CN102813933A - 鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干保护剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干保护剂，为包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸馏水溶液。上述的冻干保护剂中还可加入大豆蛋白胨。本发明的冻干保护剂组分简单、成本低廉、易于制备。解决了鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的长途运输、保存的低温储存难题。本发明的冻干保护剂配方可使鸡传染性法氏囊病卵黄抗体在2-8℃下保存12个月以上，25℃下保存6个月以上。
Description
技术领域
本发明属于禽类抗体保存技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干保护剂。
背景技术
鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，总称IBD），是由传染性法氏囊病毒侵害幼鸡免疫***的一种急性接触性传染病。1957年首次发生于美国特拉华州的冈博罗，所以又称为冈博罗病。目前已遍布于世界养鸡业发达的国家和地区，也是我国近几年来严重威胁养鸡业的重要疾病之一。该病一方面死亡率、淘汰率增加，另一方面导致免疫抑制，使多种疫苗对鸡的免疫应答下降，致使免疫失败，造成巨大的经济损失。
卵黄抗体是当今生物科学研究领域的一项重大发现。母鸡以特定抗原免疫后，能产生相对应的特异性抗体，并将其有效地储存于卵黄中，卵黄中的免疫球蛋白（IgG）称卵黄抗体，又名卵黄免疫球蛋白（IgY）。自Williams等（1962）发现卵黄抗体以来，IgY以其取材方便，制作简单，价格便宜等优点，广泛应用于动物疾病的诊断、预防和治疗。其中，鸡传染性法氏囊病卵黄抗体是开发较早的一类卵黄抗体类产品，在临床常作为鸡传染性法氏囊病的特效药使用，有效率高达90%以上，是防治临床鸡传染性法氏囊病的有力武器。
目前，国内鸡传染性法氏囊病卵黄抗体制剂都是经稀释分装而成的液体剂型，存在着体积大，运输不便，需低温保存和运输。由于反复冻融和运输不当很容易造成效价降低，而冷冻干燥能使萃取抗体在预先冷冻的状态下，不经液态直接升华除去水分而获得冻干制剂，它避免了液态下保存的抗体易失活易变性的缺点，使产品质量稳定，体积缩小，便于运输及长时间保存。常用的冻干保护剂种类有多羟基化合物、糖类、蛋白质、聚合物、氨基酸、盐和表面活性剂等。但鉴于畜禽养殖用药开发的特点，冻干保护剂成本不能太高、冻干操作要简单。因此，研发一种新的配方简单、成本低廉和能够批量制备的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干保护剂就显得尤为迫切和重要。
发明内容
本发明主要目的是提供一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干保护剂，从而弥补现有技术的不足。
本发明的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干保护剂，为包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸馏水溶液。
上述的冻干保护剂，其各组分浓度质量体积百分比g/ml为：1-5%甘露醇、1-5%右旋糖苷、0.8-1.2％甘氨酸。
上述冻干保护剂各组分浓度优选为：4%甘露醇、3%右旋糖苷、1％甘氨酸。
上述的冻干保护剂中还加入有大豆蛋白胨，加入的大豆蛋白胨的质量体积百分比g/ml浓度为5-10%，优选为8%。
将鸡传染性法氏囊病卵黄抗体与上述冻干保护剂以体积比7:1比例混合，作为鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干液体；将冻干液体在1小时内降温至-40℃并维持4小时；然后在1小时内将制品从-40℃升至-8℃并维持14小时；0.5小时将制品从-8℃升至28℃并维持10小时完成鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干制剂的制备。
本发明的冻干保护剂组分简单、成本低廉、易于制备，解决了鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的长途运输、保存的低温储存难题。使用效果表明冻干保护剂配方可使鸡传染性法氏囊病卵黄抗体在2-8℃下保存12个月以上，25℃下保存6个月以上，具有很好的应用效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，但这些实例仅是范例性的，并不对本发明的常规方法构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明保护范围内。
