CN102776126A - 活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，步骤A，将加有保护液的活细菌悬液，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，进行动态控温下的真空干燥，将活细菌悬液的水分在4-6小时内降低至12％以下，活细菌悬液转变为固态的晶体薄片状的固态干燥物；步骤B，将所述晶体薄片状的固态干燥物压碎，在10-25℃，真空度小于10Pa下，真空干燥2-4小时，将固态干燥物水分降至10％以下；步骤C，将水分降至10％以下的固态干燥物研磨为粉末，然后在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-6小时的真空干燥，将固态干燥物中的水分降至5％以下，制备得到活细菌生物材料。其工艺周期简短、节时节能，真空干燥后生物材料数损失小。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料制备技术领域，特别是涉及一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法。
背景技术
活性生物材料如活细菌生物材料，在医药、生物制品中、食品等领域有着广泛的应用，而要长期保持活细菌生物材料处于存活状态，必须使其处于低水分状态才能实现，因此不同的干燥方法被应用其中，因为大多数的活细菌生物材料对热敏感，因此通常真空干燥和冷冻干燥工艺是在活细菌生物材料干燥领域中最常应用的两项技术。
真空干燥工艺是去除活细菌生物材料中水分的最佳方法之一，该方法相比其他的干燥方法的特点是干燥过程在不同的真空度条件下发生，并且始终处于低温下，能够最大程度地保持活细菌生物材料的活性。
但是，现有的活细菌生物材料真空干燥工艺处理时间较长，很难达到既保持活细菌较高的存活数而又能够去除大部分水分的工艺要求，而且现有制备工艺无法实现大规模的连续式生产，制备方法成本很高，无法实现大规模生物材料的真空干燥制备，实用性差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其工艺周期简短、节时节能，真空干燥后生物材料数损失小。
为实现本发明目的而提供的一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，包括如下步骤：
一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，包括：
步骤A，将加有保护液的活细菌悬液，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，进行动态控温下的真空干燥，将活细菌悬液的水分在4-6小时内降低至12％以下，活细菌悬液转变为固态的晶体薄片状的固态干燥物；
步骤B，将所述晶体薄片状的固态干燥物压碎，在10-25℃，真空度小于10Pa下，真空干燥2-4小时，将固态干燥物水分降至10％以下；
步骤C，将水分降至10％以下的固态干燥物研磨为粉末，然后在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-6小时的真空干燥，将固态干燥物中的水分降至5％以下，制备得到活细菌生物材料。
较优地，所述细菌为霍乱弧菌或志贺氏菌。
较优地，所述步骤A包括如下步骤：
步骤A1，将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，将所述细菌悬液均匀平铺；
步骤A2，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，使所述平铺的活细菌悬液在动态控温条件下真空干燥4-6小时，使所述活细菌悬液的水分蒸发至水分含量小于12％，收获得到固态的晶体薄片状的固态干燥物。
较优地，所述真空干燥保护液的成分为：20％-30％海藻糖，2-8％蔗糖，0.1-0.3％聚乙二醇，0.05％-0.1％氯化钠，0.01％-0.03％磷酸二氢钾，0.05％-0.1％磷酸氢二钠；
所述将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，具体包括如下步骤：
将上述物质按比例称量后加入注射用水中，调整pH至7.0-8.0，接着用0.22um孔径的滤器无菌过滤至已灭菌的容器中得到真空干燥保护液，在温度为4℃下保存待用；
