CN102824341A - 没食子儿茶素在制备抗良性***增生药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种没食子儿茶素在制备防治良性***增生药物中的应用，通过丙酸睾酮诱导的去势大鼠***增生模型，选用没食子儿茶素作为治疗药物，观察对大鼠***重量、指数的影响及***组织的病理学改变。研究结果表明，没食子儿茶素能够显著降低模型动物的***重量与***指数，改善***组织的病理学症状。

Description

没食子儿茶素在制备抗良性***增生药物中的应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及没食子儿茶素的新的医药用途，具体涉及没食子儿茶素在制备抗良性***增生药物中的应用。 

背景技术

良性***增生^[1](benign prostatic hyperplasia，BPH)是老年男性常见的生理病变，近年来发病率呈明显上升的趋势。据统计，60岁以上男性中该病的发病率达70％以上，严重影响老年患者的身体健康和生活质量。临床上用于治疗BPH的药物主要有^[2]：α1-肾上腺受体拮抗剂、5α-还原酶抑制剂与天然产物制剂等。由于天然产物制剂不良反应少，适合长期使用，近年来引起了人们的广泛关注。 

没食子儿茶素((-)-Gallocatechin，GC)结构式如下所示，分子式：C₁₅H₁₄O₇，美国化学文摘收录号(CASNo.)：3371-27-5；是绿茶儿茶素的一种，具有抗氧化等活性^[3]。但未见单体化合物GC用于制备抗良性***增生药物的报道。 

以下为GC的分子结构式： 

参考文献： 

[1]Untergasser G.，Madersbacher S.，Berger P..Benign prostatic hyperplasia：age-related  tissue-remodeling[J].Experimental Gerontology，2005，40(3)：121-128 

[2]魏强，李涛.良性***增生的药物治疗.中华老年医学杂志[J].2006，25(7)：557-559 

[3]Plumb G.W.，De Pascual-Teresa S.，Santos-Buelga C.，et al.Antioxidant properties of gallocatechin and prodelphinidins from pomegranate peel[J].Redox Report，2002，7(1)：41-46. 

[4]温尧林，李坤.一种非表型儿茶素单体的制备方[P]，中国专利：201010022636.8，2010-01-11 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于寻找一种安全、可靠，能够有效降低BPH患者***重量与***指数，改善***组织的病理学改变。从而能够有效预防及治疗良性***增生的产品。本发明针对上述技术问题提供一种没食子儿茶素在制备抗良性***增生药物中的应用。 

本发明的目的可以通过以下技术方案实现： 

没食子儿茶素在制备抗良性***增生药物中的应用。 

上述的应用，没食子儿茶素作为药效成分用于制备抗良性***增生作用药物，可单独或与制药可接受的助剂结合，按照常规方法制成医药上可接受的任意一种剂型。所述的剂型优选为口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂或脂质体。 

本发明人采用丙酸睾酮诱导的去势大鼠***增生模型，对众多候选化合物进行筛选，发现没食子儿茶素(GC)能显著降低模型动物的***重量与***指数，改善***组织病理学症状，显示出良好的应用前景。 

本发明涉及的没食子儿茶素(GC)可在市场上购买获得，如美国sigma公司的纯度98％没食子儿茶素((-)-Gallocatechin，GC)等。也可以自行制备，其制备方法在申请号为201010022636.8的中国专利中已经公开^[4]。 

本发明涉及的没食子儿茶素(GC)用于制备防治良性***增生(BPH)的药物，可制成口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂、脂质体等剂型。 

附图说明

图1为各组大鼠***腹叶组织病理切片结果(HE，×100)。 

其中A、正常；B、模型；C、GC低剂量组；D、GC高剂量组；E、非那雄胺。 

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。 

实施例1 没食子儿茶素对大鼠***的影响 

1、实验动物 

雄性健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，清洁级，体重250±20g，购自上海西普尔-必凯实验 动物有限公司，合格证编号：00800160568，生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。 

2、造模、分组与给药 

上述大鼠35只，普通饲养一周以适应环境。经普通观察无异常后，随机取7只作正常对照组，其余28只进行造模。先用***麻醉后，无菌条件下，常规消毒皮肤，经阴囊摘除双侧睾丸，残端处结扎，以确保止血，缝合皮肤，滴加一定量的氧氟沙星注射液，以防止感染。肌肉注射(im)青霉素40万u/只，连续3天。 

手术1周后将去势大鼠随机分为模型组、没食子儿茶素(GC)低剂量组、没食子儿茶素(GC)高剂量组、阳性药非那雄胺组，每组7只。从去势第8天起，每只大鼠皮下注射(sc)溶解在橄榄油中的丙酸睾酮4mg/kg·d，正常组sc橄榄油，连续30天。同时灌胃给药。各供试品及对照药组以蒸馏水作溶剂，加5％CMC-Na作为混悬剂，配置成一定浓度的混悬液。从去势第8天起，按1mL/100g体重分别给予一定浓度的样品，正常组与模型组给相同体积的蒸馏水，每日1次，连续30天。 

3、取材及称重 

给药30天，于末次给药24h后，每组大鼠称体重、麻醉后，断颈处死大鼠，迅速取出***各叶组织(腹叶和背侧叶)，用滤纸吸除表面液体，剥离脂肪组织，电子天平称其湿重。计算大鼠***及各叶指数。 

4、***组织病理学检测 

大鼠***组织病理学观察采用常规苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察***组织形态学和结构变化，包括腺腔、上皮细胞及间质水肿、充血和炎细胞浸润情况。具体操作步骤如下： 

