CN102796170A - 双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯,其制备方法及应用 - Google Patents
双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯,其制备方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及通式I的6种具有免疫抑制活性的饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯,在饱和脂肪链醇中n=6、8、10、12、14或16,还涉及它们的制备方法,本发明通过研究所述的饱和脂肪链醇对脾淋巴细胞丝裂原增殖反应的抑制作用、对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用以及对小鼠耳后心肌移植后的存活时间,进一步通过实验数据表明了本发明的化合物具有优秀的免疫抑制作用,因此,本发明的化合物在制备免疫抑制药物中具有广泛的应用前景。His-Gly-Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3 I。
Description
技术领域
本发明涉及一种人工合成的化合物,特别涉及一种通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯,还涉及它们的制备方法,以及其在制备免疫抑制药物中的应用,本发明属于生物医药领域。
背景技术
数千年前,人们就曾设想用正常的器官组织来置换病变的器官组织,但20世纪前的移植除角膜移植外,大部分是失败的。直到20世纪40年代,英国外科医生Mdewaar应用家兔皮肤移植的实验模型,初次论证了器官组织移植中出现的排斥反应本质上是一种免疫应答反应,从而奠定了移植免疫学的基础。80年代以后,有效的免疫抑制剂如环抱素A及FK506等的发现及应用,使移植器官的存活时间进一步延长,但是由于临床用药普遍存在易降解,生物利用度低,脂溶性差,难以透过生物膜等缺点,所以亟待研究药剂纳米包材去改善这些不足之处。两亲性肽因其能自组装成明确的纳米纤维结构而受到广泛重视,从纳米技术到组织工程,在许多领域得到应用。而且由于两亲性肽化学结构的多样性和易于合成,必将成为生物医药和生物材料领域新的研究热点。发明人认识到,具有免疫抑制活性的尿毒素肽是从人体内分离出来的具有免疫抑制活性的内源性肽。从结构修饰增加肽的脂溶性的设计思想出发以提高其在体内的生物利用度。按照这种构想,发明人发现尿毒素肽与脂肪链偶联确实具有免疫抑制活性。于是,发明人提出本发明。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是,提供通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯(用9a-f表示);
His-Gly-Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3 I
通式I中的n=6、8、10、12、14或16;
其中,9a中n=6;9b中n=8;9c中n=10;9d中n=12;9e中n=14;9f中n=16;
本发明所要解决的第二个技术问题是,提供通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯的制备方法,具体的包括以下步骤;
(1)在(Boc)2O和NaOH存在下将甘氨酸转化为N-叔丁氧羰基甘氨酸;
(2)在(Boc)2O和NaOH存在下将天冬氨酸转化为N-叔丁氧羰基天冬氨酸;
(3)在(Boc)2O和三乙胺存在下将组氨酸转化为N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸;
(4)在二环己基羰二亚胺(DCC)、N-羟基苯并三氮唑(HOBt)、无水四氢呋喃(THF)存在下将N-叔丁氧羰基天冬氨酸与两倍量的饱和脂肪醇缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯;
(5)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基,生成双饱和脂肪醇天冬氨酸酯;
(4)在DCC、HOBt、无水THF存在下将Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酸与双饱和脂肪醇天冬氨酸酯缩合,生成双饱和脂肪醇Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(6)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基,生成双饱和脂肪醇Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(7)在无水THF中,在DCC和HOBt存在下将双饱和脂肪醇Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基甘氨酸缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(8)在氯化氢-乙酸乙酯存在下将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基,生成双饱和脂肪醇甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(9)在无水THF中,在DCC和HOBt存在下将双饱和脂肪醇甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(10)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基,生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(11)在无水乙醇中,在Pd/C存在下将双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯氢解,生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰赖氨酰天冬氨酸酯,即得。
本发明所要解决的第三个技术问题是,评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞对丝裂原的增殖反应的抑制作用;
本发明所要解决的第四个技术问题是,评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用;
本发明所要解决的第五个技术问题是,评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯的自主装性能;
本发明所要解决的第六个技术问题是,评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯小鼠耳后心肌组织移植存活时间。
本发明通过研究所述的饱和脂肪链醇对脾淋巴细胞丝裂原增殖反应的抑制作用、对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用以及对小鼠耳后心肌移植后的存活时间,进一步表明了本发明的化合物具有优秀的免疫抑制作用。在制备免疫抑制剂药物中具有广泛的应用前景。
本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四肽酯的用途之一是在制备免疫抑制剂中的用途;
本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四肽酯的用途之二是在制备免疫抑制药质体中的用途;
本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四肽酯的用途之三是在制备微乳或脂质体靶向药物中的用途。
附图说明
图1为通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯的合成路线;