然后将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料，离心收获后倒入所述真空干燥保护液中，使用顶置搅拌器搅拌至形成均匀无块状颗粒的所述细菌悬液。
较优地，所述步骤A1中，将所述细菌悬液均匀平铺，包括如下步骤：
设定真空干燥机的进料泵转速为5rpm、真空干燥机的履带前进速率为0.01-0.02m/s，在常压下，真空干燥机的履带温度保持在4℃，进料时间为5-60min，将所述活细菌悬液泵入真空干燥机的履带上，使所述活细菌悬液在履带上均匀平铺一层至1-2mm。
较优地，所述步骤A2中，所述动态控温条件如下表所示：
| 工艺阶段 | 温度设置 | 时间 |
| 准备期 | -10℃至-5℃ | 5-60min |
| 前期 | -5℃至5℃ | 30-60min |
| 中期 | 5℃至10℃ | 30-60min |
| 后期 | 10℃至20℃ | 120min |
较优地，所述步骤B包括如下步骤：
步骤B1，将步骤A中干燥后的晶体薄片状干燥物，在常压、温度4-15℃下，压碎平铺；
步骤B2，将平铺的晶体薄片状干燥物，控制温度在10-25℃，真空度小于10Pa下，进行2-4小时真空干燥，将所述干燥物中的水分降至10％以下。
较优地，所述步骤B1中，将晶体薄片状干燥物压碎平铺，包括如下步骤：
使用研钵手工压碎或使用低温粉碎机将所述晶体薄片状干燥物压碎至物料粒径小于0.5cm，然后倾倒至托盘中铺均匀，厚度为0.3-0.5cm。
较优地，所述步骤C包括如下步骤：
步骤C1，在步骤B真空干燥完成固态干燥物的水分降至10％以下后，将固态干燥物，在常压、温度4-15℃下，用研钵进行手工研磨或用研磨机研磨过筛至细度在60目以上，得到粉末状的固态干燥物；
步骤C2，将粉末状的固态干燥物，控制温度在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-18小时真空干燥，将粉末状的真空干燥物的水分降低至小于5％，制备得到真空干燥后的活细菌生物材料。
较优地，所述步骤C2还包括如下步骤：
若需要控制最终活性生物材料的水分小于3％以下，则控制温度在5-15度，真空度小于10Pa，将粉末状的真空干燥物进行6-18小时真空干燥。
本发明的有益效果是：本发明的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，能够在短时间内将活细菌悬液的水分去除，达到5％以下的水分；能够保持细菌的活菌数在较高的水平，换言之，本发明实施例的真空干燥制备方法中活菌死亡较少；能够实现大规模的连续式生产，成本低。
附图说明
图1是本发明实施例活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
如图1所示，作为一种可实施方式，本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法，包括：
步骤S100，将加有保护液的活细菌悬液，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，进行动态控温下的真空干燥，将活细菌悬液的水分在4-6小时(h)内降低至12％以下，使活细菌悬液转变为固态的晶体薄片状的固态干燥物；
步骤S200，将所述晶体薄片状的固态干燥物压碎，在10-25℃，真空度小于10Pa下，真空干燥2-4小时，将固态干燥物水分降至10％以下；
步骤S300，将步骤S200处理得到的固态干燥物研磨为粉末，然后在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-8小时的真空干燥，将固态干燥物中的水分降至5-3％以下，制备得到活性生物材料。
本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法，能够在短时间内将活细菌悬液的水分去除，并能够保持细菌的活菌数在较高的水平，而且其能够实现大规模的连续式生产，成本低。
下面以利用真空干燥机，实施本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法的详细过程，本发明实施例中的真空干燥机，可以是现有技术中的真空干燥机，也可以是本发明申请人在2009年申请并授权的专利号为ZL200920352269.0，发明名称为真空低温干燥机的真空干燥机。
