CN102731515B - 硅胶色谱法制备钩吻碱子 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，包括步骤：(1)乙酸乙酯萃取；(2)硅胶色谱纯化。本发明是一种制备钩吻碱子的简化工艺，能极大地提高钩吻碱子的得率，可用于钩吻碱子的工业制备。
Description
技术领域
本发明涉及一种钩吻碱子(koumine)的制备方法，特别是涉及一种从钩吻提取物中分离制备钩吻碱子的方法。
背景技术
钩吻(GelsemiumelegansBenth.)为马钱科胡蔓藤属植物，分中国钩吻和北美钩吻两种。我国盛产于福建、浙江、广西、广东、湖南等地，又名断肠草。其药用部位为全草。具有祛风攻毒，消肿止痛的功效。
钩吻碱类化合物是存在于钩吻中的一类化合物，被证明在肿瘤、镇痛等方面有较好的活性。临床上用于抑制肿瘤细胞生长、治疗神经痛、局部用于扩瞳等作用，可以被认为是钩吻药效的物质基础之一。
钩吻碱子(koumine，式1)是自钩吻中分离得到的一种钩吻碱类化合物其含量较高，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括：其能减轻慢性疼痛炎性疼痛和癌性疼痛。(专利号：200810071467.X，公开日200812月17日)
目前技术公开钩吻碱子的制备方法(专利号：200810071469.9，公开日2008年12月17日)是将钩吻总碱用流动相溶解后，采用高速逆流色谱仪进行制备，该制备方法操作繁琐，设备费用昂贵，制备量少，不利于工业化生产。因此，钩吻碱子分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。
式1
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。
为解决上述技术问题，本发明的从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，包括步骤：
(1)乙酸乙酯萃取步骤
将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5∶1～2∶1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A。
(2)硅胶色谱纯化步骤
将步骤(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇体积比为50∶1～25∶1进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇100∶1～50∶1梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子。
所述步骤(1)中钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为70％～95％的乙醇溶液。
采用本发明的方法依次经(1)乙酸乙酯萃取、(2)硅胶色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备钩吻碱子的简化工艺，可用于钩吻碱子的工业制备。
附图说明
图1钩吻碱子的1H-NMR谱。
图2钩吻碱子的13C-NMR谱。
图3钩吻碱子的DEPT谱。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1钩吻碱子的制备
钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为70％乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。
将提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。
将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1∶30，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿∶甲醇体积比为50∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约10g。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为1∶100，硅胶柱规格Φ60*600mm)，并以氯仿-甲醇100∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2.5g。
最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定【J.Nat.Prod.，1989，52(5)：1180-1182.】，并经高效液相检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，检测波长254nm，流动相为体积比50∶50的水-甲醇溶液，流速1mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000】含量在96％以上，其得率为0.25％。
实施例2钩吻碱子的制备
钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为95％乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约2L。
将提取液用1L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。
将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1∶50，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿∶甲醇体积比为25∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约8g。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为1∶50，硅胶柱规格Φ60*600mm)，并以氯仿-甲醇50∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2.1g。
最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定【J.Nat.Prod.，1989，52(5)：1180-1182.】，并经高效液相检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相为体积比50∶50的水-甲醇溶液，流速1mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000】含量在96％以上，其得率为0.21％。
实施例3钩吻碱子的制备
钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为80％乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。
将提取液用0.5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约35g。
将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1∶30，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿∶甲醇体积比为40∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约7g。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为1∶70，硅胶柱规格Φ60*600mm)，并以氯仿-甲醇75∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2.8g。
最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定【J.Nat.Prod.，1989，52(5)：1180-1182.】，并经高效液相检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相为体积比50∶50的水-甲醇溶液，流速1mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000】含量在96％以上，其得率为0.28％。
以上实验结果表明，本方法用于制备钩吻碱子，工艺简单，得率在千分之二以上，因此，本发明可用于钩吻碱子的工业制备。
Claims (4)
1.从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于：包括步骤：
(1)乙酸乙酯萃取步骤
将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5∶1～2∶1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A；所述钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为70％～95％的乙醇溶液；
(2)硅胶色谱纯化步骤
将步骤(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇体积比为50∶1～25∶1进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，减压回收溶剂，得浸膏B，将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇100∶1～50∶1梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子。
2.如权利要求1所述的从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于：所述步骤(1)中钩吻提取物的水溶液浓度相当于生药0.5g·ml-1～1.0g·ml-1。
3.如权利要求1所述的从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于：所述乙酸乙酯萃取中，钩吻提取物的水溶液与乙酸乙酯溶液的体积比为0.5∶1～2∶1。
4.如权利要求1所述的从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于：所述硅胶色谱纯化步骤中，硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶或薄层层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1∶30～1∶100。
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