CN102812037A

CN102812037A - 大环生长素释放肽受体拮抗剂和反向激动剂及其使用方法

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Publication number: CN102812037A
Application number: CN2010800600814A
Authority: CN
Inventors: H.霍维达; E.马索尔特; H.托马斯; G.弗拉泽; S.博比恩; A.马蒂厄; J.贝内特; M-A.博宁; S.费尼克斯; D.德鲁茨; M.彼得森; S.博歇明; M.布拉萨尔; M.韦兹纳
Original assignee: Tranzyme Pharma Inc
Current assignee: Ocera Therapeutics Inc
Priority date: 2009-10-30
Filing date: 2010-10-29
Publication date: 2012-12-05
Also published as: JP2013509434A; EP2493910A1; CA2778990A1; AU2010313282A1; US20110105389A1; WO2011053821A1

Abstract

本发明提供了新型的构象确定的式(I)大环化合物，该大环化合物已被证明是生长素释放肽受体(GRLN，生长激素促分泌素受体，GHS-R1a及其亚型、同种型和/或变体)的选择性调节剂。本文还描述了合成该新型化合物的方法。这些化合物用作生长素释放肽受体的拮抗剂或反向激动剂以及用于治疗和预防一系列医学症状的药剂，所述医学症状包括但不限于代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、成瘾性病症、心血管病症、胃肠病症、遗传病症、过度增殖病症、中枢神经***病症和炎性病症。

Description

大环生长素释放肽受体拮抗剂和反向激动剂及其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2009年10月30日提交的序号为61/256,727的美国临时申请的优先权，其公开内容在此通过引用整体并入。

发明领域

本发明涉及新型的构象确定的大环化合物，该大环化合物已被证明起生长素释放肽(生长激素促分泌素)受体(GRLN，GHS-R1a)的拮抗剂或反向激动剂的作用。本发明还涉及这些化合物的中间体、包含这些化合物的药物组合物和使用所述化合物的方法。这些新型的大环化合物用作一系列适应症的治疗剂，所述适应症包括代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、成瘾性病症、心血管病症、胃肠病症、遗传病症、过度增殖病症、中枢神经***病症和炎性病症。

发明背景

通过基因组学和蛋白组学中的研究工作而提高的对各种生理调节途径的理解已经开始影响新药剂的开发。具体说，关键受体及其内源性配体的鉴定已经创造了开发这些受体/配体对作为治疗靶的新机会。例如，生长素释放肽是最近鉴定的28-氨基酸肽激素，已经显示其介导多种重要的生理功能(Kojima，M.；Hosoda，H.；等人Nature1999，402，656-660.)。其结构的新特征是在Ser³上存在n-辛酰基，这似乎与生长素释放肽的活性有关。该肽已经证明是之前孤儿G蛋白偶联受体(GPCR)，1型生长激素促分泌素受体(hGHS-R1a)的内源性配体。(Howard，A.D.；Feighner，S.D.；Cully，D.F.；等人Science 1996，273，974-977.)。基于对其内源性配体的认识，最近已经将GHS-R1a重新分类为生长素释放肽受体(GRLN)(Davenport，A.P.；等人Pharmacol.Rev.2005，57，541-546)。

即使在分离该受体及其内源性肽配体之前，已经投入大量研究来发现能够刺激生长激素(GH)分泌的物质。人GH的适当调节不仅对适当的身体发育，而且对一系列其他关键的生理效应来说是重要的。通过注射施用GH和其他GH刺激肽(例如生长激素释放激素(GHRH)和生长激素释放因子(GRF))及它们的衍生物和类似物。因此，为了更好地利用这些积极作用，关注将增加GH分泌的口服活性治疗剂(称为GH促分泌素(GHS))的开发。此外，预期这些物质的使用能够更接近地模拟GH的脉动性生理释放。

从20世纪70年代末鉴定生长激素释放肽(GHRP)(Bowers，C.Y.Curr.Opin.Endocrinol.Diabetes 2000，7，168-174；Camanni，F.；Ghigo，E.；Arvat，E.Front.Neurosci.1998，19，47-72；Locatelli，V.；Torsello，A.Pharmacol.Res.1997，36，415-423)开始，已经研究了许多物质用作GHS的潜力。除了其刺激GH释放和伴随的在这方面的积极作用，预计GHS在许多其他病症(包括治疗如HIV患者中可见的消耗性症状(恶病质)和癌症诱导的厌食、老年人中的肌肉骨骼脆弱和生长激素缺陷疾病)中有用。过去25年的许多工作已经产生许多有效的可口服利用的GHS。(Cordido，F.；Isidro，M.L.；Nemina，R.；Sangiao-Alvarellos，S.Curr.Drug Disc.Tech.2009，6，34-42；Isidro，M.L.；Cordido，F.Comb.Chem.High Throughput Screen.2006，9，178-180；Smith，R.G.；Sun，Y.X.；Beatancourt，L.；Asnicar，M.BestPract.Res.Clin.Endocrinol.Metab.2004，18，333-347；Fehrentz，J.-A.；Martinez，J.；Boeglin，D.；Guerlavais，V.；Deghenghi，R.IDrugs2002，5，804-814；Svensson，J.Exp.Opin.Ther.Patents2000，10，1071-1080；Nargund，R.P.；Patchett，A.A.；Bach，M.A.；Murphy，M.G.；Smith，R.G.J.Med.Chem.1998，41，3103-3127；Ghigo，E；Arvat，E.；Camanni，F.Ann.Med.1998，30，159-168.)。这些包括小肽(例如海沙瑞林(Zentaris)和伊帕瑞林(Novo Nordisk))，以及小分子(例如卡莫瑞林(Pfizer)、L-252，564(Merck)、MK-0677(Merck)、NN703(他莫瑞林，NovoNordisk)、G-7203(Genentech)、S-37435(Kaken)和SM-130868(Sumitomo))。然而，使用此类药剂的临床试验得到了令人失望的结果，这是由于(在其他方面)延长治疗的效力缺乏或不希望的副作用，其包括细胞色素P450酶的不可逆抑制。(Zdravkovic M.；Olse，A.K.；Christiansen，T.；等人Eur.J.Clin.Pharmacol.2003，58，683-688.)。

实际上通过使用合成GHS实现的人受体的克隆以及随后鉴定生长素释放肽，开启了研究激动剂和拮抗剂的多个新化学领域(Carpino，P.A.Exp.Opin.Ther.Patents2002，12，1599-1618)。具体说，已经发现生长素释放肽除了刺激GH释放以外还具有多种其他生理功能，包括调节摄食量和食欲，促进体重增加，控制能量平衡，和调节胃肠(GI)运动、胃酸分泌和葡萄糖稳态。激素还与控制昼夜节律和记忆有关。生长素释放肽似乎还在骨代谢和炎症过程中起作用。(Van der Lely，A.J.；

M.；Heiman，M.L.；Ghigo，E.Endocrine Rev.2004，25，426-457；Inui，A.；Asakawa，A.；Bowers，C.Y.；Mantovani，G.；Laviano，A.；Meguid，M.M.；Fujimiya，M.FASEB J.2004，18，439-456；Diano，S.Farr，S.A.；Benoit，S.C.；等人Nat.Neuroscience2006，9，381-388；Kojima，K.；Kangawa，K.Nat.Clin.Pract.Endocrinol.Metab.2006，2，80-88；Kaiya，H.；Miyazato，M.；Kangawa，K.；Peter，R.E.；Unniappan，S.Comp.Biochem.Physiol.A2008，149，109-128.)。

由于这些大量的生理效应，对于生长素释放肽受体的调节，越来越多的研究针对除了与GH分泌功能相关的那些以外的治疗适应症(Dodge，J.A.；Heiman，M.L.Ann.Rep.Med.Chem.2003，38，81-88.)。例如，国际专利申请WO 2006/009645和WO 2006/009674描述了使用大环化合物作为生长素释放肽调节剂，用于治疗胃肠(GI)疾患。类似地，WO 2006/020930和WO 2006/023608描述了结构上不同的生长素释放肽激动剂(生长激素促分泌素)用于此类GI疾患。此外，国际专利申请WO 2004/09124和WO 2005/68639描述了来自生长素释放肽N端的短肽序列衍生的修饰病毒粒子，其可用作治疗肥胖的疫苗。肥胖的另一种疫苗方法描述于WO 2004/024183。

并不奇怪，由于生长素释放肽在控制食欲和喂食中的作用，在开发生长素释放肽拮抗剂和反向激动剂作为新抗肥胖药剂中也产生了浓厚兴趣，其确实调节许多肽激素及其受体(Crowley，V.E.F.；Yeo，G.S.H.；O-Rahilly，S.Nat.Rev.Drug Disc.2002，1，276-286；Spanswick，D.；Lee，K.Exp.Opin.EmergingDrugs 2003，8，217-237；Horvath，T.L.；

T.；Tang-Christensen，M.；Pagotto，U.；

M.H.Curr.Pharm.Design 2003，9，1383-1395；Higgins，S.C.；Gueorguiev，M.；Korbonits，M.Ann.Med.2007，39，116-136；Carpino，P.A.；Ho，G.Exp.Opin.Ther.Pat.2008，18，1253-1263；Soares，J.-B.；Roncon-Albuquerque，R.，Jr.；Leite-Moreira，A.Exp.Opin.Ther.Targets2008，12，1177-1189；Ukkola，O.Curr.Prot.Pept.Sci.2009，10，2-7；Constantino，L.；Barlocco，D.Fut.Med.Chem.2009，1，157-177；Chollet，C.；Meyer，K.；Beck-Sickinger，A.G.J.Pept.Sci.2009，15，711-730.)。与生长素释放肽激动剂相比，对GHS研究优先，而对生长素释放肽拮抗剂和反向激动剂的研究领域明显不够成熟。美国专利申请公布2003/0211967和WO 01/87335提出使用生长素释放肽拮抗剂作为许多疾病状态(括肥胖和相关病症)的治疗。类似地，WO 01/56592和US 2001/020012描述了使用生长素释放肽拮抗剂调节摄食量。类似地，WO 2004/004772描述了使用GHS-R拮抗剂作为糖尿病、肥胖和食欲控制的治疗。还描述了其用于治疗肠炎(国际专利申请公布WO2004/084943；美国专利申请公布2007/0025991)。然而，除了生长素释放肽及其类似物，在这些申请中没有提出为此目的的化合物的具体实例。最近，已经报道了噁二唑生长素释放肽拮抗剂，还宣称其有效改善认知、记忆和其他CNS病症(WO 2005/112903)。美国专利申请公布2010/0196396描述了通过减少生长素释放肽表达来调节温度调节、睡眠、食欲、摄食量、肥胖和其他生长素释放肽介导的症状。

还认为生长素释放肽拮抗剂和反向激动剂在减少以下肥胖相关病状发病率中起作用，所述肥胖相关病症包括糖尿病，糖尿病导致的并发症(例如视网膜病变、心血管疾病、高血压、血脂异常、骨关节炎和某些形式的癌症)。实际上，除了在动物研究中发现的抗肥胖效应以外，没有GRLN(GHS-R1a)受体的工程化转基因大鼠表现出了减少的摄食量、减少的脂肪堆积和降低的体重。然而，激素参与包括调节心血管功能和应激反应以及生长激素释放在内的许多生理过程，可能指示该策略的潜在缺点。因此，可能不希望生长素释放肽的完全缺乏，但是抑制可能足以控制肥胖和其他代谢紊乱。应该注意，最近对生长素释放肽敲除小鼠的研究揭示，这些动物没有表现出尺寸和摄食量以及其他生理特征的预期调整(Sun，Y.；Ahmed，S.；Smith，R.G.Mol.Cell Biol.2003，23，7973-7981；Wortley，K.E.；Anderson，K.D.；Garcia，K.；等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2004，101，8227-8232.)。

生长素释放肽在调节胰岛素释放和血糖过多中起关键作用，因此，生长素释放肽受体的调节剂用于治疗糖尿病和代谢综合征.(Yada，T.；Dezaki，K.Sone，H.；等人Curr.Diab.Rev.2008，4，18-23；Pulkkinen，L.；Ukkola，O.；Kolehmainen，M.；Uusitupa，M.Int.J.Pept.2010，doi：10.1155/2010/248948.)。生长素释放肽减少葡萄糖刺激的胰岛素分泌，降低胰岛素敏感性，增加休息/空腹血糖水平，使能量代谢从脂肪转移至葡萄糖，并间接拮抗摄食量和葡萄糖稳态的胰岛素依赖性CNS调节。(Sun，Y.；Asnicar，M.；Smith，R.G.Neuroendocrinol.2007，86，215-228；Dezaki，K.；Sone，H.；Yada，T.Pharmacol.Ther.2008，118，239-249；Tong，J.；Prigeon，R.L.；Davis，H.W.；等人Diabetes2010，59，2145-2151.)。因此，生长素释放肽拮抗剂和/或反向激动剂对于治疗或预防糖尿病和相关症状(例如代谢综合征)将具有有益效应。

最近，已经报道BIM-28163起GRLN(GHS-R1a)受体拮抗剂的作用，并且抑制天然生长素释放肽对受体的激活。然而，就刺激体重增加和摄食量而言，该相同分子是完全激动剂。这种和相关的肽生长素释放肽类似物使生长素释放肽的GH调节活性与肽对体重增加和食欲的效应有效地分开。(Halem，H.A.；Taylor，J.E；Dong，J.Z.；等人Eur.J.Endocrinol.2004，151，S71-S75.)。类似地，WO 2006/009645和WO 2006/009674中描述的大环生长素释放肽激动剂报道了动物模型中GI效应与GH释放效应的分开。

除了生长素释放肽受体本身，已经表明生长素释放肽生物途径的另一组分(酶生长素释放肽-O-酰基转移酶(GOAT))作为抗肥胖的靶。(Romero，A.；Kirchner，H.；Heppner，K.；等人Eur.J.Endocrinol.2010，163，1-8；国际专利申请公布WO 2008/079705；Gutierrez，J.A.；Solenberg，P.J.；Perkins，D.R.；等人Proc.Natl.Acad.Sci.2008，105，6320-6325.)。GOAT负责翻译后修饰，其在生长素释放肽的Ser³上加入n-辛酰基部分。如前提到的，该酰基化形式是体内的活性物种。已经报道了GOAT的五肽(Yang，J.；Zhao，T.J.；Goldstein，J.L.；等人Proc.Natl.Acad.Sci.2008，105，10750-10755)、小分子(BK1114，美国专利申请公布2010/0086955)和双底物(国际专利申请公布WO2010/039461)抑制剂，但是该方法还未在人中得到证明。

Prader-Willi综合征是人综合征肥胖的最常见形式，被反常地表征为GH缺陷和喂食之后不下降的高生长素释放肽水平。(Cummings，D.E.；Clement，K.；Purnell，J.Q.；等人Nat.Med.2002，8，643-644.)。生长素释放肽受体的拮抗剂也将在治疗该综合征中起作用。

非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)属于特征为肝细胞中形成显著的脂质沉积的一连串病理症状。NAFLD在工业化的西方国家是最常见的肝脏问题，影响20-40％的总人口。在II型糖尿病患者中，NAFLD的流行程度可能高达70％，且在肥胖个体中，NAFLD流行程度是58-74％。NAFLD可以发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，这增加了发生肝硬化的可能性。(Angulo，P.New Engl.J.Med.2002，346，1221-1231；Perlemuter，G.；Bigorgne，A.；Cassard-Doulcier，A.-M.；Naveau，S.Nat.Clin.Pract.Endocrinol.Metab.2007，3，458-469；Younossi，Z.M.Aliment.Pharmacol.Ther.2008，28，2-12；Ali，R.；Cusi，K.Ann.Med.2009，41，265-278；Malaguarnera，M.；Di Rosa，M.；Nicoletti，F.；Malaguarnera，L.J.Mol.Med.2009，87，679-695.)。

NAFLD可以在有或没有肝脏炎症或肝细胞损伤或损害下，并且在没有过量酒精摄入历史下发生。已经表明，NAFLD代表代谢综合征的肝脏表现，但是还可以预测代谢综合征的发展。尽管已经在没有风险因素的患者中发现了NAFLD，但是具有诸如糖尿病、肥胖、高血压和高甘油三酯血症等症状的患者存在更大的发展该症状的风险。向心性肥胖、脂肪变性和胰岛素抵抗之间存在密不可分的关系。脂肪因子和生长素释放肽通过其代谢和/或抗炎活性参与了非酒精性脂肪肝疾病的发病。最新数据显示了NAFLD、生长素释放肽和脂肪因子之间的联系。生长素释放肽在NAFLD患者(主要是具有正常体重的那些患者)中是升高的。外周生长素释放肽诱导脂质在特定腹部储库、肝和骨骼肌中累积，而不影响浅表皮下白色脂肪组织。这些效应可以通过抑制自发生长激素(GH)分泌而被放大。此外，外周生长素释放肽和去酰基生长素释放肽诱导骨髓中的脂肪生成。外周生长素释放肽防御在与代谢综合征发展有关的腹部位置中累积的脂肪(Wells，T.Prog.Lipid Res.2009，doi：10.1016/j.plipres.2009.04.002)。研究显示，生长素释放肽可以影响脂肪细胞代谢并刺激脂肪生成。(Depoortere，I.Regul.Pept.2009，156，13-23.)。因此，生长素释放肽拮抗剂将用于治疗或预防NAFLD和NASH。

类似地，此类药剂可以对糖尿病性食欲过盛有潜力。食欲过盛和改变的燃料机制产生于人类不受控制的糖尿病。已经表明，这通过升高的生长素释放肽水平和经由NPY/AGRP途径降低的瘦蛋白的组合而发生。尽管在健康受治疗者和糖尿病受治疗者中生长素释放肽的水平基本相同，但是糖尿病性食欲过盛中生长素释放肽的不同水平难以靠饮食疗法维持，而拮抗剂可用于辅助控制。(Ishii，S.；Kamegai，J.；Tamura，H.；Shimizu，T.；Sugihara，H.；Oikawa，S.Endocrinology 2002，143，4934-4937；Sindelar，D.K.，Mystkowski，P.，Marsh，D.J.，Palmiter，R.D.；Schwartz，M.W Diabetes 2002，51，778-783.)。

生长素释放肽水平在肝硬化以及慢性肝病并发症中升高，尽管不同于***-1(IGF-1)的水平，但它们与肝功能无关。(Tacke，F.；Brabant，G.；Kruck，E.；Horn，R.；等人J.Hepatology 2003，38，447-454.)。生长素释放肽拮抗剂可用于控制这些肝病。而且，生长素释放肽及其受体在许多癌症中过表达。拮抗剂对于癌症治疗将具有潜在应用。国际专利申请公布WO 02/90387描述了使用靶向GHS-R1a的干涉主义策略作为治疗生殖***癌症的方法。

对于代谢紊乱(诸如肥胖)，已经推测，由于生物体存活的摄食量过程的关键性质，针对单个靶的单一物质可能不足以长期控制体重，因为可使用替代或附加途径来避开受到影响的途径。因此，最佳的治疗策略可以是同时应用靶向喂食/食欲控制过程中涉及的不同途径的多种药剂(参见例如国际专利申请公布WO 2006/052608)。实际上，一些成功的减重治疗剂是药物组合。

最近，已经证明生长素释放肽减少酒精消耗的拮抗机制。(Kaur，S.；Ryabinin，A.E.Alcohol.Clin.Exp.Res.2010，34，1525-1534.)。这与在酗酒患者中显示改变的血浆生长素释放肽水平(Wurst，F.M.；Graf，I.；Ehrenthal，H.D.；等人Alcohol.Clin.Exp.Res.2007，31，2006-2020；Badaoui，A.；De Saeger，C.；Duchemin，J.；Gihousse，D.；de Timary，P.；Starkel，P.Eur.J.Clin.Invest.2008，38，397-403)和在生长素释放肽敲除小鼠中显示降低的酒精摄入(Jerlhag，E.；Egecioglu，E.；Landgren，S.；等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2009，106，11318-11323)的研究一致。相关地，具有缺损基因或用生长素释放肽拮抗剂治疗的小鼠中摄食量的减少表明，生长素释放肽参与食物相关的激励和奖励***(Egecioglu，E.；Jerlhag，E.；Salome，N.；等人Addict.Biol.2010，15，304-311；Perello，M.；Sakata，I.；Birnbaum，S.；等人Biol.Psychiatry2010，67，880-886.)。而且，在生长素释放肽敲除小鼠中不存在奖励食物时，多巴胺释放。此外，生长素释放肽信号传导***似乎是滥用药物奖励所需的。(Jerlhag，E.；Egecioglu，E.；Dickson，S.L.；Engel，J.A.Psychopharmacol.2010，211，415-422.)。在用生长素释放肽拮抗剂治疗时，***或***诱导的刺激和多巴胺释放减少。因此，生长素释放肽拮抗剂将用于治疗酒精相关的病症(Leggio，L.DrugNews Perspect.2010，23，157-166.)和其他成瘾性病症，例如药物依赖(国际专利申请公布WO 2009/020419)。尽管生长素释放肽拮抗剂有潜在的治疗用途，但专利或科学文献中报道了仅有限数目的小分子生长素释放肽拮抗剂，包括二氨基嘧啶、萘甲酰胺、异噁唑甲酰胺、β-咔啉、噁二唑、吡唑、苯并呋喃吲哚酮和苯磺酰胺。(美国专利申请公布US 2005/0171131；US 2005/0171132；国际专利申请公布WO2005/030734；WO 2005/112903；WO 2005/48916；WO 2008/008286；WO 2010/092288；WO 2010/092289；Zhao，H.；Xin，Z.；Liu，G.；等人J.Med.Chem.2004，47，6655-6657；Xin，Z.；Zhao，H.；Serby，M.D.；等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2005，15，1201-1204；Zhao，H.；Xin，Z.；Patel，J.R.；等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2005，15，1825-1828；Liu，B.；Liu，G.；Xin，Z.；等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2004，14，5223-5226；Pasternak，A，；Goble，S.D.；deJesus，R.K.；等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2009，19，6237-6240)。WO 2005/114180描述了许多作为“功能性生长素释放肽拮抗剂”的含有杂芳基核心结构的单个化合物(例如异噁唑、1，2，4-噁二唑和1，2，4-***)及其作为治疗剂治疗肥胖和糖尿病的用途。WO 2005/035498；WO 2005/097788和US 2005/0187237中报道了其他杂环结构，其中一些表现出拮抗剂活性。

自然界中其他已知的生长素释放肽拮抗剂主要是肽(WO2004/09616，WO 02/08250，WO 03/04518，US 2002/0187938，Pinilla，L.；Barreiro，M.L.；Tena-Sempere，M.；Aguilar E.Neuroendocrinology2003，77，83-90)，尽管也公开了基于核酸的拮抗剂(WO 2004/013274；WO 2005/49828；Helmling，S.；Maasch，C.；Eulberg，D.；等人Proc.Natl.Acad.Sci USA 2004，101，13174-13179；Shearman，L.P.；Wang，S.P.；Helmling，S.；等人Endocrinology 2006，147，1517-1526)。本发明化合物在结构上不同于所有这些之前报道的生长素释放肽拮抗剂结构。14-氨基酸化合物伐普肽(一种小促生长素抑制素模拟物)被证明是生长素释放肽拮抗剂。(Deghenghi R，Papotti M，Ghigo E，MuccioliG，Locatelli V.Endocrine 2001，14，29-33.)。已经公开了环状神经肽类似物cortistatin与生长激素促分泌素受体的结合活性(WO03/004518)。这些化合物表现出24-33nM的IC₅₀。具体地，这些类似物之一(EP-01492(cortistatin 8))作为生长素释放肽拮抗剂，已经进入治疗肥胖的临床前研究。(Deghenghi R，Broglio F，Papotti M，等人Endocrine 2003，22，13-18；Sibilia，V.；Muccioli，G.；Deghenghi，R.；等人J.Neuroendocrinol.2006，18，122-128.)。

已经报道了作为生长素释放肽拮抗剂的有限系列的肽，含有已知对于结合GHS-R1a是关键的非常特异性的短辛酰基化序列(美国专利申请号2002/0187938；国际专利申请号WO 02/08250)。已经描述了[D-Lys³]-GHRP-6作为生长素释放肽拮抗剂的作用。(Pinilla，L.；Barreiro，M.L.；Tena-Sempere，M.；Aguilar E.Neuroendocrinology 2003，77，83-90)。最近，已经证明物质P肽衍生物L-756，867(EP-80317，[D-Arg¹，D-Phe⁵，D-Trp^7，9，Leu¹¹]-物质P)(一种弱的生长素释放肽拮抗剂)是有效的反向激动剂(K_d/i＝45nM)，开启了靶向生长素释放肽受体的肥胖治疗的另一种潜在方法。(Holst，B.；Schwartz，T.W.TrendsPharmacol.Sci.2004，25，113-117；Holst，B.；Cygankiewicz，A.；Jensen，T.H.；Ankersen，M.；Schwartz，T.W.Mol.Endocrinol.2003，17，2201-2210；Cheng，K.；Wei，L.；Chaung，L.-Y.；等人J.Endocrinol.1997，152，155-158.)。然而，该特定药剂的使用可能由于其选择性差而是有限的，因为其还与神经激肽-1和铃蟾肽受体相互作用。

已经表明反向激动剂的使用在控制食欲方面具有更相关的用途，这归因于生长素释放肽受体的高组成型活性。(Holst，B.；Holliday，N.D.；Bach，A.；Elling，C.E.；Cox，H.M.；Schwartz，T.W.J.Biol.Chem.2004，279，53806-53817.)。然而，迄今仅报道了L-756，867肽和单吡咯化合物TM27810(WO 2004/056869)作为反向激动剂。

事实上，已经认为实际上有益的是具有起生长素释放肽受体拮抗剂和反向激动剂两者作用的化合物，以最佳控制喂食(Holst，B.Schwartz，T.J.Clin.Invest.2006，116，637-641)。最近发现，在生长素释放肽受体中具有影响组成型活性的突变的人身材矮小，这说明组成型活性对于该受体的正常体内功能的重要性。(Pantel，J.；Legendre，M.Cabrol，S.；等人J.lin.Invest.2006，116，760-768.)。如实施例中所示，本发明的一些化合物起生长素释放肽受体拮抗剂和反向激动剂两者的作用。

尽管之前已经描述了作为生长素释放肽受体的拮抗剂和反向激动剂的有限系列的大环肽模拟物，并总结了其用于治疗许多病症的用途(国际专利申请公布号WO 2006/046977；2006/137974)，但显示本发明化合物具有不期望的和更有利的药理学性质。

因此，由于适合药理干预的生长素释放肽拮抗剂或反向激动剂的实例很少，存在对调节生长素释放肽受体并抑制生长素释放肽释放的其他化合物的需求。

发明概述

本发明提供了可以起生长素释放肽(生长激素促分泌素)受体(GRLN，GHS-R1a)的拮抗剂或反向激动剂作用的新型的构象确定的大环化合物。

根据本发明的方面，本发明涉及根据式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

T选自

其中(N_A)指示与式(I)的NR_4a的结合位点，并且(N_B)指示与式(I)的NR_4c的结合位点；

R₁选自由以下组成的组：

-(CH₂)_sCH₃、-CH(CH₃)(CH₂)_tCH₃、-(CH₂)_uCH(CH₃)₂、-C(CH₃)₃、-CH₂-C(CH₃)₃、-CHR₁₇OR₁₈、

其中s是0、1、2、3或4；t是1、2或3；u是0、1或2；v是1、2、3或4；w是1、2、3或4；并且R₁₁和R₁₂任选地存在，并且当存在时独立选自由C₁-C₄烷基、羟基和烷氧基组成的组；R₁₇是氢或甲基；并且R₁₈选自由氢、C₁-C₄烷基和酰基组成的组；

R_2a选自由-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-CF₃、-CF₂H和-CH₂F组成的组；

R_2b选自由-H和-CH₃组成的组；

R_3a选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基和烷氧基组成的组；

R_3b选自由氢和C₁-C₄烷基组成的组；

R_4a、R_4b、R_4c和R_4d独立选自由氢和C₁-C₄烷基组成的组；

R₅在Y₁是O或NR₁₆时选自由氢、C₁-C₄烷基和酰基组成的组；或者在Y₁是C(＝O)时选自由羟基、烷氧基和胺组成的组；

R₆选自由氢、C₁-C₄烷基、氧代和三氟甲基组成的组；

R₇选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R₇和X₁一起形成五元环或六元环；

R₁₀选自由氢、C₁-C₄烷基、1，1，1-三氟乙基、羟基和烷氧基组成的组，条件是当L₆是CH时，R₁₀还选自三氟甲基，并且当L₆是N时，R₁₀还选自磺酰基；或者R₁₀和R_8a一起形成五元环或六元环；

R₂₆、R₂₈和R₂₉独立选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R₂₈和R₂₉一起形成三元环；

R₂₇选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R₂₇和X₄₃一起形成五元环或六元环；

R₃₀选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；

Ar选自由以下组成的组：

其中M₁、M₂、M₃、M₄、M₅、M₆、M₇、M₉和M₁₁独立选自由O、S和NR₁₃组成的组，其中R₁₃选自由氢、C₁-C₄烷基、甲酰基、酰基和磺酰基组成的组；M₈、M₁₀和M₁₂独立选自由N和CR₁₄组成的组，其中R₁₄选自由氢和C₁-C₄烷基组成的组；X₅、X₆、X₇、X₁₈、X₁₉、X₂₁、X₂₂、X₂₄、X₂₅、X₂₆、X₂₇、X₂₈、X₂₉、X₃₀和X₃₁独立选自由氢、卤素、三氟甲基和C₁-C₄烷基组成的组；并且X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₂₀、X₂₃、X₃₂、X₃₃、X₃₄、X₃₅、X₃₆、X₃₇、X₃₈、X₃₉、X₄₀、X₄₁和X₄₂独立选自由氢、羟基、烷氧基、氨基、卤素、氰基、三氟甲基和C₁-C₄烷基组成的组；

L₁、L₂、L₃、L₄和L₆独立选自由CH和N组成的组；

L₅选自由CR_15aR_15b、O和NR_15c组成的组，其中R_15a和R_15b独立选自氢、C₁-C₄烷基、羟基和烷氧基；并且R_15c选自由氢、C₁-C₄烷基、酰基和磺酰基组成的组；

L₁₀选自由CR_35aR_35b、O和OC(＝O)O组成的组，其中R_35a和R_35b独立选自氢、C₁-C₄烷基、羟基和烷氧基；

X₁选自由氢、卤素、三氟甲基和C₁-C₄烷基组成的组；或X₁和R₇一起形成五元环或六元环；

X₂、X₃和X₄独立选自由氢、卤素、三氟甲基和C₁-C₄烷基组成的组；

X₄₃和X₄₄任选地存在，并且当存在时独立选自由C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者X₄₃和R₂₇一起形成五元环或六元环；并且

Y₁选自由C(＝O)、O和NR₁₆组成的组，其中R₁₆选自由氢、C₁-C₄烷基、酰基和磺酰基组成的组；

z是0、1、2或3；并且

Z 选自由(Ar)-CHR_8aCHR_9a-(L₆)、(Ar)-CR_8b＝CR_9b-(L₆)和-(Ar)-C≡C--(L₆)组成的组，其中(Ar)指示与苯环的结合位点，并且(L₆)指示与L₆的结合位点，R_8a和R_9a独立选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基、氧代和三氟甲基组成的组；R_8b和R_9b独立选自由氢、C₁-C₄烷基、氟代、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R_8a和R_9a一起形成三元环；或者R_8a和R₁₀一起形成五元环或六元环；或者R_8a和X₄一起形成五元环或六元环；或者R_9a和X₄一起形成五元环或六元环；或者R_8b和X₄一起形成五元环或六元环；或者R_9b和X₄一起形成五元环或六元环。

本发明的具体实施方案提供了具有以下结构的式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐。

本发明的其他方面提供了药物组合物，包含：(a)本发明的化合物；和(b)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的其他方面，提供了药物组合物，包含：(a)本发明的化合物；(b)一种或多种其他治疗剂；和(c)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

对于具体的实施方案，其他治疗剂选自由以下组成的组：GLP-1激动剂、DPP-IV抑制剂、糊精激动剂、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-α/γ双重激动剂、GDIR或GPR119激动剂、PTP-1B抑制剂、肽YY激动剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)-1抑制剂、2型钠依赖性肾葡萄糖转运蛋白(SGLT-2)抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、葡糖激酶激活剂、α-葡糖苷酶抑制剂、糖皮质激素拮抗剂、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂、果糖-1，6-二磷酸酶抑制剂、磺酰脲受体拮抗剂、类视黄醇X受体激活剂、5-HT_1a激动剂、5-HT_2c激动剂、5-HT₆拮抗剂、***素拮抗剂或反向激动剂、黑色素浓集激素-1(MCH-1)拮抗剂、黑皮质素-4(MC4)激动剂、瘦蛋白激动剂、视黄酸受体激动剂、硬脂酰辅A去饱和酶-1(SCD-1)抑制剂、神经肽Y Y2受体激动剂、神经肽YY4受体激动剂、神经肽Y Y5受体拮抗剂、神经元烟碱受体α4β₂激动剂、二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT-1)抑制剂、甲状腺受体激动剂、脂肪酶抑制剂、脂肪酸合酶抑制剂、甘油-3-磷酸酰基转移酶抑制剂、CPT-1刺激剂、α_1A-肾上腺素能受体激动剂、α_2A-肾上腺素能受体激动剂、β₃-肾上腺素能受体激动剂、组胺H3受体拮抗剂、缩胆囊肽A受体激动剂和GABA-A激动剂。

本发明的其他方面提供了包括一个或多个容器的试剂盒，所述容器包含药物剂量单位，所述药物剂量单位包含有效量的一种或多种本发明化合物，所述容器包装有关于其使用的任选说明书。

在其他方面，本发明提供了调节哺乳动物GRLN受体活性的方法，所述方法包括施用有效调节GRLN受体活性的量的本发明化合物。根据本发明的一些方面，所述化合物是生长素释放肽受体拮抗剂或GRLN受体拮抗剂。而另一方面，所述化合物是生长素释放肽受体反向激动剂或GRLN受体反向激动剂。根据本发明的另一方面，所述化合物是生长素释放肽受体拮抗剂和生长素释放肽受体反向激动剂或GRLN受体拮抗剂和GRLN受体反向激动剂。

本发明的方面还涉及预防和/或治疗病症(例如代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、成瘾性病症、心血管病症、遗传病症、过度增殖病症、中枢神经***病症和炎性病症)的方法。

在具体实施方案中，代谢紊乱是肥胖、糖尿病、代谢综合征、非酒精性脂肪酸肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或脂肪变性。

在另一具体实施方案中，食欲或进食障碍是Prader-Willi综合征或食欲过盛。

在其他具体实施方案中，成瘾性疾患是酒精依赖、药物依赖或化学品依赖。

本发明其他方面涉及制备式I化合物的方法。

本发明还涉及用于制备用于预防和/或治疗本文所述的病症的药剂的式I化合物。

在其他实施方案中提供了选自由以下组成的组的大环化合物：

或其药学上可接受的盐。

以下陈述的说明书中更详细解释了本发明的上述和其他方面。

附图简述

图1示出了本发明的示例性化合物-化合物1319-的化学合成方案。

图2示出了本发明的示例性化合物-化合物1350-的化学合成方案。

图3示出了本发明的示例性化合物-化合物1636-的化学合成方案。

图4示出了本发明的示例性化合物-化合物1383-的化学合成方案。

图5示出了本发明的示例性化合物-化合物1390-的化学合成方案。

图6示出了本发明的示例性化合物-化合物1401-的化学合成方案。

图7示出了本发明的示例性化合物-化合物1300-的化学合成方案。

图8示出了本发明的示例性化合物-化合物1505-的化学合成方案。

图9示出了呈现评价本发明示例性化合物-化合物1505-在Zucker脂肪大鼠模型中的体内活性、特别是对体重的影响的研究结果的图。

图10示出了呈现评价本发明示例性化合物-化合物1505-在Zucker脂肪大鼠模型中的体内活性、特别是对累积摄食量的影响的研究结果的图。

图11示出了呈现评价本发明示例性化合物-化合物1712-在ob/ob小鼠模型中的体内活性、特别是对急性累积摄食量的影响的研究结果的图。

图12示出了呈现评价本发明示例性化合物-化合物1848-在ob/ob小鼠模型中的体内活性、特别是对累积摄食量的影响的研究结果的图。

图13示出了提供评价本发明示例性化合物-化合物1848-的体内活性、特别是对选定的代谢参数的影响的研究结果的一系列图。

发明详述

现在就本文所述的其他实施方案更详细描述本发明的上述和其他方面。应该理解，本发明可以不同形式实施，并且不应被解释为限于本文提出的实施方案。相反，提供这些实施方案以使本公开内容详尽且完全，并且将本发明范围完整地传达给本领域技术人员。

本发明说明书中所用的术语仅为描述具体实施方案的目的，而不旨在限制本发明。如本发明说明书和所附权利要求书中所用，除非上下文另外清楚指明，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”还旨在包括复数形式。此外，如本文所用，术语″和/或″包括相关所列术语中的任何一个或一个或多个的全部组合，并且可以缩写为″/″。

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员所通常理解相同的含义。

本文引用的所有出版物、美国专利申请、美国专利和其他参考文献通过引用整体并入。

术语“烷基”指具有1至20个碳原子、并在一些情况下具有1至8个碳原子的直链或支链饱和或部分不饱和的烃基。术语“低级烷基”指含有1至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、异丙基、叔丁基、3-己烯基和2-丁炔基。“不饱和的”意思是存在1、2或3个双键或三键或两者的组合。如下文所述，此类烷基还可以被任选地取代。

当针对本文定义的烷基或其他烃基使用下标时，下标指基团可以含有的碳原子数。例如，C₂-C₄烷基指含有2、3或4个碳原子的烷基。

术语“环烷基”指环中具有3至15个碳原子、并在一些情况下具有3至7个碳原子的饱和或部分不饱和的环烃基，并且指含有所述环烃基的烷基。环烷基的实例包括(但不限于)环丙基、环丙基甲基、环戊基、2-(环己基)乙基、环庚基和环己烯基。如本文定义的环烷基还包括具有多个碳环的基团，每个碳环可以是饱和的或部分不饱和的，例如十氢萘基、[2.2.1]-双环庚烷基或金刚烷基。如下文所述，所有此类环烷基还可以被任选地取代。

术语“芳族的”指具有含有4n+2个电子的共轭π电子***的不饱和环烃基，其中n是大于或等于1的整数。芳族分子通常是稳定的，并且被描述为具有由交替的双键和单键组成的共振结构的原子的平面环，例如苯或萘。

术语“芳基”指具有6至15个环原子、并在一些情况下具有6至10个环原子的单碳环或稠合碳环***中的芳族基团，并且指含有所述芳族基团的烷基。芳基的实例包括(但不限于)苯基、1-萘基、2-萘基和苄基。如本文定义的芳基还包括具有多个芳环的基团，所述多个芳环可以稠合(如在萘基和蒽基中)，或者是未稠合的(如在联苯和三联苯中)。芳基还指双环或三环的碳环，其中一个环是芳族的，并且其他的环可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的，例如茚满基或四氢萘基(萘满基)。如下文所述，所有此类芳基还可以被任选地取代。

术语“杂环”或“杂环的”指具有3至15个原子、并在一些情况下具有3至7个原子的饱和或部分不饱和单环、双环或三环基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子，所述杂原子选自O、S或N。杂环基团的每个环可以含有1或2个O原子、1或2个S原子、1至4个N原子，条件是每个环中的杂原子总数是4或更少并且每个环含有至少一个碳原子。使双环或三环的杂环基团完整的稠合环可以仅含有碳原子，并且可以是饱和的或部分不饱和的。N和S原子可以任选地被氧化，N原子可以任选地被季铵化。杂环还可以指含有所述单环、双环或三环的杂环基团的烷基。杂环的实例包括但不限于2-或3-哌啶基、2-或3-哌嗪基、2-或3-吗啉基。如下文所述，所有此类杂环基还可以被任选地取代。

术语“杂芳基”指具有5至15个环原子、并在一些情况下具有5至10个环原子的单环或稠合环***中的芳族基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子，所述杂原子选自O、S或N。杂芳基的每个环可以含有1或2个O原子、1或2个S原子、1至4个N原子，条件是每个环中的杂原子总数是4或更少并且每个环含有至少一个碳原子。使双环或三环基团完整的稠合环可以仅含有碳原子，并且可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的。在其中氮原子的孤对电子不参与完成芳族π电子***的结构中，N原子可以任选地被季铵化或氧化成N-氧化物。杂芳基还指含有所述环基团的烷基。单环杂芳基的实例包括(但不限于)吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和三嗪基。双环杂芳基的实例包括(但不限于)吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻嗯基(benzothienyl)、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(furopyridinyl)、噻吩并吡啶基、二氢异吲哚基和四氢喹啉基。三环杂芳基的实例包括(但不限于)咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基和呫吨基。如下文所述，所有此类杂芳基也可以被任选地取代。

术语“羟基”指基团-OH。

术语“烷氧基”指基团-OR_a，其中R_a是烷基、环烷基或杂环。实例包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、环己氧基和四氢吡喃基氧基。

术语“芳氧基”指基团-OR_b，其中R_b是芳基或杂芳基。实例包括(但不限于)苯氧基、苄氧基和2-萘氧基。

术语“酰基”指基团-C(＝O)-R_c，其中R_c是烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。实例包括但不限于乙酰基、苯甲酰基和糠酰基。

术语“氨基酰基”指衍生自氨基酸的酰基。

术语“氨基”指-NR_dR_e基团，其中R_d和R_e独立选自由氢、烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基组成的组。可选地，R_d和R_e一起形成3至8元杂环，其任选被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“酰氨基”指基团-C(＝O)-NR_fR_g，其中R_f和R_g独立选自由氢、烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基组成的组。可选地，R_f和R_g一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“脒基”指基团-C(＝NR_h)NR_iR_j，其中R_h选自由氢、烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基组成的组；并且R_i和R_j独立选自由氢、烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基组成的组。可选地，R_i和R_j一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“羧基”指基团-CO₂H。

术语“羧基烷基”指基团-CO₂R_k，其中R_k是烷基、环烷基或杂环。

术语“羧基芳基”指基团-CO₂R_m，其中R_m是芳基或杂芳基。

术语“氰基”指基团-CN。

术语“甲酰基”指基团-C(＝O)H，也被表示为-CHO。

术语“卤代”、“卤素”或“卤化物”分别指氟代、氟或氟化物、氯代、氯或氯化物、溴代、溴或溴化物、和碘代、碘或碘化物。

术语“氧代”指二价基团＝O，其在同一个碳原子上取代两个氢原子而形成羰基。

术语“巯基”指基团-SR_n，其中R_n是氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。

术语“硝基”指基团-NO₂。

术语“三氟甲基”指基团-CF₃。

术语“亚硫酰基”指基团-S(＝O)R_p，其中R_p是烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。

术语“磺酰基”指基团-S(＝O)₂-R_q1，其中R_q1是烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。

术语“氨基磺酰基”指基团-NR_q2-S(＝O)₂-R_q3，其中R_q2是氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基；并且R_q3是烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。

术语“磺酰氨基”指基团-S(＝O)₂-NR_rR_s，其中R_r和R_s独立选自由氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基组成的组。可选地，R_r和R_s一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选地含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“氨基甲酰基”指式-N(R_t)-C(＝O)-OR_u的基团，其中R_t选自氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基；并且R_u选自烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。

术语“胍基”指式-N(R_v)-C(＝NR_w)-NR_xR_y的基团，其中R_v、R_w、R_x和R_y独立选自氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。可选地，R_x和R_y一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选地含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“脲基”指式-N(R_z)-C(＝O)-NR_aaR_bb的基团，其中R_z、R_aa和R_bb独立选自氢、烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基。可选地，R_aa和R_bb与它们各自结合的氮原子一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选地含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。

术语“任选地取代”旨在明确表示，除非任选的取代基被明确指定，指定基团是未取代的或者被一个或多个合适的取代基取代，在任选的取代基被明确指定的情况下，该术语表示基团是未取代的或被指定取代基所取代。如上定义，除非本文另外指出(例如，通过指出指定基团是未取代的)，各种基团可以是未取代的或取代的(即，它们被任选取代)。

当与术语烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基一起使用时，术语“取代的”指基团的氢原子中的一个或多个被取代基取代的烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基，所述取代基独立选自：未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、卤代、氧代、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基、脲基和式-NR_ccC(＝O)R_dd、-NR_eeC(＝NR_ff)R_gg、-OC(＝O)NR_hhR_ii、-OC(＝O)R_jj、-OC(＝O)OR_kk、-NR_mmSO₂R_nn或-NR_ppSO₂NR_qqR_rr的基团，其中R_cc、R_dd、R_ee、R_ff、R_gg、R_hh、R_ii、R_jj、R_mm、R_pp、R_qq和R_rr独立选自氢、未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基或未取代的杂芳基；并且其中R_kk和R_nn独立选自未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基或未取代的杂芳基。可选地，R_gg和R_hh、R_jj和R_kk、或R_pp和R_qq与它们各自结合的氮原子一起形成3至8元杂环，其任选地被未取代的烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环、未取代的芳基、未取代的杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巯基、亚硫酰基、磺酰基、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，并且任选地含有1至3个选自O、S或N的其他杂原子。此外，对于芳基和杂芳基，术语“取代的”包括基团的一个氢原子被氰基、硝基或三氟甲基取代的选择。

进行取代的条件是不超过任何原子的正常化合价，并且取代得到稳定的化合物。一般而言，当存在基团的取代形式时，这种取代的基团不可以被进一步取代，或者如果取代，取代基仅包括有限数目的取代基团，例如1、2、3或4个此类取代基。