本发明实施例中，引用本发明申请人在2009年申请并授权的专利号为ZL200920352269.0，发明名称为真空低温干燥机的真空干燥机作为一种可实施方式，并全文引用该ZL200920352269.0中公开的真空干燥机的技术方案作为本发明实施例中真空干燥机。
下面详细说明步骤S100将加有保护液的活细菌悬液进行动态控温下的真空干燥，将活细菌悬液的水分在4-6小时(h)内降低至12％以下，细菌悬液转变为固态的晶体薄片状的固态干燥物的详细过程；
具体地，作为一种较佳的实施方式，所述步骤S100包括如下步骤：
步骤S110，将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，并将所述细菌悬液pH值调节至7.0-8.0后，将所述细菌悬液泵入真空干燥机的履带上，使所述细菌悬液在履带上均匀平铺一层。
作为一种可实施方式，所述真空干燥保护液的成分(重量百分比，总含量≤100％)为：20％-30％海藻糖，2-8％蔗糖，0.1-0.3％聚乙二醇，0.05％-0.1％氯化钠，0.01％-0.03％磷酸二氢钾，0.05％-0.1％磷酸氢二钠，其他为注射用水。
作为一种可实施方式，所述将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，具体包括如下步骤：
将上述物质按比例称量后加入注射用水中，调整pH至7.0-8.0，接着用0.22um孔径的滤器无菌过滤至已灭菌的容器中得到真空干燥保护液，在温度为4℃下保存待用；然后将发酵培养至对数生长期后期的活细菌生物材料，离心收获后倒入所述真空干燥保护液中，使用顶置搅拌器搅拌至形成均匀无块状颗粒的所述细菌悬液。
制备发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料，并将其离心收获是一种现有技术，因此，在本发明实施例中，不再进行详细描述。
本发明实施例中，较佳地，作为一种可实施方式，将所述活细菌悬液泵入真空干燥机的履带上，使所述活细菌悬液在履带上均匀平铺一层，具体包括如下步骤：
设定真空干燥机的进料泵转速为5rpm、真空干燥机的履带前进速率为0.01-0.02m/s，在常压(即标准大气压)下，真空干燥机的履带温度保持在4℃，进料时间为5-60min，将所述活细菌悬液泵入真空干燥机的履带上，使所述活细菌悬液在履带上均匀平铺一层至1-2mm，即平铺在履带上的活细菌悬液的厚度为1-2mm。
本发明实施例中，在真空干燥机的进料泵转速5rpm、真空干燥机履带前进速率为0.01-0.02m/s下，真空干燥机的温度保持在4℃，进料时间为5-60min，可以实现真空干燥机前段连续泵入活细菌悬液，后续连续收获干燥的晶体薄片状的固态干燥物的连续式干燥模式，此模式对于扩大化生产具有重大意义。
步骤S120，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，使履带上的所述活细菌悬液在动态控温条件下真空干燥4-6小时(h)(240-360min)，使履带上的所述活细菌悬液的水分蒸发至水分含量小于12％，收获得到固态的晶体薄片状的固态干燥物。
所述动态控温条件如表(1)所示。
表(1)动态控温条件的活细菌悬液真空干燥控制表
活细菌悬液平铺在真空干燥机的履带后，在低于100Pa真空度下活细菌悬液的沸点降低，水分子沸腾蒸发吸热，活细菌悬温度迅速降低，控制如表(1)的温度设置，使平铺的活细菌悬液与履带的搁板夹套介质进行热交换，并使温度逐步上升，最终达到在最短时间内，并在可能的减少活菌数的损失的前提下，达到对活细菌悬液初步干燥，得到干燥的晶体薄片状的固态干燥物的目的。
实验表明，以本发明实施例的方法进行步骤S100的初步干燥，活菌数的损失约为0.5-1log左右，低于现有技术中的损失数。
下面详细说明步骤S200将所述晶体薄片状的固态干燥物压碎，在10-25℃，真空度小于10Pa下，真空干燥2-4小时，将固态真空干燥物水分降至10％的步骤的详细过程；
首先，将步骤S100中干燥后的晶体薄片状固态干燥物，在常压、温度4-15℃下，压碎平铺入托盘中，平铺厚度为0.3-0.5cm；
本发明实施例中，作为一种可实施方式，使用研钵手工压碎或使用低温粉碎机将所述晶体薄片状干燥物(固态干燥物)压碎至物料粒径小于0.5cm，然后倾倒至托盘中铺均匀，厚度为0.3-0.5cm。
然后，将托盘及其中的晶体薄片状固态干燥物置于真空干燥机内，控制温度在10-25℃，真空度小于10Pa下，进行2-4小时(h)(120-240min)真空干燥，将固态干燥物中的水分降至10％以下。
