CN102796153B

CN102796153B - 苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A

Info

Publication number: CN102796153B
Application number: CN201210318801.3A
Authority: CN
Inventors: 纪兰菊; 张小龙; 孙洪发; 廖志新
Original assignee: Northwest Institute of Plateau Biology of CAS
Current assignee: Henan Bifu Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2012-09-03
Filing date: 2012-09-03
Publication date: 2014-09-10
Anticipated expiration: 2032-09-03
Also published as: CN102796153A

Abstract

本发明涉及一种苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A，它的分子式为C₁₆H₂₀O₁₀。经多种现在光谱分析后，确定了该化合物的化学结构，该化合物为苷元与斑蝥素相似的环烯醚萜苷，其分子中含有糖结构，具有良好的水溶性。同时体外抗肿瘤实验表明，该化合物对肿瘤细胞株具有显著的抑制作用。本发明可为研究开发新的抗肿瘤药物提供先导化合物，对开发利用青藏高原特有植物药材具有非常重要的价值。

Description

苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A。

背景技术

苇叶獐牙菜（Swertia phragmitiphylla T. N. He et S. W. Liu）为龙胆科獐牙菜属植物，产于我国西藏等地，属传统藏药，是民间用于治疗肝炎的草药，但其化学成分的研究尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供该苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法。

为解决上述问题，本发明所述的苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A，其特征在于：它的分子式为C₁₆H₂₀O₁₀，其化学结构如下：

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如上所述的苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法，包括以下步骤：

⑴提取：首先将苇叶獐牙菜阴干，全草寸断后，用其重量10~20倍且体积浓度为95%的乙醇浸泡10~14小时，在80~90℃温度下加热回流提取2~4次，每次2小时，减压浓缩，回收乙醇后，得到质量含量为20~25%的提取物；然后将所述提取物在0~5℃温度下冷藏36~60h后，经离心、取上清液再次减压回收乙醇后得到比重为1.1~1.3的浸膏；最后，将所述浸膏按为1：4~6的质量体积比分散于水中，并依次以与分散水等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取多次，分别得到四个部分萃取物——石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水部分；

⑵分离纯化：将所述水部分首先采用D101大孔吸附树脂进行2~4小时的吸附，然后依次采用水、质量浓度为5%的乙醇水溶液、质量浓度为20%的乙醇水溶液、质量浓度为50%的乙醇水溶液、质量浓度为95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为15 mL/min，分别得到五个组分——水洗脱部分、5%乙醇洗脱部分、20%乙醇洗脱部分、50%乙醇洗脱部分、95%乙醇洗脱部分；选取所述5%的乙醇洗脱部分，采用高效液相色谱法对其进行分离制备，在色谱柱为C₁₈柱(250 mm×10 mm, 5 μm)、质量浓度为30%的甲醇水溶液为流动相、体积流量为2.0 mL·min^-1、检测波长为260 nm、柱温为25 ℃的条件下进行等度洗脱，即得化合物Swertiridoid A。

如上所述的苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述抗肿瘤成分Swertiridoid A配以药用铺料以及药学上或生理学上可接受的载体，以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明是从生长在西藏的藏药材苇叶獐牙菜中提取分离一种新的环烯醚萜类化合物Swertiridoid A，该Swertiridoid A为白色粉末（95%乙醇），熔点191-193℃，[α]_D ²⁰: -196 (H₂O)，λ_Max ^MeOH(nm)：245。经多种现在光谱分析后，确定了该化合物的化学结构，该化合物为苷元与斑蝥素相似的环烯醚萜苷，其分子中含有糖结构，具有良好的水溶性。

分子式C₁₆H₂₀O₁₀；¹H（500Hz,DMSO-d6）、¹³C（300Hz,DMSO-d6）核磁共振谱数据见表1。

表1 Swertiridoid A的¹H和¹³C NMR数据（ppm）

注：溶剂为DMSO-d₆。

2、对本发明Swertiridoid A进行体外抗肿瘤实验，表明其具有明显的抑制肿瘤的效果。试验所用的细胞株为国际通用的肿瘤细胞株——肝癌细胞HepG2、直肠癌细胞LOVO。