i)无水THF、DCC、HOBt和NMM;ii)4N氯化氢-乙酸乙酯溶液;iii)无水乙醇、Pd/C和H2;1-9a n=6、1-9b n=8、1-9c n=10,1-9d n=12,1-9e n=14,1-9f n=16;
图2为9d在水溶液中形成的纳米球的代表性透射电镜照片。
缩略术语
THF 四氢呋喃
HOBt N-羟基苯并三氮唑
DCC 二环己基羰二亚胺
DCU 二环己基脲
NMM N-甲基吗啉
TLC 薄层色谱
Boc 叔丁氧羰基
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备Boc-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(1a)
将1.1g(4.8mmol)Boc-Asp-OH溶于20mL无水THF,冰浴下向得到的溶液中加入1.5g(1.2mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt),并使其完全溶解。10分钟后加入2.3g(1.2mmol)二环己基碳二亚胺(DCC)。得到反应液(I),待用。冰浴下把1.5g(1.2mmol)CH3(CH2)6CH2OH悬浮于20mL无水THF中,然后加入1mlN-甲基吗啉(NMM),调pH 8-9。搅拌35分钟,得到反应液(II),待用。冰浴下把反应液(I)加入反应液(II)中,冰浴条件下搅拌1h,再室温搅拌12h,TLC(乙酸乙酯/石油醚=2∶1)显示Boc-Asp消失。滤除二环己基脲(DCU),减压除去THF。残留物用50mL乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、5%KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。有机相用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干,得到1.6g(73.0%)本实施例标题化合物,为米黄色油状化合物。ESI-MS(m/e):458[M+H]+;
实施例2制备Boc-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(1b)
按照实施例1的制备方法由0.6g(2.5mmol)Boc-Asp和0.1g(6.1mmol)CH3(CH2)8CH2OH制得1.2g(90.2%)本实施例标题化合物,为无色油状物。ESI-MS(m/e):514[M+H]+;
实施例3制备Boc-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(1c)
按照实施例1的方法由2.3g(10.0mmol)Boc-Asp和4.1g(24.0mmol)CH3(CH2)10CH2OH制得5.0g(87.7%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):570[M+H]+;
实施例4制备Boc-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(1d)
按照实施例1的方法由2.3g(10.0mmol)Boc-Asp和5.0g(23.3mmol)CH3(CH2)6CH2OH制得5.2g(83.0%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):626[M+H]+;
实施例5制备Boc-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(1e)
按照实施例1的方法由5.3g(22.9mmol)Boc-Asp和13.30g(54.90mmol)CH3(CH2)6CH2OH制得14.30g(91.70%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):682[M+H]+;
实施例6制备Boc-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(1f)
按照实施例1的方法由5.4g(23.1mmol)Boc-Asp和15.0g(55.6mmol)CH3(CH2)16CH2OH制得15.6g(91.5%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):738[M+H]+;
实施例7制备HCl·Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(2a)
将1.60g(3.50mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3溶解在25ml4mol/L氯化氢-乙酸乙酯溶液中,室温搅拌2小时,TLC(乙酸乙酯/石油醚=1∶2)显示原料点消失,减压浓缩除去乙酸乙酯,残留物反复加少量***进行减压浓缩以除去氯化氢气。最后加少量***将残留物研磨成1.8g(95.2%)本实施例标题化合物,为无色固体粉末,直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e):394[M+H]+;
实施例8制备HCl·Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(2b)
按照实施例7的方法,从3.00g(5.85mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得2.1g(80.99%)本实施例标题化合物,为米黄色固体粉末。ESI-MS(m/e):450[M+H]+;
实施例9制备HCl·Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(2c)
按照实施例7的方法,从1.8g(5.0mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得2.3g(92.1%)本实施例标题化合物,为米黄色固体粉末。ESI-MS(m/e):506[M+H]+。
实施例10制备HCl·Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(2d)
按照实施例7的方法,从0.6g(1.0mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得0.5g(89.2%)本实施例标题化合物,为米黄色固体粉末。ESI-MS(m/e):562[M+H]+。
实施例11制备HCl·Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(2e)
按照实施例7的方法,从0.6g(1.0mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得0.6g(96.7%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):618[M+H]+;
实施例12制备HCl·Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(2f)
按照实施例7的方法,从0.7g(1.0mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得0.5g(88.6%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):674[M+H]+;
实施例13制备Boc-Lys(Z)-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(3a)
按照实施例1的方法由2.8g(7.3mmol)Boc-Lys(Z)和2.6g(6.6mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)6CH]-OCH2(CH2)6CH3制得1.2g(26.8%)本实施例标题化合物,为无色油状物。ESI-MS(m/e):720[M+H]+,
