CN102838570B

CN102838570B - 脉络宁酯及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102838570B
Application number: CN201210292520.5A
Authority: CN
Inventors: 冯煦; 汤卫国; 王奇志; 徐向阳; 王鸣; 蔡莹; 陈雨; 赵友谊; 张蕙; 印敏
Original assignee: JINTING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: JINTING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2012-08-17
Filing date: 2012-08-17
Publication date: 2014-07-16
Anticipated expiration: 2032-08-17
Also published as: CN102838570A

Abstract

本发明属于医药领域，公开了脉络宁酯及其制备方法和用途。该脉络宁酯的化学名为(E)-(5-formylfuran-2-yl)methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)acrylate，结构式为：该脉络宁酯对心肌细胞具有保护作用，可用于制备治疗心血管疾病的药物。

Description

脉络宁酯及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及脉络宁酯及其制备方法和用途。该脉络宁酯化学名为(E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-acrylate，是从脉络宁注射液中提取分离得到的一种酯类新化合物。

背景技术

心血管***疾病严重威胁着人们的生命和健康，在临床上已成为死亡的第一杀手，世界各国都高度重视防治心血管药的研发。中药复方制剂脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”临床应用的基础上研究开发出来的、具有自立知识产权的，并于1985年正式批准生产的中药复方静脉注射剂，由中药石斛、玄参、牛膝、金银花经科学提取精制而成。具有活血化淤、行气止痛、养阴通络和补益肝肾的功效，主要用于治疗缺血性中风急性期、血栓闭塞性脉管炎、下肢深静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死、血液循环障碍及其后遗症等疾病，总有效率可达94.5%，与同类药品比较具有见效快、疗效高、疗程短、价格低廉、副作用少、安全性高等优点。

脉络宁注射液在市场上经受近30年的考验，深受广大医生和患者的欢迎，已成为全国名优中成药。2009年7月入选国家新医改基本药物目录基层版307种，为仅有的3个中药注射剂品种之一，医改给脉络宁注射液带来了新的成长契机，是一个走向更广阔市场的极好机会，显示着很强的生命力和广阔的应用前景。

由于中医药的复杂性和特殊性，中药现代化进程中仍存在不少问题，针对重大疾病的优势品种开发不足，大部分处于低水平重复的状况严重，同时，针对农村地区的适合我国国情的质优价廉的中药品种开发不足，要解决这些问题，必须采用国际先进技术和质量标准，提高我国中药的研发水平，尤其是对中药进行二次开发。把开展中药新的药用成分或部位和新临床适应症的研究作为中药二次开发的重点研究课题，通过严格的科学实验，提供充足的实验数据，提升原有品种的档次，可以起到创新的效果，对提升我国医药产业的创新性、开发具有独立核心知识产权的中药产品，都具有划时代意义。

中药现代化发展的重要推动力是创新，而中药二次开发又是我国中药创新药物研发的重要源泉，是积极发展中医药的一种新途径和新方法。中药复方制剂脉络宁注射液成分复杂，其中未知成分占有相当比例，有效成分尚不明确、质量标准不够合理等关键科学问题，是脉络宁注射剂研发的核心技术问题。这些瓶颈问题一直困扰着企业生产，影响产品声誉和销售，国家食品药品监督管理局在2007年颁布的《中药、天然药物注射剂基本技术要求》中规定了“有效成分制成的注射剂，单一成分含量不得低于90％；多成分制成的中药注射剂，总固体中结构明确成分的含量不得少于60％，所测成分应大于80%”。因此，对脉络宁注射液的二次开发显得格外重要，迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种从脉络宁注射液中提取的酯类新化合物——脉络宁酯（(E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-acrylate）。

本发明的另一个目的是提供上述化合物的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述化合物在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

本发明公开了该化合物的结构式如式Ⅰ

分子式为：C₁₅H₁₂O₆，分子量：288。

命名为：脉络宁酯（化学名为：(E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-acrylate）。

所述脉络宁酯的制备方法，该方法以脉络宁注射液为原料，采用硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、反相柱中的一种或多种经过多次层析分离提纯得到。

