2重量份的氢氧化钾和0.8重量份的四丁基硫酸氢铵，得溶液2；

（3）将溶液1和溶液2混合，密封条件下，加热反应；

5.权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤（3）中的反应温度为80～90℃，反应时间为5～6小时。

6.权利要求2所述方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

（5）取步骤（4）得到的残留物1，加溶剂溶解，脱色过滤，经冷却、析晶、过滤、洗涤后干燥。

7.权利要求6所述方法，其特征在于，步骤（5）所述溶剂是乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷或其任意比混合溶剂。

8.权利要求1所述丹参酮ⅡA衍生物在制备治疗心血管疾病药物，治疗肝、肾疾病药物，治疗呼吸***疾病药物，***药物中的应用。