实施例14制备Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(3b)
按照实施例1的方法由1.9g(5.0mmol)Boc-Lys(Z)和2.6g(6.6mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)8CH]-OCH2(CH2)8CH3制得3.0g(78.6%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):776[M+H]+,
实施例15制备Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(3c)
按照实施例1的方法由2.4g(6.5mmol)Boc-Lys(Z)和3.0g(5.9mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)10CH]-OCH2(CH2)10CH3制得2.9g(59.7%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):832[M+H]+,
实施例16制备Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(3d)
按照实施例1的方法由1.3g(3.5mmol)Boc-Lys(Z)和2.0g(3.5mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)12CH]-OCH2(CH2)12CH3制得1.5g(48.3%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):888[M+H]+,
实施例17制备Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(3e)
按照实施例1的方法由0.4g(1.2mmol)Boc-Lys(Z)和0.6g(0.9mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)14CH]-OCH2(CH2)14CH3制得5.6g(40.0%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):944[M+H]+,
实施例18制备Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(3f)
按照实施例1的方法由0.4g(1.1mmol)Boc-Lys(Z)和0.6g(0.8mmol)HCl·Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得2.6g(29.2%)本实施例标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):1000[M+H]+,
实施例19制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(4a)
按照实施例7的方法,从1.2g(1.7mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得1.0g(86.3%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):656[M+H]+,
实施例20制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(4b)
按照实施例7的方法,从2.0g(2.5mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得1.5g(81.5%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):656[M+H]+,
实施例21制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(4c)
按照实施例7的方法,从3.1g(3.7mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得2.4g(88.9%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):712[M+H]+,
实施例22制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(4d)
按照实施例7的方法,从3.0g(3.3mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得2.6g(92.9%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):768[M+H]+,
实施例23制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(4e)
按照实施例7的方法,从3.7g(3.9mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得3.3g(97.1%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):768[M+H]+,
实施例24制备HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(4f)
按照实施例7的方法,从2.5g(2.5mmol)Boc-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得2.3g(98.4%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):824[M+H]+,
实施例25制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(5a)
按照实施例1的方法由1.4g(8.3mmol)Boc-Gly和6.5g(9.8mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得6.3g(80.0%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):776[M+H]+,
实施例26制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(5b)
按照实施例1的方法由1.0g(5.4mmol)Boc-Gly和3.5g(4.8mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得3.8g(92.6%)本实施例标题化合物,为米黄色油状物。ESI-MS(m/e):832[M+H]+,
实施例27制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(5c)
按照实施例1的方法由1.1g(6.1mmol)Boc-Gly和5.6g(7.3mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得5.0g(92.6%)本实施例标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):888[M+H]+,
实施例28制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(5d)
按照实施例1的方法由1.4g(8.0mmol)Boc-Gly和6.0g(7.2mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得5.0g(77.9%)本实施例标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):944[M+H]+,
实施例29制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(5e)