由于步骤S100中干燥后的晶体薄片状干燥物水分较高，直接研磨会导致活菌数下降，本发明实施例在步骤S200中，轻微压碎达到增加晶体薄片状干燥物表面积，然后对固态干燥物的干燥温度应不高于对应活细菌能够耐受的最高生长温度下进行真空干燥，本发明实施例中，控制温度在10-25℃，真空度小于10Pa下，进行真空干燥，将水分降至10％以下，使其可研磨而不损失活菌的水平，降低研磨过程中的活细菌损失的目的。
实验表明，以本发明实施例的方法进行步骤S200的压碎干燥后，活菌数的损失约为0.5-1log，低于现有技术中的损失数。
下面详细说明步骤S300将压碎后的真空干燥物研磨为粉末，然后在10-25℃，真空度小于10Pa下，然后进行4-18小时真空干燥，制备得到真空干燥后的活性生物材料的步骤的详细过程。
首先，在步骤S200真空干燥完成，固态干燥物的水分降至10％以下后，从真空干燥机内取出压碎后的固态干燥物，在常压、温度4-15℃下，用研钵进行手工研磨或用研磨机研磨过筛至细度在60目以上，使其完全粉末化，得到粉末状的固态干燥物；
然后，将粉末状的固态干燥物再平铺托盘中厚度为0.3-0.5cm，将托盘置于真空干燥机内，控制温度在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-18小时(h)真空干燥，将粉末状的真空干燥物的水分降低至小于5％，制备得到真空干燥后的活细菌生物材料。
更佳地，若需要控制最终活性生物材料的水分小于3％以下，则控制温度在5-15度，真空度小于10Pa，将粉末状的真空干燥物进行6-18小时真空干燥。
在步骤S200真空干燥完成后，活细菌悬液的水分降至10％以下，研磨过程对于活菌数的影响不太明显，通过研磨将压碎后的真空干燥物完全粉化，以尽量增加真空干燥生物材料的干燥表面面积，真空干燥物粉化目数越大，颗粒度越小，粉末状的真空干燥物干燥后的水分将会越低，本发明实施例中，对固态干燥物的干燥温度应不高于对应活细菌能够耐受的最高生长温度，进行真空干燥，本发明实施例中，控制温度在5-25℃，真空度小于10Pa下，经过步骤S300中4-8小时真空干燥后，将真空干燥生物材料中的水分降低至小于5-3％。达到生物材料真空干燥而又保持其活性的标准。
步骤S200和步骤S300对固态干燥物的处理如表(2)所示。
表(2)生物材料固态干燥物的后期真空干燥过程表
实验表明，以本发明实施例的方法进行步骤S300的研磨干燥后，活菌数的损失约为0.5-1log，低于现有技术中的损失数。
较佳地，本发明所述的生物材料活细菌，包括但不限于霍乱弧菌(Vibrio cholerae)，志贺氏菌(Shigella)等。
实验表明，本发明实施例中，活细菌悬液经步骤S100-S300真空干燥后，活细菌数的总损失约为1.5-2log，低于现有技术中的损失数。
本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其工艺周期简短，节时节能，而且真空干燥后活菌数损失小；另一方面，产业化投资少，成本低，生产线设备链简短，占地面积小，能够实现大规模的连续式生产。
下面以重组减毒霍乱弧菌Peru-15作为样本对象(所述样本对象重组减毒霍乱弧菌Peru-15制备方法见《Development of Peru-15(CholeraGarde)，a live-attenuated oral choleravaccine：1991-2009.》Expert Rev Vaccines.2009Dec；8(12)：1643-52.Chowdhury MI，SheikhA，Qadri F)，实验本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法，以实验数据说明本发明制备方法的有益效果。并且，由于志贺氏菌(Shigella)与霍乱弧菌(Vibriocholerae)的特性类似，其实验数据也相类似，因此在本发明实施例中不再一一列举关于志贺氏菌(Shigella)的实验数据。
1)干燥温度：
A)恒定干燥温度与本发明实施例的制备方法动态控制干燥温度对于生物材料影响的比较：
实验结果表明，在始终保持在恒定的温度条件下进行真空干燥，样品在干燥完成后的存活率将大幅度的下降。而前期样品在低温下进行大量水分的蒸发，后期进行程序升温干燥的动态干燥温度的本发明实施例的制备方法工艺明显可以达到使细菌达到很高的存活率。
实验结果数据如表(3)所示：
表(3)恒定干燥温度与动态控制干燥温度比较表
其中：*活菌数的测定采用稀释涂布平板的方法进行