当任何变量在本文任何成分或任何分子式中出现超过一次时，其每次出现时的定义与其其他所有出现时的定义无关。而且，取代基和/或变量的组合只有在此类组合得到稳定化合物时是允许的。

“稳定化合物”或“稳定结构”旨在表示足够稳固，以经受得住分离至有用程度的纯度并配制成有效的治疗剂的化合物。

术语“氨基酸”指本领域技术人员已知的常见的天然(基因编码的)或合成氨基酸及其常见衍生物。当应用至氨基酸时，“标准的”或“蛋白原的”指以其天然构型存在的基因编码的20种氨基酸。类似地，当应用至氨基酸时，“非天然的”或“不常见的”指非天然的、罕见的或合成的氨基酸的广泛选择，例如Hunt，S.Chemistry and Biochemistry of theAmino Acids，Barrett，G.C.，编，Chapman and Hall：New York，1985中描述的那些氨基酸。

有关氨基酸或氨基酸衍生物的术语“残基”指下式基团：

其中R_AA是氨基酸侧链，并且在这种情况下，n＝0、1或2。

有关二肽、三肽或高级肽衍生物的术语“片段”指分别含有2、3或更多个氨基酸残基的基团。

术语“氨基酸侧链”指来自标准或非天然氨基酸的任何侧链，并且被表示为R_AA。例如，丙氨酸的侧链是甲基，缬氨酸的侧链是异丙基，并且色氨酸的侧链是3-吲哚基甲基。

术语“激动剂”指使蛋白质、受体、酶或类似物的内源性配体的至少一些效应加倍的化合物。

术语“拮抗剂”指抑制蛋白质、受体、酶或类似物的内源性配体的至少一些效应的化合物。

术语“反向激动剂”指至少一定程度上降低蛋白质、受体、酶或类似物的基线功能活性的化合物，所述基线功能活性例如G蛋白偶联受体或其变体的组成型信号传导活性。反向激动剂还可以是拮抗剂。

术语“基线功能活性”指蛋白质、受体、酶或类似物在内源性配体存在下的活性(包括组成型信号传导活性)。

术语“生长激素受体促分泌素”(GHS)指在动物(特别是人)中直接或间接刺激或增加生长激素、生长激素释放激素或促生长素抑制素的内源性释放的任何外源施用的化合物或物质。GHS性质上可以是肽或非肽的，可以口服施用的物质是优选的。此外，诱导脉冲响应的物质是优选的。

术语“调节剂”指对生物或化学过程或机制产生影响的化合物。例如，调节剂可以增加、促进、上调、激活、抑制、减少、阻断、预防、延迟、脱敏、钝化、下调(等)生物或化学过程或机制。相应地，调节剂可以是“激动剂”、“拮抗剂”或“反向激动剂”。由调节剂影响的示例性生物过程或机制包括但不限于受体结合和激素释放或分泌。由调节剂影响的示例性化学过程或机制包括但不限于催化和水解。

当被应用于受体时，术语“变体”旨在包括二聚体、三聚体、四聚体、五聚体和含有多个组分的其他生物复合物。这些组分可以是相同的或不同的。

术语“肽”指由共价键合到一起的两个或更多个氨基酸组成的化合物。

术语“肽模拟物”指被设计为模拟肽的化合物，但是其通过添加或取代肽的多个官能团之一而具有结构差异，以调节其活性或其他性质，例如溶解性、代谢稳定性、口服生物利用率、亲脂性、渗透性等等。这可以包括取代肽键、侧链修饰、截断、添加官能团等等。当化学结构不衍生自肽而是模拟肽的活性时，其通常被称作“非肽的肽模拟物”

术语“肽键”指肽中的单个氨基酸通常藉此相互共价结合的酰胺[-C(＝O)-NH-]官能团。

术语“保护基”指可用于在分子其他地方发生化学变化时，防止分子上的潜在反应性官能团(例如胺、羟基或羧基)进行化学反应的任何化合物。许多此类保护基是本领域技术人员已知的，并且实例可以参见“Protective Groups in Organic Synthesis，”Theodora W.Greene和PeterG.Wuts，编，John Wiley&Sons，New York，第3版，1999[ISBN0471160199]。氨基保护基的实例包括(但不限于)苯二甲酰亚氨基、三氯乙酰基、苄氧基羰基、叔丁氧基羰基和金刚烷基氧基羰基。优选的氨基保护基是氨基甲酸酯氨基保护基，其被定义为当结合至氨基时形成氨基甲酸酯的氨基保护基。优选的氨基甲酸酯氨基保护基是烯丙氧基羰基(Alloc或Aloc)、苄氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)和α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基(Ddz)。关于新型氮保护基的最近讨论：Theodoridis，G.Tetrahedron 2000，56，2339-2358。羟基保护基的实例包括(但不限于)乙酰基、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三苯甲基(Trt)、叔丁基和四氢吡喃基(THP)。羧基保护基的实例包括(但不限于)甲酯、叔丁酯、苄酯、三甲基甲硅烷基乙酯和2，2，2-三氯乙酯。

术语“固相化学”指化学反应的进行，其中反应物的一种组分与聚合物材料(如下定义的固体载体)共价键合。在固相上进行化学作用的反应方法已经更广为人知，并且在肽和寡核苷酸化学的传统领域之外得以确立。

术语“固体载体”、“固相”或“树脂”指用于进行固相化学的机械和化学上稳定的聚合物基质。这由“树脂”、“P-”或以下符号表示：

合适的聚合物材料的实例包括(但不限于)聚苯乙烯、聚乙烯、聚乙二醇、与聚苯乙烯接枝或共价键合的聚乙二醇(还称为PEG-聚苯乙烯，TentaGelTM，Rapp，W.；Zhang，L.；Bayer，E.Innovations andPersepctives in Solid Phase Synthesis.Peptides，Polypeptides andOligonucleotides；Epton，R.，编；SPCC Ltd.：Birmingham，UK；p 205)、聚丙烯酸酯(CLEARTM)、聚丙烯酰胺、聚氨酯、PEGA[聚乙二醇-聚(N，N-二甲基丙烯酰胺)共聚物，Meldal，M.Tetrahedron Lett.1992，33，3077-3080]、纤维素等。这些材料可以任选地含有其他化学物质以形成交联键以机械上稳定结构，例如用二乙烯基苯(DVB，通常0.1-5％或0.5-2％)交联的聚苯乙烯。作为非限制性实例，该固体载体可以包括氨基甲基聚苯乙烯、羟基甲基聚苯乙烯、二苯甲基胺聚苯乙烯(BHA)、甲基二苯甲基胺(MBHA)聚苯乙烯和含有用于进一步衍生或反应的游离化学官能团(最常见为-NH₂或-OH)的其他聚合物主链。该术语还旨在包括具有高比例(“负载”)的这些官能团的“超级树脂(ultraresin)”，例如从聚乙烯亚胺和交联分子制备的那些(Barth，M.；Rademann，J.J.Comb.Chem.2004，6，340-349)。在合成结束时，树脂通常被弃掉，尽管已知它们能够被再次使用，例如参见Frechet，J.M.J.；Haque，K.E.Tetrahedron Lett.1975，16，3055。

一般而言，用作树脂的材料是不溶的聚合物，但是某些聚合物根据溶剂而具有不同的溶解度，并且还可以用于固相化学。例如，可以该方式使用聚乙二醇，因为其在许多可以在其中进行化学反应的有机溶剂中是可溶的，但是在其他溶剂(例如二***)中是不溶的。因此，可以在溶液中均相地进行反应，然后通过添加二***将聚合物上的产物沉淀，并处理成固体。这被称为“液相”化学。

有关固相化学使用的术语“连接体”指与固体载体共价键合并且在载体和底物之间连接的化学基团，通常是为了允许底物从固体载体释放(裂解)。然而，其还可用于赋予键合到固体载体的稳定性或仅仅作为间隔成分。许多已经连接了连接体的固体载体是可商购的。

用于氨基酸的缩写和肽的命名遵循IUPAC-IUB生化命名委员会的规则，J.Biol.Chem.1972，247，977-983。该文件已被更新：Biochem.J.，1984，219，345-373；Eur.J.Biochem.，1984，138，9-37；1985，152，1；Int.J.Pept.Prot.Res.，1984，24，following p 84；J.Biol.Chem.，1985，260，14-42；Pure Appl.Chem.，1984，56，595-624；amino acidsand Peptides，1985，16，387-410；和Biochemical Nomenclature andRelated Documents，第2版，Portland Press，1992，pp 39-67。该规则的延伸公开于JCBN/NC-IUB Newsletter 1985，1986，1989；参见Biochemical Nomenclature and Related Documents，第2版，PortlandPress，1992，pp 68-69.

术语“有效量”或“有效的”旨在指，如通过临床测试和评价、患者观察等所记录的引起疾病或病症的症状缓解的剂量，和/或如本领域技术人员针对相关机制或过程检测的引起生物或化学活性可检测变化的剂量。如本领域通常理解的，剂量将根据施用途径、症状和患者体重而变化，但也根据所施用的化合物而变化。

“组合”施用两种或更多种化合物表示两种化合物在时间上足够近地施用，使得一种化合物的存在改变另一种化合物的生物效应。两种化合物可以同时(共时)或依次施用。可以通过在施用之前混合化合物，或者通过在同一时间点但在不同解剖部位或使用不同施用途径施用化合物，来进行同时施用。如本文所用，短语“共时施用”、“组合施用”、“同时施用”或“同时地施用”表示化合物在同一时间点或相互紧随地施用。在后一情况下，两种化合物施用时间足够近，使得观察到的结果与在同一时间点施用化合物时获得的结果没有什么区别。

术语“药物活性代谢物”旨在表示通过具体化合物在体内代谢而产生的药理学活性产物。

术语“溶剂化物”旨在表示具体化合物的药学上可接受的溶剂化物形式，其保留了该化合物的生物效力。溶剂化物的实例包括(但不限于)与水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺组合的本发明化合物。

已经显示本发明大环化合物具有生长素释放肽调节活性，并且在具体实施方案中作为拮抗剂或反向激动剂。最近已经描述了作为生长素释放肽受体的调节剂的一系列大环肽模拟物，及其治疗和预防一系列医学症状的用途，所述医学症状包括所列的代谢紊乱和/或内分泌障碍、胃肠病症、心血管病症、肥胖和肥胖相关病症、中枢神经***病症、遗传病症、过度增殖病症和炎性病症(美国专利号7,452,862、7,476,653和7,491,695；国际专利申请公布号WO 2006/009645、WO2006/009674、WO 2006/046977、WO 2006/137974和WO 2008/130464；美国专利申请公布号2006/025566、2007/021331、2008/051383和2008/194672)。这些化合物中的一种(TZP-101(一种生长素释放肽激动剂))作为胃肠蠕动紊乱的治疗已经进入临床。(Lasseter，K.C.；Shaughnessy，L.；Cummings，D.；等人J.Clin.Pharmacol.2008，48，193-202)。与这些激动剂相比，本发明的化合物在结构组成和手性构型上存在不同。

尽管结合效价和靶亲和力是药物发现和开发中的因素，但优化药物代谢动力学(PK)和/或药物动力学(PD)参数对于开发可行药剂也是重要的。制药业研究的焦点领域已是更好地理解以这种方式确定分子适合性的潜在因素，通常俗称其“类药性”(Lipinski，C.A.；Lombardo，F.；Dominy，B.W.；Feeney，P.J.Adv.Drug Delivery Rev.1997，23，3-25；Muegge，I.Med.Res.Rev.2003，23，302-321；Veber，D.F.；Johnson，S.R.；Cheng，H.-Y.；Smith，B.R.；Ward，K.W.；Kopple，K.D.J.Med.Chem.2002，45，2615-2623.)。例如，分子量、log P、膜通透性、氢键供体和受体数目、总极性表面积(TPSA)和可旋转键的数目已与在药物开发中成功的化合物相关联。此外，血浆蛋白结合、与细胞色素P450酶的相互作用和药物代谢动力学参数的实验测量已用于制药业，以选择和发展新的候选药物。

然而，在大环结构类型中，这些参数还没有被广泛研究或报道。这在这些分子的药物开发中产生了巨大挑战。已经发现本发明的大环化合物具有这种期望的药理学特征，同时保持对生长素释放肽受体足够的结合亲和力和/或选择性，如在实施例中说明的。这些组合特征优于之前描述的大环生长素释放肽拮抗剂化合物，并且使其更适合作为药剂(特别是用作口服施用的物质)开发或长期使用，。

1.化合物

本发明的新型大环化合物包括式(I)的那些化合物：

或其药学上可接受的盐，其中组分T选自

在具体实施方案中，化合物可以具有表1定义的结构的任何一种。这些结构基于结构式(A)：

其中(N_A)指示式(A)的NR_a的结合位点，(N_B)指示式(A)的NR_c的结合位点，并且Pg是氮保护基。

本发明包括分离的化合物。在一些实施方案中，分离的化合物指占混合物中化合物的至少10％、至少25％、至少50％或至少70％的化合物。在一些实施方案中，当生物测定中对人生长素释放肽受体测试时，所述化合物、其药学上可接受的盐或含有所述化合物的药物组合物表现出统计学上显著的结合和/或拮抗剂活性和或反向激动剂活性。

在化合物、盐或溶剂化物是固体的情况下，本领域技术人员理解，本发明化合物、盐和溶剂化物可以不同的晶体或多晶型形式存在，其全部旨在本发明和指定式的范围内。

本文公开的式(I)化合物具有不对称中心。本发明化合物可以作为单个的立体异构体、外消旋物、和/或对映体和/或非对映体的混合物存在。所有此类单个立体异构体、外消旋物及其混合物旨在本发明范围内。然而，本发明化合物以旋光纯形式使用。本文使用的术语“S”和“R”构型如IUPAC 1974推荐的立体化学基础(Pure Appl.Chem.1976，45，13-30.)的章节E所定义。

除非另外描绘为具体定向，本发明考虑所有立体异构体形式。化合物可以作为单一立体异构体或立体异构体的混合物来制备。非外消旋形式可以通过合成或拆分来获得。可以通过(例如)标准技术(例如通过形成盐而形成非对映体对)将化合物拆分成成分对映体。还可以通过与手性部分共价键合来拆分化合物。然后，可以通过色谱分离和/或结晶分离来拆分非对映体。在手性助剂部分的情况下，则可以将其去除。作为替代，可以通过使用手性色谱来拆分化合物。在某些情况下还可以使用酶促拆分方法。

如本领域技术人员通常所理解，“旋光纯”化合物是仅含单一对映体的化合物。如本文所用，术语“旋光的”旨在表示包含一种对映体相对于另一种对映体至少足够过量、使得混合物旋转平面偏振光的化合物。对映体过量(e.e)指示一种对映体相对于另一种对映体过量。旋光化合物有能力旋转偏振光平面。在描述旋光化合物时，前缀D和L或R和S用来表示分子围绕其手性中心的绝对构型。前缀“d”和“l”或(+)和(-)用来表示化合物的旋光性(即，其中偏振光平面被旋光化合物旋转的方向)。“l”或(-)前缀指示化合物是左旋的(即，使偏振光平面向左或逆时针方向旋转)，而“d”或(+)前缀表示化合物是右旋的(即，使偏振光平面向右或顺时针方向旋转)。旋光性符号(-)和(+)与分子的绝对构型R和S无关。

具有预期药理学性质的本发明化合物通常是旋光的，并且由至少90％(80％e.e.)、至少95％(90％e.e.)、至少97.5％(95％e.e.)或至少99％(98％e.e)的单一异构体组成。

同样，双键的许多几何异构体等也可以存在于本文公开的化合物中，并且除非另外规定，所有此类稳定的异构体包括在本发明范围内。

本发明还包括式I的互变异构体和旋转异构体。

使用右侧以下符号指用定义的取代基R取代所示环

的一个或多个氢原子。

使用以下符号表示单键或任选的双键：

本发明的实施方案还提供了通过本文所述的合成方法形成的中间体以提供式(I)化合物。所述中间体可以具有作为治疗剂和/或进一步合成方法和反应的试剂的效用。

2.合成方法

可以使用常规溶液合成技术或固相化学方法合成式(I)化合物。在任何一种方法中，制备包括四个阶段：第一，合成构件，其包括生物靶受体的识别元件加一个主要用于控制和限定构象的系链部分。在第二阶段，采用标准的化学转化，通常以顺序方式将这些构件组装在一起。然后在第三阶段将来自组装的前体环化以提供大环结构。最后，包括去除保护基和任选的纯化的环化后处理的第四阶段提供期望的最终化合物。该一般类型的大环结构的合成方法描述于国际专利申请WO 01/25257、WO 2004/111077、WO 2005/012331、WO 2005/012332、WO 2006/009645、WO 2006/009674、WO 2008/033328、WO2008/130464和美国临时专利申请61/254,434，包括WO 2004/111077和WO 2005/012331中描述的纯化方法。美国专利申请公布号2006/025566和US 2007/0021331中描述了液相合成途径，包括适应更大规模生产的方法。

在本发明的一些实施方案中，可以使用固相化学，在如前定义的可溶的或不溶的聚合物基质上合成式(I)的大环化合物。对于固相化学，必须进行初步阶段(还称为“负载”)，其包括将第一构件连接至树脂。本发明使用的树脂优先连接至连接体部分L。这些连接体通过本领域已知的标准反应方法(例如为形成酯键或酰胺键而开发的许多反应条件的任何一种)与基础树脂上适当的游离化学官能团(通常是醇或胺，但也可能是其他自由化学官能团)连接。设计本发明的一些连接体部分，以允许从树脂同时裂解，在通常称为“环化-释放”的过程中形成大环(van Maarseveen，J.H.Comb.Chem.High Throughput Screen.1998，1，185-214；James，I.W.Tetrahedron 1999，55，4855-4946；Eggenweiler，H.-M.Drug Discovery Today 1998，3，552-560；Backes，B.J.；Ellman，J.A.Curr.Opin.Chem.Biol.1997，1，86-93。就这点而言，对本发明化合物特别有用的是3-硫代丙酸连接体。Hojo，H.；Aimoto，S.Bull.Chem.Soc.Jpn.1991，64，111-117；Zhang，L.；Tam，J.J.Am.Chem.Soc.1999，121，3311-3320.)。

这种过程通常提供更高纯度的材料，因为仅环状产物从固体载体释放，且如在溶液相中会发生的出现最少的线性前体杂质。使用形成酯键或酰胺键的已知或标准反应化学将所有构件顺序组装并拴系成线性前体之后，作为系链构件的一部分的适当亲核官能团对连接至该连接体的羰基的碱介导的分子内攻击，导致形成酰胺键或酯键，其完全所示的环状结构(方案1)。还可以采用适于液相的类似方法，因为其对于更大规模的应用可能是优选的。

方案1.环化-释放策略

尽管该描述准确提供了用于本发明方法之一的途径(硫酯策略)，本发明的另一种方法(闭环复分解(RCM))通过改良的路径进行，其中系链组分实际上在环化步骤中被组装。然而，同样在RCM方法中，按顺序进行构件的组装，随后环化(并且如果固相的话，从树脂释放)。需要额外的环化后处理步骤以去除RCM反应的特定副产物，但是以与硫酯策略或类似的碱介导的环化策略相同的方式进行剩下的随后加工。

而且，要理解，包括本文提供的方法的步骤可以独立进行，或者至少两个步骤可以组合。此外，当独立或组合进行时，包括本文提供的方法的步骤可以在相同的温度或在不同的温度下进行，而不背离本发明的教导。

因此，本发明提供了制备本发明化合物的方法，包括(a)组装构件结构，(b)化学转化所述构件结构，(c)环化包括系链组分的构件结构，(d)从构件结构除去保护基，并(e)任选地纯化从步骤(d)获得的产物。在一些实施方案中，构件结构的组装可以是顺序的。在其他实施方案中，使用常规溶液合成技术或固相化学技术进行合成方法。

A.一般合成信息

除非另外规定，试剂和溶剂具有试剂品质或更好，并按从商业提供者获得的原样使用，所述商业供应商包括Sigma-Aldrich(Milwaukee，WI，USA)、Lancaster(Alfa Aesar的一部分，Johnson Matthey Company，Ward Hill，MA)、Acros Organics(Geel，Belgium)、Alfa Aesar(JohnsonMatthey Company的一部分，Ward Hill，MA)、Fisher Chemical(ThermoFisher的一部分，Fairlawn，NJ)、TCI America(Portland，OR)、DigitalSpecialty Chemicals(Toronto，ON，Canada)。使用的DMF、DCM、DME和THF属于

(EM Science，E.Merck)或具有合成级品质，除了(i)脱保护，(ii)树脂加帽反应和(iii)洗涤。氨基酸(AA)偶联反应使用的NMP具有分析级。DMA在使用之前通过置于真空下最少30分钟来充分脱气。在含有荧光指示剂的预涂布硅胶板60F254(0.25mm厚)上进行分析型TLC。

术语“在减压/真空下浓缩/蒸发/去除”指在适合去除溶剂的水抽吸压力或机械油真空泵提供的更强真空下使用旋转蒸发器的蒸发。“干裹(Dry pack)”指在未用溶剂预处理的硅胶色谱，一般用于较大规模纯化，其中期望产物和任何杂质之间存在大的R_f差异。“快速色谱”指如在文献(Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra，A.J.Org.Chem.1978，43，2923-2925)中描述的方法并且应用于硅胶色谱(230-400目，EM Science)，用于去除可能与期望材料的R_f接近的一些杂质。单独详细说明固相化学方法。

B.固相化学的一般方法

这些方法可以同样用于合成单一化合物或小数目化合物，以及用于合成本发明化合物库。

对于固相化学，溶剂选择不仅对于如溶液化学中溶解反应物是重要的，而且对于溶胀树脂也是重要的。某些溶剂基于其性质而差异性地与聚合物基质相互作用，并且可以影响该溶胀性质。作为实例，聚苯乙烯(用DVB交联)在非极性溶剂(例如DCM和甲苯)中溶胀最好，而当暴露于极性溶剂(如乙醇)时收缩。相反，其他树脂(例如PEG接枝树脂(如TentaGel))，即使在极性溶剂中维持其溶胀。对于本发明的反应，本领域技术人员可以做出适当选择。一般而言，聚苯乙烯-DVB树脂采用DMF和DCM常用溶剂。所需反应溶剂的体积一般是1-1.5mL/100mg树脂。在合成方法中使用时，术语“适量溶剂”指这种量。推荐的溶剂量大致相当于0.2M的构件溶液(以相对于树脂的初始负载5当量使用的连接体、氨基酸、羟酸和系链)。基于起始树脂的“负载”(表示以mmol/g给出的活性官能位点数目)确定反应的化学计量。

反应可以在任何适当容器(例如圆底烧瓶、配备有烧结滤器和活塞的固相反应容器、或特氟隆封口的广口瓶)中进行。容器大小应该使得具有足够的溶剂空间，并且使得具有足以有效搅拌树脂的空间，考虑某些树脂可能在用有机溶剂处理时显著溶胀。溶剂/树脂混合物应该填充约60％的容器。注意，除了使用温和机械搅拌更适合的规模以外，固相化学的所有搅拌最好用定轨振荡器(例如Forma Scientific，型号430，160-180rpm)进行，以确保充分混合，其被普遍认为对成功反应是重要的。

用于树脂洗涤的溶剂体积是与用于反应的体积相同的最小量，但通用使用更大量以确保完全去除过量试剂和其他可溶的残余副产物。实施例中规定的每一种树脂洗涤应该以所列顺序在搅拌下进行至少5分钟(除非另外规定)。洗涤次数由与溶剂或溶液一起的“nx”表示，其中n是整数。在混合溶剂洗涤***的情况下，两者列在一起并表示为溶剂1/溶剂2。在所有情况下，洗涤步骤中使用的溶剂混合物DCM/MeOH和THF/MeOH的比例是(3∶1)。其他混合溶剂如所列的。洗涤之后，以“标准方式”干燥表示树脂首先在空气中干燥(1小时)，随后在真空(通常用油泵)下干燥，直到达到完全干燥(最低30分钟，至O/N)。

C.氨基酸

氨基酸、Boc-和Fmoc-保护的氨基酸和侧链受保护的衍生物，包括N-甲基氨基酸和非天然氨基酸的那些，从商业供应商[例如Advanced ChemTech(Louisville，KY，USA)、Anaspec(San Jose，CA，USA)、Astatech(Princeton，NJ，USA)、Bachem(Bubendorf，Switzerland)、ChemImpex(Wood Dale，IL，USA)、Novabiochem(Merck KGaA的子公司，Darmstadt，Germany)、PepTech(Burlington，MA，USA)、Synthetech(Albany，OR，USA)]获得，或者通过本领域技术人员已知的标准方法合成。Ddz-氨基酸自Orpegen(Heidelberg，Germany)或Advanced ChemTech(Louisville，KY，USA)商购，或者使用标准方法用Ddz-OPh或Ddz-N₃合成(Birr，C.；Lochinger，W.；Stahnke，G.；Lang，P.Justus Liebigs Ann.Chem.1972，763，162-172.)。Bts-氨基酸通过已知方法合成(Vedejs，E.；Lin，S.；Klapara，A.；Wang，J.J.Am.Chem.Soc.1996，118，9796-9797；WO 01/25257，WO 2004/111077)。N-烷基氨基酸(特别是N-甲基氨基酸)可自多个供应商(Bachem、Novabiochem、Advanced ChemTech、ChemImpex)商购。此外，N-烷基氨基酸衍生物通过文献方法获得(Hansen，D.W.，Jr.；Pilipauskas，D.J.Org.Chem.1985，50，945-950.)。已经报道了Fmoc-N-MeSer和Fmoc-N-MeThr的改良的合成(Bahekar，R.H.；Jadav，P.A.；Patel，D.N.；Prajapati，V.M.；Gupta，A.A.Jain，M.R.；Patel，P.R.Tetrahedron Lett.2007，48，5003-5005.)。可以通过已知方法合成别苏氨酸和β-羟基缬氨酸(Shao，H.；Goodman，M.J.Org.Chem.1996，61，2582；Blaskovich，M.A.；Evindar，G.；Rose，N.G.W.；Wilkinson，S.；Luo，Y.；Lajoie，G..J.Org.Chem.1998，63，3631；Dettwiler；J.E.Lubell，W.D.J.Org.Chem.2003，68，177-179.)。可以使用文献方法获得β-甲基苯基丙氨酸和β-甲基酪氨酸的手性异构体(Dharanipragada，R.；Van Hulle，K.；Bannister，A.；Bear，S.；Kennedy，L.；Hruby，V.J.Tetrahedron 1992，48，4733-4748；Nicolas，E.；Russell，K.C.；Knollenberg，J.；Hruby，V.J.J.Org.Chem.1993，59，7565-7571.)。类似地，可以通过文献中描述的对映选择性合成方法来制备具有适合保护基的4，4，4-三氟苏氨酸的手性异构体(Xiao，N.；Jinag，Z.-H.；Yu，Y.B.Biopolymers(Pept.Sci.)2007，88，781-796.)。基于天然产物稻曲病菌毒素D(ustiloxin D)的合成中使用的类似转化，还可以从顺式L-异构体(2S，3R)实现并入L-苏氨酸(2S，3S)的别位异构体(Wandless，T.J.；等人J.Am.Chem.Soc.2003，115，6864-6865.)。

D.系链

从之前在国际专利申请WO 01/25257、WO 2004/111077、WO2005/012331、WO 2006/009645、WO 2006/009674和美国临时专利申请61/254,434中描述的方法获得了某些系链。

本发明化合物的示例性系链(T)包括(但不限于)以下：

其中Pg和Pg₂是氮保护基，例如(但不限于)Boc、Fmoc、Cbz、Ddz和Alloc。

对于本文公开的新系链部分的代表性合成，采用了实施例中提供的途径。尽管描述的途径通常说明具体保护策略，但是也可以采用本领域已知的其他适合的保护基。

E.固相和液相技术

用于合成本发明大环化合物的具体的固相技术(包括混合固相-液相方法)已经描述于国际专利公布WO 01/25257、WO 2004/111077、WO 2005/012331、WO 2005/012332、WO 2006/009645、WO2006/009674、WO 2008/033328、WO 2008/130464和美国临时专利申请61/254,434，其包括描述于WO 2004/111077和WO 2005/012331的纯化方法。在美国专利申请公布号2006/025566和US 2007/0021331中描述了液相合成途径，包括适合较大规模生产的方法。

3.分析方法

WO 01/25257、WO 2004/111077、WO 2005/012331和WO2005/012332中已经描述了用于表征本发明大环化合物的具体分析技术。

除非另外指出，¹H和¹³C NMR光谱记录于Varian Mercury 300MHz光谱仪(Varian，Inc.，Palo Alto，CA)，并对残余的溶剂质子信号内部参照。使用标准缩写提供¹H NMR数据，如下：化学位移(δ)ppm(多重性，积分，耦合常数(s))。使用以下缩写指示信号多重性：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，b或br＝光谱，以及m＝多重峰。可以使用本领域技术人员已知的适合的二维NMR技术确定有关分子在溶液中构象的信息。(Martin，G.E.；Zektzer，A.S.Two-Dimensional NMR Methods for Establishing MolecularConnectivity：A Chemist′s Guide to Experiment Selection，Performance，and Interpretation，John Wiley & Sons：New York，1988，ISBN0471187070.)。

使用

MS C18柱(或相当的)4.6×50mm(3.5μm)和指示的梯度方法在1mL/分钟运行的Waters

***2695上进行HPLC分析。Waters 996PDA提供了用于纯度评价的UV数据(WatersCorporation，Milford，MA)。对于某些分析，LCPackings(DionexCorporation，Sunnyvale，CA)分离器(50∶40∶10)允许流分成三部分。第一部分(50％)转向质谱仪(装备有APCI探针的

PlatformII MS)以确认特征。第二部分(40％)去往蒸发光散射检测器(ELSD，Polymer Laboratories，现在是Varian，Inc.的一部分，Palo Alto，CA，PL-ELS-1000^TM)以评估纯度，而最后一部分(10％)去往化学发光氮检测器(CLND，

Model 8060，Antek Instruments，Houston，TX，RoperIndustries，Inc.的一部分，Duluth，GA)以定量和评估纯度。每个检测器还可以根据需要分析的性质而单独使用。使用最新版本的Waters

软件包捕获和加工数据。

下面提供了用于分析本发明化合物的代表性标准HPLC条件：

典型的色谱条件

柱：XTerra RP18，3.5μm，4.6×100mm(或等同的)

检测(PDA)：220-320nm

柱温：35±10℃

注射体积：10μL

流速：1mL/分钟

运行时间：20.0分钟

数据采集时间：17.0分钟

流动相A：甲醇(或乙腈)

流动相B：水

流动相C：10％TFA/水

梯度A4

时间(分钟)	％A	％B	％C
				0.00	5.0	85.0	10.0
5.00	65.0	25.0	10.0
				9.00	65.0	25.0	10.0
14.00	90.0	0.0	10.0
				17.00	90.0	0.0	10.0
17.50	5.0	85.0	10.0
				20.00	5.0	85.0	10.0

梯度B4

时间(分钟)	％A	％B	％C
				0.00	5.0	85.0	10.0
6.00	50.0	40.0	10.0
				9.00	50.0	40.0	10.0
14.00	90.0	0.0	10.0
				17.00	90.0	0.0	10.0
17.50	5.0	85.0	10.0
				20.00	5.0	85.0	10.0

使用Waters FractionLynx***，在XTerra MS C18柱(或相当的)19×100mm(5μm)上对最终脱保护的大环进行制备型HPLC纯化。使用具有Waters 2767注射器/收集器和在2mL/分钟运行的Waters 515泵的At-Column-Dilution配制，进行注射。使用FractionLynx，通过MassLynx软件(版本3.5)控制质谱仪、HPLC和质量导向的级分收集。MS分析显示含有产物的级分(13x125mm管)在减压下，最通常在离心蒸发器***(Genevac HT-4，Thermo Savant Discovery，SpeedVac或相当的)上蒸发，或者可选地冻干。然后通过LC-MS-UV-ELSD-CLND分析全面分析化合物以进行特征确认、纯度和量的评估。

在具有允许最多十六(16)个样品同时运行的一次性二氧化硅或C18小柱的Isco CombiFlash 16x***上，进行自动化中压色谱纯化。MS光谱记录于Waters Micromass Platform II或ZQ***。HRMS光谱用VG Micromass ZAB-ZF光谱仪记录。使用ActivityBase数据库软件(IDBS，Guildford，Surrey，UK)存储和分析化学和生物信息。

表2总结了本发明代表性的化合物的分析数据。

表2.代表性的本发明化合物的分析数据

化合物	分子式	分子量	MS[(M+H)+]
				1300	C32H44N4O5	564.7	565
1301	C32H46N4O5	566.7	567
				1302	C32H46N4O5	566.7	567
1304	C33H44N4O5	576.7	577
				1305	C28H36N4O6	524.6	525
1311	C30H43N5O5	553.7	554
				1313	C32H44N4O5	564.7	565
1314	C32H44N4O5	564.7	565
				1315	C32H44N4O5	564.7	565
1316	C32H44N4O5	564.7	565
				1317	C31H40N4O5	548.7	549
1318	C31H42N4O5	550.7	551
				1319	C30H40N4O5	536.7	537
1320	C32H42N4O5	562.7	563
				1323	C32H44N4O5	564.7	565
1324	C30H40N4O6	552.7	553
				1325	C31H41N4O5F	568.7	569
1326	C31H41N4O5F	568.7	569

1327	C32H41N4O5F3	618.7	619
				1328	C31H43N5O5	565.7	566
1329	C28H40N6O5	540.7	541
				1330	C30H41N5O5	551.7	552
1331	C29H40N4O6	540.7	541
				1332	C29H40N4O5S	556.7	557
1333	C31H43N5O4	549.7	550
				1334	C32H44N4O5	564.7	565
1335	C33H46N4O4	562.7	563
				1336	C33H46N4O5	578.7	579
1337	C33H46N4O5	578.7	579
				1338	C32H46N4O5	566.7	567
1339	C31H44N4O6	568.7	569
				1340	C31H44N4O6	568.7	569
1341	C31H41N4O5F	568.7	569
				1342	C32H46N4O5	566.7	567
1343	C31H43N4O5F	570.7	571
				1344	C32H45N4O5F	584.7	585
1345	C31H42N4O5	550.7	551
				1346	C32H44N4O4	548.7	549
1347	C32H46N4O5	566.7	567
				1348	C32H46N4O5	566.7	567
1349	C32H43N4O5F3	620.7	621

1350	C30H40N4O6	552.7	553
				1351	C31H42N4O6	566.7	567
1352	C31H44N4O6	568.7	569
				1353	C31H42N4O5	550.7	551
1354	C31H44N4O5	552.7	553
				1355	C31H42N4O5	550.7	551
1356	C31H44N4O5	552.7	553
				1357	C31H44N4O5	552.7	553
1358	C32H46N4O5	566.7	567
				1359	C31H44N4O6	568.7	569
1360	C31H43N4O5F	570.7	571
				1361	C31H44N4O5	552.7	553
1362	C30H42N4O6	554.7	555
				1363	C30H41N4O5F	556.7	557
1364	C31H43N4O5F	570.7	571
				1365	C30H41N4O6F	572.7	573
1366	C30H40N4O5F2	574.7	575
				1367	C31H42N4O5	550.7	551
1368	C31H41N4O5F	568.7	569
				1369	C32H43N4O5F	582.7	583
1370	C32H46N4O5	566.7	567
				1371	C32H46N4O6	582.7	583
1372	C31H42N4O5F2	588.7	589

1373	C32H46N4O5	566.7	567
				1374	C32H43N5O5	577.7	578
1375	C33H45N5O5	591.7	592
				1376	C30H41N4O5F	556.7	557
1377	C30H41N4O5F	556.7	557
				1378	C30H41N4O5F	556.7	557
1379	C31H43N4O5F	570.7	571
				1380	C31H43N4O5F	570.7	571
1381	C31H43N4O5F	570.7	571
				1382	C31H42N4O5	550.7	551
1383	C31H43N4O6Cl	603.1	603
				1384	C30H43N5O5	553.7	554
1385	C29H41N5O5	539.7	540
				1387	C31H43N4O6F	586.7	587
1388	C32H44N4O5	564.7	565
				1389	C32H46N4O5	566.7	567
1390	C32H46N4O5	566.7	567
				1391	C31H43N4O5F	570.7	571
1392	C31H42N4O5F2	588.7	589
				1393	C32H46N4O5	566.7	567
1394	C31H44N4O5	552.7	553
				1395	C30H43N5O5	553.7	554
1396	C31H40N4O5F2	586.7	587

1397	C29H40N4O5	524.7	525
				1398	C32H46N4O5	566.7	567
1399	C29H42N4O5S	558.7	559
				1400	C31H43N4O5Cl	587.1	587
1401	C31H44N4O6	568.7	569
				1402	C31H41N4O5F3	606.7	607
1403	C31H41N4O5F3	606.7	607
				1404	C32H46N4O5	566.7	567
1405	C28H41N5O5S	559.7	560
				1406	C33H44N5O5F	609.7	610
1407	C33H44N5O5F	609.7	610
				1408	C32H44N6O5	592.7	593
1409	C34H47N5O5	605.8	606
				1411	C31H41N4O5F3	606.7	607
1412	C32H43N4O5F3	620.7	621
				1413	C34H45N5O5	603.8	604
1414	C35H46N4O5	602.8	603
				1415	C35H46N4O5	602.8	603
1416	C33H44N4O5S	608.8	609
				1417	C29H42N4O5S	558.7	559
1418	C32H46N4O6	582.7	583
				1419	C30H39N4O5F	554.7	555
1420	C31H42N4O5F2	588.7	589

1421	C31H42N4O5F2	588.7	589
				1422	C31H42N4O5	550.7	551
1423	C32H45N4O5F	584.7	585
				1424	C32H45N4O5F	584.7	585
1425	C34H47N4O5F	610.8	611
				1426	C36H49N5O5	631.8	632
1427	C32H41N5O5	575.7	576
				1428	C33H44N5O5F	609.7	610
1429	C33H44N5O5F	609.7	610
				1430	C31H42N4O5	550.7	551
1431	C32H45N4O5F	584.7	585
				1432	C30H39N4O5Cl	571.1	571
1433	C30H47N4O5Cl	579.2	579
				1434	C31H42N4O5FCl	605.1	605
1435	C31H42N4O5FCl	605.1	605
				1436	C31H42N4O5F2	588.7	589
1437	C31H42N4O5F2	588.7	589
				1438	C30H38N4O5F2	572.6	573
1439	C31H41N4O5F3	606.7	607
				1440	C31H41N4O5F3	606.7	607
1441	C32H39N5O5	573.7	574
				1442	C33H42N5O5F	607.7	608
1443	C33H42N5O5F	607.7	608

1444	C32H45N4O6F	600.7	601
				1445	C31H42N4O6	566.7	567
1446	C32H45N4O6F	600.7	601
				1447	C28H38N4O5S	542.7	543
1448	C29H41N4O5FS	576.7	577
				1449	C29H41N4O5FS	576.7	577
1450	C31H43N4O5F	570.7	571
				1451	C32H45N4O5F	584.7	585
1453	C31H44N4O6	568.7	569
				1454	C32H42N5O5F	595.7	596
1455	C33H44N5O5F	609.7	610
				1456	C32H43N5O6	593.7	594
1457	C31H43N4O5F	570.7	571
				1458	C32H45N4O5F	584.7	585
1459	C31H44N4O6	568.7	569
				1460	C30H40N4O5FCl	591.1	591
1461	C31H42N4O5FCl	605.1	605
				1462	C30H41N4O6Cl	589.1	590
1463	C30H40N4O5F2	574.7	575
				1464	C31H42N4O5F2	588.7	589
1465	C30H41N4O6F	572.7	573
				1466	C30H39N4O5F3	592.6	593
1467	C31H41N4O5F3	606.7	607

1468	C30H40N4O6F2	590.7	591
				1469	C32H40N5O5F	593.7	594
1470	C33H42N5O5F	607.7	608
				1471	C32H41N5O6	591.7	592
1472	C31H43N4O6F	586.7	587
				1473	C32H45N4O6F	600.7	601
1474	C31H44N4O7	584.7	585
				1475	C28H39N4O5FS	562.7	563
1476	C29H41N4O5FS	576.7	577
				1477	C28H40N4O6S	560.7	561
1478	C32H45N4O5F	584.7	585
				1479	C33H48N4O5	580.8	581
1480	C32H45N4O5F	584.7	585
				1481	C34H47N5O5	605.8	606
1482	C33H48N4O5	580.8	581
				1483	C32H45N4O5Cl	601.2	601
1484	C32H44N4O5F2	602.7	603
				1485	C34H45N5O5	603.8	604
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1490	C30H38N4O5F2	572.6	573

1491	C32H40N5O5F	593.7	594
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1879	C31H37N4O5F	564.6	565

1880	C34H43N5O5	601.7	602
				1881	C33H44N4O5	576.7	577
1882	C32H44N4O5	564.7	565
				1883	C32H43N4O5F	582.7	583
1884	C31H36N4O5F2	582.6	583
				1885	C34H43N5O5F4	677.7	678
1888	C33H45N4O5F3	634.7	635
				1889	C33H45N5O5	591.7	592
1890	C34H44N5O5F3	659.7	660
				1891	C35H46N5O5F3	673.8	674
1892	C33H44N4O5F4	652.7	653
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1894	C34H44N6O5	616.8	617
				1895	C34H45N5O5	603.8	604
1896	C35H46N6O5	630.8	631
				1897	C33H44N5O5F	609.7	610
1898	C31H41N4O5F	568.7	569
				1899	C31H42N4O5	550.7	551
1900	C33H43N5O5	589.7	590
				1901	C33H44N4O5	576.7	577
1902	C35H45N5O5	615.8	616
				1903	C32H43N4O5F	582.7	583
1904	C32H43N4O5Cl	599.2	599

1905	C32H45N5O5	579.7	580
				1906	C30H43N5O5	553.7	554
1907	C31H43N5O5	565.7	566
				1909	C33H45N5O5	591.7	592
1911	C32H43N4O5F3	620.7	621
				1912	C34H45N4O5F3	646.7	647
1913	C33H44N4O5F2	614.7	615
				1914	C33H46N4O6	594.7	595
1916	C32H42N4O5F2	600.7	601
				1918	C31H37N4O5F	564.6	565
1919	C31H36N4O5F2	582.6	583
				1921	C33H42N4O5F4	650.7	651
1922	C34H46N6O5	618.8	619
				1925	C32H42N4O5F4	638.7	639
1927	C34H47N5O6	621.8	622
				1928	C32H46N4O6	582.7	583
1929	C30H37N4O5F	552.6	553
				1930	C32H44N4O5	564.7	565

注

1.通过ActivityBase软件(ID Business Solutions，Ltd.，Guildford，Surrey，UK)从结构自动计算分子式和分子量。

2.使用标准方法从LC-MS分析获得M+H。

3.所有分析针对制备型纯化之后的材料进行。

4.生物学方法

利用下文方法中描述的竞争性放射性配体结合测定、荧光测定、水母发光蛋白功能测定或IP3反向激动剂测定，评价本发明化合物与人生长素释放肽受体相互作用的能力。如果需要，可以高通量方式进行此类方法，以允许同时评价许多化合物。

用于人(GHS-R1a)、猪和大鼠GHS-受体的具体测定方法(美国专利号6,242,199、国际专利申请号WO 97/21730和97/22004)以及犬GHS-受体的具体测定方法(美国专利号6,645,726)及其在一般鉴定其在激动剂和拮抗剂中的用途是已知的。

可以利用WO 2005/114180中描述的方法鉴定功能性生长素释放肽拮抗剂，而可以使用WO 2004/056869的方法测定受体的反向激动剂。

以下实施例中还描述了用于测定与人生长素释放肽受体相互作用的本发明化合物的功能活性的适当方法。

(例如)使用文献中描述的那些肥胖的动物模型，可以说明本发明化合物的体内效力。(WO 2004/056869；Nakazato，M.；Murakami，N.；Date，Y.；等人Nature 2001，409，194-198；Murakami，N.；Hayashida，T.；Kuroiwa，T.；等人J.Endocrinol.2002，174，283-288；Asakawa，A.；Inui，A.；Kaga，T.；等人Gut 2003，52，947-952；Sun，Y.；Ahmed，S.；Smith，R.G.Mol.Cell Biol.2003，23，7973-7981；Wortley，K.E.；Anderson，K.D.；Garcia，K.；等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2004，101，8227-8232；Halem，H.A.；Taylor，J.E.；Dong，J.Z.；Shen，Y.；Datta，R.；Abizaid，A.；Diano，S.；Horvath，T.；Zizzari，P.；Bluet-Pajot，M.-T.；Epelbaum，J.；Culler，M.D.Eur.J.Endocrinol.2004，151，S71-S75；Helmling，S.；Maasch，C.；Eulberg，D.；等人Proc.Natl.Acad.Sci USA 2004，101，13174-13179；Shearman，L.P.；Wang，S.P.；Helmling，S.；等人Endocrinology2006，147，1517-1526；Reuter，T.Y.Drug Disc.Today：Dis.Models 2007，4，3-8；Shafrir，E.；Ziv，E.Am.J.Physiol.2009，296，E1450-E1452.)。类似地，许多动物模型可用于研究这些化合物在糖尿病中的效应。(Nandi，A.等人Physiol.Rev.2004，84，623-647；Freude，S.；Schubert，M.Drug Disc.Today：Dis.Models 2007，4，9-16；Muniyappa，R.；Lee，S.Chen，H.；Quon，M.J.Am.J.Physiol.2008，294，E15-E26.)。