(1)取材与固定：上述大鼠***组织称重后，取腹叶一半组织固定于10％中性***溶液中。 

(2)脱水、透明、浸蜡：采用自动脱水机，程序设置为：AF液90min→85％乙醇90min→95％乙醇I 90min→95％乙醇II 90min→无水乙醇I 90min→无水乙醇II 90min→二甲苯I 30min→二甲苯II 30min→石蜡I 90min→石蜡II 90min→石蜡III 90min。 

(3)石蜡包埋。 

(4)切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，连续切片，厚4μm，50℃水中烫平，再贴到载玻片上。 

(5)烤片：60℃烤片30min。 

(6)HE染色：过程如下，二甲苯I 5min→二甲苯II 5min→无水乙醇2min→95％乙醇2min→80％乙醇2min→流水冲洗2min→蒸馏水1min→苏木素染色6min→流水冲3min→盐酸酒精分化2s→流水冲洗2min→氨水反蓝5s→水洗1min→伊红10s→蒸馏水1s→80％乙醇2s→95％乙醇2s→无水乙醇2s(2遍)→二甲苯2s

(7)中性树胶封片 

***组织学改变病评判标准：正常为“-”，病变范围占全视野1/4以下为“+”；病变改变明显，范围占1/3左右为“++”；病变严重，范围占全视野1/2左右为“+++”。 

5、统计学处理 

所有结果均采用SPSS11.5统计软件处理，***重量及指数计量资料均以MEAN±S.E.M表示，组间差异采用单因素方差分析(F检验)，方差具有齐性，两两比较则采用LSD检验，以P＜0.05为显著性差异标准，P＜0.01为非常显著性差异标准。组织病理改变为等级资料，因此统计分析采用秩和检验，所有组比较采用Kruskal-Wallis H检验，其他组与模型组多重比较采用Mann-Whitney U检验，用Bonferroni法对检验水准进行校正，校正后的检验水准为0.004，即P＜0.004视为有统计学意义。 

6、试验结果 

6.1 对大鼠***各叶重量的影响 

表1 各处理组对去势大鼠***各叶重量的影响(MEAN±S.E.M) 

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01 

6.2 对大鼠***各叶指数的影响 

表2各处理组对去势大鼠***各叶指数的影响(MEAN±S.E.M) 

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01 

6.3、对大鼠***组织病理学的影响 

表3 各处理组对丙酸睾酮致BPH大鼠***腹叶病理改变的影响 

注：与模型组比较，P＜0.004视为有统计学意义 

如图1为各组大鼠***腹叶组织病理切片结果(HE，×100)。其中，A为正常；B为模型；C为GC低剂量组；D为GC高剂量组；E为非那雄胺。 

6.4 结果总结 

试验结果表明，没食子儿茶素(GC)具有显著降低丙酸睾酮诱导的去势大鼠******重量、***指数，改善模型大鼠***病理变化，与模型组相比，差异具有显著性(^*P＜0.05)和非常显著性(^**P＜0.01)；与阳性药非那雄胺接近，具有良好的应用前景。 

实施例2 没食子儿茶素没食子酸酯脂质体的制备 

将卵磷脂与胆固醇以及没食子儿茶素按质量为3g∶1g∶0.1g的比例溶解在无水乙醇和氯仿(无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1，总体积为15ml)的混合溶液中并加入维生素E 2mg得到溶液A，将适量叶酸33mg溶解在330μl二甲亚砜中得溶液B，将溶液A、B混合并加入9g 乳糖得混合物C，将该溶液C除去溶剂得到磷脂膜；将所得磷脂膜溶于水，经水化后得到脂质体，将该脂质体通过0.2μm滤膜过滤，将脂质体溶液在高压均质机中在压力200-400Mpa下逐级增压均质2h，得到的脂质体为澄明均一的溶液。将得到的脂质体溶液冷冻干燥除去溶剂，得到冻干的没食子儿茶素脂质体。将冻干的没食子儿茶素脂质体粉末加双蒸水振摇溶解，并用Ls-230型激光散射粒度测定仪(美国Beckman Coulter公司)测定粒径。脂质体的粒径分别为92.4nm±4.8nm(n＝3)。用扫描电子显微镜观察所得脂质体。在电子显微镜下观察到脂质体为圆球，大小与用粒度仪测定的结果相吻合。用超滤法测定脂质体包封率为92.8％，48h渗漏率为0.8％。 

实施例3 没食子儿茶素胶囊剂的制备 

处方：没食子儿茶素500g，淀粉15g，硬脂酸镁5g(0.5％左右)，制成1000粒。 

制备：将没食子儿茶素没食子酸酯、淀粉、硬脂酸镁过80目筛后，混合均匀，装入空胶囊中，即得。 

实施例4 没食子儿茶素片剂的制备 

处方：没食子儿茶素500g，淀粉40g，10％淀粉浆24g，干淀粉23g(4％左右)，硬脂酸镁3g(0.5％左右)制成1000片。 

制备：将没食子儿茶素没食子酸酯过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置70～80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬脂酸镁混匀后，压片，即得。 

Claims (4)

1.没食子儿茶素在制备防治良性***增生药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：没食子儿茶素作为药效成分用于制备抗良性***增生的药物，可单独或与制药可接受的助剂结合，按照常规方法制成医药上可接受的任意一种剂型。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的药物剂型为：口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂或脂质体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的药物剂型为：胶囊剂、片剂或脂质体。

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