实施例1：鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干保护剂配制
在100ml的蒸馏水溶液中加入4g的甘露醇、3g的右旋糖苷、1g的苷氨酸，混合均匀后，调pH 值至7.2～7.4，经灭菌处理后，2～8℃保存备用。
实施例2：加入了大豆蛋白胨
在100ml的蒸馏水溶液中加入4g的甘露醇、3g的右旋糖苷、1g的苷氨酸，再加入8g的大豆蛋白胨，调pH 值至7.2～7.4，经灭菌处理后2～8℃保存备用。
实施例3：鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干
将鸡传染性法氏囊病卵黄抗体与上述实施例1或实施例2的冻干保护剂以7:1比例混合，作为鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干液体。预冻阶段：冻干液体常温进箱，1小时将制品降至-40℃并维持4小时。升华阶段：1小时将制品从-40℃升至-8℃并维持14小时。解吸干燥阶段：0.5小时将制品从-8℃升至28℃并维持10小时，冻干全程30.5小时。
将冻干后鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冻干制剂分别放置2-8℃和25℃环境下保存，定期观察抗体的性状、剩余水分和效力。性状、剩余水分检测方法参见现行《兽用生物制品检验规程》，抗体效价采用双向琼脂扩散试验（AGP）：
打孔：将制备好的琼脂板按模板用打孔器打孔，并挑出孔中的琼脂。中心1孔，周围6孔，孔径3 mm，孔距4 mm，用熔化琼脂补孔底。
加样：中央孔加入标准琼扩抗原，周围孔分别加入2倍系列稀释的待检鸡传染性法氏囊病卵黄抗体，各孔加样25μl。将加样后的琼脂板放入填有湿纱布的盒内，置20-25℃室温或37℃温箱，24 h初判，72 h终判。
结果判定：待检鸡传染性法氏囊病卵黄抗体与抗原孔之间也出现沉淀线，且与标准阳性血清沉淀线末端相吻合，即判为阳性。当待检鸡传染性法氏囊病卵黄抗体与抗原孔之间无沉淀线出现时，即判为阴性。当待检鸡传染性法氏囊病卵黄抗体最高稀释度孔与抗原孔之间形成清晰沉淀线时，即判为琼扩效价。
结果：鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干后和2-8℃保存12个月、25℃保存6个月，抗体物理性状保持稳定，均为微黄色疏松团块，易与瓶壁分离；剩余水分均为2.32%左右；抗体效价均为1:128以上，未见下降。
表1 鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干制剂检验结果
注：冻干1：冻干保护剂不含大豆蛋白胨；冻干2：冻干保护剂加入8%大豆蛋白胨
本发明的保护剂中加入了大豆蛋白胨，可以更有效的在保存期间防止抗体效价降低，使保存的期限延长。同时蔬菜源性蛋白质比动物源性蛋白质更安全，避免了潜在的动物源性病原体污染抗体。
Claims (7)
1.一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干保护剂，其特征在于，所述的冻干保护剂为包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸馏水溶液。
2.如权利要求1所述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干保护剂，其特征在于所述的甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的浓度分别为1-5%、1-5%和0.8-1.2％。
3.如权利要求2所述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干保护剂，其特征在于所述的甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的浓度分别为4%、3%和1％。
4.权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，还加入有大豆蛋白胨。
5.如权利要求4所述的冻干保护剂，其特征在于所述的大豆蛋白胨的浓度为5-10%。
6.如权利要求5所述的冻干保护剂，其特征在于所述的大豆蛋白胨的浓度为8%。
7.一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干制剂，是将鸡传染性法氏囊病卵黄抗体与权利要求1或权利要求4所述的冻干保护剂以体积比7:1比例混合，作为鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干液体；将冻干液体在1小时内降温至-40℃并维持4小时；然后在1小时内将制品从-40℃升至-8℃并维持14小时；解吸干燥阶段：0.5小时将制品从-8℃升至28℃并维持10小时完成鸡传染性法氏囊病卵黄抗体冻干制剂的制备。
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