样品干燥温度选择时，本实验采用的霍乱弧菌是温度敏感性细菌，在干燥最高温度的摸索后选择的温度为最高20度。当干燥温度大于20度时，样品的水分虽然可以控制的更好，但是样品的活菌数存活率并不高。
干燥时间控制：
1)步骤S100干燥时间的控制：
前期在-5℃至5℃左右低温固形阶段，样品应保持在较短时间之内(30-60min)，以免在固形时，样品外表面由于快速形成固态晶膜，阻止晶膜内部样品水分的持续蒸发。经过实验，此阶段干燥样品处理速率为每小时约1L为宜。
干燥中期的升温过程，在水分大量蒸发的同时，样品温度缓慢提高(5-10℃)，此阶段升温速率应适当，控制在0.08-0.2℃/min之间，快速升温易导致活细菌因外界温度变化过快而引起细菌膜结构破损等从而导致活菌数大幅降低，而升温过慢则会影响样品的水分蒸发速率。
后期温度控制在10-20℃之间。
2)步骤S200干燥时间的控制：
步骤S200干燥时间的控制，取决于干燥后样品类别和水分要求，不同干燥活细菌的类型和水分要求有适应的不同。本实验的霍乱弧菌样品在经过干燥2-4小时后可以将样品水分控制在9％以下，在此水分含量之下，进行霍乱弧菌样品的研磨粉末对于样品的活性没有大的损失。
3)步骤S300干燥时间的控制：
步骤S200干燥样品经研磨细度达到60目甚至更高目数之后，样品外表面积足够大，在10Pa的真空度之下，经过4-6小时真空干燥后水分降低将会达到5％以下。若需要控制最终样品的水分小于3％甚至更低，需要将步骤S300中的干燥温度控制在5-15度左右，通过延长干燥时间至6-18小时的方式来实现，延长具体时间根据样品所需最低水分含量的标准而定。霍乱弧菌样品三次干燥样品实际温度在15度左右，延长干燥时间为18小时后，样品水分将低于3％。
下面以一组真空干燥相关样品数据说明本发明实施例的生物材料多阶段式真空干燥制备方法的有益效果：
真空干燥后样品实验数据如表(4)所示：
表(4)样品真空干燥后实验数据表
其中，表(4)中真空干燥20110203批和20110305批，实验样品为霍乱弧菌Peru-15活细菌悬液，样品由霍乱弧菌Peru-15经发酵离心收获后，按照干燥液比例配制成干燥保护液，并调节干燥保护液的pH值至7.0-8.0的范围。
20110203批中，采取4+3+4三步干燥模式，即步骤S100真空干燥4小时；步骤S200真空干燥3小时；步骤S300真空干燥4小时，总计11小时的干燥时间。其中步骤S100真空干燥后水分降至10.17％；经压碎成颗粒后，步骤S200真空干燥后水分降至8.37％；再经研磨粉化后，步骤S300真空干燥后水分降至4.50％，最终获得存活率大于108且水分小于5％的生物材料。
20110305批中，采取了4+4+4的三步干燥模式，即步骤S100真空干燥4小时；步骤S200真空干燥4小时；步骤S300真空干燥4小时，总计12小时的干燥时间。其中步骤S100真空干燥后水分降至11.80％；经压碎大颗粒后，步骤S200真空干燥后水分降至10.67％；经研磨粉化后，步骤S300真空干燥后水分降至4.80％，最终获得存活率大于108且水分小于5％的样品。在20110305批这一批次样品中，还尝试了延长干燥时间的方法以求获得更低水分的样品，将三次干燥延长到18小时后，获得水分为3.0％，存活率为8.49*107CFU/ml的样品，实验表明，要获得更低水分样品，需要考虑到存活率的下降是否在可接受的范围之内。
通过上述实验表明，在同等干燥面积情况下，本发明实施例的多阶段式真空干燥制备方法比冻干制备方法的投资减少30％-50％左右，有效地降低了成本，且使用本发明实施例的真空干燥方法完成同等面积的Peru-15干燥的时间仅为冻干干燥方法所要花费时间的七分之一，提高了效率，优化了活菌干燥的流程，提高活菌干燥材料的品质。
最后应当说明的是，很显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型。
Claims (10)
1.一种活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，包括：
步骤A，将加有保护液的活细菌悬液，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，进行动态控温下的真空干燥，将活细菌悬液的水分在4-6小时内降低至12％以下，活细菌悬液转变为固态的晶体薄片状的固态干燥物；
步骤B，将所述晶体薄片状的固态干燥物压碎，在10-25℃，真空度小于10Pa下，真空干燥2-4小时，将固态干燥物水分降至10％以下；