所述的制备方法，其中硅胶柱采用200~300目硅胶；凝胶柱为SephadexLH-20；大孔树脂为D101、AB-8、HP-20或MCI；反相柱为ODS。

所述的制备方法，该方法以脉络宁注射液为原料，经Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇、乙醇、20~80%的甲醇-水、或者20~80%的乙醇-水进行等度洗脱，洗脱液再经ODS反相柱，采用5~95%乙醇-水或5~95%甲醇-水进行梯度洗脱，洗脱液再经硅胶柱，采用石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶剂***、氯仿-甲醇、或者二氯甲烷-甲醇进行洗脱，洗脱液再经Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇、乙醇进行洗脱，洗脱液采用重结晶分离提纯，得到脉络宁酯。

所述的脉络宁酯与药学上可接受的药用辅料组成的药物制剂。

所述的药物制剂，其剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或注射剂。

所述的脉络宁酯在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。

所述的应用，其中心血管疾病为导致心肌缺血和/或缺氧的疾病，尤其是心肌梗塞、心肌炎、心肌肥大、冠心病。

本发明有益效果：

本发明提供的脉络宁配是从脉络宁注射液中提取分离得到的一种酯类新化合物，该化合物能够减少LDH从心肌细胞胞浆中漏出，降低MDA含量，提高SOD活性，调节心肌细胞内iNOS表达及NO的合成，明显提高H₂O₂及缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率，对心肌细胞具有保护作用，可用于制备治疗心血管疾病的药物中的应用。

附图说明

图1、化合物Ⅰ的¹H-NMR谱。

图2、化合物Ⅰ的¹³C-NMR谱。

图3、化合物Ⅰ的¹H-¹H COSY的谱。

图4、化合物Ⅰ的HMQC谱。

图5、化合物Ⅰ的HMBC谱。

图6、化合物Ⅰ的ESI-MS谱。

图7、脉络宁酯（化合物Ⅰ）制备工艺流程图。

具体实施方式

结合具体实施方式对本发明作进一步说明，但本发明的内容并不仅仅限于所列举的实施方式。

实施例1.从脉络宁注射液中分离和鉴定化合物Ⅰ

1、仪器与材料

质谱用Packard1100MSD质谱检测器(ESI-MS70V)测定；核磁共振谱用Bruker AV-300型核磁共振仪（TSM内标）测定；熔点用Reichert型微量熔点仪测定；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品，正相柱层析及薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品，反相柱材料为YMCAA12S50，所用试剂均为分析纯。高效液相分析柱为Nova-PakC18柱（3.9×150mm，粒径5μm，Waters公司），高效液相所用试剂为色谱纯；

2、药品

脉络宁注射液，金陵药业股份有限公司提供（批号为：20110467，部颁标准）。

3、制备方法

开启脉络宁注射液700支约7000mL，经Sephadex LH-20柱（7.5×120cm），50%乙醇洗脱，共收集10个流份，流份6反复经ODS反相柱、硅胶柱、SephadexLH-20柱层析（如：流分6经ODS反相柱，采用5-95%甲醇-水溶剂体系进行梯度洗脱，洗脱液再经硅胶柱（200目），采用二氯甲烷-甲醇进行洗脱，洗脱液再经Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇、乙醇进行洗脱，洗脱液采用重结晶分离提纯），分离提纯过程中全程采用高效液相色谱监测，选择特征吸收峰比较大的流分进行下一级分离，从脉络宁注射液中提纯分离得到多个单体化合物，经化学、波谱方法鉴定分别为：5-羟甲基糠醛（MLN-1）、肉桂酸（MLN-2）、绿原酸（MLN-3）、6,7-二羟基香豆素（MLN-4）、琥珀酸（MLN-5）、长链脂肪烃（MLN-6）、脉络宁酯（MLN-7）、3,5-二咖啡酰奎宁酸（MLN-8）、对羟基肉桂酸（MLN-9）、隐绿原酸（MLN-10）、原儿茶酸（MLN-11）、竹节参皂苷（MLN-14），其中脉络宁酯（化学名为(E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-acrylate）是新化合物。

