CN102784140B - 靛玉红在降低机体血中砷含量中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了靛玉红的新用途。靛玉红是青黛中所含的主成份，其化学结构是一个双吲哚类化合物。靛玉红对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；靛玉红还能增强动物的单核巨噬细胞***的吞噬能力。本发明靛玉红可以降低机体血中砷含量。砷是一种对机体有严重危害的毒性物质。研究表明，与空白对照组比较，服用靛玉红组大鼠血中砷的浓度明显降低。

Description

靛玉红在降低机体血中砷含量中的用途

技术领域：

本发明属于医药技术领域，具体涉及靛玉红在降低机体血中砷含量中的作用。

背景技术：

砷广泛地存在于自然界，在工农业生产中应用颇广，是一种对机体有严重危害的毒性物质。砷为原生质毒物，其易与组织细胞内酶系中巯基结合，从而抑制酶的活性，引起细胞代谢障碍，形成对中枢神经***、心血管***、胃肠***的毒性，导致口腔、食道、胃粘膜糜烂、肿胀出血、中毒性肝炎、亚急性黄色肝萎缩、心脏脂肪浸润、中枢神经***缺氧、肾小球损伤等。近年来，国内外地方性砷中毒比较严重，在我国畜牧业仍在广泛使用有机砷作为饲料添加剂(促生长剂)，导致常见的食物(动物性和植物性)均可检测出砷，尤其以海产品为最高，作为食物链终端的人类更是不可避免在体内具有一定的砷蓄积。目前，关于砷中毒的治疗方法主要有补硒治疗、用巯基驱砷治疗和利用中药治疗等，但是迄今为止，没有任何药物、任何疗法取得满意的排砷疗效。因此，寻找有效的排砷的药物或疗法是一项迫切的任务。

发明内容：

靛玉红是青黛中所含的主成份，其化学结构是一个双吲哚类化合物。分子式为C₁₆H₁₀N₂O₂。靛玉红对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；靛玉红还能增强动物的单核巨噬细胞***的吞噬能力。但是之前靛玉红在医学研究中仅作为抗癌药物，并在过去文献显示靛玉红对慢性粒白血病疗效显著。

本发明中将为靛玉红提供一个新的用途，即单独使用时有明显的降低机体血砷含量作用。

附图说明：图1是空白组和靛玉红混悬液灌胃组大鼠平均全血砷浓度-时间曲线图(n＝12)

具体实施方式：

-材料与方法

1.1实验动物

实验动物采用雄性Sprague-Dawley大鼠，雄性，体重320g～370g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号为SCXK(沪)2007-0005。

饲养环境为普通级实验动物房，温度：22℃～23℃，相对湿度40％～70％，使用许可证号为SCXK(沪)2006-0003。

1.2药品与试剂

(1)As标准储备溶液1g·L^-1(As standard stock solution，1g·L^-1)：Merck公司提供，批号HC 961324；

(2)硝酸(Nitric acid)：HPLC级，Merck公司，批号K40748356004；

(3)盐酸(Hydrochloride acid)：HPLC级，Merck公司，批号K39343417841；

(4)氢氟酸(Hydrofluoric acid)：优级纯，国药集团化学试剂有限公司提供，批号20100520；

(5)高纯氦气(99.999％)：上海成功气体有限公司提供；

(6)靛玉红原料：纯度95％，批号MRHGG 100313，陕西森弗生物技术有限公司提供；

(7)羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium，CMC)：国药集团化学试剂有限公司提供，批号20100520；

(8)超纯水(purified water)：Millipore A10超纯水仪制备；

1.3试剂配制

(1)砷系列标准溶液的配制

ICP-AES用砷标准溶液：精密量取As标准储备溶液(1g·L^-1)0.25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得5mg·L^-1的砷标准溶液；精密量取As标准储备溶液0.05mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得1mg·L^-1的砷标准溶液；精密量取5mg·L^-1的砷标准溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得0.5mg·L^-1的砷标准溶液；精密量取1mg·L^-1的砷标准溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得0.1mg·L^-1(100μg·L^-1)的砷标准溶液。