B1.竞争性放射性配体结合测定(生长素释放肽受体)

人生长素释放肽受体(GRLN，生长激素受体促分泌素受体，hGHS-R1a)的竞争性结合测定可按文献中描述的测定类似于进行。(Bednarek MA等人J.Med.Chem.2000，43，4370-4376；Palucki，B.L.等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2002，11，1955-1957.)。

材料

从用人生长素释放肽受体(hGHS-R1a)稳定转染的HEK-293细胞制备膜(GHS-R/HEK293)。这些膜由PerkinElmerBioSignal(#RBHGHSM，lot#1887)提供并以0.71μg/测定点的量使用。

1.[¹²⁵I]-生长素释放肽(PerkinElmer，#NEX-388)；终浓度：0.0070-0.0085nM

2.生长素释放肽(Bachem，#H-4864)；终浓度：1μM

3.多屏收获板-GF/C(Millipore，#MAHFC 1H60)

4.深孔聚丙烯滴定板(Beckman Coulter，#267006)

5.顶部密封-A(PerkinElmer，#6005185)

6.底部密封(Millipore，#MATAH0P00)

7.MicroScint-0(PerkinElmer，#6013611)

8.结合缓冲液：25mM Hepes(pH 7.4)、1mM CaCl₂、5mM MgCl₂、2.5mM EDTA、0.4％BSA

测定体积

以300μl过滤测定形式进行竞争实验

1.220μL稀释于结合缓冲液中的膜

2.40μL稀释于结合缓冲液中的化合物

3.40μL稀释于结合缓冲液中的放射性配体([¹²⁵I]-生长素释放肽)

本发明化合物的典型最终测试浓度(N＝1)：

10、1、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005、0.002、0.001μM。

化合物处理

以在100％DMSO中稀释的10mM储存浓度提供在干冰上冷冻的化合物，并在-80℃储存至测试日。在测试日，使化合物在室温下融化过夜，然后根据期望的测试浓度在测定缓冲液中稀释。在这些条件下，测定中的DMSO最大终浓度是0.1％。

测定方案

在深孔板中，220μL的稀释细胞膜(终浓度：0.71μg/孔)与40μL结合缓冲液(总结合，N＝5)、1μM生长素释放肽(非特异性结合，N＝3)或适当浓度的测试化合物(对于每种测试浓度，N＝2)混合。通过向每个孔添加40μL[¹²⁵I]-生长素释放肽(终浓度0.0070-0.0085nM)来引发反应。将板用顶部密封-A密封，轻轻涡旋，并在室温孵育30分钟。通过使用Tomtec收获器，经多屏收获板板(预先浸泡于0.5％聚乙烯亚胺)过滤样品而停止反应，用500μL冷50mM Tris-HCl(pH 7.4，4℃)洗涤9次，然后使板在通风橱中空气干燥30分钟。在向每个孔添加25μL MicroScint-0之前，将底部密封应用至板。然后板用顶部密封-A密封，并使用60秒的计数延迟在TopCount微板闪烁和发光计数器(PerkinElmer)上对每个孔计数30秒。结果表示为每分钟计数(cpm)。

使用可变斜率非线性回归分析，通过GraphPad Prism(GraphPadSoftware，San Diego，CA)分析数据。针对[¹²⁵I]-生长素释放肽使用0.01nM的K_d值(之前在膜表征中测定)计算K_i值。

使用下式计算D_最大值：

其中总结合和非特异性结合分别表示在1μM生长素释放肽不存在或存在下获得的cpm。

实施例中提供了使用该方法检验代表性的本发明化合物的结果。

B2.荧光功能性测定(生长素释放肽受体)

设备

1.ImageTrak Epi-荧光***(Perkin-Elmer)

2.MultiDrop TiterTek

3.CO₂培养箱：5％CO₂，加湿，37℃

材料

1.无酚红的Hanks’BSS(Life Technologies)

2.Hepes缓冲液

3.丙磺舒(Sigma)

4.FLIPR钙-3测定试剂盒(Molecular Devices#R-8091)

5.Falcon细胞培养96-孔黑色/透明底板

6.0.05％胰蛋白酶-EDTA

7.细胞：表达GHS-R1a受体的HEK293细胞(Perkin-ElmerBioSignal)在含有10％FBS、1％丙酮酸钠、1％NEAA和400μg/mL遗传霉素的DMEM(Dulbecco改良的Eagles培养基)中生长

8.生长素释放肽(参考激动剂；Bachem，#H-4864)

9.[D-Lys³]-GHRP-6(参考拮抗剂，Phoenix#031-22)

10.测定缓冲液：HBSS-含有2.5mM丙磺舒和0.1％BSA(牛血清白蛋白)的20mM Hepes；pH 7.4

化合物处理

提供在干冰上冷冻的化合物储液(10mM，于100％DMSO中)，并在使用之前储存在-80℃。通过在26％DMSO中100倍稀释，从储液制备浓度为100μM的母液。然后通过在测定缓冲液中适当稀释来准备测定板。

测试化合物(激动剂)的通常最终测试浓度(N＝10)：

1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0.0003、0.0001、0.00003μM。

测试化合物(拮抗剂)的通常最终测试浓度(N＝10)：

10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0.0003μM。

细胞准备

如上所示将细胞维持培养。在实验前一天收获70-90％汇合的细胞。除去生长培养基，且用不含Ca⁺²和Mg⁺²的PBS简单冲洗细胞。添加0.05％胰蛋白酶，并将板在37℃下孵育5分钟以使细胞脱离。添加补充有10％FBS的DMEM培养基，以失活胰蛋白酶并测定细胞浓度。将接种物调节至200细胞/μL的终浓度，并以每孔200μL分配入96孔板。该板在37℃下孵育过夜。在实验当天，细胞汇合必须在70-95％。

测定方案

将板从培养箱取出，并通过倒置板而除去培养基。加载50μL钙-3染料，然后在37℃孵育1小时。再次倒置板，然后添加25μL测定缓冲液。然后将板转移至ImageTrak***，进行分析。对于激动剂测试，在读数十(10)秒之后，将25μL 2x测试化合物或对照注射入测定板。监测荧光另外50秒。每两(2)秒进行一次读数，每个测定点共30次读数。

对于拮抗剂测试，在读数十(10)秒之后，将12.5μL 3x测试化合物或对照注射入测定板，并使之反应三(3)分钟。此后，注射4nM生长素释放肽(对应EC₈₀)并监测荧光另外60秒。每两(2)秒进行一次读数，每个数据点共125次读数。

结果的分析和表达

对于激动剂，针对每个测定点获得的值反映荧光读数的最大-最小，其中最大表示进行的30次读数的最大值，而最小表示在注射化合物之前从前5次读数中观察到的最小值。使用GraphPadPrism(GraphPad Software，San Diego，CA)，通过非线性回归分析(S型剂量-响应)来分析浓度响应曲线。使用GraphPad计算EC₅₀值。

使用下式计算E_最大值：

其中基础和Ago(E_最大)分别表示在1μM生长素释放肽不存在或存在下获得的平均计数。

对于拮抗剂，针对每个测定点获得的值反映荧光读数的最大-最小，其中最大表示在以EC₈₀注射生长素释放肽之后获得的最大值，而最小表示在注射化合物之前从前5次读数中观察到的最小值。使用GraphPad Prism(GraphPad Software，San Diego，CA)，通过非线性回归分析(S型剂量-响应)来分析浓度响应曲线。使用GraphPad计算EC₅₀值。

使用下式计算I_最大值：

其中基础和Ago(EC₈₀)分别表示，在第二添加步骤不存在或存在5nM生长素释放肽时获得的平均计数。

B3.水母发光蛋白功能测定(生长素释放肽受体)

发现结合GRLN(GHS-R1a)受体的本发明化合物的功能活性，可以使用以下描述的方法测定(LePoul，E.；等人J.Biomol.Screen.2002，7，57-65；Bednarek，M.A.；等人J.Med.Chem.2000，43，4370-4376；Palucki，B.L.；等人Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，1955-1957.)。

材料

使用表达人生长素释放肽受体的AequoScreen^TM(Perkin-Elmer，Waltham，MA)细胞系(细胞系ES-410-A；受体登记号60179)制备膜。通过将人生长素释放肽受体转染进入共表达G ₁₆和线粒体靶向的水母发光蛋白的CHO-K1细胞(Ref#ES-WT-A5)来构建该细胞系。

1.生长素释放肽(参考激动剂；Bachem，#H-4864)

2.测定缓冲液：含有0.1％BSA(牛血清白蛋白)的DMEM(Dulbecco改良的Eagles培养基)；pH 7.0。

3.腔肠素(Molecular Probes，Leiden，The Netherlands)

以两次重复测试的测试化合物的通常终浓度：0.1、0.3、1、3、10、30、100、300、1000、3000nM

化合物处理

通常提供在干冰上冷冻的化合物储液(10mM，于100％DMSO中)，并在使用之前储存在-20℃。通过稀释至在30％DMSO终浓度，从储液制备浓度为1mM的母液。然后，通过在含有0.1％BSA的DMEM培养基中适当稀释来制备测定板。在这些条件下，测定中DMSO的最大终浓度＜0.6％。

细胞准备

从含有补充了5mM EDTA的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)的培养板收集AequoScreen^TM细胞，以1000X g沉淀2分钟，以5×10⁶细胞/ml的密度重悬于含有0.1％BSA的DMEM-Ham’s F12，并在5μM腔肠素存在下在室温孵育至少4小时。加载之后，将细胞用测定缓冲液稀释至5×10⁵细胞/ml的浓度。

测定方案

对于激动剂测试，将50μl细胞悬浮液与50μl适当浓度的测试化合物或生长素释放肽(参考激动剂)在96孔板中混合(一式两份样品)。将几个浓度的生长素释放肽(参考激动剂)与测试化合物同时测试，以验证实验。使用Hamamatsu功能药物筛选***6000读数器(HamamatsuPhotonics K.K.，Japan)记录响应于生长素释放肽或测试化合物而从受体激活导致的光发射。

对于拮抗剂测试，在激动剂测试结束之后大约15分钟孵育以及如上段所述测量随之而来的从受体激活导致的光发射之后，将适当EC₈₀浓度的生长素释放肽(即，3.7nM；100μL)注射入含有测试化合物的100μL细胞悬浮液(一式两份样品)，。使用[D-Lys³]-GHRP-6作为参考拮抗剂。

为了标准化跨板和跨不同实验记录的光的发射(“100％信号”的测定)，一些孔含有100μM毛地黄皂苷、饱和浓度的ATP(20μM)和浓度相当于测试验证期间获得的EC₅₀的生长素释放肽。板还含有浓度相当于测试验证期间获得的EC₈₀的参考激动剂和/或拮抗剂。

结果的分析和表达

结果表示为相对光单位(RLU)。使用GraphPad Prism(GraphPadSoftware，San Diego，CA)，通过基于方程式E＝E_最大/(1+EC₅₀/C)n的非线性回归分析(S型剂量-响应)来分析浓度响应曲线，其中E是在给定激动剂浓度(C)测量的RLU值，E_最大是最大响应，EC₅₀是产生50％刺激的浓度，n是斜率指数。对于激动剂测试，每个浓度的测试化合物的结果表示为相对于浓度等于EC₈₀(即，3.7nM)的生长素释放肽诱导的信号的百分比激活。报告了EC₅₀、Hill斜率和％E_最大值。

对于拮抗剂测试，每个浓度的测试化合物的结果表示为相对于浓度等于EC₈₀的生长素释放肽诱导的信号的百分比抑制。实施例中提供了代表性的本发明化合物的结果。

B4.生长素释放肽受体反向激动剂测定

可以使用以下文献中描述的方法测定本发明化合物在生长素释放肽受体的反向激动剂活性：国际专利申请公布号WO 2004/056869和Holst，B.；Cygankiewicz，A.；Halkjaer，T.；Ankersen，A.；Schwartz，T.W.Mol.Endocrinol.2003，17，2201-2210。作为替代，可以利用如文献(Jensen，A.A.，等人J.Biol.Chem.2000，275，29547-29555)报道的磷脂酰肌醇水解测定来评估本发明化合物的反向激动剂活性。此外，如美国专利号5,707,798；5,912,132；5,955,281和国际专利申请公布号WO 2007/079239中描述的，可以使用称为受体选择和扩增技术(R-SAT)的功能性受体测定来评价这些化合物。

此外，可以利用以下方法来测定反向激动剂活性。(Thomsen，W.；等人Curr.Opin.Biotechnol.2005，16，655-665；Tozawa-Takahashi F；等人，11th SBS Annual Conference.September 2005，Geneva；Trinquet，E.；Fink，M.；Bazin，H.；等人Anal.Biochem.2006，358，126-135；Bergsdorf，C.；Kropp-Goerkis，C.；Kaehler，I.；Ketscher，L.；Boemer，U.；Parczyk，K.；Bader，B.Assay Drug Dev.Technol.2008，6，39-53.)。

细胞刺激：

1.通过倒置从板去除培养基。

2.添加70μl化合物/孔。

3.在37℃孵育30分钟。

4.通过添加15μl裂解缓冲液/孔而终止反应。

5.添加15μl d2/孔。

6.添加15μl抗-IP1穴状化合物/孔。

7.在室温下在100RPM的定轨振荡器上孵育1小时。

8.在读板器(Tecan GeniosPro或类似的)中读取荧光。

使用HTRF IP-1试剂盒(CisBio目录号62P1APEC)进行以上顺序。对于多个测试化合物的同时测定，可以在该测定中利用96孔板(具有平底孔的白板，Falcon#353296)。这些板以100000HEK-GHSR1稳定细胞/孔接种过夜。

*每个板的孔A1和A2用作阴性对照(没有d2的孔)。

通常以下述浓度一式两份测试化合物：

0、1nM、10nM、30nM、100nM、300nM、1μM、10μM。

化合物稀释：

化合物以10mM储存在100％DMSO中。

在100％DMSO中第1稀释1/10(1mM终浓度)。

在H₂O中第2稀释1/10(0.1mM终浓度)。

在刺激缓冲液中96孔板中进行其他稀释。

实施例中提供了代表性的本发明化合物的结果。

B5.血浆蛋白结合

药物的药物代谢动力学和药物动力学性质主要是药物与血浆或血清蛋白(例如白蛋白和α₁-酸性糖蛋白)的可逆结合的函数。一般而言，只有未结合的药物可用于跨细胞膜扩散或运输，并且用于在药理学靶位上的相互作用。另一方面，因为只有未结合的药物可用于肾小球过滤和(在一些情况下)肝清除，具有低血浆蛋白结合的药物一般具有大容量的分布和快速清除。因此，血浆蛋白结合的程度可以影响效力、分布和清除。对于大部分药品，血浆蛋白结合的细想范围在87-98％的范围内。

使用人血浆进行蛋白结合研究。简言之，使用96孔微量板在37℃下孵育各种浓度的测试品60分钟。在该研究中，10μM的浓度是要采用的通常选择。通过平衡透析分离结合和未结合的级分，其中通过LC-MS或LC-MS-MS分析定量未结合级分中保留的浓度。使用具有已知的血浆蛋白结合值的药物(例如奎宁(～35％)、华法林(～98％)和萘普生(～99.7％))作为参考对照。

表3总结了代表性的本发明化合物的结果。

表3.代表性的本发明化合物的人血浆蛋白结合

化合物	结合(％)
		1453	75.7
1503	77.9
		1505	96.4
1688	90.9
		1692	98.2
1700	99.1
		1703	99.5
1707	99.6
		1711	97.4
1712	97.6
		1720	99.3
1726	99.8
		1751	97.4
1754	99.4
		1755	99.3
1777	95.8
		1778	92.4
1780	93.9

1843	92.1
		1848	79.3
1876	95
		1878	87.3
1903	84.1

B6.有关细胞色素P450抑制的测定

细胞色素P450酶参与I相药物代谢。大部分药物-药物相互作用是基于代谢的，而且，这些相互作用通常涉及细胞色素P450的抑制。六种CYP450酶(CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)通常负责大多数药物的代谢和相关的药物-药物相互作用。测定本发明化合物与细胞色素P450代谢酶的各种代谢上重要的同种型结合的测定可商购，例如NoAb BioDiscoveries(Mississaugua，ON，Canada)和Absorption Systems(Exton，PA，USA)。而且，已经在文献中描述或综述了许多适当方法。(White，R.E.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.2000，40，133-157；Li，A.P.Drug.Disc.Today 2001，6，357-366；Turpeinen，M.；Korhonen，L.E.Tolonen，A.；等人Eur.J.Pharm.Sci.2006，29，130-138.)。

实验方法的关键方面如下：

1.对从表达个体人CYP-450亚型的昆虫细胞制备的微粒体(

BD Gentest，Becton-Dickinson)进行测定，所述亚型特别是：

-CYP亚型：1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1、3A4

-通常针对CYP-3A4测试两种底物，因为该酶表现出复杂的抑制动力学

2.通过荧光检测，测定监测了微粒体与特定CYP底物孵育之后荧光代谢物的形成。

3.使用3倍连续稀释，以8个测试浓度两次重复测试本发明化合物(浓度范围0.0457至100μM)。

4.对于每种CYP-450酶，以8个测试浓度两次重复测试特定抑制剂，作为阳性对照。

5.通过％抑制与对数浓度(M)曲线的非线性回归分析，计算抑制50％代谢物形成的抑制剂或测试化合物的浓度(IC₅₀)。

下列表4a和表4b总结了代表性的本发明化合物的结果。

表4a.代表性的本发明化合物的细胞色素P450结合

化合物	IC₅₀CYP 3A4^a(μM)	IC₅₀CYP 2D6^b(μM)
			1453	13.4	9.21
1503	14.3	55.8
			1505	0.7	2.1
1688	8.5	20.2
			1777	6	11.8
1778	7.7	21.1
			1780	6	35.7
1843	6.5	7.7
			1848	8	14.1
1876	8.5	23.1
			1878	11.6	45.3
1903	9	8
			1918	16.3	8.1
1929		25.7

^a硝苯吡啶用作底物(也可以使用咪达***)

^b右美沙芬用作底物

直到测试的最高浓度(100μM)，没有获得对测试的其他CYP亚型的结合。

表4b.代表性的本发明化合物的细胞色素P450结合

化合物	IC₅₀CYP 3A4^a(μM)	IC₅₀CYP 2D6^b(μM)
			1318	3.9	＞5
1319	8.0	19.1
			1324	＞5	＞5
1325	＞3.1	＞5
			1326	2.2	＞5
1327	＞17.7	＞25

1340	17.2	13.3
			1350	5.7	7.9
1358	1.6	＞20
			1375	8.8	＞20
1390	6.9	＞20
			1399	2.3	＞20
1413	1.0	14.7
			1418	0.9	14.5
1428	0.8	9.1
			1429	0.7	＞20
1432	1.2	5.2
			1433	2.6	3.1
1453	3.7	9.2
			1479	1.5	＞20
1490	1.4	6.3
			1501	1.5	＞20
1504	1.4	12.7
			1515	1.1	＞8
1526	1.4	＞20
			1601	2.6	＞5
1619	0.6	＞20
			1693	2.2	-
1712	5.8	-
			1720	1.6	-
1729	1.9	-
			1730	1.6	-
1732	2.9	-
			1919	11.5	-

^a咪达***用作底物(还可以采用硝苯吡啶)

^b右美沙芬用作底物

-指示未使用该亚型测试

B7.Caco-2通透性的测定

衍生自人结肠直肠癌的Caco-2细胞系已经成为完善的用于预测跨人肠的药物吸收的体外模型(Sun，D.；Yu，L.X.；Hussain，M.A.；Wall，D.A.；Smith，R.L.；Amidon，G.L.Curr.Opin.Drug Discov.Devel.2004，7，75-85；Bergstrom，C.A.Basic Clin.Pharmacol.Toxicol.2005，96，156-61；Balimane，P.V.；Han，Y.H.；Chong，S.AAPS J.2006，8，E1-13；Shah，P.；Jogani，V.；Bagchi，T.；Misra，A.Biotechnol.Prog.2006，22，186-198.)。当在半透膜上培养时，Caco-2细胞分化成高官能化的上皮障碍，其具有与小肠柱状上皮相似的显著的形态和生化。可以使用完全分化的细胞单层评估新化合物的膜运输性质。此外，已经显示，从Caco-2细胞运输研究获得的表观渗透系数(P_app)与人的肠吸收合理相关。

利用Caco-2细胞测定本发明化合物通透性的测定可商购，例如NoAb BioDiscoveries(Mississaugua，ON，Canada)和AbsorptionSystems(Exton，PA，USA)。

可选地，可以利用平行的人工膜通透性测定(PAMPA)来评估肠的通透性(Avdeef，A.Expert Opin.Drug.Metab.Toxicol.2005，1，325-342.)。

方法

通过在置于两个(供体和受体)室之间的膜上培养细胞来测定Caco-2细胞层的通透性。通常将候选药物添加至细胞层的顶(A)侧，并且经孵育时间测量其在基底外(B)侧中的出现。该方向的通透性代表肠吸收。还可以测定从Caco-2细胞的基底外侧到顶侧的通透性。与基底外侧到顶侧P_app相比，更高的顶侧到基底外侧P_app指示载体介导的运输。当相对于顶侧到基底外侧P_app发现更高的基底外侧到顶侧P_app时，表明P-gp介导的运输。

一式两份测试本发明化合物在顶侧到基底外侧以及基底外侧到顶侧方向的通透性(10μM)。在37℃孵育开始(0分钟)和60分钟之后，从供体和受体室收集样品，并在-70℃储存，直至生物分析为止。通过LC-MS-MS进一步分析从Caco-2通透性测定产生的每种测试化合物样品。平行测定[³H]-甘露糖醇和[³H]-心得安的通透性，作为对照。

使用以下方程式确定每种化合物和放射性标记的标准品的透性系数(P_app)：

P_{app} = \frac{dQ}{dT} x 1 / C_{i} x 1 / A

其中dQ/dT表示渗透率，C_i指示供体区室中的初始浓度，并且A表示滤器的表面积。C_i由添加至供体区室之前取得的一式两份样品的平均浓度确定。通过绘制受体区室中测量的化合物随时间的累积量并通过线性回归分析测定直线斜率，来计算渗透率。报道了每种化合物和标准品的一式两份的和平均的顶侧到基底外侧P_app和基底外侧到顶侧P_app。

为了进一步确定Pgp的参与，可以在本评估中使用Pgp的抑制剂(例如环孢菌素A)，并比较有和没有抑制剂时的结果。表5总结了代表性的本发明化合物的结果。

表5.代表性的本发明化合物的Caco-2通透性

a三次实验的平均值b环孢菌素A

B8.人肝微粒体中的代谢稳定性

肝是负责外源性代谢的I相(氧化)和II相(葡糖醛酸化)酶活性的主要部位。人肝微粒体用作候选药物代谢活性的体外筛选。可以对来自其他物种(例如，用于体内研究的那些)的微粒体进行类似研究，以确定稳定性概况中任何显著的物种差异。本研究的目的是测量代表性的本发明化合物的广谱代谢稳定性。

实验设计的主要方面总结如下：

●人肝微粒体(15例男性和女性供体的混合池)购自In VitroTechnologies(Baltimore，MD)。

-针对I相(Cyp2A6、2D6、2E1、1A2、2C19、3A4、4A)和II相(葡糖醛酸化)酶活性而表征的微粒体。

●使用在100mM磷酸钾缓冲液(1.5mM NADPH，8mM MgCl₂，pH 7.4，37℃)中终浓度为0.8mg/mL的微粒体进行测定。

●以单一浓度为5μM(0.05％DMSO)，在一式两份样品中测试化合物。

●测试品与微粒体在37℃孵育。在0、15和30分钟收集样品。

●通过LC/MS/MS，与内部标准品相比较，分析测试化合物和心得安(阳性对照)样品。

●通过在时间＝0、15和30分钟处保留的％化合物获得的代谢降解曲线的非线性回归分析，测定代谢半衰期。

表6提供了针对代表性的本发明化合物获得的结果。

表6.代表性本发明化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性

B9.药物代谢动力学分析

本发明化合物及其药物组合物的药物代谢动力学(PK)行为可以通过本领域技术人员公知的方法确定，并用于研究这些物质静脉内、皮下和口服施用的药物代谢动力学参数(清除半衰期、总血浆清除等)(Wilkinson，G.R.“Pharmacokinetics：The Dynamics of DrugAbsorption，Distribution，and Elimination”，Goodman & Gilman′s ThePharmacological Basis of Therapeutics，第十版，Hardman，J.G.；Limbird，L.E.，编，McGraw Hill，Columbus，OH，2001，第1章.)。还参见美国专利号7,476,653；7,491,695；国际专利申请WO 2008/033328和美国专利申请公布2008/0194672。作为实例，化合物1505具有以下PK概况。

化合物	t_1/2(分钟)	Cl(mL/分钟/kg)	口服F(％)
				1505	64	23	18

实施例中提供了其他代表性的本发明化合物的PK参数的测定。

B10.针对大鼠胃底的离体效价评价

通过在电场刺激(EFS)存在或不存在下，在离体器官浴中处理大鼠胃底条，使用该方法以提供本发明化合物作为生长素释放肽拮抗剂的效价的其他评价。使用生长素释放肽刺激组织活性，然后研究各种浓度的测试化合物的能力。

方法

平行于环状肌纤维，从成年雄性Wistar大鼠的胃切下胃底条(大约0.4×1cm)。将它们置于10ml组织浴中的两个铂环电极之间，间隔1em(Radnoti，ADInstruments，USA)，所述组织浴含有经在O₂中5％CO₂鼓泡并维持在37℃的Krebs溶液。将组织在1.5g静息张力下悬浮。与力传感器等容积测量张力变化，并用PowerLab 8/30数据捕获***(ADInstruments，USA)记录。使组织平衡60分钟，期间每15分钟更换一次浴溶液。

通过以70V的最大有效电压施加0.5ms脉冲、5Hz频率，实现EFS。以3分钟间隔应用EFS 30秒，持续30分钟的初始期。该初始期与浴溶液的洗出间隔5分钟。然后，开始第二个刺激期。在获得一致的EFS-引起的收缩之后(在3或4次30秒刺激之后)，研究了经30分钟时段，非累积应用的作为阳性对照的生长素释放肽、各种浓度(例如0.01-10μM)的测试化合物与生长素释放肽、L-NAME(300μM，作为对照)或其各自的媒介物对EFS响应的影响。测量了对物质的响应并表示为3至4个对EFS的前药响应的平均值的％。所有化合物以1mM溶解于蒸馏水或MeOH，作为储液。

结果

表7提供了代表性的本发明化合物对生长素释放肽诱导的收缩的抑制的IC₅₀值。

表7.代表性的本发明化合物对大鼠胃底收缩的抑制

化合物	IC₅₀(nM)
		1315	75
1319	72
		1325	29
1364	200
		1391	65
1392	4
		1400	360
1453	2900
		1503	650
1505	12.5

1688	0.1
		1712	3.4
1777	7.8
		1778	12
1780	12.1
		1843	2.3
1848	15
		1876	60
1878	30
		1903	1.6
1918	26
		1929	2

B11.代表性的本发明化合物的14天施用对Wistar大鼠中葡萄糖稳态和代谢的影响

目的

研究目的是确定代表性的本发明化合物皮下口服施用14天时，对雄性Wistar大鼠的体重、食物和水消耗、葡萄糖稳态和耐受性、以及血脂、血浆胰岛素和在肝、脂肪组织和骨骼肌中选定的代谢参数的影响。

测试方案

在实验第7天，根据体重将动物分成适当数目的组，每组6只动物(主要研究动物)。以溶液皮下或口服施用测试化合物。剂量体积是2或3mL/kg。进行给药时间安排以确保黑暗时期的最大暴露，特别是在黑暗时期开始时，此时喂食更密集。

在光明时期结束之前1小时(下午5:00)，每天一次施用媒介物(组1)以及两种测试化合物(组2和组5)，而在上午10:00和下午5:00，每天两次施用其他测试化合物(组3和组4)。可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

生活观察

对于研究动物，报告了从研究第7天至第16天收集的数据。在开始给药之前第7天开始、在组分配时和整个研究期间以及最后在尸体解剖之前，每天报告所有动物的体重。在开始给药之前第1天开始和整个治疗期间，每3天在上午8:00测量食物和水的摄取。

在实验第16天的上午08:00，通过心脏穿刺从组1-5的所有动物(主要研究动物)收集血液，以测定葡萄糖的血浆浓度以及游离脂肪酸、三酰基甘油和总胆固醇的血清浓度。对于血糖，在Accu-Chek Aviva血糖仪(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)上使用一滴血(～20μL)。对于其他参数，在预冷的血清分离凝集激活剂管(Sarstedt)中收集一(1)mL血液。血液在2500rpm离心(4℃，10分钟)，将血清转移入未包被的管中并储存在-80℃，直到分析为止。

血液取样用于口服葡萄糖耐量测试(OGTT)

在上午8:00左右，在组1-5的所有动物中进行口服葡萄糖耐量测试。在实验第3天，对来自每个组的半数动物进行测试，并在实验第4天对每个组的另外半数动物进行测试。在实验第14和15天重复相同过程。使动物空腹过夜(在前一天下午5:00拿走食物)。在实验第3、4、13和14天，在口服施用1.5g/kg葡萄糖(右旋糖，Sigma Aldrich，450mg/ml给药溶液)之后0、15、30、60和120分钟，从尾静脉收集各自用于血糖和胰岛素测量的大约250μL血液样品，放入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)。通过口服管饲法，经由不锈钢喂食针(18×2”，PopperSons，目录号20068-642，VWR)施用葡萄糖溶液。在从该样品的一滴血液测定葡萄糖浓度(Accu-ChekAviva血糖仪，Roche Diagnostics)的同时，剩余样品在4℃下以4000rpm离心10分钟，并将得到的血浆转移入未包被的管并在-80℃储存，用于胰岛素测定。

分析方法

对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(目录号62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖。使用标准酶测定试剂盒(TGs：目录号11488872216，Roche Diagnostics；Chol：目录号11489232216，Roche Diagnostics)测量血清胆固醇和甘油三酯。在Hitachi 912分析仪上进行测量。使用商购的比色法酶测定试剂盒(HR系列NEFA-HR(2)试剂盒，WAKO Chemicals)一式两份测量血清游离脂肪酸(FFA)。

数据评价和统计

将所有数据输入Excel 2003电子表格，随后进行相关统计分析(GraphPad Prism，GraphPad Software，San Diego，CA)。除非另外规定，结果表示为平均值±SD(标准偏差)。使用单向方差分析(ANOVA)进行数据的统计评价，在其中建立了统计学显著性的情况下，对照组和治疗组之间进行适当的事后分析。

B12.喂食响应的抑制

作为测定本发明化合物体内活性的另一种方法，可以如文献(Sartor，O.；等人Endocrinology 1985，117，1441-1447)所述，在空腹大鼠中进行喂食响应的抑制。

B13.代表性的本发明化合物的急性给药对雄性Zucker肥胖大鼠葡萄糖稳态和代谢的影响

目的

本研究的目的是确定测试化合物在剂量后24小时和皮下施用3天后对雄性Zucker肥胖大鼠的体重变化、食物和水消耗和葡萄糖稳态的急性效应。在给药后24小时以及通过腹膜内途径施用测试化合物3天后，评价相同参数。选择雄性Zucker脂肪大鼠作为胰岛素抗性和遗传确定的肥胖模型，其对急性以及慢性设置中的不同胰岛素敏化剂的效应敏感。

动物

将大鼠单独圈养在啮齿类动物笼中，该笼底部具有软木基床并配有水瓶。所有个体笼都清楚标有笼卡，指示研究编号、组、动物编号和剂量水平。每个动物由动物编号唯一标识。在动物到达动物设施当天，指定动物编号。控制动物房环境(目标范围：温度22±2℃；相对湿度50±10％；明/暗周期：12小时光明，12小时黑暗，从上午06:00至下午06:00光明)。在将食物称重之后，给动物随意提供规律的啮齿动物饮食(Charles River 5075啮齿动物食物，Purina Mills，Canada)。通过水瓶给动物随意提供市政自来水。在将水瓶称重之后，提供新鲜自来水。

对于所有组，在接收动物和开始治疗之间，允许大约4天的适应期，以使大鼠习惯实验室环境。在实验第-3天，根据体重将动物分成适当数目的组，每组4只动物。

测试方案

将测试化合物作为溶液剂以下示目标剂量皮下或腹膜内施用。剂量体积是3mL/kg。组2、3和5在上午7:00左右每天一次给药，而组1、4、6和7在上午7:00和下午4:00左右每天两次(b.i.d)给药。在第1天对半数动物(子集A)并且在第2天对另一半动物(子集B)，并且在给药后2小时(上午9:00左右)进行OGTT。在第3和4天以同样方式重复OGTT。

可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

对于研究动物，报告了从研究第-3天至第4天收集的数据。在开始给药之前第-3天、在分组时、以及整个研究期间(第1-4天)每天记录所有动物的体重。在第2天和第4天(子集A)以及第3天和第5天(子集B)测量(下午12:00左右)24小时食物和水摄取。在第1天，在给药后15分钟、30分钟、1小时和2小时(刚好在OGTT之前)对来自组3、4和7的动物取血样(～100μl)，以进行PK分析。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。在第3天，只取给药后2小时(刚好在OGTT之前)的血样进行PK分析。

在第1天和第2天(半数动物)以及第3天和第4天(另外半数动物)，在所有组的动物中进行口服葡萄糖耐量测试。这在给药后2小时进行。使动物经受空腹过夜(在前一天下午5:00拿走食物)。为此，在实验第3和4天(在第1和3天仅取血样用于葡萄糖测量，没有胰岛素)，在口服施用1.5g/kg葡萄糖(右旋糖，Sigma Aldrich，450mg/ml给药溶液)之后0(葡萄糖前)、15、30、60和120分钟，从尾静脉收集大约20μL(用于血糖测量)和230μL(用于血浆胰岛素测量)的血液样品，放入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)。通过口服管饲法，经由不锈钢喂食针(18×2”，PopperSons，目录号20068-642，VWR)施用葡萄糖溶液。在从一滴血液测定葡萄糖浓度(Accu-ChekAviva血糖仪，Roche Diagnostics)的同时，剩余样品在4℃下以4000rpm离心10分钟，且将得到的血浆转移入未包被的管并在-80℃储存，用于胰岛素测定。对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖。

数据评价和统计

将所有数据输入Excel 2003电子表格，并且随后进行相关统计分析(GraphPad Prism，GraphPad Software，San Diego，CA)。除非另外规定，结果表示为平均值±SD(标准偏差)。使用单向方差分析(ANOVA)进行数据的统计评价，在其中建立了统计学显著性的情况下，对照组和治疗组之间进行适当的事后分析。

B14.代表性的本发明化合物的亚慢性施用在雄性Zucker肥胖大鼠中的效应

目的

本研究的目的是确定测试化合物在口服施用时直到7天，对雄性Zucker肥胖大鼠的体重变化、食物和水消耗、以及葡萄糖稳态和胰岛素水平的亚慢性效应。选择雄性Zucker脂肪大鼠作为胰岛素抗性和遗传确定的肥胖模型，其对急性以及慢性设置中的不同胰岛素敏化剂的效应敏感。

动物

对于所有组，在接收动物和开始治疗之间，允许大约7天的适应期，以使大鼠习惯实验室环境。在实验第-7天，根据体重将动物分成适当数目的组，每组4或8只动物。

测试方案

将测试化合物作为溶液剂以所示剂量口服施用。剂量体积是5mL/kg/天。组在上午8:00左右，每天一次给药。在第3天对半数动物(子集A)并且在第14天对另一半动物(子集B)，在给药后2小时(10:00上午左右)进行OGTT。在第7天(子集A)和第8天(子集B)以同样方式重复OGTT。

可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

对于研究动物，报告了从研究第-7天至第8天收集的数据。在开始给药之前第-7天、在分组时、以及整个研究期间(第1-8天)每天，记录所有动物的体重。在整个研究期间(第1-8天)，每天测量食物和水摄取。在第1天(子集A)、第2天(子集B)、第3天(子集A)、第4天(子集B)、第7天(子集A)和第8天(子集B)，在给药后2小时，对来自组2和3的动物取血样(～100μl)，放入EDTA包被的管(K2-EDTAmicrotainer管，Becton Dickinson)，以进行PK分析。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。

在第3天(半数动物)以及在第4天(另一半动物)，在所有组的动物中进行口服葡萄糖耐量测试(OGTT)。这在给药后2小时进行。使动物经受空腹过夜(在前一天下午5:00拿走食物)。在口服施用1.5g/kg葡萄糖(右旋糖，Sigma Aldrich，450mg/ml给药溶液)之后0(葡萄糖前)、15、30、60和120分钟，从尾静脉收集大约20μL(用于血糖测量)和230μL(用于血浆胰岛素测量)的血液样品，放入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)。通过口服管饲法，经由不锈钢喂食针(18×2”，PopperSons，目录号20068-642，VWR)施用葡萄糖溶液。在从20μL血滴测定葡萄糖浓度(Accu-Chek Aviva血糖仪，Roche Diagnostics)的同时，剩余230μL在4℃下以4000rpm离心10分钟，且将得到的血浆转移入未包被的管并在-80℃储存，用于胰岛素测定。在第7天(子集A)和第8天(子集B)进行这些过程。值得注意的是，为了最小化从动物抽取的血液体积，如上所述，只有在第3和4天的时间0(葡萄糖前)以及另外在第7和8天的时间15、30、60和120分钟取供胰岛素测量的血液样品。

在实验第7天(子集A)和第8天(子集B)，通过心脏穿刺从所有动物收集血液，以测定游离脂肪酸、甘油三酯和总胆固醇的血清浓度。这可以刚好在OGTT之后进行。为此，在预冷的血清分离凝集激活剂管(Sarstedt)中收集1mL血液。以2500rpm离心血液(4℃，10分钟)，将血清转移入未包被的管中并储存在-80℃，直到分析为止。使用适当方法分析甘油三酯、总胆固醇和游离脂肪酸的血清样品(各自250μL)。

对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖。使用标准酶测定试剂盒(TGs：目录号11488872216，Roche Diagnostics；Chol：目录号11489232216，Roche Diagnostics)测量血清胆固醇和甘油三酯。测量在Hitachi 912分析仪上进行。使用可商购的比色法酶测定试剂盒(HR系列NEFA-HR(2)试剂盒，WAKO Chemicals)一式两份测量血清游离脂肪酸(FFA)。使用GENios Pro自动化读板器(Tecan)获得吸光度。

数据评价和统计

B15.本发明化合物的亚慢性施用在雄性ob/ob小鼠中的效应

目的

本研究的目的是确定测试化合物在口服施用时直到7天，对雄性ob/ob小鼠的体重变化、食物和水消耗、以及葡萄糖稳态和胰岛素水平的亚慢性效应。选择雄性ob/ob小鼠作为2型糖尿病(T2DM)和遗传确定的肥胖模型，其对急性以及慢性设置中的不同胰岛素敏化剂的效应敏感。更准确说，该模型表现出瘦蛋白基因的缺失。

在该模型中进行类似研究，以确定测试化合物在口服施用给雄性ob/ob小鼠时直到28天，对体重变化、食物和水消耗、葡萄糖稳态、胰岛素水平和胰高血糖素水平以及血脂和大脑渗透的急性和亚慢性效应。

动物

将小鼠单独圈养在啮齿类动物笼中，该笼底部具有软木基床并配有水瓶。所有笼都清楚标有笼卡，指示研究编号、组、动物编号和剂量水平。每个动物由在其尾部用不褪色墨水标记的动物编号唯一标识。在动物到达动物设施当天，指定动物编号。控制动物房环境(目标范围：温度22±2℃；相对湿度50±10％；明/暗周期：12小时光明，12小时黑暗，从上午06:00至下午06:00光明)。给动物随意提供规律的啮齿动物饮食(Charles River 5075啮齿动物食物，Purina Mills，Canada)。通过水瓶给动物随意提供市政自来水。在将水瓶称重之后，提供新鲜自来水。对于所有组，在接收动物和开始治疗之间，允许大约7天的适应期，以使大鼠习惯实验室环境。在实验第-7天，根据体重和血糖过多将动物分成每组5或10只动物的适当数目的组和每组5只动物的两组。

测试方案(7天研究)

将测试化合物作为溶液剂以所示剂量口服施用。剂量体积是5mL/kg/天。组在上午4:00左右，每天一次给药。使用一种经批准的噻唑烷二酮家族的抗糖尿病药物(pparγ激动剂)罗格列酮

作为阳性对照，已经明确报道，罗格列酮

在ob/ob小鼠模型中调顺血糖过多(Liu等人，J.Med.Chem..，46：2093-2103，2003)。据报道，CB1受体拮抗剂利莫纳班

在不同的2型糖尿病模型中降低体重和摄食量和肥胖，并且也被采用(Rasmussen和Huskinson Behavioral Pharmacol.2008，19，735-742，；Bobo，G.；等人Hepathology 2007，46，122-129；Di Marzo；等人，Nature 2001，410，822-825)。

可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

对于研究动物，报告了从研究第-7天至第8天收集的数据。在开始给药之前第-7天、在分组时、以及整个研究期间(第1-8天)每天，记录所有动物的体重。在给药后4小时、第1和7天(子集A)和第2和8天(子集B)黑暗周期开始之后2小时(下午8:00左右)和然后在第3天到第8天以24小时间隔每天测量食物和水摄取。在第1天(子集A)和第2天(子集B)，在给药后4小时，从来自组2至4的每组3只动物尾静脉取血样(～100μl)，放入EDTA包被的管(K2-EDTAmicrotainer管，Becton Dickinson)，以进行PK分析。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。在第7天(子集A)和第8天(子集B)，给药后24小时，重复相同的过程。在实验第7天(子集A)和第8天(子集B)，通过心脏穿刺从所有动物收集末梢血液样品(总计大约5mL)，以测定葡萄糖和胰岛素的血浆浓度以及游离脂肪酸、甘油三酯和总胆固醇的血清浓度。将用于血浆胰岛素测量(250μL)的血液样品收集入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，并将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。此外，在预冷的血清分离凝集激活剂管(Sarstedt)中收集1mL血液。以2500rpm离心血液(4℃，10分钟)，将血清转移入未包被的管中并储存在-80℃，直到分析为止。使用适当方法分析甘油三酯、总胆固醇和游离脂肪酸的血清样品(各自250μL)。

来自组1-4的动物在末梢取血之后立即被取脑，以测量测试化合物的脑浓度。脑在冰上保持并置于-80℃，直至分析为止。

对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖(20μL血液样品)。在Hitachi 912分析仪上，使用标准酶测定试剂盒(TGs：目录号11488872216，Roche Diagnostics；Chol：目录号11489232216，Roche Diagnostics)测量血清胆固醇和甘油三酯。使用可商购的比色法酶测定试剂盒(HR系列NEFA-HR(2)试剂盒，WAKO Chemicals)一式两份测量血清游离脂肪酸(FFA)。在GENios Pro自动化读板器(Tecan)上读取吸光度。

测试方案(15天研究)

将化合物作为溶液剂以所示剂量口服施用。剂量体积是5mL/kg/天。在第1天、第7天、第14天和第15天的上午9:00，对组1-4(子集A)特别给药。否则，在第2天至第6天和第8天至第13天的下午3:00左右，对这些组每天一次给药。在第1天至第14天的下午3:00左右，然后在第15天的上午9:00，对组5-8(子集B)每天一次给药。

可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

对于研究动物，报告了从研究第-7天至第15天收集的数据。在开始给药之前第-7天、在分组时、以及整个研究期间(第1-15天)每天，记录所有动物的体重。在第1、7和14天，监测组1-4(子集A)的空腹葡萄糖水平。在第1、7和14天，监测组5-8(子集B)的非空腹葡萄糖水平。在一个子集的动物(组1-4，子集A)中第1天以及第7天，并且在子集B动物(组5-8)中从第1天至第14天以24小时间隔，在给药后20分钟、1小时、2小时和4小时每天准确测量食物和水摄取。在第14天，在组1-4(子集A)的所有动物中，进行口服葡萄糖耐量测试(OGTT)。为此，使动物空腹过夜。在口服施用1.5g/kg葡萄糖(右旋糖，Sigma Aldrich，450mg/ml给药溶液)之后0(葡萄糖前)、15、30、60和120分钟，取血液样品进行血浆葡萄糖浓度测量。通过口服管饲法，经由不锈钢喂食针(18X 2”，PopperSons，目录号20068-642，VWR)施用葡萄糖溶液。从20μL血滴测定葡萄糖浓度，测量在Accu-ChekAviva血糖仪(Roche Diagnostics)上进行。

在第15天，在给药后0、15分钟、30分钟、1小时、2小时和4小时，从来自组2和3(子集A)的所有动物尾静脉取血样(～100μl)，放入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)，以进行PK分析(n＝2只小鼠/治疗组/时间点)。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移入未包被的管并在-80℃储存，直到分析为止。在实验第15天，通过心脏穿刺从组5-8(子集B)的所有动物收集末梢血液样品(总计大约5mL)，以测定胰岛素、胰高血糖素、游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇、LDL、HDL的血浆浓度以及HDL/总胆固醇比率。将血液样品收集入EDTA包被的管(K2-EDTAmicrotainer管，Becton Dickinson)。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。

在第15天，在给药后30分钟、1小时、2小时或4小时，从组1-3(子集A)以及组6和7(子集B)的动物取脑，以测量测试化合物的脑浓度(n＝3只小鼠/治疗组/时间点)。使脑保持在冰上并在-80℃冷冻，直至分析为止。