实验方法采用国际通用的MTT测定方法进行：首先，在24孔细胞培养板上接种2×104个肝癌细胞HepG2、直肠癌细胞LOVO对数生长期细胞，3个复孔，细胞贴壁后；再加入不同浓度待测品，共设置8个药物浓度梯度，分别为0.1%DMSO、0.625 μmol/L Swertiridoid A DMSO、1.25 μmol/L Swertiridoid A DMSO、2.5 μmol/L Swertiridoid A DMSO、5 μmol/L Swertiridoid A DMSO、10 μmol/L Swertiridoid A DMSO、20 μmol/L Swertiridoid A DMSO和40 μmol/L Swertiridoid A DMSO；药物处理48h后，加入新配制终浓度为1 mg/mL的MTT[3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐]溶液并于37℃温育3 h。使用全波长酶标仪检测在570nm波长的吸光度，以0.1%DMSO为阴性对照，计算待测品对细胞生长的抑制率与半数抑制浓度IC₅₀。每种样品重复试验3次。肝癌的IC₅₀为18.93(μg/ml）=51nM/ml；直肠癌的IC₅₀为16.96(μg/ml）=45.71nM/ml。实验结果表明，该化合物对肿瘤细胞株均有明显的抑制作用，为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，对开发利用我国藏药资源具有重要意义。

3、本发明由于采用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、高效液相色谱等材料和设备，所用试剂均可回收再利用，同时避免了硅胶分离，杜绝了氯仿、苯等有机溶剂的使用，大大降低了对环境的污染，因此，制备方法简单、成本低廉。

具体实施方式

苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A，它的分子式为C₁₆H₂₀O₁₀，其化学结构如下：

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实施例1 该苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法，包括以下步骤：

⑴提取：首先将苇叶獐牙菜阴干，全草寸断后，用其重量10倍且体积浓度为95%的乙醇浸泡10小时，在80℃温度下加热回流提取2次，每次2小时，在0~0.08MPa条件下经减压浓缩，回收乙醇后，得到质量含量为20~25%的提取物；然后将提取物在0~5℃温度下冷藏36h后，以0~10000转/分钟的速率进行离心，取上清液在0~0.08MPa条件下经减压回收乙醇后得到比重为1.1~1.3的浸膏；最后，将浸膏按为1：4的质量体积比（kg/mL）分散于水中，并依次以与分散水等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取多次，分别得到四个部分萃取物——石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水部分。

⑵分离纯化：将水部分首先采用D101大孔吸附树脂进行2小时的吸附，然后依次采用水、质量浓度为5%的乙醇水溶液、质量浓度为20%的乙醇水溶液、质量浓度为50%的乙醇水溶液、质量浓度为95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为15 mL/min，分别得到五个组分——水洗脱部分、5%乙醇洗脱部分、20%乙醇洗脱部分、50%乙醇洗脱部分、95%乙醇洗脱部分；选取5%的乙醇洗脱部分，采用高效液相色谱法对其进行分离制备，在色谱柱为C₁₈柱(250 mm×10 mm, 5 μm)、质量浓度为30%的甲醇水溶液为流动相、体积流量为2.0 mL·min^-1、检测波长为260 nm、柱温为25 ℃的条件下进行等度洗脱，即得化合物Swertiridoid A。

实施例2 该苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法，包括以下步骤：

⑴提取：首先将苇叶獐牙菜阴干，全草寸断后，用其重量20倍且体积浓度为95%的乙醇浸泡14小时，在90℃温度下加热回流提取4次，每次2小时，在0~0.08MPa条件下经减压浓缩，回收乙醇后，得到质量含量为20~25%的提取物；然后将提取物在0~5℃温度下冷藏60h后，以0~10000转/分钟的速率进行离心，取上清液在0~0.08MPa条件下经减压回收乙醇后得到比重为1.1~1.3的浸膏；最后，将浸膏按为1：6的质量体积比（kg/mL）分散于水中，并依次以与分散水等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取多次，分别得到四个部分萃取物——石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水部分。