步骤C，将水分降至10％以下的固态干燥物研磨为粉末，然后在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-6小时的真空干燥，将固态干燥物中的水分降至5％以下，制备得到活细菌生物材料。
2.根据权利要求1所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述细菌为霍乱弧菌或志贺氏菌。
3.根据权利要求1或2所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤A包括如下步骤：
步骤A1，将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，将所述细菌悬液均匀平铺；
步骤A2，在-10℃至20℃的温度，低于100Pa真空度下，使所述平铺的活细菌悬液在动态控温条件下真空干燥4-6小时，使所述活细菌悬液的水分蒸发至水分含量小于12％，收获得到固态的晶体薄片状的固态干燥物。
4.根据权利要求1或2所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述真空干燥保护液的成分为：20％-30％海藻糖，2-8％蔗糖，0.1-0.3％聚乙二醇，0.05％-0.1％氯化钠，0.01％-0.03％磷酸二氢钾，0.05％-0.1％磷酸氢二钠；
所述将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料离心收获后，与真空干燥保护液配制成细菌悬液，具体包括如下步骤：
将上述物质按比例称量后加入注射用水中，调整pH至7.0-8.0，接着用0.22um孔径的滤器无菌过滤至已灭菌的容器中得到真空干燥保护液，在温度为4℃下保存待用；
然后将发酵培养至稳定前期的活细菌生物材料，离心收获后倒入所述真空干燥保护液中，使用顶置搅拌器搅拌至形成均匀无块状颗粒的所述细菌悬液。
5.根据权利要求3所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤A1中，将所述细菌悬液均匀平铺，包括如下步骤：
设定真空干燥机的进料泵转速为5rpm、真空干燥机的履带前进速率为0.01-0.02m/s，在常压下，真空干燥机的履带温度保持在4℃，进料时间为5-60min，将所述活细菌悬液泵入真空干燥机的履带上，使所述活细菌悬液在履带上均匀平铺一层至1-2mm。
6.根据权利要求3所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤A2中，所述动态控温条件如下表所示：
7.根据权利要求5所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤B包括如下步骤：
步骤B1，将步骤A中干燥后的晶体薄片状干燥物，在常压、温度4-15℃下，压碎平铺；
步骤B2，将平铺的晶体薄片状干燥物，控制温度在10-25℃，真空度小于10Pa下，进行2-4小时真空干燥，将所述干燥物中的水分降至10％以下。
8.根据权利要求7所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤B1中，将晶体薄片状干燥物压碎平铺，包括如下步骤：
使用研钵手工压碎或使用低温粉碎机将所述晶体薄片状干燥物压碎至物料粒径小于0.5cm，然后倾倒至托盘中铺均匀，厚度为0.3-0.5cm。
9.根据权利要求7所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤C包括如下步骤：
步骤C1，在步骤B真空干燥完成固态干燥物的水分降至10％以下后，将固态干燥物，在常压、温度4-15℃下，用研钵进行手工研磨或用研磨机研磨过筛至细度在60目以上，得到粉末状的固态干燥物；
步骤C2，将粉末状的固态干燥物，控制温度在5-25℃，真空度小于10Pa下，进行4-18小时真空干燥，将粉末状的真空干燥物的水分降低至小于5％，制备得到真空干燥后的活细菌生物材料。
10.根据权利要求9所述的活细菌生物材料多阶段式真空干燥制备方法，其特征在于，所述步骤C2还包括如下步骤：
若需要控制最终活性生物材料的水分小于3％以下，则控制温度在5-15度，真空度小于10Pa，将粉末状的真空干燥物进行6-18小时真空干燥。
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