对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素和胰高血糖素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖(20μL血液样品)。对于临床化学测定，在Cholestech LDX分析仪(ManthaMed，Mississauga，ON，Canada)上分析35μL血浆的甘油三酯、HDL胆固醇、非-HDL胆固醇、LDL胆固醇、总胆固醇(TC)和TC/HDL比率。使用可商购的比色法酶测定试剂盒(HR系列NEFA-HR(2)试剂盒，WAKO Chemicals)一式两份测量血清游离脂肪酸(FFA)。在GENios Pro自动化读板器(Tecan)上读取吸光度。

测试方案(28天研究)

将测试化合物作为溶液剂以所示剂量口服施用。剂量体积是5mL/kg/天。在第1天、第7天、第14天、第21天和第28天的上午9:00，对组1-4(子集A)特别给药。否则，在第2天至第6天、第8天至第13天、第15天至第20天、和第22天至第28天的下午3:00左右，对这些组每天一次给药。在第1天至第27天的下午3:00左右，然后在第28天的上午9:00，对组5-8(子集B)每天一次给药。

可以类似地研究其他剂量水平和浓度。

对于研究动物，报告了从研究第-7天至第28天收集的数据。在开始给药之前第-7天、在分组时、以及整个研究期间(第1-28天)，每天记录所有动物的体重。在第1、7、14、21和28天，监测组1-4(子集A)的空腹(16小时空腹)葡萄糖水平。在第1、7、14、21和28天，监测组5-8(子集B)的非空腹葡萄糖水平。在一个子集的动物(组1-4，子集A)中第1天、第7天以及第21天，并且在子集B动物(组5-8)中从第1天至第28天以24小时间隔，在给药后20分钟、1小时、2小时和4小时每天准确测量食物和水摄取。在第1天和第14天，在组1-4(子集A)的所有动物中，进行口服葡萄糖耐量测试(OGTT)。为此，使动物空腹过夜。在口服施用1.5g/kg葡萄糖(右旋糖，SigmaAldrich，450mg/ml给药溶液)之后0(葡萄糖前)、15、30、60和120分钟，取血液样品进行血浆葡萄糖浓度测量。通过口服管饲法，经由不锈钢喂食针(18X 2”，PopperSons，目录号20068-642，VWR)施用葡萄糖溶液。从20μL血滴测定葡萄糖浓度，测量在Accu-Chek Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)上进行。

在第28/29天，在给药后0、15分钟、30分钟、1小时、2小时和4小时，从来自组2和3(子集A)的所有动物尾静脉取血样(～100μl)，放入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，Becton Dickinson)，以进行PK分析(n＝2只小鼠/治疗组/时间点)。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，并将得到的血浆转移入未包被的管并在-80℃储存，直到分析为止。在实验第28/29天，通过心脏穿刺从组2和3(子集A)和组5-8(子集B)的所有动物收集末梢血液样品(总计大约5mL)，以测定胰岛素、胰高血糖素、酰化和未酰化生长素释放肽、生长激素、GLP-1、IGF-1、游离脂肪酸、甘油三酯和总胆固醇的血浆浓度。将血液样品收集入EDTA包被的管(K2-EDTA microtainer管，BectonDickinson)。血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，将得到的血浆转移进入未包被的管并储存于-80℃，直到分析为止。

在第28/29天，在给药后30分钟、1小时、2小时或4小时，从组1-3(子集A)以及组6和7(子集B)的动物取脑，以测量测试化合物的脑浓度(n＝3只小鼠/治疗组/时间点)。使脑保持在冰上并在-80℃冷冻，直至分析为止。

在第28/29天，在末梢取血后，从组1-4(子集A)以及组5-8(子集B)的所有动物取肝，以测定游离脂肪酸、甘油三酯和总胆固醇水平。使肝保持在冰上并在-80℃冷冻，直至分析为止。

对于每个数据点和动物，使用HTRF胰岛素检测试剂盒(62INSPEB，CisBio，USA)一式两份测量血浆胰岛素和胰高血糖素。使用ACCU-CHEK Aviva血糖仪(Roche Diagnostics)测量血浆葡萄糖(20μL血液样品)。使用酶免疫测定试剂盒(分别是A05117、A05118和A05104，来自Alpco Diagnostics，USA)测量血浆酰化和未酰化生长素释放肽以及生长激素。使用来自Alpco Diagnostics(USA)的IGF-1(小鼠、大鼠)ELISA和GLP-1(活性7-36)ELISA试剂盒测量血浆IGF-1和GLP-1。对于临床化学测定，在Cholestech LDX分析仪(ManthaMed，Mississauga，ON，Canada)上分析35μL血浆的甘油三酯和血清胆固醇。使用可商购的比色法酶测定试剂盒(HR系列NEFA-HR(2)试剂盒，WAKO Chemicals)一式两份测量血清游离脂肪酸(FFA)。在GENios Pro自动化读板器(Tecan)上读取吸光度。使用可商购的比色法酶测定试剂盒(游离脂肪酸定量试剂盒K612-100、甘油三酯定量试剂盒K622-100和胆固醇/胆甾醇酯定量试剂盒K603-100，Biovision，Mountain View，CA，USA)测量肝游离脂肪酸、甘油三酯和总胆固醇水平。

数据评价和统计

将所有数据输入Excel 2003或2007电子表格，并且随后进行相关统计分析(GraphPad Prism，GraphPad Software，San Diego，CA)。除非另外规定，结果表示为平均值±SD(标准偏差)。使用单向方差分析(ANOVA)进行数据的统计评价，在其中建立了统计学显著性的情况下，对照组和治疗组之间进行适当的事后分析。

B16.hERG通道抑制

hERG(人ether-a-go-go)基因产物是负责I_Kr复极电流的离子通道，其中已经显示该电流的改变延长了心肌动作电位，并促进了早期后除极的出现。化合物与hERG通道的直接相互作用是大部分已知心脏中毒病例的原因。

方法

实验方法的主要方面如下：

●hERG基因在HEK293细胞中稳定表达

●使用硼硅酸盐微电极记录预定脉冲方案的整个细胞I_Kr电流

●在抑制剂(E-4031，阳性对照)或测试化合物不存在时记录对照电流。

●以1和10μM测试化合物：

●使化合物灌注细胞5分钟。

●然后通过应用与对照条件中相同的脉冲方案来记录三个电流。

●还测试了单一浓度(0.5μM)的阳性对照(例如E-4031，I_Kr的已知抑制剂)

结果

与媒介物(0.1％DMSO)对照相比，直到100μM，化合物1712、1848和1929显示对hERG通道功能无显著影响。

5.药物组合物

本发明大环化合物或根据本发明的其药理学可接受的盐可以配制成各种剂型的药物组合物。为制备本发明的药物组合物，根据药物制剂领域技术人员已知的技术，将作为活性成分的一种或多种化合物与适当的载体和添加剂紧密混合，所述化合物包括其旋光异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋物或立体化学混合物、或其药学上可接受的盐。

药学上可接受的盐指本发明化合物的盐形式，以允许其用作药物或配制为药物，并且其保留了具体化合物的游离酸和碱的生物效力，并且在生物学上或其他方面不是不期望的。此类盐的实例描述于Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use，Wermuth，C.G.和Stahl，P.H.(编)，Wiley-Verlag Helvetica Acta，Zürich，2002[ISBN 3-906390-26-8]。此类盐的实例包括游离酸和碱的碱金属盐和加成盐。药学上可接受的盐的实例包括(不限于)硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、丙磺酸盐、甲苯磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。

如果本发明化合物是碱，可以通过本领域技术人员已知的任何适合方法制备所需的盐，包括用无机酸或有机酸处理游离碱，所述无机酸(例如不限于)盐酸、氢溴酸、氢碘酸、碳酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸包括(不限于)甲酸、乙酸、丙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、延胡索酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、硬脂酸、抗坏血酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟酸(例如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(例如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(例如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(例如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、环己基氨基磺酸)等。

如果本发明化合物是酸，可以通过本领域已知的任何适合方法制备所需的盐，包括用无机或有机碱(例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)；碱金属或碱土金属氢氧化物等)处理游离酸。适合的盐的示例性实例包括由以下衍生的有机盐：氨基酸(例如甘氨酸、赖氨酸和精氨酸)；氨；伯胺、仲胺和叔胺(例如乙二胺、N，N’-二苄基乙二胺、二乙醇胺、胆碱和普鲁卡因)以及环胺(例如哌啶、吗啉和哌嗪)；以及由以下衍生的无机碱：钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。

用于此类药物组合物的载体和添加剂可根据预期的施用方式采用多种形式。因此，口服给药的组合物可以是(例如)固体制剂(例如片剂、糖衣片、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂等，适合的载体和添加剂是淀粉、糖、粘合剂、稀释剂、成粒剂、润滑剂、崩解剂等。因为其容易使用和较高的患者依从性，片剂和胶囊剂代表了用于许多医学症状的最有利的口服剂型。

类似地，液体制剂组合物包括溶液剂、乳剂、分散剂、悬浮剂、糖浆剂、酏剂等，适合的载体和添加剂是水、醇类、油类、二醇类、防腐剂、调味剂、着色剂、悬浮剂等。胃肠外施用的典型制剂包括活性成分和载体(例如无菌水或胃肠外可接受的油(包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或蓖麻油))，还可以包括辅助溶解性或防腐作用的其他添加剂。在溶液的情况下，可以将其冻干成粉末，然后在即将使用之前立即恢复原状。对于分散剂和悬浮剂，适当的载体和添加剂包括水性胶姆剂、纤维素、硅酸盐或油。

根据本发明实施方案的药物组合物包括适合口服、直肠、局部、吸入(例如，经由气雾剂)、口腔(例如，舌下)、***、局部(即，皮肤和粘膜表面，包括气道表面)、透皮施用和胃肠外(例如，皮下、肌肉内、皮内、关节内、胸膜内、腹膜内、鞘内、大脑内、颅内、动脉内或静脉内)的药物组合物，但是在任何给定情况下最适合的途径将取决于被治疗症状的性质和严重度以及使用的具体活性剂的性质。

注射用组合物将包括活性成分以及适合的载体，所述载体包括丙二醇-乙醇-水、等渗水、无菌注射水(USP)、emulPhor^TM-乙醇-水、cremophor-EL^TM或本领域技术人员已知的其他适合载体。这些载体可以单独使用或者与其他常规的增溶剂(例如乙醇、丙二醇)或本领域技术人员已知的其他物质组合使用。

当以溶液剂或注射剂形式应用本发明的大环化合物时，可以通过在任何常规稀释剂中溶解或悬浮而使用化合物。稀释剂可以包括(例如)生理盐水、林格氏溶液、葡萄糖水溶液、右旋糖水溶液、乙醇、脂肪酸酯、甘油、乙二醇、衍生自植物或动物的油、石蜡等。这些制剂可以根据本领域技术人员已知的任何常规方法制备。

用于鼻腔施用的组合物可以配制为气雾剂、滴剂、散剂和凝胶剂。气雾剂制剂通常包括活性成分在生理学上可接受的水溶剂或非水溶剂中的溶液或微悬浮液。这种制剂通常以单剂或多剂量的无菌形式存在于密封容器中的。密封容器可以是药筒或者替换物，与喷雾装置一起使用。可选地，密封容器可以是单一的分配装置，例如单独使用的鼻吸入器、泵喷雾器或配有设置为递送治疗有效量的计量阀的气雾剂分配器，其旨在一旦内容物完全使用后就弃掉。当剂型包括气雾剂分配器时，其含有推进剂(例如压缩气体(例如空气)或有机推进剂(包括氟氯烃或氟代烃))。

适合口腔或舌下施用的组合物包括片剂、糖锭和锭剂，其中活性成分与载体(诸如糖和***树胶、黄蓍胶或明胶和甘油)一起配制。

用于直肠施用的组合物包括含有常规栓剂基质(例如可可脂)的栓剂。

适合透皮施用的组合物包括软膏剂、凝胶剂和贴剂。

本领域技术人员已知的其他组合物(例如硬膏剂)还可以用于经皮或皮下施用。

而且，在制备包含与配制组合物所必需的组分混合的一种或多种活性成分的此类药物组合物时，可以加入其他常规的药理学上可接受的添加剂(例如赋形剂、稳定剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、香化剂、着色剂、调味剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂等)。作为添加剂，可能提到(例如)淀粉、蔗糖、果糖、乳糖、葡萄糖、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇、沉淀碳酸钙、结晶纤维素、羧甲基纤维素、糊精、明胶、***树胶、EDTA、硬脂酸镁、滑石、羟基丙基甲基纤维素、焦亚硫酸钠等。

在一些实施方案中，以单位剂型(例如片剂或胶囊剂)提供组合物。

在其他实施方案中，本发明提供了包括一个或多个容器的试剂盒，所述容器包含药物剂量单位，所述药物剂量单位包含有效量的一种或多种本发明的化合物。

本发明还提供了包含本文所述的化合物的前药。术语“前药”旨在指在生理条件下或通过溶剂分解或代谢转化为有药物活性的特定化合物的化合物。“前药”可以是化学衍生化的本发明化合物，使得(i)其保留了其母体药物化合物的一些、全部生物活性或没有其母体药物化合物的生物活性，并且(ii)其在受治疗者中代谢以产生母体药物化合物。本发明的前药还可以是“部分前药”，因为该化合物已经被化学衍生化，使得(i)其保留了其母体药物化合物的一些、全部生物活性或没有其母体药物化合物的生物活性，并且(ii)其在受治疗者中代谢以产生化合物的生物活性衍生物。可以采用用于衍生化合物以提供前药的已知技术。此类方法可以利用与化合物的可水解偶联的形成。

本发明还提供：本发明化合物可以与用于预防和/或治疗代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、成瘾性病症、心血管病症、胃肠病症、遗传病症、过度增殖病症和炎性病症的治疗剂组合施用。示例性药剂包括：止痛剂(包括阿片类止痛剂)、麻醉剂、抗真菌剂、抗生素、抗炎剂(包括非类固醇抗炎剂)、驱肠虫剂、止吐剂、抗组胺剂、抗高血压剂、抗精神病药、抗关节炎药、镇咳药、抗病毒药、作用于心脏的药物、泻药、化疗药(例如DNA相互作用剂)、抗代谢物、微管蛋白相互作用剂、激素剂和诸如天冬酰胺酶或羟基脲的药剂、肾上腺皮质激素(类固醇)、抗抑郁药、抑制剂、利尿剂、***、矿物质、营养添加剂、拟副交感神经功能药物、激素(例如促肾上腺皮质素释放激素、促皮质素、生长激素释放激素、生长激素、促甲状腺激素释放激素和甲状腺刺激激素)、镇静剂、磺酰类药物、刺激剂、拟交感神经药、安定药、血管收缩剂、血管扩张剂、维生素和黄嘌呤衍生物。

可以与本发明化合物组合使用的其他治疗剂包括GLP-1激动剂、DPP-IV抑制剂、糊精激动剂、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-α/γ双重激动剂、GDIR或GPR119激动剂、PTP-1B抑制剂、肽YY激动剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)-1抑制剂、2型钠依赖性肾葡萄糖转运蛋白(SGLT-2)抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、葡糖激酶激活剂、α-葡糖苷酶抑制剂、糖皮质激素拮抗剂、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂、果糖-1，6-二磷酸酶抑制剂、磺酰脲受体拮抗剂、类视黄醇X受体激活剂、5-HT_1a激动剂、5-HT_2c激动剂、5-HT₆拮抗剂、***素拮抗剂或反向激动剂、黑色素浓集激素-1(MCH-1)拮抗剂、黑皮质素-4(MC4)激动剂、瘦蛋白激动剂、视黄酸受体激动剂、硬脂酰辅A去饱和酶-1(SCD-1)抑制剂、神经肽Y Y2受体激动剂、神经肽YY4受体激动剂、神经肽Y Y5受体拮抗剂、神经元烟碱受体α₄β₂激动剂、二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT-1)抑制剂、甲状腺受体激动剂、脂肪酶抑制剂、脂肪酸合酶抑制剂、甘油-3-磷酸酰基转移酶抑制剂、CPT-1刺激剂、α_1A-肾上腺素能受体激动剂、α_2A-肾上腺素能受体激动剂、β₃-肾上腺素能受体激动剂、组胺H3受体拮抗剂、缩胆囊肽A受体激动剂和GABA-A激动剂。

适合根据本发明治疗的受治疗者包括(但不限于)禽类和哺乳动物受治疗者，并且优选是哺乳动物。本发明的哺乳动物包括(但不限于)犬、猫、牛、山羊、马、绵羊、猪、啮齿动物(例如大鼠和小鼠)、兔、灵长类、人等，以及在子宫内的哺乳动物。需要根据本发明治疗的任何哺乳动物受治疗者都是适合的。优选人受治疗者。两个性别以及任何发育阶段(即，新生儿、幼儿、少年、青少年、成年人)的人受治疗者都可以根据本发明来治疗。

根据本发明的示例性禽类包括鸡、鸭、火鸡、鹅、鹌鹑、野鸡、走禽类(例如，鸵鸟)和家禽类(例如，鹦鹉和金丝雀)和卵内禽类(birdsin ovo)。

本发明主要关注人受治疗者的治疗，但本发明也可以在动物受治疗者上进行，所述动物受治疗者特别是用于兽医目的和用于药物筛选和药物开发目的的哺乳动物受治疗者(例如小鼠、大鼠、狗、猫、家畜和马))。

在生长素释放肽受体的拮抗剂或反向激动剂对之有效的哺乳动物(即，人或动物)症状治疗的治疗性用途中，可以有效量施用本发明化合物或其适当的药物组合物。因为化合物的活性和疗效程度变化，施用的实际剂量将基于公认因素(例如年龄、受治疗者症状、递送途径和受治疗者体重)来确定。剂量可从约0.1至约100mg/kg，每天口服施用1-4次。此外，可以每剂量大约0.01-20mg/kg通过注射来施用化合物，每天施用1-4次。治疗可以持续数周、数月或更长时间。对于具体情况，最佳剂量的确定在本领域技术人员的能力之内。

6.使用方法

本发明化合物可用于预防和治疗一系列医学症状，包括但不限于代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、成瘾性病症、心血管病症、胃肠病症、遗传病症、过度增殖病症、中枢神经***病症、炎性病症及其并发症，其中所述病症可能由多种潜在病导致。

代谢紊乱和/或内分泌障碍包括(但不限于)肥胖、糖尿病(特别是II型糖尿病)、代谢综合征、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和脂肪变性。肥胖和肥胖相关病症包括(但不限于)视网膜病、多语症和涉及调节摄食量和食欲控制的病症，除了特征为代谢紊乱和/或内分泌障碍的肥胖。食欲或进食障碍包括(但不限于)Prader-Willi综合征和食欲过盛。成瘾性病症包括(但不限于)酒精依赖或滥用、非法药物依赖或滥用、处方药物依赖或滥用和化学品依赖或滥用(非限制性实例包括酒精中毒、麻醉剂成瘾、刺激剂成瘾、镇静剂成瘾和尼古丁成瘾)。心血管病症包括(但不限于)高血压和血脂异常。胃肠病症包括(但不限于)肠易激综合征、消化不良、阿片类物质引起的肠功能紊乱和胃轻瘫。过度增殖病症包括(但不限于)肿瘤、癌症和肿瘤组织，其还包括诸如以下病症：乳腺癌、骨肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤和其他肉瘤、白血病、淋巴瘤、窦瘤、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、***癌和其他泌尿生殖***癌症、结肠癌、食道癌和胃癌和其他胃肠癌症、肺癌、骨髓癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌和恶性或良性的脑癌或中枢和外周神经(CNS)***肿瘤(包括神经胶质瘤和成神经细胞瘤)。中枢神经***病症包括(但不限于)癫痫发作、癫痫病症、癫痫、癫痫持续状态、偏头痛、皮层扩散性抑制、头痛、颅内高压、中枢神经***水肿、神经精神障碍、神经毒性、头部创伤、中风、局部缺血、低氧、焦虑、抑郁、阿尔茨海默病、肥胖、帕金森病、戒烟、成瘾性病症(例如酒精成瘾、麻醉剂成瘾(例如***成瘾、***成瘾、阿片剂成瘾等)、焦虑和神经保护(例如，减轻中风后损伤，减轻像阿尔茨海默病的神经退行性疾病的损伤，防乙醇毒性损伤。炎性病症包括(但不限于)一般炎症、关节炎(例如类风湿性关节炎和骨关节炎)和炎性肠病。本发明化合物还可用于预防和/或治疗肝硬化和慢性肝病。如本文所用，“治疗”不一定意指病症或其伴随症状的治愈或完全消除。

本发明化合物还可用于制备用于治疗一系列医学症状的药剂，所述医学症状包括但不限于代谢紊乱和/或内分泌障碍、肥胖和肥胖相关病症、食欲或进食障碍、心血管病症、胃肠病症、遗传病症、过度增殖病症和炎性病症。

现在参考以下实施例来描述本发明的其他实施方案。应该理解，这些实施例为说明本发明实施方案的目的，而不限制本发明范围。

实施例1

氨基酸构件

实施例AA1.合成H-(3Me)Cpg-OH的标准程序

步骤AA1-1：环丙烷化。在-20℃、氩气氛下，向3-甲基-3-丁烯-1-醇(AA1-A，3.52mL，34.8mmol，1.0当量)在DCM(350mL)中的溶液小心添加纯净二乙基锌(17.9mL，174mmol，5.0当量)和二碘甲烷(28.1mL，348mmol，10.0当量)，并且使温度快速升至0℃。(注意：温度控制非常重要。二碘甲烷(熔点：5-8℃)和二乙基锌(熔点：-28℃)可以突然冷冻并停止搅拌，熔化时有***风险)。使反应物缓慢升温至室温并搅拌过夜。向混合物添加饱和NH₄Cl(水溶液)，并用Et₂O(3×)萃取水相。用饱和NaHCO₃水溶液(2×)、盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后通过旋转蒸发器在低温低压(由于产物沸点低)下浓缩滤液，以提供2-(1-甲基环丙基)乙醇(AA1-B，12.4g，＞100％，橙色液体)，其不经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤AA1-2：氧化。在0℃下冷却AA1-B(34.8mmol，1.0当量)在丙酮(350mL)中的溶液。添加琼斯试剂，直到溶液颜色保持橙色为止，并在0℃下搅拌另外10分钟。添加水，并用Et₂O(3×)萃取得到的水相。然后，用1M碳酸钠(3×)萃取合并的有机相。用Et₂O(3×)洗涤合并的水相，然后用6N HCl在0℃下酸化至pH＝2，并用Et₂O(3×)萃取。用水(1×)、盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后在真空中浓缩滤液，以得到具有讨厌的气味的呈无色液体的2-(1-甲基环丙基)乙酸(AA1-C，2.03g，2个步骤51％)。

步骤AA1-3：手性助剂锚定。在-78℃，向在THF(200mL)中的AA1-C(2.03g，17.8mmol，1.0当量)添加Et₃N(2.98mL，21.4mmol，1.2当量)和PivCl(2.41mL，19.6mmol，1.1当量)以形成混合的酸酐。该混合物在-78℃搅拌15分钟并在0℃下搅拌45分钟，然后冷却至-78℃。单独地，在-78℃下向在THF(80mL)中的手性助剂(AA1-D，2.61g，16.0mmol，0.9当量)添加在己烷(10mL，16.0mmol，0.9当量)中的1.6M n-BuLi，并在-78℃下搅拌该混合物20分钟。然后，在-78℃下，通过套管将酸酐溶液添加至含有手性助剂的混合物，并在室温搅拌反应物2小时，然后添加饱和的NH₄Cl(水溶液)。用EtOAc(3×)萃取水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(梯度，1∶4至2∶3，Et₂O∶己烷)纯化残余物以提供AA1-E(3.15g，68％，白色固体)。

步骤AA1-4：卤化。在-78℃下，向在DCM(94mL)中的AA1-E(3.15g，12.2mmol，1.0当量)添加DIPEA(2.55mL，19.6mmol，1.2当量)和Bu2BOTf(3.44mL，12.8mmol，1.05当量)。在-78℃下搅拌反应物10分钟，然后在-78℃下经套管进入NBS(2.39g，13.4mmol，1.1当量)在DCM(42mL)中的悬浮液。在-78℃搅拌得到的混合物2小时，并在0℃搅拌2小时。向其中添加1M硫代硫酸钠，并搅拌10分钟。用DCM(3×)萃取水相。用盐水(×1)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(100％DCM)立即(以限制粗品状态下的潜在分解)纯化残余物以提供AA1-F(667mg，17％，白色固体)。

步骤AA1-5：叠氮化物形成。在室温下向在DMSO(20mL)中的AA1-F(667mg，1.97mmol，1.0当量)添加NaN₃(642mg，9.87mmol，5.0当量)。在室温搅拌反应物1小时，然后添加水。用Et₂O(3×)萃取水相。用盐水(1×)萃取合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空下浓缩滤液以得到呈白色固体的AA1-G(552mg，93％)。

步骤AA1-6：助剂裂解。在室温下向在THF/H₂O(3∶1，100mL)中的AA1-G(1.45g，4.83mmol，1.0当量)添加LiOH(608mg，14.5mmol，3.0当量)和H₂O₂(30％，1.38mL，24.2mmol，5.0当量)。在室温搅拌反应物2小时，然后蒸发THF并添加水。用DCM(3×)洗涤水溶液，然后用3N HCl酸化至pH＝2。用Et₂O(3×)萃取酸性水相。用1MNa₂S₂O₃(3×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩以提供呈无色油状的AA1-H(830mg，100％)。

步骤AA1-7：叠氮化物还原。在室温下向在THF/H₂O(2∶1，105mL)中的AA1-H(830mg，5.35mmol，1.0当量)添加50％湿10％Pd/C(250mg，20％w/w)。将氢气直接鼓泡进入该溶液，持续30分钟，然后在氢气氛下搅拌过夜。如果TLC指示反应不完全，则通过过滤除去催化剂，添加新鲜量的催化剂，并在Parr仪器中在20psi下用氢气处理1小时。当反应完全时，通过

垫过滤反应物，并用THF/H₂O小心冲洗，然后真空蒸发滤液以除去THF。(注意，产物有时在氢化过程中沉淀)。用DCM(3×)洗涤得到的水相，然后真空浓缩(或者冻干)以提供呈浅灰色固体的H-(3Me)Cpg-OH(355mg，51％)。

实施例AA2：合成H-逆式-(3H，4Me)Cpg-OH的标准程序

步骤AA2-1：环丙烷化。在-20℃，向(Z)-戊-3-烯-1-醇(AA2-A，3.34g，38.9mmol，1.0当量)在DCM(390mL)中的溶液小心添加纯净二乙基锌(20.0mL，194mmol，5.0当量)和二碘甲烷(31.4mL，398mmol，10.0当量)，并且使温度快速升至0℃。(注意：温度控制非常重要。二碘甲烷(熔点：5-8℃)和二乙基锌(熔点：-28℃)可以突然冷冻并停止搅拌，熔化时有***风险)。使反应物缓慢升温至室温并搅拌过夜。添加饱和NH₄Cl(水溶液)，用Et₂O(3×)萃取水相。用饱和NaHCO₃水溶液(2×)、盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后通过旋转蒸发器在低温低压(由于产物沸点低)下浓缩，以提供2-(2-甲基环丙基)乙醇(AA2-B，29.5g，＞100％，黑色液体)，其如获得时的原样用于下一步骤。

步骤AA2-2：氧化。将AA2-B(38.9mmol，1.0当量)在丙酮(390mL)中的溶液冷却至0℃。添加琼斯试剂，直到溶液颜色保持橙色为止，然后在0℃下搅拌另外10分钟。添加水，并用Et₂O(3×)萃取得到的水相。用1M碳酸钠(3×)萃取合并的有机相。然后，用Et₂O(3×)洗涤得到的合并的水相，用6N HCl在0℃下酸化至pH＝2，并用Et₂O(3×)萃取。用水(1×)、盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后在真空下浓缩滤液，以得到具有难闻气味的呈无色液体的2-(1-甲基环丙基)乙酸(AA2-C，1.7g，2个步骤38％)。

步骤AA2-3：手性助剂锚定。在-78℃，向在THF(75mL)中的手性助剂(AA2-D，2.19g，13.4mmol，0.9当量)添加在己烷中的1.6Mn-BuLi(8.4mL，13.4mmol，0.9当量)，并且在-78℃下搅拌溶液20分钟。在-78℃下，向在THF(166mL)中的AA2-C(1.7g，14.9mmol，1.0当量)添加Et₃N(2.5mL，17.9mmol，1.2当量)和PivCl(2.02mL，16.4mmol，1.1当量)以形成混合的酸酐，并且将反应物在-78℃下搅拌15分钟并在0℃下搅拌45分钟，然后冷却至-78℃。在-78℃下，通过套管将酸酐溶液添加至助剂混合物，然后在室温搅拌反应物2小时。添加饱和NH4Cl(水溶液)，并用EtOAc(3×)萃取水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(梯度，1∶4至2∶3，Et₂O∶己烷)纯化残余物以产生呈无色油状的AA2-E(2.8g，73％)。

步骤AA2-4：卤化。在-78℃下，向在DCM(83mL)中的AA2-E(2.8g，10.8mmol，1.0当量)添加DIPEA(2.25mL，13.0mmol，1.2当量)和Bu₂BOTf(3.05mL，11.4mmol，1.05当量)，然后在-78℃下搅拌混合物10分钟。在-78℃下，将该溶液经套管转移至NBS(2.11g，11.9mmol，1.1当量)在DCM(37mL)中的悬浮液，然后在-78℃搅拌2小时，并在0℃搅拌2小时。添加1M硫代硫酸钠，并搅拌混合物10分钟。用DCM(3×)洗涤得到的水相。用盐水(×1)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(100％DCM)立即(以避免粗品状态下的分解)纯化残余物以提供呈橙色油状的AA2-F(2.98g，82％)。

步骤AA2-5：叠氮化物形成。在室温下向在DMSO(88mL)中的AA2-F(2.98g，8.82mmol，1.0当量)添加NaN₃(2.87g，44.1mmol，5.0当量)。在室温搅拌反应物1小时，然后添加水。用Et₂O(3×)洗涤水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空下浓缩滤液以得到呈橙色油状的AA2-G(2.54g，96％)。

步骤AA2-6：手性助剂裂解。在室温下向在THF/H₂O(3∶1，180mL)中的AA2-G(2.54g，8.47mmol，1.0当量)添加LiOH(1.07g，25.4mmol，3.0当量)和30％H₂O₂(2.42mL，42.4mmol，5.0当量)，然后在室温搅拌反应物2小时。从反应混合物真空蒸发THF，然后添加水。用DCM(3×)洗涤水相，用3N HCl酸化至pH＝2。用Et₂O(3×)洗涤酸性水相。用1M Na₂S₂O₃(3×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩以提供呈无色油状的AA2-H(1.05g，80％)。

步骤AA2-7：叠氮化物还原。在室温下向在THF/H₂O(2∶1，135mL)中的AA2-H(1.05g，6.77mmol，1.0当量)添加50％湿10％Pd/C1(300mg，20％w/w)。将氢气直接鼓泡进入该溶液，持续30分钟，并在氢气氛下搅拌过夜。如果TLC指示反应不完全，则通过过滤除去催化剂，添加新鲜量的催化剂，并在Parr仪器中在20psi下用氢气处理反应物1小时。当反应完全时，通过

垫过滤反应，并用THF/H₂O小心冲洗，然后真空蒸发以除去THF。(注意，产物有时在氢化过程中沉淀)。用DCM(3×)洗涤得到的水相，然后真空浓缩(或者冻干)以提供呈米色固体的H-逆式-(3H，4Me)Cpg-OH(794mg，91％)。

实施例AA3.合成H-同式-(3H，4Me)Cpg-OH的标准程序

步骤AA3-1：环丙烷化。在-20℃，向(E)-戊-3-烯-1-醇(AA3-A，4.77mL，38.9mmol，1.0当量)在DCM(390mL)中的溶液小心添加纯净二乙基锌(20.0mL，194mmol，5.0当量)和二碘甲烷(31.4mL，398mmol，10.0当量)，并且使温度快速升至0℃。(注意：温度控制非常重要。二碘甲烷(熔点：5-8℃)和二乙基锌(熔点：-28℃)可以突然冷冻并停止搅拌，熔化时有***风险)。使反应物缓慢升温至室温并搅拌过夜。添加饱和NH₄Cl(水溶液)，并用Et₂O(3×)萃取水相。用饱和NaHCO₃水溶液(2×)、盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后通过旋转蒸发器在低温(浴温＜15℃)低压(由于产物沸点低)下浓缩，以提供甲基-2-(2-甲基环丙基)乙酸酯(AA3-B，19g，＞100％，黑色液体)，其如获得时的原样用于下一步骤。

步骤AA3-2：酯水解。向在THF/H₂O(1∶1，200mL)中的AA3-B(38.9mmol，1.0当量)添加LiOH(8.17g，194.5mmol，5.0当量)，搅拌反应物过夜。真空蒸发THF，并用Et₂O(3×)洗涤剩余水相。用3N HCl使水相酸化至pH 2，然后用Et₂O(3×)萃取。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后在减压下浓缩滤液，得到具有难闻气味的呈橙色液体的2-(2-甲基环丙基)乙酸(AA3-C，3.96g，2个步骤89％)。

步骤AA3-3：手性助剂锚定。在-78℃，向在THF(173mL)中的手性助剂(AA2-D，5.09g，31.2mmol，0.9当量)添加在己烷(19.5mL，31.2mmol，0.9当量)中的1.6M n-BuLi，并在-78℃下搅拌溶液20分钟。在-78℃下，向在THF(386mL)中的AA3-C(3.96g，34.7mmol，1.0当量)添加Et₃N(5.8mL，41.6mmol，1.2当量)和PivCl(4.71mL，38.2mmol，1.1当量)以形成混合的酸酐，并且将反应物在-78℃下搅拌15分钟并在0℃下搅拌45分钟，然后冷却至-78℃。在-78℃下，通过套管将酸酐溶液添加至助剂混合物，然后在室温搅拌反应2小时。添加饱和NH₄Cl(水溶液)，并用EtOAc(3×)萃取水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(梯度，1∶4至2∶3，Et₂O∶己烷)纯化残余物以产生呈白色固体的AA3-D(6.18g，69％)。

步骤AA3-4：卤化。在-78℃下，向在DCM(184mL)中的AA3-D(6.18g，23.9mmol，1.0当量)添加DIPEA(4.99mL，28.7mmol，1.2当量)和Bu2BOTf(6.73mL，25.1mmol，1.05当量)，然后在-78℃下搅拌混合物10分钟。在-78℃下，将该溶液经套管转移至NBS(4.68g，26.3mmol，1.1当量)在DCM(82mL)中的悬浮液，然后在-78℃搅拌2小时，并在0℃搅拌2小时。添加1M硫代硫酸钠，并搅拌混合物10分钟。用DCM(3×)洗涤得到的水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速柱色谱法(100％DCM)立即(以避免粗品状态下的分解)纯化残余物以提供呈黄色油状的AA3-E(5.41g，67％)。

步骤AA3-5：叠氮化物形成。在室温下向在DMSO(80mL)中的AA3-E(2.70g，7.99mmol，1.0当量)添加NaN₃(2.60g，40.0mmol，5.0当量)。在室温搅拌反应物1小时，然后添加水。用Et₂O(3×)洗涤水相。用盐水(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空下浓缩滤液以得到呈白色固体的AA3-F(2.53g，100％)。

步骤AA3-6：手性助剂裂解。在室温下向在THF/H₂O(3∶1，168mL)中的AA3-F(2.53g，8.43mmol，1.0当量)添加LiOH(1.06g，25.3mmol，3.0当量)和30％H₂O₂(2.66mL，42.1mmol，5.0当量)，然后在室温搅拌反应物2小时。从反应混合物真空蒸发THF，然后添加水。用DCM(3×)洗涤水相，用3N HCl酸化至pH＝2。用Et₂O(3×)洗涤酸性水相。用1M Na₂S₂O₃(3×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩以提供呈橙色油状的AA3-G(1.15g，80％)。

步骤AA3-7：叠氮化物还原。在室温下向在THF/H₂O(2∶1，18mL)中的AA3-G(1.15g，7.42mmol，1.0当量)添加50％湿10％Pd/C 1(300mg，20％w/w)。将氢气直接鼓泡进入该溶液，持续30分钟，然后在氢气氛下搅拌过夜。如果TLC指示反应不完全，则通过过滤除去催化剂，添加新鲜量的催化剂，并在Parr仪器中在20psi下用氢气处理反应1小时。当反应完全时，通过

垫过滤反应物，并用THF/H₂O小心冲洗，然后真空蒸发以除去THF。(注意，产物有时在氢化过程中沉淀)。用DCM(3×)洗涤得到的水相，然后真空浓缩(或者冻干)以提供呈棕色固体的H-同式-(3H，4Me)Cpg-OH(472mg，49％)。

实施例AA4：合成H-β-(S)Me-Phe-OH的标准程序

该合成基于Evans针对合成手性氨基酸描述的反应方法(Evans，D.A.；Ellman，J.A.；Dorow，R.L.Tetrahedron Lett.1987，28，1123-1126)。使用标准方法向手性酸AA4-A(1.83g)添加不对称助剂，以产生AA4-B(2.9g，85％)。不对称溴化以提供AA4-C(2.6g，72％，加10-15％未反应的AA4-B)，随后叠氮化物S_N2置换以提供AA4-D(2.3g，100％)。助剂裂解提供了AA4-E，然后形成苄基酯，产生AA4-F。与三苯基膦反应以形成膦亚胺，然后用水水解，将叠氮化物转化为胺并产生500mg(28％，3个步骤)受保护的氨基酸，H-β-(S)Me-Phe-OBn。

实施例AA5：合成o-Tyr内酯(AA5-3)的标准程序

向在DCM(49mL)中的Boc-(DL)oTyr-OH(AA5-1，2.76g，9.82mmol，1.0当量)添加DIPEA(3.4mL，19.6mmol，2.0当量)，随后添加Ac₂O(1.02mL，10.8mmol，1.1当量)。在室温下搅拌混合物3小时。真空蒸发溶剂，并残余物溶解于EtOAc。用柠檬酸盐缓冲液(1M，pH 3.5，3×)、盐水(1×)洗涤该有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法[梯度，EtOAc/Hex(1∶1)至100％EtOAc]纯化残余物，以产生呈白色固体的内酯AA5-3(1.06g，41％)。此外，获得了含有AA5-1和乙酰化邻酪氨酸(AA5-2)的混合物的1.06g级分。

实施例2

系链的合成

A.合成系链T59的标准程序

步骤T59-1：向在THF(500mL)中的Boc-T8(32.3g，110.2mmol，1.0当量)添加咪唑(15.0g，220.4mmol，2.0当量)和TBDMSCl(21.6g，143.3mmol，1.3当量)，并搅拌混合物2小时，通过TLC监测。然后用饱和NH₄Cl水溶液处理溶液，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(10％EtOAc/90％己烷)过滤得到的残余物，产生呈无色油状的59-1(100％)。

TLC：R_f＝0.60(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T59-2：向在H₂O∶t-BuOH(1∶1，500mL)混合物中的59-1(20.1g，49.3mmol，1.0当量)添加AD-混合β(60g)和甲磺酰胺(4.7g，49.3mmol，1.0当量)，并且将得到的橙色混合物在4℃搅拌36-48小时，期间颜色变为黄色。一旦TLC指示反应完全时，添加亚硫酸钠(75g，12.0当量)，并在室温搅拌混合物1小时。用EtOAc萃取混合物，然后用水和盐水萃取合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(50％EtOAc/50％己烷)纯化残余物以得到呈黄色油状的59-2(96％)。

TLC：R_f＝0.41(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T59-3：在0℃下向在DCM(300mL)中的59-2(20.9g，47.4mmol，1.0当量)添加吡啶(15mL)和DMAP(293mg，2.4mmol，0.05当量)。然后向该混合物缓慢添加在DCM(50mL)中的三光气(14.1g，47.4mmol，1.0当量)。在下0℃搅拌反应物45分钟，此时，TLC指示反应完全。用饱和NH₄Cl水溶液处理溶液，并分离有机相。用Et₂O萃取水相，且用饱和NH₄Cl水溶液处理合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(30％EtOAc/70％己烷)纯化得到的残余物，以产生呈黄色油状的59-3(91％)。

TLC：R_f＝0.56(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T59-4：向59-3(20.2g，43.3mmol，1.0当量)在95％EtOH∶丙酮(3∶1，400mL)混合物的溶液中添加阮内镍(50％水溶液，51mL，433mmol，10.0当量)。向该溶液鼓泡通入氢气，持续6小时，通过TLC监测。当反应完全时，向混合物鼓泡通入氮气以除去过量的氢，然后通过Celite垫过滤混合物并用EtOAc冲洗。在减压下浓缩滤液，得到呈无色油状的59-4，其纯度足以用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.29(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T59-5：向在CH₂Cl₂(250mL)中的醇59-4(17.0g，40.0mmol，1.0当量)添加DHP(4.4mL，48.0mmol，1.2当量)和PTSA(380mg，2.0mmol，0.05当量)。在室温下搅拌混合物1小时。TLC(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce；R_f＝0.51)指示完全时，用饱和NaHCO₃水溶液处理溶液，然后用CH₂Cl₂萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物溶解于THF(250mL)，并添加TBAF在THF(80.0mL，80.0mmol，2.0当量)中的1M溶液。在室温搅拌混合物1小时。当TLC指示反应完全时，用盐水处理混合物，分层，用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(50％EtOAc/50％己烷)纯化残余物，以产生呈黄色油状的Boc-T59b(THP)(76％，3个步骤)。

TLC：R_f＝0.12(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：δ19.5，25.5，25.6，28.6，30.8，31.1，33.5，44.5，61.5，62.6，69.9，75.0，96.7，111.0，120.9，121.0，128.1，131.8，156.9.