⑵分离纯化：将水部分首先采用D101大孔吸附树脂进行4小时的吸附，然后依次采用水、质量浓度为5%的乙醇水溶液、质量浓度为20%的乙醇水溶液、质量浓度为50%的乙醇水溶液、质量浓度为95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为15 mL/min，分别得到五个组分——水洗脱部分、5%乙醇洗脱部分、20%乙醇洗脱部分、50%乙醇洗脱部分、95%乙醇洗脱部分；选取5%的乙醇洗脱部分，采用高效液相色谱法对其进行分离制备，在色谱柱为C₁₈柱(250 mm×10 mm, 5 μm)、质量浓度为30%的甲醇水溶液为流动相、体积流量为2.0 mL·min^-1、检测波长为260 nm、柱温为25 ℃的条件下进行等度洗脱，即得化合物Swertiridoid A。

实施例3 该苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法，包括以下步骤：

⑴提取：首先将苇叶獐牙菜阴干，全草寸断后，用其重量15倍且体积浓度为95%的乙醇浸泡12小时，在85℃温度下加热回流提取3次，每次2小时，在0~0.08MPa条件下经减压浓缩，回收乙醇后，得到质量含量为20~25%的提取物；然后将提取物在0~5℃温度下冷藏48h后，以0~10000转/分钟的速率进行离心，取上清液在0~0.08MPa条件下经减压回收乙醇后得到比重为1.1~1.3的浸膏；最后，将浸膏按为1：5的质量体积比（kg/mL）分散于水中，并依次以与分散水等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取多次，分别得到四个部分萃取物——石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水部分。

⑵分离纯化：将水部分首先采用D101大孔吸附树脂进行3小时的吸附，然后依次采用水、质量浓度为5%的乙醇水溶液、质量浓度为20%的乙醇水溶液、质量浓度为50%的乙醇水溶液、质量浓度为95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为15 mL/min，分别得到五个组分——水洗脱部分、5%乙醇洗脱部分、20%乙醇洗脱部分、50%乙醇洗脱部分、95%乙醇洗脱部分；选取5%的乙醇洗脱部分，采用高效液相色谱法对其进行分离制备，在色谱柱为C₁₈柱(250 mm×10 mm, 5 μm)、质量浓度为30%的甲醇水溶液为流动相、体积流量为2.0 mL·min^-1、检测波长为260 nm、柱温为25 ℃的条件下进行等度洗脱，即得化合物Swertiridoid A。

上述实施例1~3所得的苇叶獐牙菜中新的抗肿瘤成分Swertiridoid A在制备抗肿瘤药物中的应用：抗肿瘤成分Swertiridoid A配以药用铺料以及药学上或生理学上可接受的载体，以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。

Claims

1.苇叶獐牙菜中抗肿瘤成分Swertiridoid A，其特征在于：它的分子式为C₁₆H₂₀O₁₀，其化学结构如下：

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2.如权利要求1所述的苇叶獐牙菜中抗肿瘤成分Swertiridoid A的制备方法，包括以下步骤：

⑵分离纯化：将所述水部分首先采用D101大孔吸附树脂进行2~4小时的吸附，然后依次采用水、质量浓度为5%的乙醇水溶液、质量浓度为20%的乙醇水溶液、质量浓度为50%的乙醇水溶液、质量浓度为95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为15 mL/min，分别得到五个组分——水洗脱部分、5%乙醇洗脱部分、20%乙醇洗脱部分、50%乙醇洗脱部分、95%乙醇洗脱部分；选取所述5%的乙醇洗脱部分，采用高效液相色谱法对其进行分离制备，在色谱柱为C₁₈柱、质量浓度为30%的甲醇水溶液为流动相、体积流量为2.0 mL·min^-1、检测波长为260 nm、柱温为25 ℃的条件下进行等度洗脱，即得化合物Swertiridoid A。

3.如权利要求1所述的苇叶獐牙菜中抗肿瘤成分Swertiridoid A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述抗肿瘤成分Swertiridoid A配以药用铺料以及药学上或生理学上可接受的载体，以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。