4、化合物I（脉络宁酯）结构经核磁共振谱鉴定如下：

化合物Ⅰ：黄色针晶（氯仿-甲醇），易溶于氯仿甲醇混合溶液。254nm有吸收，I₂蒸汽显褐色、喷FeCl₃显色剂显蓝色，5%-香草醛浓硫酸显黑色。ESI-MS（m/z）：287（M-H）^-，311（M+Na）⁺，分子量为288，结合氢谱、碳谱推测分子式为C₁₅H₁₂O₆。

氢谱显示12个质子信号，其中1个醛基氢质子δ_H9.60(1H,s)，4个烯氢质子，其中2个反式烯氢质子δ_H6.34(1H,d,J=15.9Hz)和δ_H7.54(1H,d,J=15.9Hz)、2个顺式烯氢质子δ_H6.84(1H,d,J=3.5Hz)和δ_H7.53(1H,d,J=3.5Hz)，1个亚甲基δ_H5.27(2H,s)，3个ABX***的芳氢质子信号δ_H7.08(1H,d,J=1.8Hz)、δ_H6.77(1H,d,J＝8.1Hz)和δ_H7.03(1H,dd,J=1.8,8.1Hz)，2个羟基质子信号3-OH,4-OHδ_H5-9(2H,brs)。

碳谱显示15个碳信号，其中1个醛基碳信号δ_C178.5，1个酯羰基碳信号δ_C166.0，10个芳碳信号，2个反式烯碳信号δ_C146.3和δ_C121.8，1个亚甲基δ_C57.4。

在¹H-¹H COSY相关谱中可以找到3组有相关关系的质子，即第一组：δ_H7.08(1H,d,J=1.8Hz)、δ_H6.77(1H,d,J＝8.1Hz)和δ_H7.03(1H,dd,J=1.8,8.1Hz)；第二组：δ_H6.34(1H,d,J=15.9Hz)和δ_H7.54(1H,d,J=15.9Hz)；第三组：δ_H6.84(1H,d,J=3.5Hz)和δ_H7.53(1H,d,J=3.5Hz)，结合HMQC谱可以推出以下3个简单小片段：

在HMBC谱中，δ_H9.60与δ_C152.4；δ_H7.08与δ_C145.6、δ_C121.8；δ_H6.77与δ_C125.4、δ_C145.6、δ_C148.7；δ_H7.03与δ_C114.9、δ_C146.3、δ_C148.7；δ_H7.54与δ_C166.0、δ_C114.9、δ_C121.8、δ_C121.8、δ_C125.4；δ_H6.34与δ_C166.0、δ_C125.4；δ_H5.27与δ_C112.9、δ_C155.7、δ_C166.0；δ_H6.84与δ_C123.9、δ_C152.4、δ_C155.7；δ_H7.53与δ_C155.7、δ_C112.9、δ_C152.4；分别有远程相关信号，其关键的碳氢远程相关如下：

通过¹H NMR、¹³C NMR、HMBC、HMQC、¹H-¹H COSY谱的综合解析，鉴定结构见式I，经文献检索化合物Ⅰ为新化合物，定名为脉络宁酯（(E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-acrylate），对化合物Ⅰ的碳氢信号进行了全归属见表10。

化合物Ⅰ：黄色针晶（氯仿-甲醇），分子式为C₁₅H₁₂O₆，ESI-MSm/z：287[M-H]^-(100)。¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ：9.60(1H,s,CHO),7.08(1H,d,J＝1.8Hz,H-2)，6.77(1H,d,J＝8.1Hz,H-5)，7.03(1H,dd,J＝1.8,8.1Hz,H-6)，7.54(1H,d,J＝15.9Hz,H-7)，6.34(1H,d,J＝15.9Hz,H-8),5.27(2H,s,H-11)，6.84(1H,d,J＝3.5Hz,H-13)，7.53(1H,d,J＝3.5Hz,H-14)，3-OH,4-OH5-9(2H,brs)。¹³CNMR(DMSO-d₆，75MHz)δ：125.4(C-1)，114.9(C-2)，145.6(C-3)，148.7(C-4)，115.8(C-5)，121.8(C-6)，146.3(C-7)，121.8(C-8)，166.0(C-9)，57.4(C-11)，155.7(C-12)，112.9(C-13)，123.9(C-14)，152.4(C-15)，178.5(C-16)。