为了获得Boc-T59a及其THP-保护的衍生物，遵循如上相同程序，但是利用AD-混合α，工序产率类似。也可以在最后步骤中引入其他适合的保护基来替代THP。

B.合成系链T104b的标准程序

步骤T104-1：向在THF(500mL)中的(1R，2S)-顺式-2-羟基-环己酸乙酯104-1(获自Julich，目前是Codexis，产品编号15.60，50g，290mmol)添加咪唑(29.6g，435mmol)和TBDMSCl(49.8g，331mmol)。在室温搅拌反应物72小时，然后用饱和NH₄Cl(水溶液)猝灭。用Et₂O(3×)萃取混合物。合并有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液以产生中间体受保护的酯(104-2，93g)，其直接用于下一步骤。

步骤T104-2：将获自上一步骤的104-2(215g，0.75mol)溶解于DCM(2L)，并使溶液冷却至-30℃。经1.5小时的时段，向该溶液添加DIBAL-H(在DCM中的1M溶液，2250mL，2.25mol)。在0℃下搅拌反应混合物1小时，然后在0℃下倒入罗谢尔盐的水溶液(2M，4L)。在室温下剧烈搅拌该混合物过夜，然后用DCM(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到155g 104-3(85％)。

步骤T104-3：在0℃下向在CH₂Cl₂(2L)中的104-3(196g，0.8mol)添加TEMPO(12.5g，80mmol)，随后添加KHCO₃(1.6M，862g)的水溶液和KBr(2.7M，196g)的水溶液。剧烈搅拌混合物，并经45分钟添加11％NaOCl水溶液(573mL，1.04mol，1.3当量)。当完成添加时，在0℃下搅拌混合物另外15分钟，然后用1M Na₂S₂O₃水溶液(1L)猝灭。猝灭混合物，并用CH₂Cl₂(2×500mL)洗涤水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液以提供中间体酸酐(104-4，190g)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

步骤T104-4：将104-4(116g，480mmol)和三苯基膦烯碳酸乙酯(250g，720mmol)溶解于苯(2L)，加热反应物至回流过夜。使混合物冷却至室温并蒸发至50％体积。添加己烷，搅拌混合物15分钟，沉淀Ph₃P＝O副产物，然后通过硅胶垫过滤并用10％EtOAc/己烷冲洗。在减压下浓缩滤液至干以提供104-5(125g，50％)。

步骤T104-5：向溶解于EtOAc(3L)的104-5(200g，640mmol)添加10％Pd/C(50％湿，68g)，并将氢气鼓泡通入混合物，持续16小时。通过Celite垫过滤混合物，用EtOAc(1L)冲洗滤饼。在减压下浓缩合并的滤液和洗液，然后将残余物(104-6，180g)溶解于Et₂O。将溶液冷却至0℃，分批添加LiAlH₄(16.3g，430mmol)，并在0℃下搅拌混合物1小时。通过缓慢添加水(17mL)，随后添加15％NaOH水溶液(17mL)，最后添加水(51mL)，来猝灭反应物。在0℃下搅拌该混合物1小时，然后过滤。真空浓缩滤液以提供中间体醇(104-7，152.6g)。将该醇溶解于THF(3L)和三苯基膦(220.6g，841mmol)，添加苯邻二甲酰亚胺(123.7g，841mmol)和DIAD(154.5mL，785mmol)。在室温搅拌混合物5小时，然后在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解于MTBE，在室温搅拌1小时，期间沉淀Ph₃P＝O副产物，然后过滤。在减压下蒸发滤液，并通过快速色谱法(梯度，5％Et₂O/己烷至20％Et₂O/己烷)纯化残余物，以产生104-8(194g，75％)。

步骤T104-6：将104-8(194g，483mmol)溶解于1％HCl/MeOH的溶液(3L)。在室温下搅拌该溶液过夜，然后用水(1.5L)猝灭。用DCM(2×1.5L)萃取混合物，并将合并的有机级分经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。使残余物穿过硅胶垫，用10％Et₂O/己烷冲洗以除去硅醇副产物，然后用Et₂O冲洗，直到TLC显示没有额外化合物被洗脱为止。减压下除去溶剂以产生呈白色固体的104-9(138.5g，98％)

步骤T104-7：向104-9(135g，470mmol)在MeOH(3L)的溶液中添加肼(88mL，1.41mol)。使该混合物在室温搅拌64小时，然后过滤，并用EtOH(500mL)冲洗滤饼。合并滤液和洗液，并在减压下蒸发。将残余物解于EtOH(1L)，再次过滤，并用EtOH(250mL)冲洗滤饼。合并滤液和洗液，并在减压下蒸发至干。用EtOH(1L)再次溶解残余物，并再次真空干燥至干。然后将残余物溶解于DCM，过滤，并用DCM冲洗滤器。在减压下蒸发合并的滤液和洗液至干，以得到中间体氨基醇104-10，其溶解于THF/水的1∶1混合物(3L)。向该混合物添加Na₂CO₃(150g，1.41mol)，随后添加(Boc)₂O(153.8g，705mmol)。在室温搅拌反应物过夜，并用水猝灭。用Et₂O(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(梯度，15％Et₂O/己烷至50％Et₂O/己烷)纯化得到的残余物以提供呈油状的104-11(73g，60％)。

步骤T104-8：向104-11(13.8g，53.7mmol)在乙基乙烯醚(500mL)的溶液中添加乙酸汞(5.13g，16.1mmol)，并回流加热溶液24小时。然后添加另外0.3当量的乙酸汞，并再次回流加热溶液另外24小时。将溶液冷却至室温，用饱和Na₂CO₃水溶液猝灭，并用Et₂O(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(10％Et₂O/含有2％Et₃N的己烷)纯化残余物，以产生呈无色油状的104-12(8.6g，94％)。

步骤T104-9：在0℃下，经15分钟时段，向104-12(13.2g，46.6mmol)在THF(400mL)的溶液中缓慢添加1M BH₃·THF(69.9mL，69.9mmol)溶液。在0℃搅拌混合物1小时，然后在室温下搅拌2小时。将溶液冷却至0℃，并添加5N NaOH溶液(90mL)，随后添加30％H₂O₂水溶液(200mL)。在0℃搅拌混合物15分钟，然后在室温搅拌2小时。用Et₂O(3×)萃取溶液。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化得到的残余物，以得到Boc-T104b(11.4g，81％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.05分钟，[M+H]⁺302。

使用(1S，2R)-顺式-2-羟基-环己酸乙酯104-13，可以类似地获得对映异构体系链Boc-T104a。

C.合成系链T104b的可选程序

T104b的可选合成途径包括作为关键步骤的使用作为手性助剂的(S)-1-氨基-2-甲氧基甲基吡咯烷(SAMP)腙和作为亲电体的104-C衍生的环己酮的不对称烷基化(Enders，D.Alkylation of Chiral Hydrazones.Asymmetric Synthesis；Morrison，J.D.，编；Academic Press：Orlando，FL，1984；第3卷，pp 275-339.)。使如此获得的104-16依次接受腙裂解和三仲丁基硼氢化锂(L-Selectride)还原，以产生醇104-18。使用溴乙酸O-烷基化，硼烷还原，然后氢解苄基保护基，产生Boc-T104b。

利用类似工序，但使用(R)-1-氨基-2-甲氧基甲基吡咯烷(RAMP)腙作为手性助剂，以相似产率提供Boc-T104a。

D.合成系链T134的标准程序

步骤T134-1：向(R)-(-)-2-氨基-1-丁醇(134-0，50g，561mmol，1.0当量)在THF/水(1∶1，2.8L)中的溶液添加(Boc)₂O(129g，589mmol，1.05当量)和Na₂CO₃(71.3g，673mmol，1.2当量)，并搅拌溶液过夜。真空除去THF，并用***(3×500mL)萃取水相。用1M柠檬酸盐缓冲液(200mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。在硅胶(干裹法，50％EtOAc/己烷)上纯化粗品，产生呈无色油状的134-1(104.9g，554mmol，99％)。

步骤T134-2：在0℃下向134-1(93.8g，496mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(1.24L)中的溶液添加TEMPO(7.75g，49.6mmol，0.1当量)，随后添加2.75M KBr(130g)水溶液和1.6M KHCO₃(570g)溶液。然后在剧烈搅拌下经～30分钟逐滴加入NaOCl(11.5％/水，420mL，645mmol，1.3当量)。在0℃搅拌反应物10分钟，然后添加1M Na₂S₂O₃水溶液(400mL)以猝灭过量氧化剂。在0℃搅拌混合物5分钟，并经90分钟升温至室温。分离相，并用CH₂Cl₂(2×1L)萃取水相。用水(1L)和盐水(500mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩滤液，以产生呈橙色油状的134-2(95g，508mmol，＞100％)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

步骤T134-3：在0℃下向对甲苯磺酰叠氮(117.3g，595mmol，1.2当量，Org.Synth.Coll.第5卷，p.179(1973)；第48卷，p36(1968))在MeCN(7.4L)中的溶液添加K₂CO₃(206g，1.49mol，3当量)，随后添加134-A(98.8g，595mmol，1.2当量)。使反应物升温至室温并搅拌3小时。然后添加来自在MeOH(1.5L)中上一步骤粗品134-2，并搅拌反应物过夜。真空蒸发溶剂，并向残余物添加水(1.5L)和Et₂O(1L)。分离相，并用Et₂O(2×1L)萃取水相。用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。用戊烷(5×500mL)研磨残余物，然后真空浓缩来自研磨的溶剂。通过快速色谱法(梯度，5-10％EtOAc/己烷)纯化得到的残余物，以产生134-3(33.7g，184mmol，2个步骤37％)。

步骤T134-4：将氩气鼓泡通入134-3(20.2g，110mmol，1.7当量)和溴代醇134-B(22.6g，64.8mmol，1.0当量)在MeCN(325mL)中的溶液，持续20分钟。然后添加重结晶的CuI(248mg，1.30mmol，0.02当量)、PdCl₂(PhCN)₂(744mg，1.94mmol，0.03当量)、t-Bu₃PHBF₄(1.22g，4.21mmol，0.065当量)和iPr₂NH(16mL，110mmol，1.7当量)。在室温下，在氩气氛下搅拌反应40小时。通过硅胶垫过滤反应物，用EtOAc冲洗垫。真空去除挥发物，并通过快速色谱法(梯度，5-10-20％EtOAc/己烷)纯化残余物，以得到呈起始溴化物、炔和其他未知杂质的混合物的134-4(18.3g，40.5mmol，62％)。

步骤T134-5：向在无水乙醇(300mL)中的炔134-4(18.2g，40.5mmol，1.0当量)添加10％Pd/C(50％湿，4.29g，0.02当量)。将混合物放入400psi氢气压力下的Parr反应器，持续72小时。通过HPLC监测反应。通过

垫过滤混合物，然后真空浓缩。将残余物溶解于THF，并添加1M TBAF的THF(48mL，48mmol)溶液。在室温搅拌反应物2小时，然后真空蒸发溶剂。通过快速色谱法(梯度，10-15-20-30-40-50％丙酮/己烷)纯化得到的残余物，以产生完全还原(134-5)和部分还原的产物(7.8g，22.9mmol，57％)的混合物。然后将该混合物溶解于无水乙醇(115mL)，并添加10％Pd/C(50％湿，2g，0.04当量)。在Parr反应器中H₂(400psi)下搅拌反应物过夜。通过Celite垫过滤溶液，真空蒸发滤液。通过快速色谱法(梯度，10-20％丙酮/己烷)纯化残余物，以产生T134(5.51g，15.1mmol)。注意，2-(3-氟苯氧基)乙醇常常作为杂质存在于该产物中。为了去除该物质，将不纯的产物溶解于HCl/MeOH(10％w/w)并搅拌24小时，然后真空除去挥发物。将残余物溶解于水(100mL)，然后用MTBE(4×25mL)洗涤，直到TLC证实去除了2-(3-氟苯氧基)乙醇杂质为止。添加THF(100mL)，随后添加Na₂CO₃以调节pH至10。添加过量Boc₂O，并搅拌溶液过夜。真空下蒸发THF，用MTBE(3×100mL)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液以获得残余物，通过快速色谱法(梯度，20-40％丙酮/己烷)纯化残余物以产生呈油状的纯净的Boc-T134a(3.87g，11.3mmol，28％，2个步骤)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.39分钟，M⁺341；

¹H NMR(DMSO，300MHz)：δ7.13-7.06(m，1H)，6.82(dd，1H，J＝2.5，11.5Hz)，6.68-6.56(m，2H)，4.83(t，1H，J＝5.5Hz)，3.98(t，2H，J＝5.1Hz)，3.72(dd，2H，J＝5.5，10.3Hz)，3.32-3.20(m，1H)，2.60-2.40(m，2H)，1.66-1.22(m，4H)，1.39(s，9H)，0.79(t，3H，J＝7.4Hz)。

从134-0的对映异构体开始，构建对映异构体系链T135b。

E.合成系链T135的标准程序

步骤T135-1：向2-溴代-5-氟苯酚(135-0，15.0g，78.5mmol，1.0当量)和135-A(30.2g，126.4mmol，1.6当量)在DMF(Drisolv，225mL)的溶液中添加碳酸钾(13.0g，93.5mmol，1.2当量)、碘化钾(2.5g，15.1mmol，0.19当量)。加热溶液至55℃，并氮气下搅拌过夜。减压下浓缩溶剂至干，然后用水(200mL)稀释残余的油，并用Et₂O(3×150mL)萃取。合并有机相，用1M柠檬酸盐缓冲液(2×)、盐水(1×)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，真空蒸发滤液。通过快速色谱法(10％EtOAc/戊烷)纯化粗品产物，以产生呈淡黄色固体的135-1(20.0g，73％)。

TLC：R_f＝0.68(25％EtOAc/己烷；检测：UV，CMA)。

步骤T135-2：向135-1(17.0g，48.7mmol，1.0当量)在MeOH(Drisolv，162mL)中的溶液添加HCl(12.1M，25μL，0.486mmol，1mol％)，并在室温搅拌反应物2.5小时。然后添加水，用Et₂O(2×300mL)洗涤水层。合并有机层，用饱和NH₄Cl水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液，以留下橙色油。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化，得到10.7g(94％)呈无色油状的135-2。

TLC：R_f＝0.57(30％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.48(dd，J＝6.3，8.7Hz，1H)，6.58-6.68(m，2H)，4.12(m，2H)，4.01(m，2H)，2.17(br，1H)。

步骤T135-3：将MeCN(26mL)引入火焰干燥的烧瓶中，并用多个氩气/真空循环脱气30分钟。然后，添加Pd(OAc)₂(143mg，0.640mmol，0.05当量)、P(o-tol)₃(388mg，1.27mmol，0.10当量)、二Boc-烯丙胺(135-B，参见以下程序，3.6g，14.0mmol，1.1当量)、Et₃N(3.6mL，25.5mmol，2当量)和醇135-2(3.0g，12.8mmol，1.0当量)。室温下搅拌溶液，快速脱气，然后在110℃、氩气氛下加热至回流，持续20小时。使反应混合物冷却至室温，用H₂O(20mL)猝灭，并分层。用Et₂O(2×60mL)洗涤水层。合并有机层，用饱和NH₄Cl水溶液(70mL)、盐水(70mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液，以产生粗品产物。通过快速色谱法(梯度，30％至40％Et₂O/己烷)纯化，得到4.25g(81％)呈浅黄色固体的135-3。

TLC：R_f＝0.39(30％Et₂O/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝8.55分钟，[M+Na]⁺434；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.35(dd，J＝6.9，8.7Hz，1H)，6.79(d，J＝15.9Hz，1H)，6.56-6.68(m，2H)，6.17(dt，J＝未测定，15.9Hz，1H)，4.31(dd，J＝1.2，6.3Hz，2H)，4.05-4.09(m，2H)，3.94-3.98(m，2H)，2.26(br m，1H)，1.51(s，18H)。

步骤T135-4：在氩气下，向135-3(4.25g，10.3mmol，1.0当量)在DCM(Drisolv，52mL)中的溶液添加TFA(1.15mL，15.5mmol，2.0当量)，并在室温搅拌溶液1.75小时，用TLC监测。如果反应不完全，添加额外TFA(0.5或1当量)。减压下蒸发溶剂，并通过预吸附于二氧化硅的快速色谱法(梯度，40％至50％Et₂O/己烷)纯化得到的油，以产生2.2g(70％)呈白色固体的Boc-T135。

TLC：R_f＝0.46(40％Et₂O/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.63分钟，[M+Na]⁺334；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.15-7.087(m，1H)，6.74-6.52(m，4H)，4.74(s(br)，1H)，4.13-4.09(m，2H)，4.00-3.97(m，2H)，3.92(t(br)，J＝5Hz，2H)，1.93(s(br)，1H)，1.46(s，9H)。

F.合成试剂135-B的标准程序

步骤T135-5：在0℃下，经2小时，向烯丙胺(30g，0.526mol)和三乙胺(95mL，0.684mol)在DCM(900mL)中的溶液分批添加(Boc)₂O(112g，0.531mol)，然后搅拌溶液过夜。用柠檬酸盐缓冲液(pH3.5，3×)、NaHCO₃(2×)和盐水(2×)连续洗涤反应混合物，经无水MgSO₄干燥，过滤，并真空蒸发滤液以得到80.5g(97％)的135-B1。

TLC：R_f：0.35(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T135-6.向135-B1(80.5g，0.513mol)在CH₃CN(1.8L)中的溶液添加(Boc)₂O(134.2g，0.615mol)和DMAP(4.39g，0.036mol)。在60℃加热混合物过夜。除去溶剂，并通过干裹法(10％EtOAc/己烷)纯化粗品化合物以提供呈白色固体的135-B(105g，80％)。

TLC：R_f：0.27(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KmnO₄)；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ5.78-5.90(1H，m)；5.09-5.20(2H，m)；4.17(2H，dt，J＝5.5和1.5Hz)；1.5(9H，s)。

G.合成系链T136的标准程序

步骤136-1：在室温下，向2-溴代-4-氟苯酚(136-0，30.0g，158mmol，1.0当量)和受保护的溴乙醇(136-A，41.4g，173.8mmol，1.1当量)在DMF(Drisolv，320mL)中的溶液添加碳酸钾(28.0g，205.4mmol，1.3当量)、碘化钾(5.24g，31.6mmol，0.2当量)。加热溶液至55℃，并在氮气下搅拌过夜。使混合物冷却至室温，并添加水(400mL)。用Et₂O(3×300mL)洗涤得到的溶液。用H₂O(2×300mL)、饱和NH₄Cl水溶液(300mL)、盐水(300mL)连续洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥，过滤，并真空蒸发滤液至干。由此获得的粗品产物没有进一步纯化而用于下一步骤，但是可以通过快速色谱法(10％Et₂O/己烷)纯化以产生呈无色固体的烷基化苯酚(79mmol规模，27.3g，99％)。

TLC：R_f＝0.69(10％Et₂O/己烷；检测：UV，CMA)。

步骤136-2：向来自步骤136-1的粗品产物(55.1g，158mmol，1.0当量)在THF(320mL)中的溶液添加TBAF(在THF中的1M溶液，237mL，237mmol，1.5当量)。在室温搅拌反应物过夜，然后添加H₂O(300mL)，并分层。用EtOAc(2×300mL)洗涤水相。用饱和NH₄Cl水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化粗品产物，以得到26.0g(70％，2个步骤)呈浅橙色固体的136-1(在其他批次中，获得呈无色固体的136-1)。

TLC：R_f＝0.34(40％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO4₎。

步骤136-3：将MeCN(130mL)引入火焰干燥的烧瓶中，并用多个氩气-真空循环脱气30分钟。然后，添加Pd(OAc)₂(715mg，3.19mmol，0.05当量)、P(o-tol)₃(1.94g，6.38mmol，0.10当量)、二Boc-烯丙胺(135-B，18.0g，70.2mmol，1.1当量)、Et₃N(18mL，127mmol，2当量)和136-1(15.0g，63.8mmol，1.0当量)。室温搅拌溶液并快速脱气，然后在110℃、氩气氛下加热20小时。使反应混合物冷却至室温，用H₂O(100mL)猝灭，分层，并用Et₂O(2×90mL)洗涤水层。用饱和NH₄Cl水溶液(100mL)、盐水(100mL)洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液至干，以产生粗品产物，其没有进一步纯化而用于下一步骤，但是可以通过快速色谱法(梯度，30％至40％Et₂O/己烷)纯化，以得到11.6g(80％，35mmol规模)呈浅黄色固体的136-2。

TLC：R_f＝0.37(30％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)。

步骤136-4：在氩气下，向粗品136-2(26.2g，63.8mmol，1.0当量)在DCM(Drisolv，320mL)中的溶液添加TFA(9.5mL，127.6mL，2.0当量)。在室温搅拌溶液1.75小时，用TLC监测。完成时，减压下蒸发溶剂，并通过预吸附于二氧化硅的快速色谱法(40％Et₂O/己烷)纯化得到的油，以产生10.2g(2个步骤51％)Boc-T136。在单独实验中，获得呈浅黄色固体的6.1g(70％，28.2mmol规模)Boc-T136。

TLC：R_f＝0.29(40％Et₂O/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.62分钟，[M+Na]⁺334；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.08(dd，J＝3，9Hz，1H)，6.89-6.76(m，3H)，6.17(dt，J＝6，16Hz，1H)，4.81(s(br)，1H)，4.06-4.02(m，2H)，3.96-3.93(m，2H)，3.88(m(br)，2H)，2.71(s(br)，1H)，1.45(s，9H)。

H.合成系链T137的标准程序

步骤T137-1：在-78℃、氮气下，向n-BuLi(在己烷中的1.6M溶液，82.0mL，130.8mmol，1.1当量)在THF(无水，从Na-二苯甲酮羰游基新鲜蒸馏，450mL)中的溶液滴加3-氟茴香醚(137-0，15.0g，118.9mmol，1.0当量)在THF(无水，45mL)中的溶液(经～25分钟)。在-78℃下搅拌溶液30分钟。然后在-78℃下逐滴加入I₂(36.1g，142.7mmol.1.2当量)在THF(无水，100mL)中的溶液(添加时间：30分钟，在添加结束时用THF冲洗添加漏斗)。使溶液升温至-60℃，并搅拌45分钟，用TLC监测反应进程。当反应完全时，在-60℃小心添加H₂O(100mL)，随后添加Na₂SO₃(10％w/v；100mL)，并搅拌混合物5分钟。用己烷(3×)洗涤水相。用NaHSO₃(10％w/v；2×)、H₂O(2×)洗涤合并的有机相，经无水MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，以得到黄色残余物。通过快速色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化，产生25.3g(84％)呈无色油状的137-1。粗品产物还可以直接用于工序的下一步骤。

TLC：R_f＝0.34(5％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.64分钟，M⁺252.

步骤T137-2：在-30℃、氮气下，向137-1(25.0g，99.2mmol，1.0当量)在DCM(Drisolv，100mL)中的溶液滴加BBr₃在DCM中的溶液(1.0M，248mL，248mmol，2.5当量)(经～30分钟)。在-30℃下搅拌溶液3小时，然后升温至室温。冷却混合物至0℃，并小心逐滴加入MeOH(气体发生)，随后添加H₂O。除去冷却浴，并在室温下搅拌混合物10分钟。分离水层，并用DCM洗涤。合并有机层，用盐水(300mL)洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，以产生黑色残余物。通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化，得到21.5g(91％)呈棕色油状的137-2。粗品油还可以直接用于工序的下一步骤。

TLC：R_f＝0.35(20％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC：梯度B4，t_R＝7.02分钟.

步骤T137-3：在室温下向137-2(18.8g，79.07mmol，1.0当量)和经保护的溴乙醇(136-A，20.8g，87.0mmol，1.1当量)在DMF(Drisolv，320mL)中的溶液添加碳酸钾(14.2g，102.8mmol，1.3当量)、碘化钾(2.62g，15.8mmol，0.2当量)。加热溶液至55℃，并在氮气下搅拌过夜。使混合物冷却至室温，并添加H₂O(500mL)。分层，并用Et₂O(3×300mL)洗涤水层。合并有机层，用H₂O(2×300mL)、饱和NH₄Cl水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。由此获得的粗品油没有进一步纯化而用于下一步骤。

步骤T137-4：向来自步骤T137-3的粗品油(31.0g，79.07mmol，1.0当量)在MeOH(263mL)中的溶液添加HCl(12.1M，65μL，0.79mmol，0.01当量)。室温下搅拌反应物2.5小时，然后添加H₂O并分层。用Et₂O(2×300mL)洗涤水层。合并有机层，用饱和NH₄Cl水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，以产生橙色油。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化，得到26.0g(70％，2个步骤)呈白色固体的137-3。

TLC：R_f＝0.38(50％MTBE/己烷；检测：UV，CAM)。

步骤T137-5：将MeCN(92mL)引入火焰干燥的烧瓶中，并用多个氩气-真空循环脱气30分钟。然后，添加Pd(OAc)₂(516mg，2.30mmol，0.05当量)、P(o-tol)₃(1.40g，4.61mmol，0.10当量)、二Boc-烯丙胺(135-B，13.0g，50.7mmol，1.1当量)、Et₃N(13.0mL，92.18mmol，2当量)和醇137-3(13.0g，46.1mmol，1.0当量)。室温下搅拌溶液，并快速脱气，然后在氩气下加热至110℃，持续20小时。使反应混合物冷却至室温，用H₂O(150mL)猝灭，并分层。用Et₂O(2×90mL)洗涤水层。合并有机层，用饱和NH₄Cl水溶液(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液，以产生粗品137-4，其没有进一步纯化而用于下一步骤，但是可以通过快速色谱法(梯度，30％至40％Et₂O/己烷)纯化。

TLC：R_f＝0.35(30％Et₂O/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC：梯度A4，t_R＝8.54分钟.

步骤T137-6：在氩气下，向粗品137-4(7.0g，17.0mmol，1.0当量)在DCM(Drisolv，90mL)中的溶液添加TFA(1.90mL，127.6mL，2.0当量)，并在室温搅拌溶液1.75小时，用TLC监测。如果反应不完全，可以添加更多TFA(0.5当量)。完成时，减压下蒸发溶剂，并通过预吸附于二氧化硅的快速色谱法(梯度，40％至50％Et₂O/己烷)纯化得到的油，在用己烷研磨之后，得到3.71g(70％)呈白色固体的Boc-T137。

TLC：R_f＝0.30(40％Et₂O/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.71分钟，[M+Na]⁺334；

I.合成系链T138的标准程序

步骤T138-1：向2，3-二氟代-6-溴苯酚(138-0，25g，120mmol，1.0当量)和135-A(48.6g，239mmol，1.7当量)在无水DMF(535mL)中的溶液添加碳酸钾(19.8g，144mmol，1.2当量)和碘化钾(4.0g，24mmol，0.2当量)。加热溶液至55℃，并在氮气下搅拌过夜。减压下除去溶剂直至干燥，然后，用水稀释残余油，用二***(3×)萃取。合并有机相，并用柠檬酸盐缓冲液(2×)和盐水(1×)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩滤液，以产生呈棕色固体的138-1(32g)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f：0.83(30％/70％EtOAc/己烷)；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.87分钟，[M+H+2]⁺369.

步骤T138-2：向138-1(30.2g，120mmol，1.0当量)在THF(600mL)中的溶液添加TBAF(在THF中的1.0M溶液，240mL，240mmol，2.0当量)。室温搅拌反应物1小时。用二***稀释混合物，用饱和氯化铵水溶液(1×)和盐水(1×)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法(25％EtOAc/己烷)纯化残余物以提供呈无色油状的138-2(27.2g，90％，2个步骤)。

TLC：R_f：0.27(30％/70％EtOAc/己烷)；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC：梯度A4，t_R＝5.73分钟.

步骤T138-3：使用以下循环使138-2(10.63g，40.0mmol，1.0当量)在乙腈(84mL)中的溶液脱气：真空、氮气、真空、氮气。向其中添加乙酸钯(472mg，0.05当量)和P(o-tol)₃(1.38g，0.1当量)。再次使混合物脱气，然后添加三乙胺(11.8mL，79mmol，2.0当量)和135-B(11.8g，43mmol，1.1当量)。在110℃搅拌溶液过夜。然后添加水，并用乙酸乙酯(4×)萃取水相。用水和盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化由此获得的残余物，以产生呈金色浆体的138-3(12.4g，73％)。

TLC：R_f：0.28(40％/60％EtOAc/己烷)；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝9.06分钟，[M+Na]⁺452.

步骤T138-4：在氮气下向138-3(11.53g，27.0mmol，1.0当量)在DCM(135mL)中的溶液添加TFA(3.0mL，40mmol，1.5当量)。在室温搅拌反应物直至完全，然后在减压下蒸发溶剂至干。通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈黄色固体的Boc-T138。

TLC：R_f：0.25(40％/60％EtOAc/己烷)；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.83分钟，[M]⁺329，[2M+H]⁺559；

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.2(1H，dd，J＝11.2和8.9Hz)；6.77至6.66(2H，m)；6.13(1H，dt，J＝15.9，6.2Hz)；4.71(1H，bs)；4.06至4.01(2H，m)；4.01至3.93(2H，m)；3.92至3.85(2H，m)；2.21(1h，bs)；1.46(9H，s)。

J.合成系链T139的标准程序

步骤T139-1：向溴化物139-0(25g，120mmol，1.0当量)和经保护的溴乙醇139-A(48.6g，239mmol，1.7当量)在无水DMF(535mL)中的溶液添加碳酸钾(19.8g，144mmol，1.2当量)和碘化钾(4.0g，24mmol，0.2当量)。加热溶液至55℃，然后在氮气下搅拌过夜。减压下除去溶剂直至干燥，然后用水稀释残余油，并用Et₂O(3×)萃取。合并有机相，并用柠檬酸盐缓冲液(2×)和盐水(1×)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。由此获得呈棕色固体的粗品产物139-1(32g)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f：0.83(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.87分钟，[M+2]⁺368.

步骤T139-2：向139-1(30.2g，120mmol，1.0当量)在THF(600mL)中的溶液添加TBAF(在THF中的1.0M溶液，240mL，240mmol，2.0当量)。室温搅拌反应物1小时。然后用Et₂O稀释混合物，用饱和氯化铵水溶液(1×)和盐水(1×)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速色谱法(25％EtOAc/己烷)纯化粗品残余物，以产生呈无色油状的139-2(27.2g，90％，2个步骤)。

TLC：R_f：0.27(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T139-3：向醇139-2(10g，40mmol，1.0当量)、Boc-炔丙基胺139-B(10.4g，68mmol，1.7当量)在二噁烷(ACS级，40mL)中的溶液鼓泡通入氩气15-20分钟。然后，添加tBu₃PHBF₄(454mg，0.03当量)，重结晶的碘化铜(I)(150mg，0.02当量)、二氯双(苄腈)钯(II)(150mg，0.02当量)和二异丙基胺(9.5mL，67mmol，1.7当量)，并在室温氩气下搅拌反应混合物过夜。用EtOAc稀释溶液，经硅胶垫过滤，用乙酸乙酯洗涤，直至不再有物质被洗脱为止。减压浓缩滤液，然后通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化粗品残余物，以产生呈金色浆体的炔139-3(8.3g，70％)。

TLC：R_f：0.28(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.71分钟，M⁺327.

步骤T139-4：在氮气下，向炔139-3(8.3g，25mmol，1.0当量)在95％乙醇(241mL)中的溶液添加碳载钯(5.7g，50％水)，然后向混合物鼓泡通入氢气过夜。当¹H NMR指示反应完全时，向混合物鼓泡通入氮气10分钟，以除去过量氢。通过Celite垫过滤溶剂，并用乙酸乙酯洗涤，直至不再有物质被洗脱为止。减压浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化得到的粗品残余物，以产生呈淡黄色油状的Boc-T139(7.65g，90％)。

TLC：R_f：0.13(25/75EtOAc/己烷；检测：UV，茚三酮)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.91分钟，M⁺331；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ6.85-7.0(m，1H，)，6.6-6.7(m，1H，)，4.9-5.0(m，1H)，3.95-4.1(m，4H)，3.15-3.2(m，2H)，2.9-3.0(m，1H)，2.55-2.65(m，2H)，1.75-1.95(m，2H)，1.45(s，9H)。

K.合成系链T140的标准程序

步骤T140-1：向溴化物140-0(25g，120mmol，1.0当量)和经保护的溴乙醇140-A(48.6g，239mmol，1.7当量)在无水DMF(535mL)中的溶液添加碳酸钾(19.8g，144mmol，1.2当量)和碘化钾(4.0g，24mmol，0.2当量)。加热溶液至55℃，并在氮气下搅拌过夜。减压下除去溶剂直至干燥，然后用水稀释残余油，并用Et₂O(3×)萃取。合并有机相，用1M柠檬酸盐缓冲液(2×)和盐水(1×)洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。由此获得的粗品产物140-1(32g)是棕色固体，且其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f：0.83(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.87分钟，[M+2]⁺368.

步骤T140-2：向醇140-1(30.2g，120mmol，1.0当量)在THF(600mL)中的溶液添加TBAF(在THF中的1.0M溶液，240mL，240mmol，2.0当量)。室温搅拌反应物1小时。用Et₂O稀释反应混合物，用饱和氯化铵水溶液(2×)和盐水(1×)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空浓缩滤液。通过快速色谱法(25％EtOAc/己烷)纯化粗品残余物，以产生呈无色油状的醇140-2(27.2g，90％，2个步骤)。

TLC：R_f：0.27(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T140-3：向醇140-2(9.5g，38mmol，1.0当量)和140-B(10.82g，64mmol，1.7当量)在二噁烷(ACS级，38mL)中的溶液鼓泡通入氩气15-20分钟。然后，添加tBu₃PHBF₄(707mg，0.07当量)、重结晶的碘化铜(I)(143mg，0.02当量)、二氯双(苄腈)钯(II)(431mg，0.03当量)和二异丙基胺(9.5mL，67mmol，1.7当量)，并在室温氩气下搅拌反应混合物过夜。用EtOAc稀释溶液，经硅胶垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤，直至不再有物质被洗脱为止。减压除去溶剂，然后通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化粗品产物，以产生呈金色浆体的炔140-3(6.5g，54％)。

TLC：R_f：0.28(30/70EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.01分钟，M⁺341.

步骤T140-4：在氮气下，向炔140-3(6.2g，18mmol，1.0当量)在95％乙醇(171mL)中的溶液添加碳载钯(4.04g，50％水)，然后向其中鼓泡通入氢气过夜。当¹H NMR指示反应完全时，向反应物鼓泡通入氮气10分钟，以除去过量氢。通过Celite垫过滤溶剂，并用乙酸乙酯洗涤，直至不再有物质被洗脱为止。减压浓缩滤液，通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化粗品产物，以产生呈淡黄色油状的Boc-T140a(4.63g，75％)。

TLC：R_f：0.13(25/75EtOAc/己烷；检测UV，茚三酮)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.81分钟，M⁺345；

¹H NMR(300MHz，DMSO)：δ6.8-7.0(m，1H，)，6.0-6.7(m，1H，)，4.5-4.65(m，1H)，3.85-4.1(m，4H)，3.55-3.75(m，1H)，3.2-3.35(m，1H)，2.6-2.7(m，1H)，2.4-2.6(m，1H)，1.8-2.0(m，1H)1.45(s，9H)，1.15(d，3H，J＝6.6Hz)。

在相同工序中使用140-B的对映异构体140-C，其可以用来提供对映异构体系链Boc-T140b。

L.合成系链T141的标准程序

步骤T141-1：向腈141-1(6.0g，18.7mmol，1.0当量)在THF(93.5mL)中的溶液添加10M BH₃·DMS的溶液(2.8mL，28.1mmol，1.5当量)，并回流搅拌得到的混合物过夜。通过TLC(20％EtOAc/己烷；检测：UV，茚三酮；产物胺处在基线)监测反应进程。一旦完成，冷却溶液至0℃，并缓慢添加MeOH以猝灭过量BH3。在室温搅拌混合物1小时，然后添加Et₃N(3.9mL，28.1mmol，1.5当量)和(Boc)₂O(5.1g，22.4mmol，1.2当量)。在室温搅拌得到的混合物3天，通过TLC(20％EtOAc/己烷；检测：UV，茚三酮；R_f＝0.15)监测反应。然后缓慢添加饱和NH₄Cl水溶液并分层。用EtOAc萃取水相，并且合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩滤液。通过快速色谱法(梯度，20％至40％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈黄色油状的141-2(4.8g，53％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝11.86分钟，[M+H]⁺426.

步骤T141-2：向141-2(17g，4.00mmol，1.0当量)在DCM(20mL)中的溶液添加H₂O(81μL，4.50mmol，1.125当量)和戴斯-马丁(Dess-Martin)氧化剂(2.1g，5.0mmol，1.25当量)。室温下搅拌得到的混合物25分钟。通过TLC(15％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce；R_f＝0.48)监测反应进程。缓慢添加硫代硫酸钠水溶液(10％，25mL)。分离水相，并用硫代硫酸钠水溶液(10％，2×25mL)洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(梯度，5％至15％EtOAc/己烷)纯化残余物以提供呈无色油状的141-3(1.4g，82％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝12.38分钟，[M+Na]⁺446.

步骤T141-3：向141-3(1.4g，3.30mmol，1.0当量)在DCM(26mL)中的溶液添加原甲酸三甲酯(1.1mL，9.90mmol，3当量)、乙二醇(1.8mL，33.0mmol，10当量)和APTS(62mg.0.33mmol，0.1当量)。室温下搅拌得到的混合物25分钟。通过TLC(40％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce；R_f＝0.14.)和HPLC监测反应进程。添加饱和NaHCO₃水溶液(30mL)，并用DCM(3×30mL)萃取得到的水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(梯度，40％至60％EtOAc/Hex)纯化残余物，以产生呈无色油状的Boc-T141(1.1g，92％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.45分钟，M⁺353；

¹H MR(CDCl₃，ppm)：δ7.42(dd，J＝7.61，1.76Hz，1H)，7.27(dt，J＝7.79，7.76，1.80Hz，1H)，7.00-6.85(m，2H)，4.97(br，1H)，4.20-3.65(m，9H)，3.17(dd，J＝12.04，5.98Hz，2H)，2.34(t，J＝6.43，6.43Hz，2H)，1.42(s，9H)。

M.合成系链T142的标准程序

步骤142-1.向142-1(4.2g，9.9mmol，1.0当量)在DCM(49.5mL)中的溶液添加H₂O(200μL，11.1mmol 1.13当量)和戴斯-马丁氧化剂(6.28g，14.8mmol，1.5当量)。室温下搅拌反应物2小时。添加第二份的戴斯-马丁氧化剂(1.05g，2.5mmol，0.25当量)，并搅拌反应物另外2小时。通过过滤除去得到的白色沉淀，并用DCM冲洗。合并滤液和冲洗液，并用10％硫代硫酸钠水溶液洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液至干。通过快速色谱法(梯度，10％至15％至20％EtOAc/己烷)纯化残余物以获得呈白色固体的142-2(3.4g，82.8％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝12.17分钟，[M+Na]⁺446.

步骤142-2：向142-2(3.46g，8.2mmol，1.0当量)、原甲酸三甲酯(2.7mL，24.5mmol，3.0当量)和乙二醇(4.8mL，81.8mmol，10.0当量)在DCM(41mL)中的溶液添加PTSA(154mg，0.81mmol，0.1当量)，并在室温下搅拌反应物4小时。添加NaHCO₃饱和水溶液，并分离有机相。用DCM(2×)萃取水相，并将合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，且真空除去滤液。通过快速色谱法(梯度，40％，50％，60％75％EtOAc/己烷)纯化残余物以提供呈白色固体的Boc-T142(2.18g，75.6％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.39分钟，[M+H]⁺354；

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：δ7.29-7.17(2H，m)，6.93-6.84(2H，m)，5.00(1H，bs)，4.15-4.08(3H，bm)，3.98-3.85(5H，m)，3.64(1H，bs)，3.28(1H，bd)，3，10(2H，m)，1.45(9H，s)。

N.合成系链T143的标准程序

步骤T143-1：在0℃、氮气氛下，向充分搅拌的2-羟基苯乙醇(143-0，Aldrich，8.0g，58mmol，1.0当量)在DMF(200mL)中的溶液分批添加NaH(60％于矿物油中，2.32g，58mmol，1.0当量)。在0℃下继续搅拌10分钟，然后添加溴烷烃(143-A，20.8g.87mmol，1.5当量)，随后添加KI(1.9g，11.6mmol，0.2当量)，并搅拌反应物过夜，使之逐渐升温至室温。可以使用HPLC监测醇起始材料的消失。真空浓缩溶液(真空泵，浴温大约50℃)，然后添加EtOAc(300mL)。用饱和NaHCO₃水溶液(2×100mL)、水(1×100mL)、盐水(1×100mL)洗涤有机相，然后干燥(MgSO₄)，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化得到的液体残余物以产生10.2g(59％)呈淡黄色液体的143-1。还从863μL醇进行该反应以提供1.70g产物(83％)。还使用作为作为碱的K₂CO₃进行烷基化，并在70℃加热，以57％产率产生143-B1。

TLC：R_f＝0.29(20％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝9.50分钟，[M+H]⁺297.

步骤T143-2：在0℃、氮气氛下，向经搅拌的143-1(11.3g，38.0mmol，1.0当量)、DMAP(464mg，3.8mmol，0.1当量)和三乙胺(5.81mL，41.8mmol，1.1当量)在二氯甲烷(127mL)中的溶液分批添加对甲苯磺酰氯(7.61g，39.9mmol，1.05当量)。在0℃下继续搅拌2小时(期间一些盐沉淀)，然后在室温搅拌1小时。当TLC监测指示所有143-1耗尽时，添加100mL二氯甲烷，并用饱和NaHCO3水溶液(2×100mL)、水(1×100mL)、盐水(1×100mL)洗涤溶液，然后干燥(MgSO₄)，过滤并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化液体残余物以提供14.6g(85％)呈黄色浆体的143-2。还从100mg醇进行该反应以提供138mg产物(91％)。

TLC：R_f＝0.35(20％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ0.06(6H，s)，0.89(9H，s)，2.42(3H，s)，2.97(3H，t，J＝7.0)，3.85-3.95(4H，叠加)，4.12(2H，t，J＝7.0)，6.75-6.87(2H，m)，7.04-7.09(1H，m)，7.14-7.25(3H，m)，7.63-7.69(2H，m)。

步骤T143-3：向143-2(14.6g，32.4mmol，1.0当量)、KI(13.5g，81mmol，2.5当量)和二异丙基乙胺(8.46mL，48.6mmol，1.5当量)在DMF(65mL)中的溶液一次性添加143-B(参见以下合成，6.82g，46.7mmol，1.44当量)。在室温、真空下在Ace管(Ace Glass，Inc.，150mL容积)中搅拌得到的悬浮液，以使DMF脱气。拧上螺旋帽(Teflon涂层)，并在搅拌下加热反应至100℃过夜(加热后，悬浮液变成溶液)，之后HPLC指示甲苯磺酸酯消失。冷却溶液(一些盐在室温下沉淀)，并添加饱和NaHCO₃水溶液(300mL)。用EtOAc(3×100mL)萃取该溶液，并用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩滤液(真空泵除去残余DMF)。通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化，得到2.70g(20％)呈黄色油状的143-3。还从138mg 143-2进行该反应，以产生89mg产物(68％)。

TLC：R_f＝0.35(20％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝8.09，11.05分钟(可能的旋转异构体)，[M+H]⁺425；

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ0.10(6H，s)，0.91(9H，s)，1.46(9H，s)，2.17(2H，s)，2.60(2H，s)，2.85(3H，s)，3.98-4.05(4H，叠加)，5.60-5.75(1H，br s)，6.80-6.90(2H，m)，7.13-7.19(2H，m)。

步骤T143-4：在0℃下，向经搅拌的143-3(2.70g，6.36mmol，1.0当量)在THF(32mL)中的溶液滴加TBAF(在THF中的1M溶液，7.0mL，7.0mmol，1.1当量)。在0℃下继续搅拌2小时，此时TLC指示没有剩余的起始材料。真空浓缩溶液(浴温，室温)，并通过快速色谱法(梯度，10％，50％，70％EtOAc/己烷)纯化得到的黄色油以提供呈淡黄色油状的143-4(1.72g，87％)，其在冷冻时固化。还从89mg143-3进行该反应以提供61mg产物(94％)。

TLC：R_f＝0.10(20％EtOAc/己烷；检测：UV，KMnO₄)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝5.72分钟，[M+H]⁺311；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ1.47(9H，s)，2.63(3H，br s)，2.80-2.95(4H，叠加)，3.09-3.25(1H，br s)，3.95-4.03(2H，br s)，4.64-4.10(2H，m)，5.75-5.79(1H，br s)，6.81-6.92(2H，m)，7.12-7.21(2H，m)。

O.合成试剂143-B的标准程序

步骤T143-5：在0℃下，在异丙醇(188mL)中搅拌多水合肼(143-B1，Aldrich，含有未知量的水；47g，大约734mmol，1.0当量)15分钟。然后在0℃下向第一溶液逐滴加入在异丙醇(94mL)中的Boc₂O(80g，367mmol，0.5当量)。添加第二溶液时，溶液变得浑浊，并观察到气体逸出。在0℃下搅拌该溶液20分钟，然后真空浓缩(浴温，45℃)；溶液在加热时变得澄清。向残余物添加二氯甲烷(200mL)，且溶液经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液以提供46.7g呈无色浆体的143-B2，其在冰箱中储存时固化。通常，其纯度足以(TLC，¹H NMR)用于下一步骤。还可以进行快速色谱法(MeOH/二氯甲烷)以提供高纯样品。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ1.41(9H，s)，3.69(2H，br s)，5.80(1H，br s)。

步骤T143-6：使用配有橡胶隔膜的圆底烧瓶，向143-B2(46.7g，353mmol，1.0当量)和粉末状

分子筛(Aldrich-activated，原样使用，9.3g，20％重量)在二氯甲烷(1L)中的搅拌悬浮液滴加苯甲醛(35.7mL，353mmol，1.0当量)。通过取出小份的¹H NMR监测反应，且5小时之后显示反应完全。过滤除去分子筛，并真空浓缩滤液，产物在蒸发期间沉淀，得到呈白色固体的143-B3(78.1g，定量)，其纯度足以原样用于下一个反应。

TLC：R_f＝0.70(5％MeOH/CH₂Cl₂；检测：KMnO₄，UV)。

步骤T143-7：在室温下向143-B3(78.1g，353mmol，1.0当量)在MeOH/AcOH(9/1，1L)中的搅拌溶液分批添加氰基硼氢化钠(44.4g，706mmol，2.0当量)。浑浊溶液在添加143-B3后缓慢澄清并伴随氢逸出。在室温搅拌反应物过夜(TLC和¹H NMR显示完全)。真空浓缩溶液至干(至少一次与甲苯共蒸发，以除去AcOH)，且将残余物溶解于饱和NaHCO₃水溶液(900mL)。用CH₂Cl₂(3×300mL)萃取水层，且合并的萃取物经干燥(MgSO₄)，过滤，并真空浓缩滤液，以产生呈无色浆体的143-B4(60.4g，76％)，通过TLC和NMR指示，其纯度足以原样用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.45(2％MeOH/CH₂Cl₂；检测：KMnO4，UV)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ1.42(9H，s)，3.98(2H，s)，6.01(1H，br s)，7.24-7.41(5H，叠加)。

步骤T143-8：在配有橡胶隔膜的圆底烧瓶中，室温下向143-B4(30g，135mmol，1.0当量)在MeOH(450mL)中的搅拌溶液连续添加低聚甲醛(27g，270mmol，2.0当量)、氰基硼氢化钠(21g，337mmol，2.5当量)和AcOH(7.73mL，135mmol，1.0当量)。室温搅拌反应物过夜，此时，取出小份的¹H NMR显示完全反应(其难以通过TLC跟踪)。真空浓缩(浴温大约30℃)，以产生白色胶，其溶解于饱和NaHCO₃水溶液(1L)。用CH₂Cl₂(3×500mL)萃取水层，干燥(MgSO₄)，过滤，并减压浓缩滤液，以得到12.1g(38％)呈白色固体的143-B5，NMR和TLC显示其纯度足以原样使用。

TLC：Rf ＝0.35(2％MeOH/CH₂Cl₂；检测：KMnO₄，UV)；

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ1.40(9H，s)，2.61(3H，s)，3.92(2H，br s)，4.02(1H，br s)，5.42(1H，br s)，7.26-7.40(5H，叠加)。

步骤T143-9：在室温下，将氩气鼓泡通入143-B5(12.1g，51.3mmol，1.0当量)在无水乙醇(256mL)中的溶液30分钟。然后向搅拌的溶液小心添加10％Pd/C(2.72g，2.56mmol，0.05当量)，并向混合物鼓泡通入氢气30分钟。此后，将氢气球安装在橡胶隔膜密封的圆底烧瓶上，并在室温搅拌反应物过夜。通过Celite垫过滤，用在CH₂Cl₂中的10％MeOH溶液洗涤，随后真空浓缩滤液，得到呈无色油状的143-B(7.49g，91％)，其在静置时固化。1H NMR和TLC显示该材料纯度足以原样使用。

TLC：R_f＝0.60(2％MeOH/CH₂Cl₂；检测：KMnO₄，UV)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ1.41(9H，s)，2.61(3H，s)，6.01(1H，br s)。

P.合成系链T144的标准程序

步骤T144-1：向59-4(如针对T59的标准程序中描述的来合成，4.0g，9.4mmol，1.0当量)在MeI(37.6mL)中的溶液添加Ag₂O(21.8g，94mmol，10当量)，并在室温搅拌反应物2天。过滤除去固体，并用MeI冲洗。向滤液添加第二份Ag₂O(21.8g，94mmol，10当量)，并搅拌反应物另外2天。通过TLC(3/7，EtOAc/己烷)进行反应物监测。过滤溶液，并用DCM冲洗残余物。真空浓缩滤液，通过快速色谱法(梯度，20％to25％EtOAc/己烷)纯化粗品残余物，以产生经保护的甲醚中间体(2.2g，53.3％)。此外，回收一些起始材料(1.6g)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.54分钟，[M+H]⁺440.