按照实施例1的方法由0.5g(2.8mmol)Boc-Gly和3.0g(3.4mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得2.5g(91.4%)本实施例标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):1000[M+H]+,
实施例30制备Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(5f)
按照实施例1的方法由0.9g(4.8mmol)Boc-Gly和5.5g(5.8mmol)HCl·Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得4.8g(94.1%)本实施例标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):1056[M+H]+,
实施例31制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(6a)
按照实施例7的方法,从5.2g(6.7mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得4.5g(93.8%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):714[M+H]+,
实施例32制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(6b)
按照实施例7的方法,从3.8g(4.6mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得3.4g(97.1%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):770[M+H]+,
实施例33制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(6c)
按照实施例7的方法,从5.0g(5.6mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得4.5g(97.8%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):826[M+H]+,
实施例34制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(6d)
按照实施例7的方法,从5.3g(5.6mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得4.4g(88.8%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):882[M+H]+,
实施例35制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(6e)
按照实施例7的方法,从2.5g(2.5mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得2.1g(87.5%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):938[M+H]+,
实施例36制备HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(6f)
按照实施例7的方法,从4.8g(4.5mmol)Boc-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得4.0g(88.8%)本实施例标题化合物,为米黄色固体。ESI-MS(m/e):994[M+H]+,
实施例37
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(7a)
按照实施例1的方法由1.8g(5.2mmol)Boc-His(Boc)和4.5g(6.3mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得750mg无色透明油状物,纯化条件:石油醚∶丙酮=1∶1,收率为14.4%。ESI-MS(m/e):1014[M+H]+;mp 67-69℃.
1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.10(s,1H),7.94(s,1H),7.31(m,6H),7.202(m,2H),5.75(s,1H),5.12(s,1H),5.06(s,2H),4.80(m,1H),4.51(m,1H),4.40(s,1H),4.03(m,5H),3.11(s,2H),2.85(m,3H),1.25-1.85(m,41H),0.86(t,J=6.3Hz,6H).
实施例38
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(7b)
按照实施例1的方法由1.7g(4.7mmol)Boc-His(Boc)和3.4g(4.4mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得1g无色透明油状物,纯化条件:氯仿∶甲醇=100∶1,收率为19.6%。ESI-MS(m/e):1071[M+H]+;mp 66-67℃. 1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.35(m,1H),8.03(m,1H),7.24(m,6H),4.99(s,2H),4.62(t,J=6.6Hz,1H),4.28(m,1H),4.21(m,1H),4.00(t,J=6Hz,4H),3.710(m,2H),3.36(d,6H),2.95-2.66(m,6H),1.83-1.15(m,54H),0.848(t,J=5.7Hz,6H).
实施例39
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(7c)
按照实施例1的方法由1.6g(4.5mmol)Boc-His(Boc)和4.5g(5.5mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得800mg无色透明油状物,纯化条件:石油谜∶丙酮=1∶1,收率为15.9%。ESI-MS(m/e):1149[M+H]+;mp 69-70℃. 1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.21(s,1H),7.79s,1H),7.36-7.20(m,6H),5.34(s,1H),5.11(s,2H),4.84(m,1H),4.50(m,2H),4.08(m,6H),3.19(d,J=6Hz,3H),3.03(m,1H),2.83(m,1H),1.702-1.27(m,67H),0.87(t,J=5.7Hz,6H).
实施例40
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(7d)
按照实施例1的方法由1.6g(7.3mmol)Boc-His(Boc)和5.4g(6.1mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得1.4g无色固体,纯化条件:氯仿∶甲醇=100∶1,收率为19.4%。ESI-MS(m/e):1183[M+H]+;mp 68-69℃. 1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.16(m,1H),7.95(s,1H),7.36-7.17(m,6H),7.09(d,J=8.7Hz,1H),5.72(s,1H),5.45(s,1H)5.08(m,1H),4.82(m,1H),4.50(m,1H),4.42(s,1H),4.11(m,2H),3.99(s,1H),3.16(m,2H),2.99-2.76(m,3H),1.89(m,1H),1.48-1.25(m,45H),0.85(t,J=6.6Hz,6H).