表10：化合物Ⅰ的碳氢信号

No.	¹³C-NMR	¹H-NMR	¹H-¹H COSY	HMBC
					1	125.4
2	114.9	7.08(1H,d,J＝1.8Hz)	H-6	C-6,C-3
					3	145.6
4	148.7
					5	115.8	6.77(1H,d,J＝8.1Hz)	H-6	C-1,C-3,C-4
6	121.8	7.03(1H,dd,J＝1.8,8.1Hz)	H-5,H-2	C-2,C-7,C-4
					7	146.3	7.54(1H,d,J＝15.9Hz)	H-8	C-9,C-2,C-8,C-6,C-1
8	121.8	6.34(1H,d,J＝15.9Hz)	H-7	C-9,C-1

9	166.0
					11	57.4	5.27(2H,s)		C-13,C-12,C-9
12	155.7
					13	112.9	6.84(1H,d,J＝3.5Hz)	H-14	C-14,C-15,C-12
14	123.9	7.53(1H,d,J＝3.5Hz)	H-13	C-12,C-13,C-15
					15	152.4
16	178.5
					3-OH,4-OH		5-9(2H,brs)
-CHO		9.60(1H,s)		C-15

实施例2

本发明所提供的新化合物Ⅰ脉络宁酯能够减少心肌缺血模型大鼠LDH含量，降低MDA含量，提高SOD活性，调节心肌细胞内iNOS表达及NO的合成，明显提高H₂O₂及缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率，对心肌细胞具有保护作用。其药理实验结果如下：

（一）实验目的

分别以H₂O₂、缺氧-复氧刺激H9C2大鼠心肌细胞制备体外抗心肌缺血模型，通过测定相关指标，考察脉络宁酯的抗氧化作用和对缺氧-复氧损伤的保护作用，综合评价其抗心肌缺血的活性

（二）实验方法

采用H9C2大鼠心肌细胞模型，分别以H₂O₂、缺氧-复氧刺激心肌细胞制备体外抗心肌缺血模型，观察脉络宁酯对H₂O₂处理的细胞上清液中缺氧/复氧后LDH漏出量、MDA、NO含量、SOD活性及细胞裂解液中总NOS，iNOS、GSH-Px活性的影响。用PrestoBlue法检测APS对H₂O₂、缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。

（三）实验结果：

1.脉络宁酯对H₂O₂引起的H9C2心肌细胞增殖抑制的影响

0.2mmol/LH₂O₂处理H9C2细胞30min，可导致心肌细胞活力降低，与溶剂对照组（如生理盐水）相比具有显著性差异（P<0.05）。与模型组比较，辅酶Q10100mg/L可显著提高细胞活力（P<0.05），脉络宁酯30~80μmol/L也可显著提高细胞活力（P<0.05or P<0.01）。结果提示，当脉络宁酯浓度为15~30μmol/L时抑制H₂O₂损伤心肌细胞有明显趋势，而脉络宁酯浓度高于等于30μmol/L可显著抑制H₂O₂损伤心肌细胞，且随着浓度增加对细胞的保护作用有所增强。

表1.脉络宁酯对H₂O₂引起的H9C2心肌细胞增殖抑制的影响(n=3)

与溶剂对照组相比*P＜0.01；与模型组相比#P＜0.01，##P＜0.05

2.脉络宁酯对H₂O₂损伤心肌细胞LDH、DA、SOD、GSH-Px、NOS、NO水平的影响。

2.1对H₂O₂损伤心肌细胞LDH释放的影响.