步骤T144-2：向经保护的甲醚中间体(2.2g，5.0mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的溶液添加1.0M TBAF在THF中的溶液(7.5mL，7.5mmol，1.5当量)，并在室温搅拌反应1.5小时。添加盐水，并用MTBE(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩滤液至干。通过快速色谱法(梯度，1/1至3/2EtOAc/己烷)纯化残余物以提供Boc-T144b(1.6g，100％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.43分钟，[M+H]⁺326；

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：δ7.22-7.16(2H，m)，6.93-6.83(2H，m)，5.05(1H，bs)，4.16-4.07(3H，m)，4.00-3.98(2H，m)，3.59(1H，bs)，3.33(3H，s)，3.06-2.9(1H，m)，2.90-2.79(2H，m)，1.44(9H，s)。

可以从对映异构体前体59-5获得对映异构体系链Boc-T144a。如前所示，转而如针对59-4所描述来合成该化合物，但使用AD-混合α。

Q.合成系链T145的标准程序

步骤T145-1：向7-羟基茚酮(145-0，2.0g，13.5mmol，1.0当量)和2-苄氧基溴乙烷(145-A，3.16mL，20.3mmol，1.5当量)在DMF(Drisolv，50mL)中的溶液添加碳酸钾(2.33g，16.9mmol，1.25当量)和碘化钾(448mg，2.70mmol，0.20当量)。加热溶液至55℃，并在氮气下搅拌过夜。用水(200mL)稀释反应物，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物。合并有机相，经硫酸镁干燥，过滤，并减压蒸发滤液至干。通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈白色固体的145-1(3.08，81％)。

步骤T145-2：将二苄胺(2.6mL，13.6mmol，1.25当量)溶解于甲醇(30mL)，然后添加盐酸(4M，在二噁烷中，5mL，20mmol，16当量)。减压浓缩混合物以产生二苄胺盐酸盐。将该物质溶解于乙酸(40mL)，添加145-1(3.08g，10.9mmol，1.0当量)和低聚甲醛(425mg，14.2mmol，1.3当量)，并在60℃搅拌混合物5小时。减压浓缩反应物，然后添加DCM(50mL)，并用饱和碳酸氢钠水溶液处理混合物，直至达到pH 9。弃掉水层，并经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(10％MTBE/甲苯)纯化残余物，以产生呈淡黄色油的145-2。尽管该物质含有二苄胺，但其适合用于下一步骤。

HPLC/MS：特殊条件，t_R＝5.63分钟，[M+H]⁺492。

步骤T145-3：将145-2(4.47g，9.10mmol，1.0当量)溶解于THF(75mL)，冷却至-78℃，然后用LAH(0.175g，4.55mmol，0.5当量)处理2小时。此时，添加20％氢氧化钾水溶液(50mL)，并用乙酸乙酯(3x)萃取混合物。合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩滤液以产生145-3。因为通过TLC或HPLC分析无法区分产物和起始材料。必须MS分析来核查反应完全。

HPLC/MS：特殊条件，t_R＝5.70分钟，[M+H]⁺494.

步骤T145-4：将来自上一步骤的145-3(3.78g)溶解于95％乙醇和乙酸的混合物(100mL，9∶1)。使碳载钯(3.78g，10％w/w，50％湿)和混合物经受1大气压氢气(大气压力)。3天后，经Celite过滤混合物，并用乙酸和95％乙醇洗涤滤饼。低温(浴温≤40℃)减压除去溶剂，以获得145-4。

HPLC/MS：特殊条件，t_R＝2.34分钟，[M+H]⁺224。

步骤T145-5：将来自上一步骤的145-4溶解于DCM(80mL)，添加碳载钯(500mg，10％w/w，50％湿)和对甲苯磺酸(2.9g，15.34mmol，2当量)，并使混合物经受1大气压氢气(大气压力)。2小时之后，经Celite过滤混合物，并用THF和水(200mL，1∶1)的混合物洗涤滤饼。添加碳酸钠(4.3g，40.1mmol，5.3当量)，并减压除去有机溶剂，以留下氨基酸145-5的水溶液。通过HPLC分析确定起始材料的消失。

HPLC/MS：特殊条件，t_R＝2.95分钟，[M+H]⁺208。

步骤T145-6：向145-4的水溶液添加THF(100mL)和Boc₂O(2.5g，11.5mmol，1.5当量)。搅拌混合物3小时，然后用饱和氯化铵水溶液(400mL)稀释。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水相。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化残余物以产生呈无色油状的Boc-T145(1.03g，5个步骤总产率34％)以及系链醇的相应乙酸酯(145-6，600mg，5个步骤总产率17％)。

HPLC/MS：特殊条件，t_R＝5.57分钟，[M+H]⁺308.

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.11(t，1H，J＝8.0Hz，CH芳基)，6.83(d，1H，J＝7.0Hz，CH芳基)，6.66(d，1H，d＝8.0Hz，CH芳基)，4.67(bs，1H，NHBoc)，4.12-4.08(m，2H，CH ₂O)，3.98-3.93(m，2H，CH ₂O)，3.23-3.18(m，1H，CHNHBoc)，3.11-2.99(m，2H，芳基CH ₂)，2.75-2.58(m，3H，CH₂CHCH₂)，1.45(s，9H，C(CH ₃)₃)

R.合成系链T146的标准程序

步骤T146-1：向Boc-T135(3.5g，11.0mmol，1.0当量)在THF(50mL)中的溶液添加咪唑(1.5g，22.0mmol，2.0当量)和TBDMSCl(2.21g，15.0mmol，1.3当量)，并搅拌混合物2小时，通过TLC监测。然后用饱和NH₄Cl水溶液处理溶液，并用EtOAc(2×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(10％EtOAc/90％己烷)过滤得到的残余物，以产生呈白色固体的146-1(100％)。

TLC：R_f＝0.60(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.51分钟，[M]⁺425

步骤T146-2：向146-1(4.46g，10.5mmol，1.0当量)在H₂O：t-BuOH(1∶1，104mL)混合物中的溶液添加AD-混合β(12.8g)和甲磺酰胺(998mg，10.5mmol，1.0当量)，并在4℃搅拌得到的橙色混合物36-48小时，期间颜色变为黄色。一旦TLC指示反应完全，添加亚硫酸钠(15g，12.0当量)，并在室温搅拌混合物1小时。用EtOAc(3×)萃取混合物，然后用水和盐水萃取合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(50％EtOAc/50％己烷)纯化残余物以得到呈黄色油状的146-2(96％)。

TLC：R_f＝0.41(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，KMnO₄)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝10.63分钟，[M]⁺459，[M+Na]⁺482

步骤T146-3：在0℃下向146-2(4.5g，9.79mmol，1.0当量)在DCM(62mL)中的溶液添加吡啶(3.1mL)和DMAP(60mg，0.49mmol，0.05当量)。然后向该混合物缓慢添加在DCM(10mL)中的三光气(2.9g，9.79mmol，1.0当量)。在0℃下搅拌反应物45分钟，此时，TLC指示反应完全。用饱和NH₄Cl水溶液处理溶液，并分离有机相。用Et₂O(2×)萃取水相，并用饱和NH₄Cl水溶液处理合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(30％EtOAc/70％己烷)纯化得到的残余物，以产生呈黄色油状的146-3(91％)。

TLC：R_f＝0.56(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，Mo/Ce)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝11.96分钟，[M]⁺485

步骤T146-4：向146-3(2.49g，4.9mmol，1.0当量)在95％EtOH∶丙酮(3∶1，60mL)混合物中的溶液添加阮内镍(50％水溶液，16mL，49mmol，10.0当量)。在Parr氢化器中500psi氢气下搅拌反应1周。此时，向混合物鼓泡通入氮气以除去过量的氢，然后通过Celite垫过滤混合物并用EtOAc冲洗。在减压下浓缩滤液，残余物通过快速色谱法(20％EtOAc/80％己烷)提供呈无色油状的146-4(1.1g，56％)。

TLC：R_f＝0.29(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝12.35分钟，[M+H]⁺444

步骤T146-5：向醇146-4(1.1g，2.48mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(16mL)中的溶液添加DHP(272μL，2.97mmol，1.2当量)和PTSA(24mg，0.124mmol，0.05当量)。在室温下搅拌混合物1小时，用TLC监测(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce；R_f＝0.51)。添加额外DHP(2×0.3当量)以驱使反应完全。此时，用饱和NaHCO₃水溶液处理溶液，然后用CH₂Cl₂萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc/80％己烷)纯化粗品残余物，以产生1.2g中间体脱保护的二醇。

将残余物溶解于THF(16mL)，并添加TBAF在THF(4.96mL，4.96mmol，2.0当量)中的1M溶液。室温搅拌混合物1小时。当TLC指示反应完全时，用盐水处理混合物，分层，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(50％EtOAc/50％己烷)纯化残余物，以产生呈黄色油状的Boc-T146b(THP)(76％，3个步骤)。

TLC：R_f＝0.12(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.49分钟，[M]⁺413，[M+Na]⁺436

为了获得Boc-T146a及其THP-保护的衍生物，可以遵循如上相同程序，但是利用AD-混合α。也可以在最后步骤中引入其他适合的保护基来替代THP。

S.合成系链T147的标准程序

步骤T147-1：在0℃下，向2-溴乙醇(10.3mL，146mmol，1.5当量)逐滴加入二氢吡喃(13.4mL，146mmol，1.5当量)。在0℃搅拌混合物30分钟，然后在室温下搅拌2小时。向该混合物添加水杨醛(147-0，10.2mL，97.0mmol，1.0当量)，随后添加碳酸钾(14.6g，106mmol，1.1当量)、碘化钾(3.15g，19mmol，0.2当量)和无水DMF(50mL)。在70℃搅拌反应物过夜。使溶液冷却至室温，并用***(200mL)稀释。过滤除去无机盐，并用己烷(200mL)稀释滤液。用水(3×)洗涤有机层，然后减压浓缩至干。由此获得的化合物147-1没有进一步纯化而直接在下一步骤中还原。

TLC：R_f＝0.18(MTBE/己烷，1/4；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.27分钟，[M]⁺250，[M+Na]⁺273

步骤T147-2：将粗品化合物147-1溶解于THF(200mL)和水(200mL)并在0℃冷却。向该混合物添加硼氢化钠(3.67g，97mmol)，通过TLC(20％EtOAc/己烷)追踪反应物。当不再存在147-1时，添加水(400mL)，并用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化获得的物质，以获得呈无色油状的147-2(19.7g，2个步骤81％)。

TLC：R_f＝0.08(20％EtOAc/己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝5.79分钟，[M]⁺252，[M+Na]⁺275

步骤T147-3：将147-2(17.9g，71mmol，1.0当量)和四溴化碳(23.6g，71mmol，1.0当量)溶解于DCM(500mL)，并使用乙二醇/水/干冰浴将溶液冷却至-45℃。向其中分批添加三苯基膦(18.6g，71mmol，1.0当量)，在每次随后添加之前等待所有三苯基膦溶解。搅拌混合物45分钟，并减压浓缩。通过快速色谱法(MTBE/DCM，1/19)纯化残余物以提供呈淡黄色油状的147-3(21.9g，98％)。

TLC：R_f＝0.68(MTBE/DCM，1/9；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.51分钟，[M+H]⁺315，[M+Na]⁺337，339

步骤T147-4：向147-3(15.6g，49.4mmol，1.0当量)在甲苯(300mL)中的溶液添加三苯基膦(13.0g，49.4mmol，1.0当量)。回流混合物4小时，然后冷却至室温。通过精细烧结的玻璃滤器过滤除去预先沉淀的固体，并真空(油泵)干燥获得的固体1小时。获得白色固体鏻盐147-4(18.7g，77％)。注意，CDCl₃中的¹H NMR和HPLC都显示，THP部分在该过程中被去除。如在下一步骤中描述的，这在下一次转化之前必须被替代。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝5.72分钟，[M]⁺413

步骤T147-5：向147-4(18.6g，37.6mmol，1.0当量)和DHP(17.2mL，188mmol，5.0当量)在DCM(200mL)中的溶液添加APTS(8mg，0.02mmol，0.001当量)。在室温搅拌混合物1小时，然后减压除去溶剂。将残余物置于真空(油泵)下以获得泡沫。添加无水THF(Drisolv，新瓶，400mL)，室温搅拌悬浮液。添加BuLi(1.6M己烷溶液，25.1mL，37.6mmol，1.0当量)，并搅拌混合物30分钟。然后添加三氟丙酮酸乙酯(5.00mL，37.6mmol，1.0当量)，并搅拌反应10分钟。将混合物倒入水(1.4L)中并用MTBE(4×200mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOac/己烷)纯化残余物以产生呈无色油状的147-5(7.47g，51％)。

TLC：R_f＝0.53(40％EtOAc/己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC：梯度A4，t_R＝6.58分钟(注意，观察到一些THP保护基的裂解)

步骤T147-6：将酯147-5(7.47g，19.3mmol，1.0当量)溶解于DCM(Drisolv，200mL)，并使用乙二醇/水/干冰浴冷却溶液至-45℃。向溶液添加DIBAL-H(1M，在DCM中，58mL，58mmol，3.0当量)。通过TLC(30％MTBE/己烷)监测反应，并使反应温度缓慢增加，直到观察到反应完全。添加氢氧化钾(20％w/v水溶液，300mL)，并用DCM(3×100mL)萃取混合物。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(MTBE/己烷，3/7)纯化粗品产物以产生呈无色油状的147-6(4.33g，65％)。

TLC：R_f＝0.11(MTBE/己烷，1/4；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.01分钟，[M]⁺346，[M+Na]⁺369

步骤T147-7：室温下，将氯化锂(583mg，13.8mmol，1.1当量)溶解于无水DMF(30mL)，然后添加147-6(4.33g，12.5mmol，1.0当量)和2，4，6-可力丁(1.91mL，14.4mmol，1.15当量)，并使混合物冷却至0℃。添加甲磺酰基氯(新鲜蒸馏提高产率，1.12mL，14.4mmol，1.15当量)，并使混合物升温至室温并搅拌2小时。添加叠氮化钠(4.07g，62.6mmol，5.0当量)，并搅拌混合物过夜。用水(400mL)稀释反应物并用MTBE(3×)萃取。用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％MTBE/己烷)纯化残余物。获得呈无色油状的147-7(2.70g，58％)。

TLC：R_f＝0.34(MTBE/己烷，3/7；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝10.22分钟，[M-N₂]⁺343

步骤T147-8：将叠氮化物147-7(834mg，2.25mmol，1.0当量)溶解于甲醇(25mL)。添加浓盐酸(0.25mL)，并通过TLC(30％MTBE/己烷)监测反应。当TLC指示反应完全时，减压浓缩反应物，然后真空(油泵)干燥。将脱保护的物质(635mg，98％)溶解于乙酸乙酯(10mL)，然后添加Boc₂O(725mg，3.32mmol，1.5当量)和Pd/C(10％w/w，50％湿，65mg)，并在50psi氢下氢化混合物24小时。通过Celite过滤反应，用乙酸乙酯洗涤，并减压浓缩合并的滤液和洗液。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化残余物。获得呈无色油状的Boc-T147(668mg，83％)。

TLC：R_f＝0.41(MTBE/己烷，2/3；检测：UV，茚三酮)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.16分钟，[M+Na]⁺386

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ7.21-7.17(m，2H，Ar)，6.90-6.80(m，3H，Ar+NHBoc)，4.82(t，1H，J＝5.4Hz，OH)，4.00(t，2H，J＝5.1Hz，ArOCH ₂)，3.73(q，2H，J＝5.4Hz，CH ₂OH)，3.22-3.00(m，2H，CH ₂NHBoc)，2.85-2.62(m，3H，CH ₂Ar+CHCF₃)，1.35(s，9H，C(CH ₃)₃)。

T.合成系链T148的标准程序

步骤T148-1：向Boc-T156a(2.57g，8.36mmol，1.0当量)在THF(42mL)中的溶液添加咪唑(1.14g，16.7mmol，2.0当量)和TBDMSCl(1.64g，10.9mmol，1.3当量)，并搅拌混合物2小时，通过TLC监测。然后用饱和NH₄Cl水溶液处理溶液，并用EtOAc(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(15％EtOAc/85％己烷)纯化得到的残余物，以产生呈无色油状的148-1(100％)。

TLC：R_f＝0.54(25％EtOAc/75％己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝13.72分钟，[M]⁺421，[M+Na]⁺444

步骤T148-2：向148-1(2.80g，6.60mmol，1.0当量)在H₂O∶t-BuOH(1∶1，66mL)混合物中的溶液添加AD-混合β(8.1g)和甲磺酰胺(632mg，6.60mmol，1.0当量)，并在4℃搅拌得到的橙色混合物4天。一旦TLC指示反应完全时，添加亚硫酸钠(15.8g，125.4mmol，19.0当量)，并在室温搅拌混合物1小时。添加水，并用EtOAc(3×)萃取混合物，然后用水和盐水萃取合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(梯度，30％至50％EtOAc/己烷)纯化残余物以得到呈无色油状的148-2(2.60g，87％)。

TLC：R_f＝0.32(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝11.25分钟，[M+H]⁺456

步骤T148-3：在0℃下向148-2(2.6g，5.7mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的溶液添加吡啶(2.0mL)和DMAP(60mg，0.49mmol，0.05当量)。然后向该混合物缓慢添加在DCM(5mL)中的三光气(1.7g，5.7mmol，1.0当量)。在下0℃搅拌反应1小时，此时，TLC指示反应完全。用饱和NH4Cl水溶液处理溶液，并分离有机相。用DCM(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(30％EtOAc/70％己烷)纯化得到的残余物，以产生呈黄色油状的146-3(2.7g，100％)。

TLC：R_f＝0.53(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝12.00分钟，[M]⁺481

步骤T148-4：向148-3(31g，6.4mmol，1.0当量)在95％EtOH∶丙酮(3∶1，80mL)混合物中的溶液添加阮内镍(50％水溶液，7.5mL，64.0mmol，10.0当量)。向溶液鼓泡通入氢气2天。此时，向混合物鼓泡通入氮气以除去过量的氢，然后通过Celite垫过滤混合物并用EtOAc冲洗。在减压下浓缩滤液，残余物通过快速色谱法(梯度20％至25％EtOAc/己烷)提供呈无色油状的148-4(1.4g，50％)。

TLC：R_f＝0.44(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝12.69分钟，[M+H]⁺440

步骤T148-5：向醇148-4(1.4g，3.2mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(30mL)中的溶液添加DHP(0.35mL，3.8mmol，1.2当量)和PTSA(30mg，0.16mmol，0.05当量)。在室温下搅拌混合物2小时，用TLC监测(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，香草醛；R_f＝0.54)。此时，用饱和NaHCO₃水溶液处理溶液，然后用CH₂Cl₂(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。残余物纯度足以继续进行下一步骤。

将残余物溶解于THF(30mL)，并添加TBAF在THF(4.8mL，4.8mmol，2.0当量)中的1M溶液。室温搅拌混合物1小时。当TLC指示反应完全时，用盐水处理混合物，分层，并用EtOAc(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(梯度，30％至50％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈黄色油状的Boc-T148c(THP)(73％，2个步骤)。

TLC：R_f＝0.16(30％EtOAc/70％己烷；检测：UV，香草醛)

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝8.11分钟，[M]⁺409，[M+Na]⁺432

为了获得Boc-T148a及其THP-保护的衍生物，可以遵循如上相同程序，但是利用AD-混合α。也可以在最后步骤中引入其他适合的保护基来替代THP。类似地，从T156b开始，使用如上利用AD-混合-β和AD-混合-α的相同程序，分别提供了非对映异构体系链Boc-T148d和Boc-T148b。可以使用标准技术进行这些系链的羟基部分(包括THP)的适当保护。

U.合成系链T149的标准程序

使用与已经针对相应的环己基衍生物Boc-T104b描述的几乎相同的程序合成Boc-T149b。然而，使用如下描述的面包酵母，通过β-酮酯149-0的不对称还原来获得起始手性β-羟基酯T149-1。

步骤149-1：(改编自Crisp，G.T.；Meyer，A.G.Tetrahedron 1995，51，5831-5845中的程序)。在36℃下向水(2L)中添加MgSO₄(2g)、KH₂PO₄(8g)、CaCO₃(10g)和右旋糖(304g)。添加面包酵母(24g)，并且由于溶液在36℃下粘稠，使用机械搅拌器搅拌混合物45分钟。经大约5分钟，向混合物缓慢添加β-酮-酯149-0(20.3g，130mmol)，并在36℃下搅拌反应72小时。经Celite垫过滤混合物，用水(2×300mL)冲洗。用Et₂O(5×500mL)萃取合并的滤液和洗液，并用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过真空分馏(沸点40℃，油泵)纯化残余物，以产生呈无色油状的149-1(13.3g，65％)。化合物149-1也是可商购的(Julich，现在是Codexis，产品编号31.60)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝4.11分钟，[M+H]⁺159.

V.合成系链T150a和T150b的标准程序

步骤T150-1：在-100℃、N₂下，向(E)-溴丙烯(15g，124mmol)在THF/Et₂O(1∶1，150mL)中的溶液添加t-BuLi在己烷(146mL，248mmol)中的1.7M溶液。然后在-78℃下搅拌反应物1小时。使反应物回到-100℃，并经30分钟添加104-4(15g，62mmol)在THF/Et₂O(1∶1，100mL)中的溶液。添加之后，在-78℃下搅拌反应物1小时，然后用饱和NaHCO₃水溶液猝灭。用Et₂O(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(5％Et₂O/己烷)纯化粗品产物，以产生在游离羟基碳原子处具有不同构型的非对映异构体的1.2∶1混合物，(R)-异构体150-1有6.95g，(S)-异构体150-2有8.37g(总产率87％)。

步骤T150-2：在0℃下将KH(30％，在矿物油中，560mg，4.2mmol)在己烷(1mL)中的悬浮液添加至150-1(6.0g，21.1mmol)在THF(18mL)中的溶液。室温搅拌混合物10分钟，然后在0℃下通过套管添加至三氯乙腈(3.2mL，31.6mmol)在THF(18mL)中的溶液。在0℃下搅拌反应物1小时，然后用饱和NaHCO₃水溶液猝灭。用Et₂O(3×)萃取混合物，合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(5％Et₂O/己烷+1％Et₃N)纯化残余物，提供了含有少量杂质的150-3(6.42g，71％)。

步骤T150-3：在密封管中在140℃下加热150-3(6.4g，15mmol)在甲苯(150mL)中的溶液18小时。终止反应，减压蒸发，通过快速色谱法(5％Et₂O/己烷)纯化残余物，以产生呈无色油状的150-4(4.2g，66％)。

步骤T150-4：将150-4(4.2g，9.8mmol)溶解于在MeOH溶液(100mL)中的1％HCl。在室温搅拌反应物1小时，然后真空蒸发至干。将残余物溶解于EtOH(100mL)并在0℃下添加5N NaOH水溶液(100mL)。在室温搅拌混合物4小时，然后减压蒸发EtOH。向残余水相添加THF(100mL)，随后添加(Boc)₂O(5.36g，24.6mmol)。在室温搅拌双相混合物过夜，然后用水稀释并用Et₂O(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(梯度，5％EtOAc/己烷至30％EtOAc/己烷)进行由此获得的残余物的纯化，以得到呈无色油状的150-5(1.69g，64％)。

步骤T150-5：向150-5(1.30g，4.8mmol)在EtOH(50mL)中的溶液添加5％Rh/氧化铝(490mg)。向反应鼓泡通入氢气5分钟，然后在氢气氛下搅拌反应过夜。通过Celite垫过滤反应，用Et₂O冲洗，并减压蒸发合并的滤液和冲洗液至干，以产生150-6(1.3g，100％)。

步骤T150-6：向150-6(1.3g，4.8mmol)在乙基乙烯醚(50mL)中的溶液添加乙酸汞(460mg，1.44mmol)，并回流加热溶液24小时。此时，添加另外0.3当量的乙酸汞，并回流加热溶液另外24小时。然后使溶液冷却至室温，用饱和Na₂CO₃水溶液猝灭，并用Et₂O(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(5％Et₂O/含有2％Et₃N的己烷)纯化残余物，以产生呈无色油状的150-7(1.38g，97％)。

步骤T150-7：在0℃下经15分钟的时段，向150-7(1.35g，4.5mmol)在THF(45mL)中的溶液缓慢添加1M BH₃·THF(6.9mL，6.9mmol)溶液。在0℃搅拌混合物1小时，然后在室温下搅拌2小时。将溶液冷却至0℃，并添加5N NaOH溶液(10mL)，随后添加30％H₂O₂水溶液(20mL)。在0℃搅拌反应物15分钟，然后在室温搅拌2小时。用Et₂O(3×)萃取溶液。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化残余物，以得到Boc-T150a(1.27g，90％)。

使用从150-2开始的相同工序，获得另一种非对映异构体系链Boc-T150b。

W.合成系链T151的标准程序

步骤T151-1：向在二氯甲烷(80mL)中的碘苯酚衍生物151-0(5.10g，19.3mmol，1.0当量)添加叔丁基氯二甲基硅烷(3.19g，21.3mmol，1.1当量)，并且最后添加咪唑(1.45g，21.3mmol，1.1当量)。室温搅拌乳状溶液2.5小时。添加饱和氯化铵水溶液(100mL)，并剧烈搅拌混合物5分钟。分离相，并用二氯甲烷(2×)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。在短硅胶柱(梯度，4％至10％EtOAc∶己烷)上纯化得到的黄色液体，以获得呈无色液体的151-1(7.25g，99％)。

TLC：R_f＝0.40(15％EtOAc∶己烷；检测：KMnO₄)

步骤T151-2：在干燥氮气下，将151-1(541mg，1.43mmol，1.0当量)、151-A(参见以下合成，403mg，1.79mmol，1.25当量)、三(邻甲苯基)膦(44mg，0.143mmol，0.1当量)和二乙酸钯(16mg，0.072mmol，0.05当量)溶解/悬浮于无水乙腈(10mL)。然后添加三乙胺(402μL，2.864mmol，2.0当量)。回流加热得到的淡黄色混合物。混合物快速变黑，并且在加热3小时后恢复。23小时之后，停止加热，冷却混合物至室温，且减压蒸发溶剂至干。将残余物溶解于10％EtOAc∶己烷(8-10mL)，并通过短二氧化硅垫过滤，用另外40mL 10％EtOAc∶己烷洗涤。减压下蒸发合并的滤液和洗液之后，通过快速色谱法(5％EtOAc∶己烷)进一步纯化得到的黄色油，以提供呈嫩黄色油状的151-2(627mg)。¹H NMR和LC-MS分析指示，该物质中存在一些151-A，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.25(5％EtOAc∶己烷；检测：香草醛，CAM，KMnO₄)。

步骤T151-3：将151-2(627mg，1.32mmol，1.0当量)溶解于THF(13.2mL)。经1分钟的时段逐滴添加四-N-丁基氟化铵在THF(1.58mL，1.58mmol，1.2当量)中的1M溶液。溶液立即变成深黄色。在室温搅拌反应物2小时，之后TLC(30％EtOAc∶己烷)指示完全转化。用饱和NaCl水溶液(25mL)猝灭混合物，并剧烈搅拌5分钟。分离相，并用乙酸乙酯(2×)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOAc∶己烷)纯化得到的黄色油。因为极性略大的杂质难以从预期产物分离，所以只收集最纯的级分。分离呈白色晶体的Boc-T151a，300mg(2个步骤58％)。

TLC：R_f＝0.30(30％EtOAc∶己烷；检测：CAM)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝7.00分钟，[M+Na]⁺384；

手性HPLC分析：88％ee；

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.40(dd，1H，J₁＝7.6，J₂＝1.6)，7.25(td，1H，J₁＝8.8，J₂＝1.6)，7.08(d，1H，J＝16.0)，6.95(t，1H，J＝7.0)，6.87(d，1H，J＝8.2)，6.16(dd，1H，J₁＝16.0，J₂＝6.5)，5.17(bs，1H)。4.97(bs，1H)，4.11(t，2H，J＝5.0)，3.99(t，2H，J＝5.0)，2.48(bs，1H)，1.47(s，9H)。

通过相同的程序，但从对映异构体氨基酸151-B开始，获得具有(S)-构型的对映异构体系链Boc-T151b。

Y.合成试剂151-A的标准程序

步骤T151-A：使(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺151-A1(1.84g，15.2mmol，1.1当量)与三氟乙醛缩半乙醇(151-A2，1.99g，13.8mmol，1.0当量)混合。添加四乙醇钛(4.3mL，20.7mmol，1.5当量)以形成澄清稠溶液，其在氮气下用回流冷凝器在70℃加热3天。到那时，溶液逐渐变成黄色。冷却反应混合物至室温，用100mL乙酸乙酯稀释，然后在剧烈搅拌下倒入100mL饱和NaCl水溶液。通过Celite过滤双相混合物，并用乙酸乙酯冲洗滤饼。分离相，并用乙酸乙酯(1×)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，且减压浓缩滤液以留下黄色油。TLC(50％EtOAc∶己烷)揭示，两种产物非对映异构体各自具有显著不同的R_f(0.2与0.4)。快速色谱法(梯度，40％至60％EtOAc∶己烷)提供了呈白色粉末的151-A3a(1.84g，54％)和呈白色晶体的151-A3b(830mg，24％)。¹H NMR光谱和TLC显示，两种化合物是纯的。

151-A3a，TLC：R_f＝0.15(50％EtOAc∶己烷；检测：香草醛(蓝绿防斑剂)；

151-A3b，TLC：R_f＝0.35(50％EtOAc∶己烷；检测：香草醛(蓝绿防斑剂)。

步骤T151-B：在氮气下，将151-A3a(830mg，3.36mmol，1.0当量)溶解于二氯甲烷(26mL)，且冷却溶液至-60℃。经10分钟的时段逐滴添加乙烯基溴化镁在THF(8.4mL，8.4mmol，2.5当量)中的1.0M溶液，之后在-60℃搅拌反应物另外45分钟。经75分钟的时段，使温度逐渐升至-20℃。此时，向混合物添加大约50mL饱和NH₄Cl水溶液，并剧烈搅拌15分钟，同时升温至室温。分离相，并用二氯甲烷(3×)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(50％EtOAc∶己烷)纯化得到的黄色油。获得呈浅黄色油状的151-A4a，715mg(93％)。通过¹⁹F NMR发现非对映异构体比例为19∶1。

TLC：R_f＝0.30(50％EtOAc∶己烷；检测：KMnO₄)。

除了用于添加乙烯基溴化镁的温度(-40℃代替-60℃)，使用基本相同的程序将151-A3b转化为151-A4a。

步骤T151-C：将151-A4a(715mg，3.119mmol，1.0当量)溶解于甲醇(1.5mL)。经1分钟的时段逐滴添加氯化氢在1，4-二噁烷(1.5mL，6.24mmol，2.0当量)中的4M溶液。在室温搅拌溶液75分钟，之后TLC指示完全反应。减压蒸发溶剂以产生粘稠油。添加大约400μL甲醇以溶解油，然后在搅拌下添加15-20mL冷***，其沉淀盐酸盐。真空过滤该固体，并用5-10mL冷***冲洗。获得呈白色粉末的151-A5a，361mg(72％)。

TLC：R_f＝基线(50％EtOAc∶己烷；检测：KMnO₄)。

步骤T151-D：将151-A5a(361mg，2.24mmol，1.0当量)溶解于THF(7mL)和水(7mL)。向双相混合物连续添加碳酸钠(321mg，3.02mmol，1.1当量)和二叔丁基-碳酸氢盐(660mg，3.02mmol，1.1当量)。在室温搅拌得到的溶液过夜。向混合物添加蒸馏水(～30mL)。分相，并用EtOAc(3×)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOAc∶己烷)纯化得到的淡黄色油以提供呈白色针状的151-A，403mg(80％)。

TLC：R_f＝0.55(30％EtOAc∶己烷；检测：KMnO₄)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ5.89-5.82(m，1H)，5.50-5.40(m，2H)，4.83(brs，2H)，1.46(s，9H)。

通过相同程序，但是从对映异构体(R)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺151-B1开始，获得对映异构体氨基酸151-B。这转而用于制备对映异构体系链T151b。

Z.合成系链T152和T157的标准程序

步骤T152-1：向7-羟基-茚酮(152-0，4.15g，28mmol，1.0当量，Minuti，L.等人.Tetrahedron Asymm.2003，14，481-487)在DMF(无水，85mL)中的溶液添加156-A(如针对T156所述的合成，10g，42mmol，1.5当量)、K₂CO₃(4.84g，35mmol，1.25当量)和KI(0.93g，5.6mmol，0.2当量)。在氮气下在55℃(油浴)搅拌混合物过夜(～16小时)。通过TLC(己烷/EtOAc，4/1；检测：UV，KMnO₄)监测反应。冷却混合物至室温，添加H₂O(200mL)，分层，然后用EtOAc(3×250mL)萃取水层。用盐水(100mL)洗涤合并的有机相，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥。通过快速色谱法(己烷/EtOAc，5/1)纯化残余物，以得到8.6g(100％)呈无色油状的152-1。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.47(m，1H)，6.99(d，J＝7.6，1H)，6.84(d，J＝8.2，1H)，4.19(t，J＝5.8，2H)，4.04(t，J＝5.6，2H)，3.06(t，J＝5.6，2H)，2.64(m，2H)，0.89(s，9H)，0.10(s，6H)

步骤T152-2：用戊烷(15mL)洗涤NaH(1.18g，60wt％油溶液，29.4mmol，1.5当量)，通过注射器除去戊烷，并添加THF(无水，从Na-二苯甲酮羰游基新鲜蒸馏，60mL)。在0℃、氮气下，通过注射器向悬浮液小心(由于氢气逸出)滴加甲基氰基磷酸二乙酯(3.7mL，23.5mmol，1.2当量)。室温搅拌混合物1.0小时，冷却至0℃，然后逐滴加入156-1(6.0g，19.6mmol，1.0当量)在THF(无水，20mL)中的溶液。使混合物升温至室温，然后搅拌过夜，用TLC监测。减压浓缩溶液以产生黑色残余物，将其溶解于H₂O(50mL)和饱和NaHCO₃水溶液(50mL)。用EtOAc(3×150mL)萃取该水溶液。用盐水(50mL)洗涤合并的有机相，经无水Na₂SO₄水干燥，过滤，并减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥以产生黑色液体，其通过快速色谱法(己烷/EtOAc，6/1)纯化而得到5.7g(88％)呈白色固体的152-2。根据TLC和¹H NMR分析显示，分离了单一几何异构体。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.29(t，J＝7.9，1H)，6.92(d，J＝7.6，1H)，6.75(d，J＝8.2，1H)，6.28，6.27(s，1H)，4.15(t，J＝5.0，2H)，4.00(t，J＝5.2，2H)，3.08(s，2H)，3.07(s，2H)，0.91(s，9H)，0.10(s，6H)。

步骤T152-3：向NH₃在EtOH(2.0M，100mL)中的溶液添加152-2(5.7g，17.3mmol，1.0当量)和阮内镍2800(5.7g，H₂O中浆体；100wt％)。在室温、H₂(70psi)下搅拌混合物过夜(～20小时)。使混合物穿过Celite垫，然后用MeOH∶Et₃N(5∶1，240mL)洗涤。减压浓缩合并的溶液并真空(油泵)干燥以产生5.77g黄色油，其没有进一步纯化而用于后续步骤。LC-MS指示双键部分保留，由于信号重叠而不能容易测定比例。期望延长氢化时间或在高氢气压力下进行，以几乎只产生152-3。

步骤T152-4：将黄色油溶解于THF/H₂O(1/1，120mL)并添加Na₂CO₃(2.75g，26mmol，1.5当量)。使混合物冷却至0℃，并一次性添加Boc₂O(4.54g，20.8mmol，1.2当量)。在0℃搅拌反应物30分钟，然后室温搅拌过夜，用TLC监测反应进程。分层，用***(3×120mL)萃取水相。用盐水(80mL)洗涤合并的有机相，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥。通过快速色谱法(梯度，己烷/EtOAc，20/1至15/1)纯化得到的残余物，以得到呈无色油状的2.42g 152-3、1.39g 152-4和2.6g 152-3和152-4的混合物[2个步骤总产率85％(152-3+152-4)]。

152-3

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.10(t，J＝7.9，1H)，6.82(d，J＝7.3，1H)，6.66(d，J＝7.9，1H)，4.85(s，br，1H)，4.00(m，4H)，3.50(m，5H)，2.21(m，1H)，1.87(m，2H)，1.65(m，1H)，1.44(s，9H)，0.91(s，9H)，0.09(s，6H)

MS：336(M⁺+1-Boc)

152-4

MS：334(M⁺+1-Boc)

步骤T152-5：向152-3(2.42g，5.55mmol，1.0当量)在THF(2.0mL)中的溶液添加TBAF(1.0M，在THF中，20mL，3.6当量)的溶液。溶液颜色立即变成绿黑色。室温搅拌反应溶液30分钟，通过TLC(己烷/EtOAc，2/1；检测：UV，CMA)监测。完全时，使溶液穿过硅胶垫并用EtOAc(100mL)洗脱。减压浓缩合并的有机溶液并真空(油泵)干燥。通过快速色谱法(梯度，己烷/EtOAc，5/1至3/1至2/1)纯化残余物，以产生1.4g(78％)呈无色粘稠油状的Boc-T152。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.11(t，J＝7.9，1H)，6.84(d，J＝7.6，1H)，6.66(d，J＝8.2，1H)，4.98(s，br，1H)，4.08(m，4H)，3.35(m，1H)，3.18(m，2H)，3.00(m，1H)，2.80(m，1H)，2.23(m，1H)，1.99(m，1H)，1.78(m，2H)，1.45(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ155.38，145.90，134.24，127.98，117.36，108.86，79.34，69.38，61.39，39.90，39.57，33.99，31.74，31.48，28.43

MS：222(M⁺+1-Boc)

以与上述类似的方式，从152-4获得Boc-T157。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.13(t，J＝7.9，1H)，6.88(d，J＝7.3，1H)，6.70(d，J＝8.2，1H)，6.47(s，1H)，4.66(s，br，1H)，4.17(m，2H)，4.02(m，2H)，3.88(t，J＝6.7，2H)，2.99(m，2H)，2.78(m，2H)，2.23(s，br，1H)，1.46(s，9H)

MS：264(M⁺+2H⁺-t-Bu)

AA.合成系链T153的标准程序

步骤T153-1：如文献所述(Uchikawa，O.等人.J.Med.Chem.2002，45，4212-4221；Uchikawa，O.等人.J.Med.Chem.2002，45，4222-4239)，用戊烷(25mL)洗涤NaH(3.4g，60wt％油溶液，85mmol，1.5当量)，通过注射器除去戊烷，然后添加THF(无水，从Na-二苯甲酮羰游基新鲜蒸馏，300mL)。在0℃、氮气下，通过注射器向该悬浮液小心(由于氢气逸出)逐滴加入磷酸乙酸三甲酯(11mL，68.1mmol，1.20当量)。室温搅拌混合物1.0小时，冷却至0℃，然后一次性添加8-甲氧基-2-四氢萘酮(153-0，9.0g，51mmol，1.0当量)。使混合物温至室温，然后搅拌过夜。通过TLC(己烷/EtOAc，4/1；检测：UV，KMnO₄)监测反应进程。真空浓缩棕色溶液以产生黑色残余物。将该残余物溶解于H₂O(150mL)和EtOAc(200mL)。分层，并用EtOAc(3×250mL)萃取水相。用盐水(150mL)洗涤合并的有机相，经无水Na₂SO₄水干燥，过滤，减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥。通过快速色谱法(己烷/EtOAc，5/1)纯化得到的黑色残余物，以得到呈白色油状的1.08g 153-1A和10.52g 153-1B(总产率98％)。从NMR光谱数据推导了153-1A和153-1B的结构。

153-1A

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.13(t，J＝7.9，1H)，6.77(d，J＝7.6，1H)，6.72(d，J＝8.2，1H)，5.89(qu，J＝1.5，1H)，3.83，(s，3H)，3.71(s，3H)，3.52(s，2H)，3.12(m，2H)，2.86(t，J＝7.0，2H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ167.05，160.13，156.46，138.62，126.53，123.38，120.22，114.07，107.61，55.29，50.85，33.17，29.87，27.52。

153-1B：

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.08(t，J＝7.9，1H)，6.73(d，J＝6.5，1H)，6.71(d，J＝7.9，1H)，3.82(s，3H)，3.70(s，3H)，3.25(s，2H)，2.82(t，J＝7.9，2H)，2.32(t，J＝7.9，2H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ171.80，154.53，135.99，132.74，127.28，122.81，120.04，119.90，108.67，55.44，51.83，42.96，28.24，26.74。

步骤T153-2：向153-1B(6.0g，25.8mmol)在95％EtOH(120mL)中的溶液添加PtO₂(600mg，10wt％)。在室温、H₂填充气球下搅拌混合物过夜(～16小时)。使溶液穿过Celite垫，用EtOAc洗脱，并减压浓缩得到的有机溶液并真空(油泵)干燥，以得到6.05g(100％)呈无色油状的153-2。类似地，处理153-1A也得到153-2，其通过¹H NMR和LC-MS共注射来证实。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.08(t，J＝7.9，1H)，6.71(d，J＝7.3，1H)，6.65，J＝7.9，1H)，3.81(s，3H)，3.71(s，3H)，2.94(m，1H)，2.82(m，2H)，2.41(m，2H)，2.20(m，2H)，1.93(m，1H)，1.46(m，1H)；

MS：235[M+H]⁺.