精密量取上述100μg·L^-1的砷标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得50μg·L^-1的砷标准溶液；精密量取50μg·L^-1的砷标准溶液20mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得20μg·L^-1的砷标准溶液；精密量取20μg·L^-1的砷标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得10μg·L^-1的砷标准溶液；精密量取10μg·L^-1的砷标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得5μg·L^-1的砷标准溶液；精密量取5μg·L^-1的砷标准溶液10mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得1μg·L^-1的砷标准溶液。

(2)0.5％羧甲基纤维素钠溶液的配制

准确称取5.00g的羧甲基纤维素钠粉术，置800ml烧杯中，加入500ml蒸馏水，60℃磁力搅拌4h，转移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。4℃储存备用。

(3)药品混悬液的制备

靛玉红混悬液：精密称取靛玉红52.6mg，研磨成细粉，缓慢加入少量0.5％CMC溶液，继续研磨至均匀，转移至25mL具塞刻度量筒中，多次转移合并，加至25mL，配制成浓度为2g·L-1的混悬液。临配现用。

1.4仪器

(1)美国Perkin Elmer公司OPTIMA-DV 5300型电感耦和等离子发射光谱仪(ICP-AES)；

(2)美国Agilent公司7500Ce电感耦和等离子质谱仪(ICP-MS)；

(3)德国Saturious BT2202S百分之一分析天平(称取血样)；

(4)上海博迅实验有限公司SSW型电热恒温水槽；

(5)瑞士Mettler Toledo AL204-IC精密天平(称取原料)；

(6)瑞士Mettler Toledo XP-205DU十万分之一精密天平(称取对照品)

1.5仪器设置

(1)ICP-AES仪器方法设置

仪器工作参数：RF功率1300w，雾化器流量0.8L·min^-1，辅助气流量0.2L·min^-1，等离子气流量15L·min^-1，蠕动泵流速15mL·min^-1，积分时间1～20s，分析波长118.979nm。

(2)ICP-MS仪器方法设置

仪器工作参数：射频功率1500w；采样深度8.0mm；载气流量0.7L·min^-1；辅助气流量0.2L·min^-1；等离子气流量15L·min^-1；反应气氦气；S/C温度2℃；样品提升速度0.5rps；雾化器：Babington高盐型；采样锥类型和直径：镍锥，0.8mm；截取锥类型和直径：镍锥，0.4mm；采集模式：Spectrum；点数/质量：3；重复次数：3；检测方式：自动；分析波长118.979nm。

1.6试验设计

选取12只大鼠，不禁食，体重为(357.8±10.7)g，随机分为2组，每组于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12、24、32、48、56、72、80、96、104、120、144h大鼠眼眶静脉丛采集抗凝全血0.5mL，-40℃保存直至分析。

表1-1不同组别的给药安排

1.7含砷样品预处理

精密称取待测大鼠全血0.5g于全新气相顶空瓶中，加入4mL硝酸、1mL盐酸和0.5mL氢氟酸，加盖密封。放置于50℃水浴中温育过夜。第二天开盖将顶空瓶内样品转移至15mL全新Falcon管中，多次润洗，合并所有液体并加水至15g。4000rpm离心10min，取上清6mL进样ICP-AES或ICP-MS分析。

1.8数据处理与统计

AUC_0-t(0-144h血砷-时间曲线下面积)采用统计矩计算。两组间AUC_0-t、差异采用SNK检验(q检验)，由SAS 9.1.3实现。

二结果

1.砷标准曲线

ICP-AES：标准曲线为过原点曲线，浓度分别为0、0.1、0.5、1、5mg·L^-1，回归方程为，线性范围为0～5mg·L^-1。

ICP-MS：标准曲线为过原点曲线，浓度分别为0、1、2、5、10、20、50、100μg·L^-1，回归方程为Y＝7.035e-3*X-2.813e-4，线性范围为0～100μg·L^-1。

2.大鼠体内药代动力学

空白组大鼠全血砷浓度见表2-1，灌胃药物混悬液后的全血砷浓度见表2-2，两组AUC_0-t值和组间比较结果见表2-3。使用靛玉红可使血砷的AUC_0-t显著下降。

表2-1空白组大鼠的全血总砷浓度(mg·L^-1)

表2-2大鼠灌胃靛玉红(50mg·kg^-1)后的全血总砷浓度(mg·L^-1)

表2-3不同组别的血砷AUC_0-t

注：“*”和空白组比较P＜0.05

Claims (1)

1.靛玉红在制备用于降低血液中重金属砷的含量的药物中的应用。

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