LDH广泛存在于全身组织，心肌组织中含量尤为丰富。当心肌细胞受到损伤时，LDH等心肌酶从胞浆中漏出，培养细胞上清中LDH水平升高，通过测定上清中LDH活性可反映心肌损伤程度，并已成为反映心肌损伤程度的敏感指标被广泛采用。

0.2mmol/LH₂O₂处理H9C2细胞30min，可引起心肌细胞LDH漏出增加，与溶剂对照组相比具有显著性差异（P<0.05）。与模型组比较，辅酶Q10100mg/L显著降低细胞内LDH的漏出（P<0.01），脉络宁酯也可显著降低细胞内LDH的漏出（P<0.05）。结果提示，脉络宁酯可减轻H₂O₂诱导心肌细胞内LDH的漏出，对心肌细胞膜具有保护作用，且随着浓度增加对细胞的保护作用有所增强，结果见表2。

表2药物对H₂O₂损伤心肌细胞释放LDH的影响(n=3)

与溶剂对照组相比*P＜0.05；与模型组相比#P＜0.01，##P＜0.05

2.2对H₂O₂损伤心肌细胞MDA水平的影响

心肌细胞缺氧时，能量代谢障碍，心肌细胞膜受损。再灌注时，随着大量氧的涌入，产生大量氧自由基，造成细胞膜脂质过氧化，生物膜损伤，膜通透性增加，MDA是氧自由基攻击生物膜不饱和脂肪酸的终产物，其值高低间接反映机体细胞受自由基损伤程度。

0.2mmol/L H₂O₂处理H9C2细胞30min，MDA含量显著上升，与溶剂对照组相比具有显著性差异（P<0.01），显示细胞受到损伤。与模型组比较，辅酶Q10100mg/L可显著降低细胞内MDA（P<0.05），脉络宁酯也可显著降低细胞培养液中MDA（P<0.05or P<0.01）。结果提示，脉络宁酯可减轻H₂O₂诱导心肌细胞内MDA含量，对心肌细胞具有保护作用，且随着浓度增加对细胞的保护作用有所增强，结果见表3。

表3药物对H₂O₂损伤心肌细胞MDA水平的影响(n=3)

与溶剂对照组相比*＜0.01，与模型组相比#＜0.05，##＜0.01

2.3药物对H₂O₂损伤心肌细胞SOD活力的影响

SOD是一种存在于细胞液中的抗氧化酶，它可清除超氧阴离子，保护机体免受超氧阴离子损伤，其值高低间接反映了机体清除氧自由基的能力。

0.2mmol/LH₂O₂处理H9C2细胞30min，SOD的活力显著降低，与溶剂对照组相比具有显著性差异（P<0.01），表明脂质过氧化强烈，细胞损伤明显。与模型组比较，脉络宁酯可显著增强SOD的活力（P<0.05）。结果提示，脉络宁酯可能通过增强机体对氧自由基的清除能力，减轻细胞膜脂质过氧化损伤，从而发挥对细胞膜的保护作用，且随着浓度增加对细胞的保护作用有所增强。

表4药物对H₂O₂损伤心肌细胞SOD活力的影响(n=3)

与溶剂对照组相比*＜0.01，与模型组相比#＜0.05

2.4对H₂O₂损伤心肌细胞iNOS活力及NO合成的影响。

一氧化氮(NO)在心肌缺血损伤中有着十分重要的作用，细胞凋亡是心肌损伤的主要形式，而且激活心肌细胞异常表达iNOS产生过量的NO，后者在心肌缺血再灌注型损伤中存在保护和加重损伤双重作用，过量的NO具有损伤心肌细胞的作用。正常情况下，iNOS不表达或弱表达缺血及缺血再灌注型损伤和心肌梗死可引起iNOS的激活，iNOS生成增多可能是心肌细胞凋亡的机制之一。

0.2mmol/LH₂O₂处理H9C2细胞30min，与溶剂对照组相比心肌细胞中iNOS的活性增强（P<0.05），同时培养液中NO合成增加（P<0.01），表明细胞损伤明显。与模型组比较，脉络宁酯可以降低iNOS的活性（见表5）及培养液中NO合成（见表6），虽然对总的NOS活性具有抑制作用，但缺乏统计学意义（见表7）。结果提示，脉络宁酯可降低心肌细胞氧化损伤时NO水平，抑制NO的生成和释放，从而保护和减轻细胞损伤，且随着浓度增加对细胞的保护作用有所增强。

表5药物对H₂O₂损伤心肌细胞iNOS活性的影响（n=3）

与溶剂对照组相比*＜0.05,与模型组相比#＜0.05

表6药物对H₂O₂损伤心肌细胞培养液中NO含量的影响(n=3)

与溶剂对照组相比*＜0.01,与模型组相比#＜0.01

表7药物对H₂O₂损伤心肌细胞总的NOS活性的影响(n=3)

2.5对H₂O₂损伤心肌细胞内GSH-Px活性的影响。

GSH-Px是机体内广泛分布的一种抗氧化酶，催化还原型谷胱甘肽(GSH)对H₂O₂的还原反应，及时清除自由基，对保护细胞膜结构和功能完整具有重要作用。本实验发现，H₂O₂可引起心肌细胞内GSH-Px活性降低，脉络宁酯对细胞内GSH-Px活性无显著性影响（见表8）。

表8药物对H₂O₂损伤心肌细胞内GSH-Px活性的影响(n=3)

3.药物对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

H9C2细胞缺氧培养4h，复氧培养2h处理，可导致心肌细胞活力降低，与溶剂对照组相比具有显著性差异（P<0.01）。与模型组比较，辅酶Q10100mg/L可显著提高细胞活力（P<0.01），脉络宁酯也可显著提高细胞活力（P<0.01）。结果提示，脉络宁酯可呈剂量依赖性的增加心肌细胞缺氧/复氧损伤的活率，具有保护作用（表9）。

表9药物对心肌细胞缺氧损伤的保护作用(n=3)

与正常组相比*＜0.01,与模型组相比#＜0.01。

上述实验结果表明，本发明的脉络宁酯可减少LDH从心肌细胞胞浆中漏出，降低MDA含量，提高SOD活性，调节心肌细胞内iNOS表达及NO的合成，明显提高H₂O₂及缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率，对心肌细胞具有保护作用。

实施例3制剂例

例1：取脉络宁酯10g，加入片剂（包括缓控释片，骨架片，包衣片，分散片等）适当辅料，按片剂（包括缓控释片，骨架片，包衣片，分散片等）工艺制备成治疗心血管疾病的药物片剂。

例2：取脉络宁酯10g，加入胶囊剂适当辅料，按胶囊剂工艺制备成治疗心血管疾病的药物胶囊剂。

例3：取脉络宁酯10g，加入颗粒剂适当辅料，按颗粒剂工艺制备成治疗心血管疾病的药物颗粒剂。

例4：取脉络宁酯10g，加入注射剂（包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂）适当辅料，按注射剂（包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂）工艺制备成治疗心血管疾病的药物注射剂。

本发明脉络宁酯可制备的剂型不限于上述几例，可根据需要制备成药学上可接受的任意剂型，制剂的制备方法均可采用现有技术，此处不再赘述。

Claims

1.一种脉络宁酯，其特征在于该化合物的结构式为：

2.权利要求1所述脉络宁酯的制备方法，其特征在于以脉络宁注射液为原料，采用硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、反相柱中的一种或多种经过多次层析分离提纯得到。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于硅胶柱采用200～300目硅胶；凝胶柱为Sephadex LH-20；大孔树脂为D101、AB-8、HP-20或MCI；反相柱为ODS。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于该方法以脉络宁注射液为原料，经Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇、乙醇、20～80%的甲醇-水、或者20～80%的乙醇-水进行等度洗脱，洗脱液再经ODS反相柱，采用5～95%乙醇-水或5～95%甲醇-水进行梯度洗脱，洗脱液再经硅胶柱，采用石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶剂***、氯仿-甲醇、或者二氯甲烷-甲醇进行洗脱，洗脱液再经Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇、乙醇进行洗脱，洗脱液采用重结晶分离提纯，得到脉络宁酯。

5.权利要求1所述的脉络宁酯与药学上可接受的药用辅料组成的药物制剂。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或注射剂。

7.权利要求1所述的脉络宁酯在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于心血管疾病为导致心肌缺血和/或缺氧的疾病。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于导致心肌缺血和/或缺氧的疾病为心肌梗塞、心肌炎、心肌肥大、冠心病。