步骤T153-3：将152-2(7.02g，30mmol，1.0当量)溶解于DCM(无水，150mL)。使溶液冷却至-30℃(二氯乙烷-干冰浴)，然后滴加BBr₃在DCM中的溶液(1.0M，75mL，2.5当量)。添加之后，一直在N₂下，在-30℃搅拌黑色溶液40分钟，然后在0℃搅拌3.0小时，通过TLC(己烷/EtOAc，4/1；检测：UV，KMnO₄)监测。当完全时，在剧烈搅拌并维持低温下，向混合物逐滴加入(但不缓慢)MeOH(无水，20mL)，随后添加H₂O(150mL)。使混合物在0℃保持2-3分钟。分层，并用DCM(3×150mL)萃取水相。合并的有机相经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥以产生黑色残余物，其通过快速色谱法(己烷/EtOAc，5/1)纯化得到5.01g(76％)呈浅黄色固体的153-3。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ6.98(t，J＝7.9，1H)，6.68(d，J＝7.6，1H)，6.60(dd，J＝7.9，0.9，1H)，3.72(s，3H)，2.92(m，1H)，2.82(m，2H)，2.43(m，2H)，2.24(m，2H)，1.93(m，1H)，1.44(m，1H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ173.50，153.43，138.01，126.15，122.40，121.11，111.86，51.63，41.03，31.09，29.14，28.97，28.72。

步骤T153-4：在0℃、N₂下，使用注射器向153-3(5.0g，22.7mmol，1.0当量)、苄氧基乙醇(153-A，4.4mL，30.6mmol，1.35当量)和三苯基膦(8.0g，30.6mmol，1.35当量)在THF(无水，120mL)中的溶液滴加DIAD(6.0mL，30.6mmol，1.35当量)。在0℃搅拌溶液30分钟，然后升温至室温并搅拌过夜。减压浓缩溶液并真空(油泵)干燥以产生浅黄色油，其通过快速色谱法(己烷/EtOAc，5/1)纯化而获得5.98g(75％)呈无色油状的153-4。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.31(m，5H)，7.06(t，J＝7.9，1H)，6.71(d，J＝7.6，1H)，6.64(d，J＝7.9，1H)，4.65(s，2H)，4.14(m，2H)，3.85(m，2H)，3.68(s，3H)，3.00(m，1H)，2.82(m，2H)，2.40(m，2H)，2.24(m，2H)，1.93(m，1H)，1.42(m，1H)。

步骤T153-5：在0℃下，向153-4(4.98g，14mmol，1.0当量)在THF(35mL)中的溶液添加LiOH·H₂O(2.9g，70mmol，5.0当量)在H₂O(35mL)中的溶液。在0℃搅拌混合物30分钟，然后升温至室温并搅拌24小时。真空除去THF，然后逐滴加入HCl水溶液(20wt％)以调节pH至1.0。用EtOAc(3×80mL)萃取酸化的溶液。合并的有机相经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥。将得到的残余物溶解于甲苯(2×25mL)，再次减压浓缩并真空(油泵)干燥以提供4.8g(100％)呈白色固体的153-5。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.32(m，5H)，7.01(t，J＝7.9，1H)，6.67(m，2H)，4.62(s，2H)，4.11(m，2H)，3.83(m，2H)，3.01(m，1H)，2.79(m，2H)，2.36(m，2H)，2.13(m，2H)，1.95(m，1H)，1.40(m，1H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ177.57，158.72，140.51，139.55，130.28，129.66，129.54，127.94，126.84，123.20，110.16，75.07，70.75，69.64，42.95，33.42，31.52，31.00，30.84。

步骤T153-6.在N₂下，向153-5(4.76g，14mmol，1.0当量)在t-BuOH(氮气下从Na新鲜蒸馏，85mL)中的溶液添加三乙胺(从CaH₂新鲜蒸馏，2.2mL，15.4mmol，1.1当量)和叠氮磷酸二苯酯(DPPA，3.33mL，15.4mmol，1.1当量)。在N₂下回流溶液24小时。回到室温之后，减压浓缩溶液并真空(油泵)干燥以产生浅黄色固体。将该黄色固体溶解于DCM(400mL)，用NaOH溶液(1.0M，2×80mL)、H₂O(80mL)和盐水(80mL)连续洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液并真空(油泵)干燥以产生浅黄色固体，其通过快速色谱法(己烷/EtOAc，5/1)纯化而得到2.7g(47％)呈白色固体的153-6。此外，通过色谱分离了1.39g呈无色油状的153-7(153-5的叔丁酯)和1.19g结构未确定的153-8。

153-6

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.31(m，5H)，7.05(t，J＝7.9，1H)，6.71(d，J＝7.6，1H)，6.64(d，J＝7.9，1H)，4.62(s，2H)，4.13(m，2H)，3.84(t，J＝5.0，2H)，2.99(m，1H)，2.82(m，2H)，2.27(m，4H)，1.93(m，1H)，1.46(s，9H)，1.43(m，1H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ172.30，156.49，138.20，137.86，128.40，127.65，125.84，125.22，121.28，107.91，80.13，73.35，68.71，67.51，42.66，31.37，29.46，29.13，28.65，28.14；

MS：419[M+Na]⁺。

153-7

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.33(m，5H)，7.05(t，J＝7.9，1H)，6.71(d，J＝7.6，1H)，6.64(d，J＝8.2，1H)，4.65(s，2H)，4.15(dt，J＝2.0，4.7，2H)，3.85(t，J＝5.0，2H)，3.16(m，2H)，2.95(dd，J＝16.7，5.0，1H)，2.81(m，2H)，2.19(m，1H)，1.90(m，2H)，1.45(s，9H)，1.37(m，1H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ156.52，138.16，138.06，128.42，127.66，125.89，124.93，121.29，107.99，73.29，68.59，67.49，46.28，34.82，29.06，28.42，27.41，26.60；

MS：312[M+H-Boc]⁺。

153-8

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.31(m，5H)，7.06(t，J＝7.6，1H)，6.71(d，J＝7.0，1H)，6.65(d，J＝7.9，1H)，4.65(s，2H)，4.15(m，2H)，3.85(t，J＝5.3，2H)，3.27(m，2H)，2.94(m，1H)，2.81(m，2H)，2.22(m，1H)，1.90(m，2H)，1.30(m，2H)；

MS：381[M+H]⁺。

步骤T153-7：向153-6(2.7g，6.56mmol)在95％EtOH/EtOAc/DCM(4/2/1，70mL)中的溶液添加Pd-C(Degussa，～54％H₂O，675mg，25wt％)。在室温、H₂(Parr，60psi)下振摇混合物4.0小时，通过TLC(己烷/EtOAc，2/1；检测：UV，CMA)监测反应。使混合物穿过Celite垫以除去催化剂，并用EtOAc洗脱。减压浓缩合并的有机相并真空(油泵)干燥以产生浅黄色固体，其通过快速色谱法(梯度，己烷/EtOAc，1/1，然后DCM/EtOAc，1/1)纯化得到2.11g(100％)呈白色固体的Boc-T153。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.06(t，J＝7.9，1H)，6.73(d，J＝7.6，1H)，6.65(d，J＝7.9，1H)，4.73(s，1H)，4.08(m，2H)，3.97(m，2H)，3.20(t，J＝6.1，2H)，2.92(dd，J＝16.7，4.4，1H)，2.79(m，2H)，2.20(m，2H)，1.89(m，2H)，1.46(s，9H)，1.36(m，1H)；

¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)：δ156.23，138.18，125.98，124.84，121.53，108.03，79.18，69.16，61.59，46.21，34.92，29.03，28.40，27.31，26.56；

MS：222[M+H-Boc]⁺。

BB.合成系链T154的标准程序

步骤T154-1：在0℃下向2-碘苯胺(154-0，13.1g，60.0mmol，1.0当量)在THF(70mL)中的溶液添加NaHMDS的溶液(1M，在THF中，132mL，132mmol，2.2当量)，且室温搅拌混合物25分钟。添加Boc₂O(14.5g，66.0mmol，1.1当量)并在室温搅拌混合物2.5小时。添加0.5M HCl，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(7％EtOAc，93％己烷)纯化得到的残余物以产生154-1(19.0g，100％)。

步骤T154-2：向154-1(12.6g，39.6mmol，1.0当量)在DMF(150mL)中的溶液添加NaH(60％，于油中，2.1g，53.5mmol，1.35当量)、KI(32.9g，198mmol，5.0当量)和135-A(12.8g，53.5mmol，1.35当量)，并在80℃搅拌得到的混合物过夜。使混合物冷却至室温并添加水。用MTBE萃取水相，且用盐水萃取合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，减压浓缩滤液至干以产生呈白色固体的154-2(18g，95％)。

步骤T154-3：向154-2(17.3g，36.0mmol，1.0当量)在DMF(100mL)中的溶液添加135-B(13.9g，54.0mmol，1.5当量)、P(o-Tol)₃(1.1g，3.6mmol，0.1当量)、K₂CO₃(9.9g，72.0mmol，2.0当量)和Bu₄NBr(1.16g，3.6mmol，0.1当量)，并用Ar使得到的混合物脱气。添加Pd(OAc)₂(0.8g，3.6mmol，0.1当量)，且再次用Ar使混合物脱气。在90℃搅拌得到的混合物20小时。添加水，并用***萃取水相。用盐水萃取合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(11％EtOAc，89％己烷)纯化残余物，以产生化合物154-3(13.0g，60％)以及一些回收的起始材料(7.8g)。

步骤T154-4：向154-3(11.9g，19.6mmol，1.0当量)在THF(60mL)中的溶液添加TBAF的溶液(1M，在THF中，39.2mL，39.2mmol，2.0当量)，且在室温搅拌得到的混合物过夜。添加水并用EtOAc萃取水相。用盐水萃取合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(40％EtOAc，60％己烷)纯化残余物以产生呈固体的154-4(9.2g，95％)。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝9.81分钟，[M]⁺492，[M+Na]⁺515

步骤T154-5：向154-4(3.3g，6.7mmol，1.0当量)在95％EtOH(20mL)中的溶液添加5％Pd/C(300mg)。向混合物鼓泡通入氢气，然后在氢气氛下搅拌过夜。向混合物鼓泡通入氮气以除去过量的氢，然后通过Celite垫过滤混合物并用EtOAc冲洗。在减压下浓缩合并的滤液，以定量产率产生154-5。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝10.41分钟，[M]⁺494，[M+Na]⁺517

步骤T154-6：为了合成Boc-T154，使用针对T135(步骤135-4)、T136(步骤136-4)和T137(137-6)描述的程序，通过在室温下用在DCM中的TFA处理154-5，从154-5选择性除去Boc基团之一，通过TLC监测以确保没有丢失其他Boc基团。

CC.合成系链T156的标准程序

步骤T156-1：向2-溴乙醇(50g，400mmol，1当量)和咪唑(54.5g，800mmol，2当量)在THF(1600mL)中的溶液添加TBDMSCl(63.3g，420mmol，1.05当量)，且溶液反应物变成乳状。搅拌过夜之后，添加Et₂O(1600mL)，并用饱和NH₄Cl水溶液(2×250mL)和盐水(250mL)洗涤混合物。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压蒸发滤液以产生呈油状的156-A(97g，405mmol，＞100％)。当发现该物质中依然存在咪唑时，可以通过溶解于Et₂O，用1M柠檬酸盐缓冲液洗涤，然后减压蒸发有机物而去除咪唑。可选地，156-A可商购(Aldrich目录号428426)。

步骤T156-2：在高真空下，使2-碘苯酚(156-0，7.66g，34.8mmol，1.0当量)在DMF(115mL)中的溶液脱气10分钟。将氮气引入烧瓶，并添加156-A(10g，41.8mmol，1.2当量)、KI(1.16g，6.96mmol，0.2当量)和K₂CO₃(6.01g，43.5mmol，1.25当量)。在氮气、55℃下搅拌混合物过夜。真空(油泵)去除溶剂，添加水(150mL)并用Et₂O(3×150mL)萃取水相。用1M Na₂CO₃(50mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以产生156-1，其纯度足以直接用于下一步骤。

步骤T156-3：向156-1(来自之前反应)在THF(350mL)中的溶液添加TBAF(在THF中的1M溶液，63mL，63mmol，1.5当量)。搅拌反应2小时。添加Et₂O(600mL)，并用饱和NH₄Cl水溶液(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到9.1g(99％，2个步骤)156-2。

步骤T156-4：156-2(4.55g，17.2mmol，1.0当量)和156-B3(3.24g，18.9mmol，1.1当量)在MeCN(110mL)中的溶液用氩气脱气45分钟。向脱气的溶液添加Et₃N(4.8mL，34.4mmol，2.0当量)、P(o-tol)₃(524mg，1.72mmol，0.1当量)和Pd(OAc)₂(193mg，0.86mmol，0.05当量)。在氩气、搅拌下加热反应物至回流2小时。冷却至室温后，真空除去溶剂，且将残余物溶解于CH₂Cl₂(100mL)和水(100mL)，分离相，并用CH₂Cl₂(2×100mL)萃取水相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，且减压蒸发滤液。使用快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈棕色固体的Boc-T156a(2.98g，9.7mmol，56％)。注意，没有N保护时，该化合物表现出一定的不稳定性。

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.77分钟，[M+Na]⁺330

通过相同程序，但是从对映异构体氨基醇(R)-(-)-2-氨基-1-丙醇156-C1开始，获得对映异构体系链Boc-T156b。

DD.合成试剂156-B3的标准程序

步骤T156-5：向156-B1(7.01g，40mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(180mL)中的溶液添加DMP(23.8g，56mmol，1.4当量)。然后经30分钟添加CH₂Cl₂(含有0.1％H₂O，820mL，45mmol，1.125当量)。真空蒸发溶剂至干燥，且将残余物溶解于***(500mL)和饱和NaHCO₃水溶液和10％Na₂S₂O₃溶液的混合物(1∶1)(400mL)。搅拌该混合物1小时，分离相，并用水(100mL)和盐水(500mL)萃取有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，且减压蒸发滤液以提供156-B2(6.2g)，其直接用于下一步骤。

步骤T156-6：向MePPh₃Br(31.4g，88mmol，2.2当量)在THF(250mL)中的溶液添加t-BuOK(8.98g，80mmol，2.0当量)。搅拌溶液90分钟，冷却至-78℃，并通过套管添加在THF中的156-B2(150mL)。移除冰浴，并在室温搅拌反应物过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液(100mL)以溶解沉淀的盐，搅拌混合物5分钟，并分离相。用***(2×200mL)萃取水相。用盐水(50mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并减压蒸发滤液以获得残余物，其通过快速色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化以产生呈白色固体的156-B3(70％，2个步骤)。

通过相同程序，但是从对映异构体氨基醇(R)-(-)-2-氨基-1-丙醇156-C1开始，获得对映异构体氨基烯Boc-156C-3。

EE.合成系链T158的标准程序

步骤T158-1：向2-溴苯甲醛(158-0，9.6g，51.9mmol，1.0当量)在CH₃CN(300mL)中的溶液添加135-B(14.7g，57.1mmol，1.1当量)、(o-tol)₃P(1.6g，5.2mmol，0.1当量)、Pd(OAc)₂(584mg，2.6mmol，0.05当量)和Et₃N(14.6mL，103.8mmol，2.0当量)。回流搅拌得到的混合物过夜。冷却混合物至室温，并减压蒸发溶剂。添加水，且用CH₂Cl₂萃取水相。用盐水(2×)萃取有机相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。通过快速色谱法(15％EtOAc，85％己烷)纯化残余物，得到呈黄色油状半固体的158-1(17.5g，94％)。

TLC：R_f＝0.49(30％EtOAc，70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T158-2：向158-1(9.3g，25.8mmol，1.0当量)在EtOH(200mL)中的溶液添加阮内镍于水中的悬浮液(3mL)，并向不均匀的混合物鼓泡通入氢气。氢气氛下搅拌反应物7小时。然后，向反应溶液鼓泡通入氮气以除去过量的氢，并通过Celite垫过滤混合物。用50％EtOAc/己烷冲洗二氧化硅，并减压蒸发合并的滤液和洗液。获得呈黄色油状的158-2(8.8g，94％)。

TLC：R_f＝0.29(30％EtOAc，70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T158-3：向158-2(8.8g，24.1mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(200mL)中的溶液添加戴斯-马丁氧化剂(14.3g，33.7mmol，1.4当量)。室温下搅拌得到的混合物1.5小时。添加饱和NaHCO₃水溶液，并用CH₂Cl₂萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc，80％己烷)纯化得到的残余物以提供呈白色固体的158-3(6.8g，77％)。

TLC：R_f＝0.43(30％EtOAc，70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T158-4：在0℃下，向NaH(60％，于油中，1.12g，28.1mmol，1.5当量)在THF(150mL)中的悬浮液添加膦酸酯(4.1mL，28.1mmol，1.5当量)。注意，该反应产生氢。搅拌混合物15分钟，然后添加在THF(50mL)中的158-3(6.8g，18.7mmol，1.0当量)。室温下搅拌得到的混合物2小时。添加饱和NH₄Cl水溶液，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(20％EtOAc，80％己烷)纯化残余物，以产生呈浅黄色油状的158-4(7.3g，94％)。

TLC：R_f＝0.42(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T158-5：向158-4(7.3g，17.4mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(200mL)中的溶液添加TFA(1.9mL，26.1mmol，1.5当量)。室温下搅拌得到的混合物4小时。添加饱和NaHCO₃水溶液，并用CH₂Cl₂萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(30％EtOAc，70％己烷)纯化残余物以产生呈浅黄色油状的158-5(5.4g，96％)。

TLC：R_f＝0.40(30％EtOAc，70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T158-6：在-78℃下，向158-5(5.4g，16.9mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液添加DIBAL(1M，于CH₂Cl₂中，42.3mL，42.3mmol，2.5当量)。在-78℃搅拌得到的混合物30分钟，然后在0℃搅拌1小时。如果TLC指示反应不完全，则添加额外1当量的DIBAL。添加1M罗谢尔盐溶液，并搅拌混合物1小时。用CH₂Cl₂萃取水相，直到TLC指示没有额外物质被萃取为止。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(60％EtOAc，40％己烷)纯化残余物以提供呈无色油状的Boc-T158(4.6g，94％)。

TLC：R_f＝0.17(50％EtOAc，50％己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.83分钟，[M]⁺291，[M+Na]⁺314.

FF.合成系链T159的标准程序

步骤T159-1：向2-溴苯酚(159-0，45g，260mmol，1.0当量)在丙酮(1.3L)中的溶液添加无水碳酸钾(71.9g，520mmol，2.0当量)和烯丙基溴(34.6g，24.2mL，286mmol，1.1当量)。氩气下回流搅拌悬浮液6小时。冷却反应物至室温，然后真空除去溶剂，添加冷水(500mL)，并用***(3×500mL)萃取水相。用水(200mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩滤液以产生呈油状的159-1(55.6g，213mmol，100％)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.32(25％CH₂Cl₂/己烷)。

步骤T159-2：回流搅拌159-1(51.0g，239mmol，1.0当量)在N，N-二乙基苯胺(36mL，1∶1v/v)中的溶液4小时。可以通过¹H NMR追踪反应物。使溶液冷却至室温，并添加稀释的HCl(300mL)。用***(3×300mL)萃取水相。合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤，且真空浓缩滤液。残余物溶解于***(500mL)并用1N NaOH(4×250mL)萃取。用6N HCl酸化水相至pH 2-3，然后用***(3×250mL)萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩滤液以提供呈油状的159-2(46g)，其被一些二乙基苯胺污染，其原样用于下一步骤。

步骤T159-3：向159-2(46g)在CHCl₃(2.4L)中的溶液添加m-CPBA(80.5g，359mmol，1.5当量)和TFA(1.8mL，24mmol，0.1当量)。回流搅拌反应物过夜。添加TFA(1.8mL)，并搅拌反应物3小时。添加另一部分TFA(14.4mL)，且搅拌反应物另外3小时。冷却反应物至室温，然后用饱和碳酸氢钠溶液(2×500mL)和盐水(500mL)洗涤。有机相经硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩滤液以产生有机固体，其通过快速色谱法(梯度，20％-30％-40％EtOAc/己烷)纯化。获得了两种含有产物的级分。通过快速色谱法(条件如上)再次纯化第一种产物(20g)，得到12.0g(52.4mmol，21.9％，2个步骤)的159-3。第二种产物(14.9g，65.0mmol，27.2％，2个步骤)含有纯159-3。

步骤T159-4：向159-3(2.67g，11.6mmol，1.0当量)、135-B(3.29g，12.8mmol，1.1当量)和Et₃N(3.2mL，23.2mmol，2.0当量)在MeCN(优选被脱气，72.5mL)中的溶液添加P(o-tol)₃(706mg，2.32mmol，0.2当量)和Pd(OAc)₂(260mg，1.16mmol，0.1当量)。氩气下回流搅拌混合物过夜。真空浓缩溶液，添加水(250mL)和CH₂Cl₂(250mL)，并分离相。用CH₂Cl₂(2×250mL)萃取水相。合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤，且真空浓缩滤液以产生油，其通过快速色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化而得到5g(＞100％)2∶1的产物混合物(159-4)和起始材料(159-3)。

步骤T159-5：向159-4(5g，123mmol)在CH₂Cl₂(60mL)中的溶液添加TFA(1.1mL，15mmol，1.22当量)。室温搅拌混合物3小时。然后添加***(250mL)，用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机相。有机相经硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩滤液以产生黄色残余物，其通过快速色谱法(梯度，30％-40％-50％EtOAc/己烷)纯化以得到1.69g(48％，2个步骤)呈黄色油状的Boc-T159。

TLC：R_f＝0.35(50％EtOAc/己烷)

GG.合成系链T160的标准程序

步骤T160-1：向2-羟基苯甲醛(160-0，1.2g，4.8mmol，1.0当量)在DMF(20mL)中的溶液添加碳酸钾(1.5g，10.8mmol，1.1当量)、碘化钾(332mg，2.0mmol，0.2当量)和136-A(4.2mL，19.6mmol，2.0当量)。在70℃下搅拌得到的混合物4小时。冷却溶液至室温并添加盐水。用***萃取水相，并用盐水(2×)萃取合并的有机相。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(15％EtOAc，85％己烷)纯化残余物以产生160-1(3.0g，＞100％，如通过¹H NMR检测，含有痕量136-A)。

TLC：R_f＝0.55(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T160-2：在-78℃下，向膦酸酯160-A(3.6g，15.0mmol，1.5当量，Alagappan Thenappan and Donald J.Burton J.Org.Chem 1990，4639)在THF(150mL)中的溶液添加n-BuLi的溶液(2M，于戊烷中，7.5mL，15.0mmol，1.5当量)。在-78℃下维持得到的混合物10分钟，然后添加在THF(50mL)中的160-1(2.8g，10.0mmol，1.0当量)，在-78℃搅拌得到的混合物45分钟。添加饱和NH₄Cl水溶液，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(10％EtOAc，90％己烷)纯化残余物以提供160-2(3.9g，105％，如通过¹H NMR检测，含有痕量136-A)。

TLC：R_f＝0.58(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T160-3：在-78℃下，向酯160-2(3.7g，10.0mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液添加DIBAL的溶液(1M，于CH₂Cl₂中，25.0mL，25.0mmol，2.5当量，临界量，因为使用更大过量的DIBAL观察到TBDMS保护的损失)。在-78℃下搅拌得到的混合物30分钟，然后在0℃下搅拌1小时。添加丙酮和Na₂SO₄·10H₂O，并室温搅拌得到的混合物2小时。过滤沉淀并用EtOAc和CH₂Cl₂冲洗。减压蒸发溶剂，且通过快速色谱法(30％EtOAc，70％己烷)纯化残余物以产生160-3(2.8g，85％，3个步骤)。

TLC：R_f＝0.46(30％EtOAc，70％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T160-4：在0℃下，向160-3(2.6g，8.0mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂(50mL)中的溶液添加Et₃N(5.6mL，40.0mmol，5.0当量)和MsCl(1.2mL，16.0mmol，2.0当量)。在0℃搅拌得到的混合物1小时。添加水，并用CH₂Cl₂萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以产生粗品甲磺酸酯160-4(含有痕量MsCl)，其原样用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.24(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T160-5：向160-4(3.2g，8.0mmol，1.0当量)在DMF(30mL)中的溶液添加NaN₃(2.6g，40.0mmol，5.0当量)。在室温搅拌得到的混合物2小时。添加水，并用***萃取水相。用盐水萃取合并的有机相，且有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以产生粗品叠氮化物160-5(1.9g，68％，2个步骤)，其纯度足以原样用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.68(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T160-6：向160-5(1.9g，5.4mmol，1.0当量)在THF(50mL)中的溶液添加PPh₃(2.1g，8.1mmol，1.5当量)和水(5mL)。在50℃加热得到的混合物过夜。(TLC：R_f＝基线(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。使溶液冷却至室温，然后添加水(50mL)、Na₂CO₃(572mg，5.4mmol，1.0当量)和(Boc)₂O(1.2g，5.4mmol，1.0当量)。在室温搅拌得到的混合物2小时。(TLC：R_f＝0.36(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。添加水，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液至干。向在THF(30mL)中的残余物添加TBAF的溶液(1M，于THF中，8.1mL，8.1mmol，1.5当量)。在室温搅拌得到的混合物1小时。添加水，并用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(60％EtOAc，40％己烷)纯化残余物以产生Boc-T160(1.3g，76％，3个步骤)。

TLC：R_f＝0.10(20％EtOAc，80％己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝6.51分钟，[M]⁺311，[M+Na]⁺334.

HH.合成系链T161和T177的标准程序

步骤T161-1：向134-0[(R)-(-)-2-氨基-1-丁醇，5g，56mmol，1.0当量]在THF/水(1/1)中的溶液添加(Boc)₂O(12.9g，59mmol，1.05当量)和碳酸钠(7.12g，67mmol，1.2当量)。室温搅拌溶液过夜。减压除去溶剂，残余物溶解于***，并添加柠檬酸盐缓冲溶液。用***(3×)萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过穿过硅胶垫(50％EtOAc/己烷)纯化残余物，以得到呈有色油状的10g(94％)161-1。

步骤T161-2：(基于Meyer，S.D.和S.L.Schreiber J.Org.Chem1994，59，7549-7552.中的程序)向161-1(7.55g，40mmol，1.0当量)在DCM(230mL)中的溶液添加戴斯-马丁氧化剂(DMP，24g，56mmol，1.4当量)。经0.5小时，在剧烈搅拌下，使用滴液漏斗向该溶液添加H₂O(1.5mL，1.4当量)。0.5小时之后，添加Et₂O，过滤溶液，并在减压下浓缩滤液。将残余物溶解于Et₂O，并用饱和NaHCO₃/10％硫代硫酸钠(1∶1)、水和盐水连续洗涤溶液。有时需要用碳酸氢盐-硫代硫酸盐额外洗涤，以除去DMP试剂形成的乙酸。使用Et₂O(1x)反萃取合并的水相，且合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶垫(20％EtOAc/己烷)纯化残余物以产生5.4g(75％)呈白色固体的161-2，其与甲苯温和共沸(3×，浴温＝30℃，油泵)并直接用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.3(己烷/EtOAc，1/4；检测：KMnO₄，UV)。

步骤T161-3：在0℃下，经5分钟，分三批，向在DCM(173mL)中的Zn粉[通过以下工序活化：用0.5N HCl(3×)、H₂O(3×)、MeOH(3×)、Et₂O(3×)连续洗涤并真空(油泵)干燥，3.8g，53mmol，2.0当量]和CBr₄(19.2g，53mmol，2.0当量)添加PPh₃(15.2g，58mmol，2.0当量)，观察到放热反应。在室温搅拌溶液24小时。溶液从黄色变成粉色悬浮液。在DCM(30mL)中添加新鲜制备的乙醛161-2(5.0g，26mmol，1.0当量)。在接下来的24小时，溶液变成暗紫色。减压浓缩溶液，然后通过快速色谱法(己烷/EtOAc，10/1)纯化以提供呈白色固体的161-3(4.1g，46％)。

TLC：R_f＝0.67(EtOAc/己烷，3/7；检测：KMnO₄)。

步骤T161-4：在-78℃下，向161-3(2.0g，5.83mmol，1.0当量)在THF(从Na-二苯甲酮羰游基蒸馏，95mL)中的溶液逐滴加入新滴定的n-BuLi在己烷(1.8M，10.5mL，17.5mmol，3.0当量)中的溶液。在-78℃搅拌溶液1.0小时。添加0.01N NaOH溶液(100mL)，并使混合物升温至室温。用Et₂O(2×120mL)萃取水相。用盐水(2×300mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩，然后通过快速色谱法(己烷/EtOAc，4/1)纯化，以产生880mg(88％)呈白色固体的161-4。

TLC：R_f＝0.57(Et₂O/己烷，2/3；检测：KMnO₄)。

步骤T161-5：向161-4(880mg，4.81mmol，1.0当量)和161-A(参见关于Cbz-T33a的程序，1.65g，6.25mmol，1.3当量)在CH₃CN(38mL)中的溶液鼓泡通入氩气20分钟。添加Et₃N(从CaH₂新鲜蒸馏，2.4mL，224mmol，3.6当量)，并鼓泡通入氩气10分钟。然后向溶液添加重结晶的CuI(28mg，0.144mmol，0.03当量)和PdCl₂(PPh₃)₂(102mg，0.144mmol，0.03当量)。在室温、氩气氛下搅拌反应过夜。减压除去挥发物，并通过快速色谱法(DCM/EtOAc，4/1)纯化残余物，以得到1.4g(92％)呈橙色固体的161-5。注意，必须小心除去所有未反应的161-A，因为可以证明其在之后极难分离。

TLC：R_f＝0.13(Et₂O/己烷，1/4：检测：KMnO₄)。

步骤T161-6：向161-5(1.4g，4.39mmol，1.0当量)添加10％Pd/C(210mg，15％重量)和95％EtOH(128mL)。将混合物放入400psi氢气压下的Parr氢化器，持续24小时。通过Celite垫过滤混合物，然后减压浓缩滤液，以产生1.12g(80％)呈无色油状的Boc-T161。类似地，使用该程序，以16％总产率，从50.0g 134-0合成了29.7gBoc-T161a。

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.18-7.10(m，2H)，6.90-6.82(m，2H)，4.58-4.46(m，2H)，4.2-3.8(m，4H)，3.5(m，1H)，2.85-2.7(m，1H)，2.65-4.45(m，1H)，1.8-1.2(m，4H)，1.44(s，9H)，0.8(t，3H，J＝7Hz)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：7.3分钟，[M]⁺323.

通过相同程序，但从134-0的对映异构体氨基醇(S)-(-)-2-氨基-1-丁醇161-6开始，获得了对映异构体系链Boc-T161b和Boc-T177b。

II.合成系链T162的标准程序

步骤T162-1：在-30℃、N₂下，向叔丁基胺(43.6g，62.9mL，600mmol，3.0当量)在无水甲苯(170mL)中的溶液逐滴加入Br₂(35.1g，11.3mL，220mmol，1.1当量)(～10分钟)。使混合物冷却至-78℃，并在N₂下逐滴加入2-氟苯酚(162-0，22.5g，200mmol，1.0当量)在DCM(110mL)中的溶液(～30分钟)。使混合物逐渐升温至室温并搅拌过夜。用二***稀释反应物，并用1.0M HCl(2×)和盐水(1×)洗涤有机相。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，并减压蒸发滤液。通过快速色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化残余物以产生呈棕色固体的162-1(26g，68％)。

TLC：R_f：0.45(EtOAc/己烷，25/75；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T162-2：向162-1(26.0g，136mmol，1.0当量)和136-A(52.1g，218mmol，1.6当量)在无水DMF(500mL)中的溶液添加碳酸钾(22.6g，163.2mmol，1.2当量)和碘化钾(4.5g，27.2mmol，0.2当量)。在55℃、氮气下加热并搅拌溶液过夜。用水(500mL)和二***(500mL)稀释混合物，并用Et₂O(2×300mL)萃取水相。合并有机相，并用柠檬酸盐缓冲液(400mL)和盐水(2×300mL)洗涤。有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，并减压蒸发滤液。通过快速色谱法(5％乙酸乙酯/己烷)纯化淡黄色油残余物，以产生呈无色油状的162-2(37.0g，78％)。

TLC：R_f：0.77(EtOAc/己烷，25/75；检测：UV，KMnO₄)。

步骤T162-3：使162-2(1.05g，3.0mmol，1.0当量)、162-A(1.02g，6.0mmol，2.0当量)、PPh₃(79mg，0.3mmol，0.1当量)和TBAF(1M的THF溶液，9mL，9.0mmol，3.0当量)在THF(10mL)中的溶液脱气并用氩气再填充两次。然后添加Pd₂(dba)₃(137mg，0.15mmol，0.05当量)，使混合物脱气并再填充氩气，在60℃、氩气下搅拌反应物。减压蒸发溶剂，并用EtOAc稀释混合物，通过硅胶垫过滤并用乙酸乙酯洗涤，直到TLC指示不再有物质被洗脱。减压除去溶剂直至干燥，然后通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷，重复2×)纯化残余物，以产生呈橙色油状的162-3(700mg，72％)。

TLC：R_f：0.56(EtOAc/DCM，20/80；检测：UV，茚三酮)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：6.66分钟，[M]⁺323.

步骤T162-4：在氮气下向162-3(700mg，2.2mmol，1.0当量)在95％乙醇(30mL)中的溶液添加碳载钯(10％重量，50％水，200mg，30％重量当量)，然后用维持在60psi的氢气处理4-6小时。通过Celite垫过滤反应物，并用乙醇洗涤，直至不再有额外物质被洗脱。减压蒸发合并的滤液和洗液，直至干燥。通过快速色谱法(20％EtOAc/DCM)纯化残余物，以产生呈淡黄色油状的Boc-T162a(690mg，97％)。

TLC：R_f＝0.46(20/80，EtOAc/DCM；检测：UV，茚三酮)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：6.92分钟，[M+H]⁺328；

¹H NMR(CDCl₃)：δ6.90(m，3H，Ar)，4.69(br，1H，NH)，4.15(m，2H)，3.93(m，2H)，3.67(m，1H)，3.07(m，1H，OH)，2.79(m，1H)，2.59(m，1H)，1.82-1.59(m，2H)，1.43(s，9H)，1.14(d，J＝6.5Hz，3H)。

通过相同程序，但从对映异构体氨基炔162-B开始，获得对映异构体系链Boc-T162b。

JJ.合成系链T163的标准程序

步骤T163-1：向2-溴代-4-氟苯酚(163-0，14g，73mmol，1.0当量)和经保护的136-A(29.8g，125.0mmol，1.7当量)在DMF(Drisolv，230mL)中的溶液添加碳酸钾(12.7g，92mmol，1.25当量)和碘化钾(2.42g，14.8mmol，0.2当量)。加热反应至55℃，并在氮气下搅拌过夜。减压下除去溶剂至干，然后用水(200mL)稀释残余的油，并用***(3×150mL)萃取。合并有机相，用柠檬酸盐缓冲液(2×)、盐水(1×)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并减压蒸发滤液。通过快速色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化残余物，以产生呈淡黄色固体的163-1(24.6g，96％)。

TLC：R_f：0.68(EtOAc/己烷，25/75；检测：UV，CMA)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：13.93分钟，[M+H]⁺349，351.

步骤T163-2：向163-1(3.5g，10mmol，1.0当量)、162-A(3.0g，17mmol，1.7当量)和三苯基膦(161mg，0.06当量)在二异丙基胺(ACS级，58mL)中的溶液鼓泡通入氩气15-20分钟。然后，添加重结晶的碘化铜(I)(39mg，0.02当量)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(210mg，0.03当量)，并在60℃、氩气下搅拌反应混合物过夜。通过硅胶垫过滤溶液，并用乙酸乙酯洗涤，直至有额外物质洗脱。减压除去溶剂直至干燥，通过快速色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化残余的油以提供呈淡黄色油状的163-2(4.0g，91％)。

TLC：R_f：0.60(EtOAc/己烷，25/75；检测：UV，茚三酮)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：13.65分钟，[M]⁺437，[M+Na]⁺460.

步骤T163-3：在氮气下，向163-2(4.05g 9.41mmol，1.0当量)在95％乙醇(241mL)中的溶液添加碳载钯(434mg，10％重量/50％水)。(注意，更浓的反应条件(＞0.04M)导致一些二聚体形成)。在400psi氢气下搅拌溶液过夜。当反应完全时，向混合物鼓泡通入氮气10分钟，以除去过量氢。通过Celite垫过滤溶剂，并用乙酸乙酯洗涤，直至不再有额外物质被洗脱。减压浓缩滤液和洗液直至干燥。通过快速色谱法(梯度，30％EtOAc/己烷至75％EtOAc/己烷)纯化得到的残余物，以产生呈淡黄色油状的Boc-T163a(2.8g，91％)。氢化期间除去TBDMS基团。

TLC：R_f：0.30(EtOAc/己烷，40/60；检测：UV，茚三酮)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：7.00分钟，[M+Na]⁺350；

¹H NMR(CDCl₃)：δ6.84-6.75(m，3H)，4.6(m，1H)，4.01(m，2H)，4.0(m，4H)，3.65(m，1H)，2.7m，1H)，2.55(m，1H)，1.85(m，1H)，1.65(m，1H)，1.45(s，6H)，1.15(d，7Hz，3H)。

通过相同程序，但从对映异构体氨基炔162-B开始，获得对映异构体系链Boc-T163b。

KK.合成系链T164的标准程序

步骤T164-1：在-78℃、N₂下，向n-BuLi(36.1mL，1.6M于己烷中，57.8mmol，1.1当量)在THF(无水，从Na-二苯甲酮羰游基蒸馏，200mL)中的溶液滴加3-氟茴香醚(164-0，6.0mL，52.5mmol，1.0当量)在THF(无水，20mL)中的溶液(～15分钟)。在-78℃下搅拌反应物10分钟，然后在-60-78℃逐滴加入I2(16.0g，63mmol.1.2当量)在THF(无水，100mL)中的溶液(～30分钟)。使混合物升温至-60℃并搅拌30分钟。小心添加H₂O(50mL)，随后添加Na₂SO₃(10％w/v；50mL)，并搅拌溶液5分钟。分层，用己烷(3×)萃取水相。用Na₂SO₃(10％w/v；2×)和H₂O(2×)洗涤合并的有机相，经无水MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液，以留下黄色残余物，其通过快速色谱法(5％EtOAc/己烷)纯化以得到9.3g(70％)呈无色油状的164-1。

TLC：R_f＝0.34(5％EtOAc/95％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T164-2：在-30℃、N₂下，向164-1(9.3g，36.9mmol，1.0当量)在DCM(无水，100mL)中的溶液逐滴加入BBr₃在DCM(1.0M，92.3mL，92.3mmol，2.5当量)中的溶液(～30分钟)。使溶液经3小时升温至0℃，然后在0℃搅拌另外3小时。小心逐滴加入MeOH(气体逸出)，随后添加H₂O。除去冷却浴，并搅拌混合物10分钟。分层，并用DCM萃取水相。合并的有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，且减压浓缩滤液以留下黑色残余物，通过快速色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化以提供7.5g(86％)呈棕色油状的164-2。

TLC：R_f＝0.09(5％EtOAc/95％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T164-3：向164-2(7.5g，31.5mmol，1.0当量)和136-A(11.3g，47.3mmol，1.5当量)在DMF(无水，100mL)中的溶液添加K₂CO₃(5.6g，41.0mmol，1.3当量)和KI(1.0g，6.3mmol，0.2当量)。在55℃搅拌混合物过夜。添加水，并用***萃取水相。用盐水洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(5％EtOAc/己烷)纯化得到的残余物，以产生13.7g预期产物164-3和136-A的混合物(15％，¹H NMR)，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.57(10％EtOAc/90％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T164-4：向164-3(12.8g，32.3mmol，1.0当量)在THF(200mL)中的溶液添加TBAF的溶液(1M于THF中，48.5mL，48.5mmol，1.5当量)，并室温搅拌混合物30分钟。添加盐水，且用EtOAc萃取水相。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(50％EtOAc，50％己烷)纯化残余物，以产生呈白色固体的164-4(7.3g，80％，2个步骤)。

TLC：R_f＝0.22(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤T164-5：向164-4(7.3g，1.0当量，25.9mmol)在THF(52mL)中的溶液添加164-A苹果酸盐(5.8g，28.5mmol，1.1当量)，并用氩气对混合物脱气30分钟。添加CuI(重结晶的，248mg，1.3mmol，0.05当量)、PdCl₂(PPh₃)₂(912mg，1.3mmol，0.05当量)和2M NH₄OH水溶液(52.0mL，103.6mmol，4.0当量)，且再次用氩气使混合物脱气30分钟。室温搅拌反应混合物过夜，通过HPLC监测。蒸发THF，并用2N HCl酸化有机相至pH2，形成棕色不溶胶。通过Celite小垫过滤水相，并用0.01M HCl冲洗。用6N NaOH碱化调节水相至pH13-14，并用EtOAc萃取。合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以得到呈橙色固体的165-5(5.0g，86％)。

步骤T164-6：向164-5(5.0g，22.4mmol，1.0当量)在95％EtOH(100mL)中的溶液添加湿10％Pd/C(4.7g，2.24mmol，0.1当量)。在60psiH2下、Parr氢化器中搅拌混合物5小时，通过HPLC监测反应。完全时，鼓泡通入氮气以除去过量氢，然后通过Celite垫过滤混合物并用95％EtOH冲洗，减压浓缩合并的滤液和洗液以提供呈橙色油状的165-6(5.0g，100％)。

步骤T164-7：向165-6(5.0g，22.0mmol，1.0当量)在THF∶H₂O(1∶1，100mL)中的溶液添加Na₂CO₃(2.6g，24.2mmol，1.1当量)和(Boc)₂O(5.3g，24.2mmol，1.1当量)。室温搅拌混合物过夜，然后添加水。用EtOAc萃取水相，合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法(40％EtOAc，60％己烷)纯化残余物以产生呈浅黄色油状的Boc-T164a(6.4g，86％)。

TLC：R_f＝0.47(50％EtOAc/50％己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

HPLC/MS(梯度A4)：t_R：7.16分钟，[M+Na]⁺350；

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.10(1H，q)，6.64(2H，dd)，4.63(1H宽峰)，413-392(4H，m)，3.64(1H，宽峰)，2.70(2H，t)，1.80和1.59(2H，2宽峰)，1.45(9H，s)，1.15(3H，d)。

通过相同程序，但是从对映异构体氨基炔164-B开始，获得对映异构体系链Boc-T164b。

LL.合成系链T165的标准程序

对于T165a，在Mitsunobu条件下使经保护的苯酚165-1与(S)-1，2-丙二醇衍生的手性醇165-B偶联以提供165-2。酯还原为醇之后逐步标准转化以提供Boc-T165a，所述标准转化包括转化为甲磺酸酯、叠氮化物置换、使用三苯基膦还原叠氮化物为胺、胺的保护和甲硅烷基醚的脱保护。

使用相同工序以相等产率将165-1转化为Boc-T165b，除了在Mitsunobu反应中采用(R)-1，2-丙二醇衍生的手性醇165-D(以形成165-5)。

MM.合成系链T166的标准程序

从系链T8开始，实现系链T166的合成。将醇保护为其THP醚，随后使用作为碱的氢化钠和作为亲电体的甲基碘烷基化氨基甲酸酯氮。在较高温度下进行THP醚的酸性裂解，但是保持Boc基团完整，以提供Boc-T166。

NN.合成系链T167的标准程序

以上提供了合成系链T167的两种可选方法。第一种是通过Boc-T166的简单还原。

此外，可以采用针对Boc-T166描述的类似工序，但是从系链T9开始。

OO.合成系链T168的标准程序

从(1R，2S)-顺式-2-羟基-环己酸乙酯104-1(获自Julich，现在是Codexis)开始合成系链T168。将醇保护为其叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)醚，随后将酯受控低温还原为相应的醛(168-1)。随后Wittig反应产生不饱和酯168-2。一系列转化涉及双键还原、酯的氢化铝锂还原和通过Mitsunobu反应将醇转化为相应的苯二甲酰亚氨基衍生物，以很好的产率生成了中间体化合物168-3。在酸性条件下脱保护TBDMS，随后通过钯催化连接烯丙基碳酸酯以提供168-5。用肼裂解苯二甲酰亚氨基，随后将得到的胺保护为其Boc衍生物，提供了168-6。通过在还原条件下臭氧解，将该中间体转化为Boc-T168。此外，通过改变臭氧解还原条件，可以将168-6转化为相应的醛168-7。168-7用于通过还原性胺化连接系链。

PP.合成系链T169的标准程序

使用标准方法将间苯二酚单苯甲酸酯(169-0)的游离苯酚保护为其苄基醚。酯的皂化产生169-2，其在三氟乙酸银存在下碘化以得到169-3。用保护的溴化物169-A烷基化苯酚，提供了169-4。在关键步骤，使其经受与手性炔基胺169-B的Pd(II)偶联，产生了具有系链完整构架的169-5。随后使用标准方法依次进行三键的催化氢化、胺的Boc保护和TBDMS醚的裂解，以留下Boc-T169a(Bn)。使用169-B的对映异构体胺提供了对映异构体系链Boc-T169b(Bn)的途径。

QQ.合成系链T170的标准程序

从30g(0.14mol)间苯二酚单苯甲酸酯(169-0)开始，使用标准方法将游离苯酚保护为其苄基醚。酯在碱中裂解，随后用NBS溴化，产生4-溴代衍生物(170-4)。与(S)-乳酸乙酯(170-A)的Mitsunobu偶联提供了170-5。用硼氢化锂还原酯，并使得到的溴代醇(170-6)经受与Boc-炔丙基胺(170-B)的Pd(II)-介导的偶联。将炔还原为170-7，苄基醚同时裂解，然后在标准条件下保护恢复，以产生经保护的系链衍生物。可选地，可以使170-6经受不同的Pd(II)-介导的与Boc-烯丙胺(170-C)的偶联反应，以直接提供经保护的系链。该程序中使用(R)-乳酸乙酯(或(R)-乳酸的其他适当的烷基酯)，提供了相应的经保护的对映异构体系链Boc-T170b(Bn)。

RR.合成系链T171的标准程序

如上所提出的，从间苯二酚单苯甲酸酯(169-0)开始进行系链T171a的合成。保护基处理，随后碘化，产生171-3。用171-A(等同于134-0，参见针对T161描述的合成)烷基化，随后与171-B的Sonogashira偶联，产生了中间体171-7。还原提供了Boc-T171a，使用相同程序，但使用171-B的对映异构体试剂171-C(等同于161-6衍生的炔，参见针对T161描述的合成)获得了对映异构体系链T171b。

SS.合成系链T172的标准程序

从经保护的碘-苯酚172-0开始进行系链T172a的合成，以及Pd(0)-介导的与经保护的氨基炔172-A的Sonagashira偶联，以产生172-1。炔的还原提供了Boc-T172a。

从(R)-2-氨基-1-戊醇(172-2)开始，如所描述的，获得了手性试剂172-A。

类似地，但使用试剂172-B构建了对映异构体系链T172b，试剂172-B如针对172-A所描述的，从(S)-2-氨基-1-戊醇开始合成。

TT.合成系链T173的标准程序

以与刚针对T172描述的类似方式，从经保护的碘-苯酚172-0开始制备系链T173b，以及Pd(0)-介导的与经保护的氨基炔173-A的Sonagashira偶联，以产生173-1，随后完全还原炔，产生了Boc-T173b。如所示的，从手性氨基醇173-0获得173-A试剂。

使用相同过程，利用试剂173-B构建对映异构体系链Boc-T173a，该试剂173-B可以如针对173-A所示从对映异构体氨基醇173-4合成。

UU.合成系链T174和T175的标准程序

从以与已经描述的合成子类似的方式制备的烷基化苯酚(175-0)开始，从相同工序获得系链T174和T175。脱保护，随后与手性炔161-4Sonogashira偶联，以高产率产生175-2，其等同于Boc-T174a。然后还原175-2，也以良好产率提供了Boc-T175a。

使用161-4的对映异构体试剂175-3，采用相同的工序制备了对映异构体系链T174b和T175b。

VV.合成系链T176的标准程序

以直接的方式，醇176-0与Boc保护的炔丙基胺(176-A)Sonogashira偶联，产生了Boc-T176。可以通过两步工序从相应的苯酚获得176-0，所述两步工序涉及用经保护的2-卤代醇烷基化、随后脱保护。

WW.合成系链T178和T179的标准程序

从上述单个工序产生了系链T178和T179。卤化苯酚(179-0)与(S)-乳酸乙酯的Mitsunobu反应产生了179-1。水解为179-2，随后硼烷还原，提供了溴化物179-3，其作为Pd(0)-偶联反应物的前体。该中间体使用手性炔基胺(179-A)的Sonogashira产生了179-4，其等同于Boc-T178a。然后，完全还原三键，然后产生了Boc-T179a。

使用对映异构体炔179-B的类似方法提供了经保护的系链Boc-T178b和Boc-T179b。但利用(R)-乳酸乙酯或其他适当(R)-乳酸酯的类似方法用来提供非对映异构体系链Boc-T178c、Boc-T178d、Boc-T179c和Boc-T179d。

YY.合成系链T180和T181的标准程序

从中间体179-3开始，通过与经保护的炔基胺161-4的Sonogashira偶联制备了系链T180和T181，随后还原偶联产物181-1(等同于Boc-T180a)以提供Boc-T181a。

通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，获得了非对映异构体系链Boc-T180b和Boc-T181b。采用179-3的对映异构体179-6与161-4或175-3，可分别用来合成Boc-T180c和Boc-T181c、或Boc-T180d和Boc-T181d。

ZZ.合成系链T182和T183的标准程序

在Mitsunobu条件下用(S)-乳酸乙酯烷基化溴苯酚183-0，用来合成183-1。碱水解，随后硼烷还原，产生中间体醇183-3。与炔基胺161-4Sonogashira偶联，产生183-4，其等同于Boc-T182a。然后完全还原三键，提供Boc-T183a。

通过类似程序，但是使用161-4的对映异构体试剂175-3，获得了非对映异构体系链Boc-T182b和Boc-T183b。采用183-3的对映异构体183-5与161-4或175-3，可分别用来合成Boc-T182c和Boc-T183c、或Boc-T182d和Boc-T183d。可以从(R)-乳酸乙酯或另一种适合的酯制备183-5。

AAA.合成系链T184和系链T185的标准程序

以直接方式，从中间体176-0开始，与161-4的Sonogashira偶联产生185-1(等同于Boc-T184a)。然后炔的还原提供Boc-T185a。

通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以获得对映异构体系链Boc-T184b和Boc-T185b。

BBB.合成系链T186的标准程序

标准条件下中间体134-4的脱保护用来提供Boc-T186a。134-4的对映异构体得到对映异构体系链Boc-T186b。

CCC.合成系链T187的标准程序

用经保护的溴代醇187-A烷基化二卤代苯酚187-0，然后经受Pd(0)-偶联条件以很好的产率制备中间体187-2。利用标准方法脱保护产生Boc-T187。

DDD.合成系链T188的标准程序

通过重氮化-置换工序制备碘苯酚188-1。用经保护的溴代醇188-A烷基化，随后水解去除甲硅烷基醚保护基，得到188-2。与手性炔基胺161-4的Sonogashira偶联以中等产率制备了Boc-T188a。可选的一个步骤工序也有效地从188-0直接提供188-2.