实施例41
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(7e)
按照实施例1的方法由0.9g(2.7mmol)Boc-His(Boc)和3.0g(3.2mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得500mg无色固体,纯化条件:石油醚∶丙酮=1∶1,收率为15.1%。ESI-MS(m/e):1240[M+H]+;mp 66-67℃. 1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.15(s,1H),7.41-7.05(m,6H),5.72(s,1H),5.38(s,1H),5.14(s,2H),4.82(m,1H),4.54(m,1H),4.42(s,1H),4.14-3.87(m,6H),3.17(d,J=6Hz,3H),2.99-2.76(m,3H),1.90-1.18(m,75H),0.87(t,J=5.7Hz,6H).
实施例42
制备Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(7f)
按照实施例1的方法由1.2g(3.4mmol)Boc-His(Boc)和4.0g(4.0mmol)HCl·Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得,所得化合物经柱层析纯化得500mg无色固体,纯化条件:石油醚∶丙酮=1∶1,收率为11.3%。ESI-MS(m/e):1295[M+H]+;mp 71-73℃. 1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ/ppm=8.16(s,1H),7.85(s,1H),7.36-7.06(m,7H),5.72(s,1H),5.38(s,1H),5.10(s,2H),4.82(m,1H),4.51(m,1H),4.42(m,1H),4.08(m,6H),3.48(m,1H),3.17(d,J=6Hz,3H),2.99-2.77(m,3H),2.01(m,3H),1.91-1.19(m,87H),0.87(t,J=5.7Hz,6H).
实施例43
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(9a)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得93.6mg(70%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):680[M+H]+;mp 66-68℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=8.92(s,1H),8.45(m,2H),8.15(s,1H),7.67(m,1H),6.97(m,1H),4.64(m,1H),4.32(s,2H),3.89(m,5H),3.39(m,2H),3.06(m,2H),2.75(m,4H),1.55(m,8H),1.43-1.18(m,25H),0.86(t,J=6.3Hz,6H).
实施例44
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(9b)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得97.7mg(71%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):737[M+H]+;mp 66-67℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=8.89(s,1H),8.47(m,1H),8.18(s,1H),7.66(s,1H),6.96(s,1H),4.64(m 1H),4.28(m,1H),4.32(m,1H),4.00(m,4H),3.05(m,2H),2.73(m,4H),1.65-1.13(m,52H),0.84(t,J=5.7Hz,6H).
实施例45
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(9c)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得88.5mg(65%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):793[M+H]+;mp 69-70℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=8.61(m,1H),8.42(m,1H),8.22(m,1H),7.54(s,1H),4.62(m,1H),4.31(m,2H),4.01(m,5H),3.81(m,1H),2.72(m,4H),1.53(m,8H),1.34(m,2H),1.22-1.45(m,36H),0.84(t,J=5.7Hz,6H).
实施例46
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(9d)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得100.3mg(70%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):849[M+H]+;mp 66-67℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=9.05(m,1H),8.55(m,2H),8.42(m,2H),8.07(s,1H),7.34(m,3H),4.64(m,1H),4.29(m,2H),4.00(m,6H),2.85(m,5H),1.68-1.22(m,56H),0.85(t,J=5.7Hz,6H).
实施例47
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(9e)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得100.4mg(69%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):905[M+H]+;mp 68-69℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=9.05(m,1H),8.45(m,2H),8.26(m,1H),8.14(s,1H),7.88(m,3H),6.99(m,1H),4.62(m,2H),4.33(m,1H),4.02(m,6H),2.75(m,4H),1.84(m,1H),1.54(m,7H),1.39-1.18(m,52H),0.85(t,J=5.7Hz,6H).
实施例48
制备HCl·His-Gly-Lys-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(9f)
按照实施例7的方法,从200mg(0.2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得HCl·His-Gly-Lys(Z)-Asp-[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3,将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20%)、通H2(0.02Mba),室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得74.4mg(50%)本实施例标题化合物,为褐色固体。ESI-MS(m/e):961[M+H]+;mp 66-67℃. 1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ/ppm=9.08(m,2H),8.45(m,4H),8.39(m,1H),8.03(s,3H),7.53(s,1H),7.26(m,1H),4.62(m,1H),4.33(m,2H),4.00(m,7H),2.66(m,4H),1.91(m,4H),1.54(m,8H),1.24-1.19(m,57H),0.85(t,J=5.7Hz,6H).
实施例49双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞丝裂原增殖的抑制作用
脱颈处死小鼠,无菌取脾,用200目钢网和注射器芯研磨,用PBS液洗两次,1500转/分条件下离心10分钟,计数后用完全RPMI-1640培养液配成脾细胞5×106/mL的细胞悬液,加100μL细胞悬液于96孔培养板中(每空含5×105个细胞)。每孔加20μL刀豆蛋白(ConA终浓度为5μg/mL),该96孔细胞培养板置于体积分数为0.05的CO2饱和湿度的培养箱内37℃培养4h。4h后按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品(1×10-4,8×10-5,5×10-5,2×10-5,1×10-5,8×10-6,5×10-6,1×10-6),每个浓度3个复孔,对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。同时设不含化合物对照孔和只含同量培养液无ConA的细胞空白孔。各个孔均重复3次(n=3)。培养48h后用MTT法检测化合物对脾淋巴细胞的抑制作用。
按照公式“抑制率=(D对照-D含药)/D对照×100%”计算不同浓度的化合物对脾淋巴细胞增殖的抑制作用,根据细胞相对生存率和化合物的浓度绘制细胞生长曲线,利用该生长曲线求得半数抑制率(DxIC50)。结果列入表1,结果表明本发明的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞增殖有明确的抑制作用。
表19a-f对小鼠脾淋巴细胞丝裂原增殖的抑制作用
注:CsA为环孢菌素n=3
实施例50双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对巨噬细胞吞噬的抑制作用
将生长状态良好、处于对数生长期的Ana-1小鼠巨噬细胞以1×105个/mL的密度接种于96孔板,每孔100μL,37℃、5%CO2培养箱中培养4小时,按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品(1×10-4,8×10-5,5×10-5,2×10-5,1×10-5,8×10-6,5×10-6,1×10-6),每个浓度3个复孔,对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养24小时后,吸弃上清液,每孔加入50μL 0.1%的中性红溶液,置于37℃孵育30分钟。吸弃中性红溶液,并用PBS缓冲溶液洗涤2-3次(除去未被巨噬细胞吞噬的中性红),加入细胞溶解液(乙醇∶乙酸=1∶1)50μL,4℃过夜,酶标仪检测吸光度值,波长540nm。各个孔均重复3次(n=3)。
按照公式“抑制率=(D对照-D含药)/D对照×100%”计算不同浓度的化合物对巨噬细胞的吞噬能力的抑制作用,根据细胞相对生存率和化合物的浓度绘制细胞生长曲线,利用该生长曲线求得半数抑制率(DxIC50)。结果列入表2,结果表明本发明的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯对Ana-1小鼠巨噬细胞吞噬有明确的抑制作用。
表29a-f对小鼠巨噬细胞吞噬的抑制作用
注:CsA为环孢菌素,n=3
实施例519a-f的自主装性能评价
1)水溶液中9a-f纳米球的粒径(单位:nm)
将双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯配置成1μmol/mL的水溶液,在激光纳米粒度仪上25℃测定粒径。连续测定8天,记录其粒径。结果列入表3。数据表明,本发明的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯水溶液中均能自组装成粒经稳定在200-600nm的纳米球。
表39a-f在水中自组装的纳米球粒径
2)9a-f的纳米球的形态
将9a-f配成浓度为1×10-12mg/mL的水溶液,然后将此溶液滴在铜网上,挥发干溶剂后在JEM-1230透射电子显微镜下观察纳米球的形态。测定表明,9a-f形成规则的纳米球。9d的透射电子显微镜照片作为代表,用图2描述。
实施例529a-f的采用小鼠耳后心肌组织移植实验
受体鼠经10%乌拉坦腹腔注射麻醉。1%新洁尔灭酊耳廓局部消毒,剃毛,持眼科剪于耳廓背侧中线之前1/3处作一与耳廓中线垂直处作一3-4毫米长的切口,勿损伤耳廓静脉。持镊子向耳尖方向钝性分离皮下组织,使之成一管腔。将新生供鼠置于碎冰中一分钟后用75%酒精皮肤消毒,剖胸摘取心脏。将心脏置于无PBS液内搏动1-2次以排空心腔余血。移植时,用刀片把供心纵向剖成为基本等大二半,肌纤维成一斜面。将心肌组织移植填入受体鼠耳腔内,将皮肤切口缝合一针。(心肌组织的离体时间不超过2分钟)用手指轻按局部,使移植物与受鼠之周围组织贴紧。移植术后当天给药,每日腹腔注射给药0.2mL。
术后第六日起每天记录移植心肌组织的心电信号。测试异位心电图时,正负电极分别置于移植心脏两侧,接地极连接在小鼠后肢。
阳性对照品环孢菌素A按2.5μmol/kg/day的剂量、化合物9a-f按1.0μmol/kg/day的剂量以及CMCNa(0.5%),腹腔给药。每天一次,0.2mL/只鼠,连续给药15天,共给药15次。
表4小鼠耳后心肌组织存活时间
a)与NS比较P<0.01;b)与NS比较P<0.05;
实施例539a-f的采用小鼠耳后心肌组织移植实验量效关系
用实施例52的方法,选取10.0μmol/kg/day、1.0μmol/kg/day和0.01μmol/kg/day三种剂量考察9f的剂量效应关系。结果表明,9f的小鼠耳后心肌组织存活时间用显示剂量依赖性(表5)。
表5不同剂量9e对小鼠耳后心肌组织存活时间的影响
注:n=12,存活时间用天表示,存活率用%表示,CsA为阳性对照环孢菌素;a)与NS组比较P<0.01,与0.01μmol/kg组比较P<0.05;b)与NS及0.01μmol/kg比较P<0.01,与1.0μmol/kg组比较P<0.05;c)与NS组比较P>0.05.
以上所述仅为本发明的优选实施例,对本发明而言仅是说明性的,而非限制性的;本领域普通技术人员理解,在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变,修改,甚至等效变更,但都将落入本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯:
His-Gly-Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3 I
其中,通式I中的n=6、8、10、12、14或16。
2.一种制备权利要求1的双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在(Boc)2O和NaOH存在下将甘氨酸转化为N-叔丁氧羰基甘氨酸;
(2)在(Boc)2O和NaOH存在下将天冬氨酸转化为N-叔丁氧羰基天冬氨酸;
(3)在(Boc)2O和三乙胺存在下将组氨酸转化为N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸;
(4)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三氮唑、无水四氢呋喃存在下将N-叔丁氧羰基天冬氨酸与两倍量的饱和脂肪醇缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯;
(5)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基,生成双饱和脂肪醇天冬氨酸酯;
(4)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三氮唑、无水四氢呋喃存在下将Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酸与双饱和脂肪醇天冬氨酸酯缩合,生成双饱和脂肪醇Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(6)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇Nα-叔丁氧羰基-Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基,生成双饱和脂肪醇Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(7)在无水四氢呋喃中,在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基甘氨酸缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(8)在氯化氢-乙酸乙酯存在下将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基,生成双饱和脂肪醇甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(9)在无水四氢呋喃中,在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸缩合,生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(10)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基,生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯;
(11)在无水乙醇中,在Pd/C存在下将双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰Nε-苄氧羰基赖氨酰天冬氨酸酯氢解,生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰赖氨酰天冬氨酸酯。
3.权利要求1所述的的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯在制备具有免疫抑制剂中的用途。
4.权利要求1所述的的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯在制备免疫抑制药质体的中的用途。
5.权利要求1所述的的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Lys-Asp四肽酯在制备微乳或脂质体靶向药物中的用途。
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