通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T188b。

EEE.合成系链T189的标准程序

利用中间体碘代醇188-2与烯189-1的AB-烷基Suzuki-Miyaura偶联，以制备经保护的系链Boc-T189a。通过炔161-4的部分还原，提供试剂189-1。

同样，可以使用161-4的对映异构体175-3来提供189-2。当其经受刚描述的Pd(0)-条件时，得到对映异构体系链Boc-T189b。

FFF.合成系链T190的标准程序

190-0的碘化，随后氯化，并用来自乙二醇的醇盐置换，产生190-3。利用经保护的烯丙胺190-A的B-烷基Suzuki-Miyaura偶联，得到Boc-T190。

GGG.合成系链T191的标准程序

利用针对系链T190描述的过程中烯组分的改性来获得系链T191。B-烷基Suzuki-Miyaura反应中经保护的手性不饱和胺189-1的取代提供了Boc-T191。类似地，可以使用189-1的对映异构体189-2来制备对映异构体系链Boc-T191b。

HHH.合成系链T192的标准程序

通过多步骤过程从碘化物192-0合成硼酸192-1，所述多步骤过程包括金属-卤素交换、用硼酸三异丙酯处理和水解。与手性碘化物的Suzuki偶联产生192-2，然后对其脱保护以产生Boc-T192a。可以采用192-A的对映异构体来提供对映异构体系链T192b。

III.合成系链T193的标准程序

在指示的手性铑复合物存在下，环戊烯酮(193-0)与硼酸193-A反应，以提供良好光学纯度的193-1(＞96％ee)。还原胺化、芳族甲醚的裂解和胺的保护产生193-4。用经保护的合成子193-B对苯酚的烷基化以及甲硅烷基醚的脱保护产生Boc-T193a。使用S-BINAP钌复合物将产生193-1的对映异构体环戊酮193-5，其转而提供Boc-T193b。

JJJ.合成系链T194的标准程序

通过用DAST处理，随后用TBAF处理以保证TBDMS醚的完全脱保护，从酮衍生物142-2(T142构建中的中间体)合成Boc-T194。

KKK.合成系链T195的标准程序

以标准方式从195-0形成烯基三氟甲基磺酸酯195-1。钯催化的羰基化，随后甲醚脱保护，以产生195-3。苯酚与乙二醇的单叔丁基二甲基甲硅烷基醚(195-B)Mitsunobu反应，产生195-4。酯还原为醇，得到195-5，然后使用Mitsunobu过程再次将其转化为脱保护的胺195-6。通过具有氟化物的甲硅烷基保护基的脱保护，完成了Boc-T195的合成。

LLL.合成系链T197的标准程序

充分进行197-0的烷基化以产生酮197-1。同时在所示的还原条件下发生氨基甲基化和羰基还原，以制备197-2。胺的保护、脱水和乙酸酯水解，得到Boc-T197。

MMM.合成系链T198的标准程序

该系链的构建开始于脱保护2-苄氧基苯酚(198-0)为烯丙基醚，随后通过克莱森重排以提供198-2。与(S)-乳酸乙酯(199-A)的Mitsunobu反应产生198-3。双键的硼氢化和随后氧化产生198-4。此时与亚氨基二甲酸二叔丁酯的另一个Mitsunobu反应产生198-5。用硼氢化锂还原酯和Boc基团之一的碱裂解，成功提供Boc-T198a(Bn)。在该程序中使用(R)-乳酸乙酯(或(R)-乳酸的其他适合的烷基酯)提供了相应的经保护的对映异构体系链Boc-T198b(Bn)。

NNN.合成系链T199Boc-(2RMe，50H)o18r的标准程序

以与已经针对T170描述的类似方式，从可商购的4-(苄氧基)苯酚(199-0)开始构建该系链。对之溴化以产生2-溴代衍生物(199-1)，其在Mitsunobu条件下与(S)-乳酸乙酯(199-A)偶联以提供199-2。用DIBAL-H还原酯为醇，以提供199-3。与170-A的9-BBN衍生物的Suzuki偶联产生了经保护的系链Boc-T199a(Bn)。在该程序中使用(R)-乳酸乙酯(或(R)-乳酸的其他适当的烷基酯)，提供了相应的经保护的对映异构体系链Boc-T199b(Bn)。

OOO.合成系链T200的标准程序

类似于针对系链192描述的过程，碘化物200-0的卤素-金属交换、与硼酸三异丙酯反应和水解得到硼酸200-1。与手性烯基碘化物192-A的Suzuki偶联和甲硅烷基脱保护产生Boc-T200a。可选地，可以在该系链路线中使用锡试剂192-B或其对映异构体。

使用192-A的对映异构体192-C提供对映异构体系链Boc-T200b。

PPP.合成系链T210的标准程序

连续转化包括碘化3-三氟甲基苯酚(210-0)、烷基化苯酚和脱保护甲硅烷基醚，产生了中间体210-2。与炔134-3的Sonogashira偶联，随后还原三键，提供了经保护的系链Boc-T210a。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T210b。

QQQ.合成系链T211的标准程序

苯胺211-1的重氮化并用碘化物置换，产生211-2。在标准方法下，将羧酸转化成酰胺，随后裂解芳族甲醚，提供211-3。利用游离苯酚的烷基化和甲硅烷基醚的脱保护来制备Pd(0)-偶联的前体，其以与已经描述的其他此类转化类似的方式进行。将炔还原得到211-6，其中间体本身可用作系链组分。将酰胺脱水成腈，然后去除得到的三氟乙酰基，产生目标系链Boc-T211a。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成Boc-T211b。

RRR.合成系链T212的标准程序

利用从氨基酸212-1开始的通常高产率的工序来制备经保护的系链Boc-T212。通过重氮化并用碘化物处理来完成胺到碘化物的转化。利用酰基氯的中间性将酸转化为酰胺，随后三溴化硼裂解甲醚。苯酚烷基化、水解去除甲硅烷基保护基和Sonogashira偶联产生了212-5。然后，三键的完全还原提供了Boc-212a。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T212b。

SSS.合成系链T213的标准程序

使用之前描述的方法，以合理产率从相应苯胺213-0获得碘化物213-1。烷基化、Sonogashira反应和还原提供了213-4。具有芳族胺的正交保护的该中间体可用作系链组分。在该情况下，在标准条件下将胺转化成甲磺酰胺。TBDMS部分的脱保护完成了Boc-T213a的合成。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T188b。

TTT.合成系链T214的标准程序

通过酮214-0的Wittig反应开始构建该系链。还原得到不饱和产物，然后酯皂化以提供214-2。单锅库尔提斯(Curtius)重排以及胺保护，产生了214-3。甲醚裂解还导致Boc基团损失，因此需要在标准条件下重装。在苯酚的Mitsunobu反应中采用了(S)-乳酸乙酯，随后将酯还原以完成Boc-T214a的合成。在上述程序的Mitsunobu中使用(R)-乳酸乙酯或其他单酯，获得了对映异构体系链Boc-T214b。

UUU.合成系链T215的标准程序

使用已经用于多个其他系链的类似程序烷基化2-溴代-5-氟苯酚。使用外消旋炔基胺215-A(如以下描述合成)的Pd(0)-催化的Sonogashira偶联，以良好产率得到215-1。完成合成的最有效过程是脱保护甲硅烷基，随后还原，其产生Boc-T215。

如所示例的，从氨基酸215-0制备关键试剂215-A。将酸还原成醇并保护胺，产生215-1。用戴斯-马丁氧化剂(DMP)氧化提供了醛，在整个过程中以良好产率转化为炔(215-A)。

VVV.合成系链T216的标准程序

使二卤代吡啶216-0经受乙二醇阴离子的置换，随后使用161-4作为炔配偶体进行Sonogashira反应并氢化三键，以产生Boc-T216a。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T216b。

WWW.合成系链T217的标准程序

使用文献(Pews，R.G.J.Fluorine Chem.1998，87，65-67)中描述的程序，从3-三氟甲基茴香醚制备必要的苯胺217-1。使用之前描述的化学，通过重氮化合物进行胺到碘化物的转化。用氰化物亲核去除甲醚，释放苯酚用于随后烷基化。醇甲硅烷基的脱保护提供了偶联前体217-3。在Sonogashira反应之后，炔的还原产生了Boc-T217a。通过相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T217b。

XXX.合成系链T218的标准程序

通过保护-脱保护工序，以高产率将1，3-二羟基苯的单苯甲酸酯218-0转化成单苄基化的衍生物218-1。在银(I)存在下碘化，随后烷基化和选择性甲硅烷基醚去除，得到218-3。在Sonogashira条件下与炔161-4偶联，然后还原，以很好的产率提供系链Boc-T218a。利用相同程序，但使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T218b。

YYY.合成系链T219的标准程序

还采用与之前针对T216描述的相同中间体来构建该系链。216-1与炔164-A的Sonogashira反应提供了219-1。随后三键还原和胺的Boc-保护，产生了Boc-T219a。通过相同程序，但从对映异构体氨基炔164-B开始，可以获得对映异构体系链Boc-T219b。

ZZZ.合成系链T220的标准程序

在该系链的制备中还使用了经保护的系链T212a。通过与三氟乙酸酐加热使酰胺脱水成腈，提供了220-1。用温和碱水解除去胺和醇上的三氟乙酰基，以基本上定量的产率得到Boc-T220a。通过相同程序，但在制备前体酰胺Boc-T212b时使用161-4的对映异构体试剂175-3，可以合成对映异构体系链Boc-T220b。

实施例3

本发明的大环化合物

在本发明大环化合物的构建中，氨基酸被称为AA₁、AA₂和AA₃，使用相同的编号，其是肽序列(从N端到C端)的标准。

实施例M1：合成化合物1319的标准程序.

图1中描述了化合物1319的合成。

步骤M1-1：二肽形成。向Cbz-NMeThr-OH(M1-A，136mmol，1.0当量)在THF/DCM(1∶1，1.15L)中的溶液添加H-(D)Phe-OtBu·HCl(M1-B，150mmol，1.1当量)和HATU(143mmol，1.05当量)。使混合物冷却至0℃，并添加DIPEA。在氮气下、室温搅拌反应物2-3天，当HPLC分析指示M1-A完全消失时结束。然后减压浓缩混合物以产生黄色油。将该残余物溶解于DCM并通过干裹法(50％EtOAc/己烷)纯化以产生54g(85％)呈黄色固体的二肽M1-C。

步骤M1-2：Cbz脱保护。在氮气下将M1-C(54g，115mmol，1.0当量)溶解于95％EtOH(1.6L)。添加10％Pd/C(50％湿)并将H₂(g)鼓泡通入混合物过夜。通过Celite垫过滤混合物并减压浓缩滤液以提供38g(100％)呈黄色油状的M1-D。

步骤M1-3：甲苯磺酸酯形成。在0℃、氮气下，以30mL份(每5分钟一次，直至完成)，向Boc-T8(80g，0.273mol，1.0当量)、三乙胺(76mL，0.546mol，2.0当量)和DMAP(6.72g，0.055mol，0.2当量)在DCM(359mL)中的溶液添加对甲苯磺酰氯(54.6g，0.287mol，1.05当量)在DCM(910mL)中的溶液。室温搅拌反应物过夜，通过TLC监测反应。添加饱和氯化铵水溶液(1L)并用DCM(2×600mL)萃取。合并有机相，并用0.1N HCl(3×600mL)和盐水(600mL)洗涤。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以提供116g呈橙色油状的M1-E，其没有任何进一步纯化而原样用于下一步骤。

TLC：R_f＝0.30(25％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce)；

HPLC/MS：梯度A4，t_R＝8.22分钟，[M]⁺447.

步骤M1-4：AA1烷基化。减压脱气M1-E(122g，0.273mol，1.0当量)在DMF(139mL)中的溶液30分钟。然后在氮气氛下添加碘化钾(在140℃、真空下干燥过夜，113.4g，0.683mol，2.5当量)、碳酸钾(113.4g，0.819mol，3.0当量)、H-Val-OMe(M1-F，68.7g，0.410mol，1.5当量)和丙腈(EtCN，417mL)。在100℃加热溶液过夜，用TLC监测。添加水(2.2L)，并用EtOAc(3×1L)萃取混合物。合并有机相，并用柠檬酸盐缓冲液(2×1L)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×1L)和盐水(2×1L)连续洗涤。有机相经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以产生黄色油。通过干裹法(梯度，15％至25％EtOAc/己烷)纯化该残余物以产生87g(80％)呈橙色油状的M1-G。

TLC：R_f＝0.38(40％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤M1-5：酯裂解。向M1-G(80.0g，190mmol，1.0当量)在THF∶MeOH(1∶1，1200mL)中的溶液添加4M LiOH(674mL)，并搅拌混合物(机械搅拌)过夜。真空蒸发溶剂以得到黄色胶体。添加水，并使不均匀混合物冷却至0℃。然后添加3M HCl以达到pH＝3-4并继续搅拌(机械搅拌)。注意，该pH范围对于避免过早Boc脱保护是重要的。形成白色沉淀，其通过过滤收集，用水、然后***冲洗。将沉淀溶解于THF并减压浓缩。固体残余物与甲苯(2×)和THF(1×)共沸，然后真空(油泵)干燥，直至¹H NMR(DMSO-d₆)指示仅痕量剩余的水。由此获得呈白色固体的M1-H(82.2g，100％)。

步骤M1-6：偶联。向M1-H(78.8g，184mmol，1.5当量)和M1-D(38.6g，115mmol，1.0当量)在THF∶CH₂Cl₂(1∶1，1.5L)中的悬浮液缓慢添加HATU(70g，184mmol，1.5当量)和DIPEA(120mL，690mmol，6.0当量)。该添加期间形成胶体，使混合物极难搅拌。搅拌不均匀混合物(机械搅拌)过夜，用TLC监测。真空蒸发溶剂，并使残余物溶解于EtOAc。用柠檬酸盐缓冲液(2×)、饱和NaHCO₃水溶液(2×)和NaCl饱和水溶液(1×)连续洗涤有机溶液。有机相经MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩滤液以得到黄色油。通过干裹法(30％EtOAc/己烷)纯化该残余物以产生68.2g(58％)呈米色泡沫的M1-I。

TLC：R_f＝0.31(60％EtOAc/己烷；检测：UV，Mo/Ce)。

步骤M1-7：脱保护。在50％TFA、3％TIPS/CH₂Cl₂(840mL)的溶液中搅拌M1-I(74.8g，105mmol，1.0当量)5小时。真空蒸发溶剂，添加甲苯，并次真空蒸发混合物。真空(油泵)干燥残余物过夜，以提供呈黄色-橙色固体的M1-J，其没有进一步纯化而用于下一步骤。

步骤M1-8：大环形成。向M1-J(105mmol，1.0当量)在THF(10.5L)中的溶液添加DEPBT(47.1g，158.0mmol，1.3当量)和DIPEA(110mL，630.0mmol，6.0当量)。搅拌得到的混合物(机械搅拌)过夜。可以通过HPLC监测反应。完全时，真空蒸发THF并添加1M Na₂CO₃(水溶液)。用EtOAc(3×)萃取水相。然后，用1M Na₂CO₃(水溶液，1×)和NaCl饱和水溶液(1×)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩滤液以得到橙色残余物。通过干裹法(梯度，3％至5％MeOH)纯化该橙色残余物，然后在CH₃CN中沉淀含产物的级分，以产生化合物1319，8.2g(50％，2个步骤)。

步骤M1-9：盐酸盐形成。将大约1g 1319放入40mL管形瓶，并添加10mL乙腈。向悬浮液添加2当量1M HCl(3.4mL)，并用水稀释得到的混合物以获得20mL总溶剂。获得了50mg/mL溶剂的浓度，并且大环是完全可溶的。在液氮中冷冻溶剂15分钟，然后冻干3天以获得1319的盐酸盐。使用该方法，获得了11.1g 1319·HCl。

实施例M2：合成化合物1346的标准程序.

采用与用于化合物1319的程序略微不同但依然趋同的程序来构建化合物1346。使用Mitsunobu反应将系链Boc-T158连接至AA₁(Bts-Ile-OMe)以产生M2-1。首先使用硫代丙酸和碱的标准条件去除活化和保护AA₁的氮的Bts基团以提供M2-2，然后用在THF/MeOH中的氢氧化锂裂解酯以制备M2-3。使用HATU作为偶联剂，将使用标准方法单独合成的AA₂-AA₃二肽H-NMeThr-(D)Phe-Ot-Bu(M2-A)与AA₁-系链组分连接，以低产率提供M2-4。通过通常方法同时去除Boc和t-Bu保护基以提供大环化前体M2-5。在稀释条件(～10nM)下用DEPBT环化，在快速色谱法纯化之后以7.2％的总产率产生了产物1346。此外，用快速色谱法纯化化合物M2-1、M2-2和M2-4，而以粗品使用M2-3和M2-5。

实施例M3：合成化合物1350的标准程序.

如图2所示，采用与用于化合物1346的程序基本相同的程序来构建化合物1350。使用Mitsunobu反应将系链Boc-T8连接至AA₁(Bts-Val-OMe(1.0g))以产生M3-1(1.84，100％)。首先使用硫代丙酸和碱的标准条件去除Bts基团以提供M3-2(1.5g，100％)，然后用在THF/MeOH中的氢氧化锂(或三甲基氢氧化锡)裂解酯以制备M3-3(78％)。使用所示标准方法，以2g规模以70％产率从经保护的氨基酸M3-7和M3-8单独合成AA₂-AA₃二肽(H-NMeThr-(D)mTyr-OMe(M3-A))。使用HATU作为偶联剂，在DMF(或NMP)中将M3-A与AA₁-系链组分连接，以提供低产率M3-4。通过通常方法首先除去甲基酯部分，然后除去Boc基团，以产生大环化前体M3-6。HPLC纯化之后，与DEPBT环化产生产物1350(6.2mg)。

实施例M4：合成化合物1351的标准程序.

采用如以上用于化合物1350的相同程序(图2)，但从Bts-Ile-OMe开始，构建化合物1351(30.9mg)。与M3-A二肽的偶联以55％产率进行。

实施例M5：合成化合物1352的标准程序.

采用如以上用于化合物1350的相同程序(图2)，但从系链T125a开始，构建化合物1352(5.0mg)。从1g Bts-Val-OMe开始，通过该工序获得的具体产率是：AA₁-系链形成(100％)、Bts脱保护(89％)和酯裂解(100％)。

实施例M6：合成化合物1636的标准程序.

如图3所示，采用如以上用于化合物1350的相同程序，但从系链T104开始，构建化合物1636(0.2mg)。特别是，AA₁-系链组分与二肽M3-A的偶联产率低(8％)。

实施例M7：合成化合物1383的标准程序.

采用对已经描述的程序改编的反应程序来构建化合物1383并提供于图4。如前所述，使用Mitsunobu反应，从Bts-Val-OMe和Boc-T125a合成M7-1。如同所示，快速色谱法(梯度80％至95％EtOAc/己烷)之后以80％产率从经保护的氨基酸Boc-NMeThr-OH和H-(D)Tyr(3-Cl)-OMe(M7-A)单独合成AA₂-AA₃二肽H-NMeThr-(D)Tyr(3-Cl)-OMe(M7-B)。使用HATU作为偶联剂，在NMP中连接M7-B和M7-1，在快速色谱法(梯度80％至95％EtOAc/己烷)后以30％产率提供M7-2。接下来，使用三甲基氢氧化锡裂解甲基酯部分，然后用在EtOAc中的HCl除去Boc基团，以产生大环化前体M7-4。快速色谱法(5％MeOH/EtOAc)之后，与DEPBT环化产生产物化合物1383(25％产率，4.7％总产率)，然后HPLC纯化。

实施例M8：合成化合物1390的标准程序.

图5示出了对那些已经描述的改编反应程序，其用来构建化合物1390。使用标准方法从Boc-NMeThr-OH和AA4(Bn)合成二肽M8-1。用在EtOAc中的2.1M HCl对Boc基团脱保护，产生M8-2，使用HATU作为偶联剂在DCM/THF中将M8-2与M7-1偶联以64％产率得到M8-3。接下来，使用氢解裂解苄基酯部分，然后用TFA去除Boc基团以产生大环化前体M8-4。HPLC纯化之后，与DEPBT环化产生产物化合物1390(135mg，63％产率)。

实施例M9：合成化合物1401的标准程序.

如图6所概括的，采用与已经描述的程序不同的反应程序来将o-Tyr氨基酸加入大环构架中。如前所述，使用Mitsunobu反应，从Bts-Val-OMe和Boc-T125a合成M9-1。使用3-巯基丙酸和碱从该物质脱保护Bts部分，提供了M9-2，然后用在EtOAc中的2.1M HCl裂解Boc基团，产生M9-3。随后在作为碱的DIPEA存在下与Boc-o-Tyr内酯(AA5-3)反应，以得到M9-4。除去M9-4的Boc基团，并使用HATU使Boc-NMeThr-OH与得到的脱保护中间体偶联以85％产率提供M9-5。接下来，氢解除去苄基酯保护，以得到M9-6。HPLC纯化之后，从M9-6脱保护Boc基团，然后在DIPEA碱存在下与HATU环化，产生产物化合物1401。

实施例M10：合成化合物1300的标准程序.

采用对已经描述的程序改编的反应程序以加入所示氨基酸H-NMe-(β-OH)Val-OH，来构建化合物1300(参见WO 2006/137974)，其提供于图7。如前所述，使用Mitsunobu反应，在快速色谱法之后以94％产率从Bts-Ile-OMe和Boc-T8合成M10-1。使用标准方法，首先脱保护Bts基团，然后脱保护甲基酯，以产生M10-3。从经保护的氨基酸H-NMe(β-OTHP)Val-OBn(M10-A)和H-(D)Phe-OMe单独合成AA₂-AA₃二肽(H-NMe(β-OH)Val-(D)PheOMe(M10-E))。将保护基修饰以在快速色谱法之后以63％产率产生Boc-NMe(β-OH)Val-OBn(M10-B)。通过氢解除去苄基酯保护以提供M10-C，使用HATU作为偶联剂在NMP中使M10-C连接至H-(D)Phe-OMe·HCl以在快速色谱法后定量产率得到M10-D。通过Boc基团的标准裂解从M10-D制备M10-E。使用在NMP中的HATU和作为碱的DIPEA，再次将该衍生物M10-E转而偶联至M10-3，尽管M10-4的产率低(15％)。接下来，使用三甲基氢氧化锡裂解甲基酯部分，然后用TFA/TES去除Boc基团，以产生大环化前体M10-6。快速色谱法纯化之后，在稀释条件(0.01M)下与DEPBT环化，产生产物化合物1300(17％产率)。

实施例M11：合成化合物1505的标准程序.

如图8所示，采用与实施例M1描述基本相同的反应程序来获得化合物1505。从经保护的氨基酸衍生物Cbz-NMeThr-OH(M11-A)和H-(D)Trp(Boc)-OtBu(M11-B)构建二肽组分M11-C。获得为其环己胺(CHA)盐的M11-A，因此如本领域技术人员已知的，必须在使用前转化为相应的游离碱。作为实例，从50g CHA盐制备了33g(140mmol，1.0当量))M11-A。使之与51g(140mmol，1.0当量)M11-B偶联，随后在标准氢解条件下去除Cbz保护，以提供75g(126mmol，90％)二肽M11-C。单独地，将系链T134a转化成相应的甲苯磺酸酯，然后与作为亲核体的H-Val-OMe在EtCN-DMF溶剂中反应以85％产率产生M11-1。用LiOH对甲基酯进行脱保护以定量产率提供M11-2。使用HATU将该中间体(105mmol)与M11-C(75g，126mmol，1.2当量)偶联以70-80％产率得到M11-3。Boc和tBu保护基同时酸裂解，基本上定量地产生大环化前体M11-4。以～10nM的稀释浓度使用在THF中的DEPBT/DIPEA实现环化。纯化后以50％产率(23g，37mmol)获得大环1505。

实施例4

生物学结果

使用以下详述的方法评价代表性的本发明化合物：评价与生长素释放肽受体的结合活性的方法B1，评价作为生长素释放肽受体拮抗剂的功能活性的方法B2和方法B3，以及作为生长素释放肽受体反向激动剂的功能活性的方法B4。分别在表7、8和9中示出了结果。

表7.代表性的本发明化合物的生长素释放肽受体结合活性

化合物	K_i(nM)	IC₅₀(nM)
			1301	C	-
1302	A	B
			1304	B	-
1305	D	-
			1311	D	-
1313	B	B
			1314	C	C
1315	A	A
			1316	B	B
1317	A	B
			1318	A	B
1319	A	B
			1320	B	B
1323	B	-
			1324	B	-
1325	B	B
			1326	A	B
1327	A	B
			1328	B	C
1329	B	C

1330	B	C
			1331	B	B
1332	B	C
			1333	B	B
1334	A	B
			1335	C	D
1336	B	B
			1337	B	B
1338	B	B
			1339	C	C
1340	B	B
			1341	C	D
1342	A	A
			1343	A	-
1344	B	-
			1345	B	C
1346	C	D
			1347	C	C
1348	C	D
			1349	B	-
1453	-	A
			1503	-	A
1505	-	A
			1535	B	-
1551	B	C
			1552	C	C
1554	D	D
			1555	C	-
1556	B	C
			1558	C	C
1559	C	C

1560	C	D
			1601	A	-
1655	A	A
			1688	-	A
1689	-	B
			1690	-	A
1691	-	A
			1692	-	A
1693	-	B
			1694	-	D
1695	-	C
			1696	-	D
1697	-	C
			1698	-	B
1699	-	B
			1700	-	A
1701	-	A
			1702	-	A
1703	-	A
			1704	-	B
1705	-	B
			1706	-	C
1707	-	B
			1708	-	C
1709	-	B
			1710	-	B
1711	-	A
			1712	-	A
1713	-	A
			1714	-	A
1715	-	A

1718	-	A
			1719	-	B
1720	-	B
			1721	-	C
1722	-	B
			1723	-	B
1724	-	B
			1725	-	B
1726	-	B
			1727	-	D
1728	-	B
			1729	-	A
1730	-	A
			1731	-	C
1732	-	B
			1733	-	C
1735	-	B
			1736	-	B
1737	-	A
			1738	-	A
1739	-	A
			1740	-	A
1741	-	D
			1742	-	B
1743	-	B
			1744	-	D
1745	-	B
			1746	-	A
1747	-	B
			1751	-	A
1752	-	B

1753	-	B
			1754	-	A
1755	-	A
			1756	-	B
1757	-	B
			1758	-	A
1759	-	A
			1760	-	A
1761	-	B
			1762	-	B
1763	-	A
			1764	-	D
1768	-	B
			1769	-	B
1770	-	C
			1771	-	A
1772	-	A
			1773	-	B
1774	-	B
			1775	-	A
1776	-	A
			1777	-	A
1778	-	B
			1779	-	B
1780	-	B
			1781	-	D
1782	-	D
			1784	-	C
1785	-	C
			1786	-	C
1787	-	C

1789	-	A
			1790a	-	A
1790b	-	C
			1791	-	A
1792a	-	A
			1792b	-	C
1794	-	A
			1795	-	A
1796	-	A
			1797	-	B
1798	-	A
			1799	-	A
1800	-	B
			1801	-	A
1802	-	A
			1803	-	A
1805	-	B
			1806	-	B
1808	-	A
			1809	-	A
1810	-	A
			1811	-	B
1812	-	B
			1813	-	C
1814	-	C
			1815	-	A
1824	-	B
			1825	-	A
1826	-	C
			1827	-	B
1840	-	D

1841	-	D
			1842	-	C
1843	-	B
			1843	-	B
1844	-	B
			1846	-	C
1847	-	C
			1848a	-	A
1848b	-	B
			1849	-	B
1851	-	D
			1852	-	D
1853	-	B
			1854	-	C
1855	-	B
			1856	-	B
1857	-	D
			1858a	-	A
1858b	-	B
			1859	-	B
1860a	-	A
			1860b	-	B
1861a	-	B
			1861b	-	C
1862	-	D
			1863	-	D
1864	-	D
			1866	-	D
1867	-	B
			1869	-	B
1870	-	B

1871	-	B
			1872	-	A
1875	-	A
			1876	-	A
1878	-	A
			1879	-	B
1880	-	A
			1883	-	B
1884	-	A
			1885	-	C
1888	-	D
			1889	-	C
1891	-	C
			1892	-	D
1893	-	D
			1894	-	D
1895	-	C
			1896	-	C
1897	-	C
			1898	-	C
1899	-	B
			1900a	-	B
1900b	-	D
			1901	-	C
1902a	-	B
			1902b	-	B
1903a	-	B
			1903b	-	C
1903c	-	C
			1904	-	A
1905a	-	C

1905b	-	C
			1906	-	B
1907	-	B
			1912	-	D
1913	-	B
			1916	-	A
1918	-	A
			1919	-	A
1921	-	C
			1922a	-	A
1922b	-	B
			1925	-	D
1927	-	A
			1928	-	B
1929	-	A

*K_i和IC₅₀两者的活性表示如下：A＝1-1-0nM，B＝10-100nM，C＝100-500nM；D＞500nM

表8.代表性的本发明化合物的拮抗剂活性

*活性表示如下：A＜1nM；B＝1-10nM，C＝10-100nM，D＝100-500nM

表9.代表性的本发明化合物的反向激动剂活性

化合物	IC50
		1338	D
1408	B
		1453	B
1503	B
		1505	D
1688	C
		1690	C
1691	D
		1692	D
1693	D
		1699	D
1700	C
		1701	B
1702	C
		1703	C
1704	D
		1705	D
1707	D
		1710	D
1711	B
		1712	C
1713	C
		1718	C
1719	D
		1720	D
1723	D
		1725	D
1726	C
		1729	C
1730	D
		1732	D
1737	C
		1738	B
1739	D

1740	D
		1742	B
1743	D
		1745	D
1746	C
		1747	C
1751	D
		1752	D
1753	C
		1754	C
1755	C
		1758	B
1759	C
		1760	C
1761	C
		1762	D
1763	D
		1768	B
1769	D
		1771	D
1772	D
		1773	D
1774	C
		1775	D
1776	C
		1777	C
1778	D
		1780	C
1789	D
		1790a	D
1791	C
		1792a	C
1794	B
		1795	D
1796	B
		1797	D

1798	D
		1799	C
1801	B
		1802	B
1803	B
		1804	B
1805	D
		1806	D
1808	B
		1809	B
1810	B
		1811	D
1812	C
		1813	D
1814	D
		1815	D
1824	D
		1825	C
1827	D
		1843	B
1847	B
		1848a	B
1848b	D
		1853	D
1854	D
		1855	D
1858a	C
		1858b	D
1859	C
		1860a	C
1862	D
		1863	D
1867	D
		1872	B
1875	C
		1876	C

1878	B
		1879	B
1884	B
		1903a	B
1904	B
		1916	B
1918	C
		1919	B
1922a	C
		1927	C
1928	C
		1929	C

*活性表示为：A＝1-10nM；B＝10-50nM，C：50-100nM，D：100-500nM

实施例5

使用方法B9中所列程序进行代表性的本发明化合物的药物代谢动力学特征的详细分析。表10a和10b提供了静脉内和口服给药的结果。

表10a.代表性的本发明化合物的药物代谢动力学参数

表10b提供了有关其他代表性的本发明化合物的药物代谢动力学数据。通常采用2mg/mL的剂量水平用于静脉内给药和8mg/mL的剂量水平用于口服给药。

表10b.代表性的本发明化合物的药物代谢动力学数据

化合物	t_1/2(分钟)	Cl(mL/分钟/kg)	％F
				1693	41±4	35±18	5±2
1703	147±52	9±6	12±6
				1705	166±2	6±2	50±14
1707	130±26	8±4	nd
				1713	104±25	30±1	14±9
1718	162±4	5±1	17±6
				1719	93±11	44±3	nd
1720	70±15	33±12	nd
				1726	171±16	9±6	14±8
1746	107±4	12±1	59±31
				1751	46±1	32±5	34±19
1754	106±13	8±1	39±44
				1755	123±28	12±13	7±4
1759	119±101	14±2	nd
				1773	70±8	24±11	2±1
1775	74±27	18±16	36±29
				1776	105±20	8±4	nd
1778	59±38	26±18	nd
				1789	52±1	26±8	81±55
1803	103±13	10±1	nd

1847	70±42	19±16	10±1
				1876	159±16	28±8	54±19
1878	124±19	35±1	nd
				1903a	31±13	17±9	nd
1904	65±25	34±4	nd
				1918	114±53	14±7	nd

nd＝未测定

实施例6

在代谢疾病动物模型中的体内评价

使用方法B14进行化合物1505对Zucker肥胖大鼠中代谢参数的影响的研究，Zucker肥胖大鼠是研究抗肥胖或抗糖尿病治疗的标准模型。如图9所示，在7天研究期间，30mg/kg的该化合物表现出净体重的显著下降。此外，在该剂量水平，还观察到了累积摄食量的显著下降(图10)。与媒介物对照相比，10mg/kg和30mg/kg剂量在2天时间点时每天都表现出显著的下降。经6天时间点，较高的剂量依然显著。

除了对体重的影响，在第3天和第7天，使用化合物1505(30mg/kg)的OGTT结果显示了与未治疗对照相比血糖下降。如曲线下面积(AUC)所示，该测试中还获得了对胰岛素水平的降低作用。胰岛素敏感性指数较高，在较高剂量时达到显著。

最后，在两个治疗组中的其他代谢参数(包括游离脂肪酸和总胆固醇)也显著下降。PK分析说明，达到了化合物1505的足够血浆水平，证实了分子在口服给药时的效力。

实施例7

在代谢疾病的另一个动物模型中的体内评价

使用方法B15进行了化合物1712和1848对ob/ob小鼠中代谢参数的影响的研究，ob/ob小鼠是研究代谢病症治疗的标准模型。如在ob/ob小鼠模型中所预期的，动物是肥胖的并且显示了代谢综合征的问题(例如，高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、血脂异常)。(Leiter，E.H.FASEB J.1989，3，2231-2241.)。如图11所示，与媒介物对照动物相比，用化合物1712治疗显著减少了空腹动物中2小时内的急性累积摄食量。

在单独的14天研究中，与媒介物对照相比(图12)，用75mg/kg剂量的化合物1848治疗的动物中观察到累积摄食量显著减少(11.9％)。此外，与媒介物对照相比，化合物1848(75mg/kg)治疗的小鼠中口服葡萄糖耐量测试期间发现血糖水平显著下降，这表明治疗后血糖耐量升高。对于其他代谢参数，与媒介物对照小鼠相比(图13)，用化合物1848治疗显著减少了非空腹葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素、游离脂肪酸(FFA)，但没有减少总胆固醇或甘油三酯水平。这些数据指示化合物1848治疗的ob/ob小鼠中胰岛素敏感性的提高。

以上是本发明的说明而不应解释为其限制。以下权利要求限定本发明，其中包括权利要求的等同替代。

Claims

1.式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

T选自

R₁选自由以下组成的组：

R_2b选自由-H和-CH₃组成的组；

R_3a选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基和烷氧基组成的组；

R_3b选自由氢和C₁-C₄烷基组成的组；

R_4a、R_4b、R_4c和R_4d独立选自由氢和C₁-C₄烷基组成的组；

R₆选自由氢、C₁-C₄烷基、氧代和三氟甲基组成的组；

R₇选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R₇和X₁与它们结合的碳一起形成五元环或六元环；

R₂₇选自由氢、C₁-C₄烷基、羟基、烷氧基和三氟甲基组成的组；或者R₂₇和X₄₃与它们结合的碳一起形成五元环或六元环；

Ar选自由以下组成的组：

L₁、L₂、L₃、L₄和L₆独立选自由CH和N组成的组；

z是0、1、2或3；并且

2.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中

R₁是-CH(CH₃)CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、

R_2a和R_4b各自为-CH₃；

R_3a是氢或-CH₃；

R_2b、R_3b、R_4b、R_4c、R_4d、R₅、R₆和R₇各自为氢；

R₉是氢或羟基；

R₁₀是-CH₃或-CH₂CH₃；

Ar是

L₁、L₂、L₃、L₄、L₅和L₆各自为CH；

X₁是氟代，并且X₂、X₃和X₄是氢；或者X₂是氟代，并且X₁、X₃和X₄是氢；或者X₃是氟代，并且X₁、X₂和X₄是氢；或者X₄是氟代，并且X₁、X₂和X₃是氢，或者X₂和X₃是氟代，并且X₁和X₄是氢；

Y是O；并且

Z是CH₂CH₂或C≡C；

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中T选自由以下组成的组：

其中(N_A)指示与式(I)的NR_4a的结合位点，(N_B)指示与式(I)的NR_4c的结合位点，并且Pg是氮保护基。

4.根据权利要求1所述的化合物，具有以下结构：

或其药学上可接受的盐。

5.一种药物组合物，包含：

(a)权利要求1的化合物；和

(b)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

6.一种药物组合物，包含：

(a)权利要求4的化合物；和

(b)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

7.一种药物组合物，包含：

(a)权利要求1的化合物；

(b)一种或多种其他治疗剂，和

(c)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述其他治疗剂选自由以下组成的组：GLP-1激动剂、DPP-IV抑制剂、糊精激动剂、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-α/γ双重激动剂、GDIR或GPR119激动剂、PTP-1B抑制剂、肽YY激动剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)-1抑制剂、2型钠依赖性肾葡萄糖转运蛋白(SGLT-2)抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、葡糖激酶激活剂、α-葡糖苷酶抑制剂、糖皮质激素拮抗剂、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、AMP--激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂、果糖-1，6-二磷酸酶抑制剂、磺酰脲受体拮抗剂、类视黄醇X受体激活剂、5-HT_1a激动剂、5-HT_2c激动剂、5-HT₆拮抗剂、***素拮抗剂或反向激动剂、黑色素浓集激素-1(MCH-1)拮抗剂、黑皮质素-4(MC4)激动剂、瘦蛋白激动剂、视黄酸受体激动剂、硬脂酰辅A去饱和酶-1(SCD-1)抑制剂、神经肽YY2受体激动剂、神经肽Y Y4受体激动剂、神经肽Y Y5受体拮抗剂、神经元烟碱受体α₄β₂激动剂、二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT-1)抑制剂、甲状腺受体激动剂、脂肪酶抑制剂、脂肪酸合酶抑制剂、甘油-3-磷酸酰基转移酶抑制剂、CPT-1刺激剂、α_1A-肾上腺素能受体激动剂、α_2A-肾上腺素能受体激动剂、β₃-肾上腺素能受体激动剂、组胺H3受体拮抗剂、缩胆囊肽A受体激动剂和GABA-A激动剂。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述GLP-1激动剂选自由以下组成的组：GLP-1、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽(毒蜥外泌肽-4)、利拉鲁肽(NN2211)、gilatide、阿必鲁泰(GSK-716155，albugon)、他司鲁泰、GLP1-I.N.T.、GLP-1DUROS、AC2592、AC2993LAR、ADX4(PAM)、ARI-2255、ARI-2651、BRX-0585(GLP-1-Tf)、CJC-1131、CJC-1134-PC(PC-DAC^TM：毒蜥外泌肽-4)、CS-872、AVE-0010(ZP-10)、BIM-51077(R-1583)、BIM-51182、DA3071、GTP-010、ITM-077、SUNE7001、TH-0318、TH-0396、TTP-854、LY-315902和LY-307161。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述DPP-IV抑制剂选自由以下组成的组：西他列汀、维格列汀、沙格列汀(BMS-477118)、阿格列汀(SYR322)、ABT-279、ALS-20426、ARI 2243、AM622、ASP8497、DA 1229、DB295、E3024、FE999011、GRC-8200、KR-62436、KRP104、MP-513、PHX1149、PSN9301、SK-0403、SYR619、TA-6666、TAK 100和VMD-700。

11.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述糊精激动剂选自由糊精、普兰林肽、MBP-0250和PX811016组成的组。

12.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述PPAR-γ激动剂选自由吡格列酮、利格列酮、罗格列酮和曲格列酮组成的组。

13.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述激动剂是选自由拉格列扎、替格列扎、莫格列扎、阿格列扎、塞格列扎、R1439、PLX204(PPM-204)组成的组的PPAR-α/γ双重激动剂。

14.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述PTP-1B抑制剂选自由ISIS 113715和KR61639组成的组。

15.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述5-HT2c激动剂选自由以下组成的组：绿卡色林、戊卡色林(SCA-136)、ATHX-105、BVT933(GW 876167)、IK264、LY448100、MK-212、ORG-12962、VR1065、WAY-163909和YM348。

16.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述***素拮抗剂或反向激动剂选自由以下组成的组：利莫纳班、泰伦那班(MK-0364)、舒利那班、AVE1625、AVN 342、CP-945，598、E-6776、GRC 10389、SLV-319、SR 147778、TM38837和V24343。

17.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述肽YY激动剂选自由肽YY和肽YY 3-36(AC-162352)组成的组。

18.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述脂肪酶抑制剂选自由奥利司他和新利司他组成的组。

19.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述α-葡糖苷酶抑制剂选自由阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖组成的组。

20.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述SGLT-2抑制剂选自由以下组成的组：达格列净、瑞格列净、舍格列净、AVE2268、GSK189075。

21.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述11β-HSD-1抑制剂选自由以下组成的组：INCB13739、BVT.3498、BVT.2733、AMG221、PF-915275。

22.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述葡糖激酶抑制剂选自由以下组成的组：R1440/GK3、RO-28-1675、PSN010和ARRY-403。

23.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述其他治疗剂选自由以下组成的组：二甲双胍、***、芬特明、倍他司汀、***、苄非他明、苯甲曲秦、安非拉酮、安非他酮、托吡酯、氨磺丁脲、氯磺丙脲、格列本脲(优降糖)、格列齐特、格列美脲、格列吡嗪、格列喹酮、米格列奈、那格列奈、瑞格列奈、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲及其药学上可接受的盐。

24.一种试剂盒，所述试剂盒包括一个或多个容器，所述容器包含药物剂量单位，所述药物剂量单位进一步包含有效量的一种或多种根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述容器包装有关于其使用的任选说明书。

25.一种调节哺乳动物GRLN(GHS-R1a)受体活性的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效调节GRLN(GHS-R1a)受体活性的量的根据权利要求1所述的化合物。

26.一种治疗代谢紊乱和/或内分泌障碍的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述代谢紊乱和/或内分泌障碍选自由以下组成的组：肥胖或肥胖相关症状、糖尿病、代谢综合征、非酒精性脂肪酸肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和脂肪变性。

28.一种治疗食欲或进食障碍的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述食欲或进食障碍是Prader-Willi综合征或食欲过盛。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述食欲过盛是糖尿病性食欲过盛。

31.一种治疗成瘾性病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述成瘾性病症包括酒精依赖、药物依赖和/或化学品依赖。

33.一种治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

34.一种治疗胃肠病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

35.一种治疗遗传病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

36.一种治疗过度增殖病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

37.一种治疗炎性病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

38.一种治疗中枢神经***(CNS)病症的方法，所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。

39.一种大环化合物，选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐。