CN102724979A

CN102724979A - 组合

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Publication number: CN102724979A
Application number: CN2010800616827A
Authority: CN
Inventors: T.吉尔默; R.库马; S.拉奎尔
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 2009-11-17
Filing date: 2010-11-17
Publication date: 2012-10-10
Also published as: WO2011062930A1; US20160008368A1; CA2781063A1; CN104382906A; EA022637B1; PL2501379T3; BR112012011677A2; BR112012011677A8; ZA201203444B; IL219786A0; US20140303195A1; PT2501379E; IL219786A; AU2010322105B2; EA201290339A1; EP2501379A4; AU2010322105A1; EP2501379A1; US20170065593A1; ES2578191T3

Abstract

新组合，其包含MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物以及mTOR抑制剂；包含该组合的药物组合物；和使用所述组合和组合物治疗其中对MEK和/或mTOR的抑制是有益的病症，例如癌症的方法。

Description

组合

发明领域

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法，以及涉及用于这种治疗的组合。具体地，本方法涉及新组合，其包含MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物以及mTOR抑制剂，涉及包含该组合的药物组合物和使用所述组合治疗癌症的方法。

发明背景

对过度增殖疾病包括癌症的有效治疗一直是肿瘤学领域的目标。一般而言，癌症由控制细胞***、分化和细胞凋亡的正常过程中的失调而产生。凋亡(程序性细胞死亡)在胚胎发育和各种疾病的发病机制中起重要作用，所述疾病如变性神经元疾病、心血管疾病和癌症。一种最常见的涉及激酶调节凋亡的研究途径是从细胞表面生长因子受体向细胞核的细胞信号传导(Crews和Erikson,Cell,74:215-17,1993)。

促细胞***素-活化的蛋白质激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)(下文称为MEK)已知与介导Raf-MEK-ERK信号传导途径的激酶的细胞增殖的调节相关，并且Raf家族(B-Raf，C-Raf等)激活MEK家族(MEK-1,MEK-2等)且MEK家族激活ERK家族(ERK-1和ERK-2)。

经常观察到在癌症特别是结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等中的Raf-MEK-ERK信号传导途径的激活。

此外，由于信号分子例如生长因子、细胞因子等所产生的信号使MEK-ERK的激活，这些功能的抑制被认为更有效地抑制了Raf-MEK-ERK信号转导，更甚于抑制上游激酶例如RTK、Ras和Raf的功能。

此外，还已知具有MEK抑制活性的化合物有效地诱导了ERK1/2活性的抑制和细胞增殖的抑制(The Journal ofBiological Chemistry,vol.276,No.4,pp.2686-2692,2001)，期望该化合物显示出对由不期望的细胞增殖引起的疾病如肿瘤发生和/或癌症的作用。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)也称为FK506结合蛋白12雷帕霉素相关蛋白1(FRAP1)，其在人类中是由FRAP1基因编码的蛋白。mTOR为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其调节细胞生长，细胞增殖，细胞运动性，细胞存活，蛋白合成和转录。

目前的研究表明，mTOR整合了多种上游途径的输入，包括胰岛素、生长因子(例如IGF-1和IGF-2)和促细胞***素。mTOR还起到细胞营养、能量水平和氧化还原状态传感器的作用。mTOR途径的失调被认为是多种人类疾病过程，尤其是多种癌症的帮凶。雷帕霉素是天然的细菌产物，其能够通过与其细胞内受体FKBP12结合来抑制mTOR。FKBP12-雷帕霉素复合物直接结合至mTOR的FKBP12-雷帕霉素结合(FRB)域。

mTOR已显示起到细胞中两种不同的分子复合物（mTORC1和mTORC2）的催化亚单位的功能。mTOR抑制剂已被用于治疗移植排斥。它们也开始被用于治疗癌症。mTOR抑制剂还可用于治疗一些与年龄有关的疾病。

有用的是提供一种新的疗法，该疗法向患有癌症的个体提供更有效的和/或增强的治疗。

发明概述

本发明者已鉴定相比于单一疗法提供更好的活性的化疗药物组合。特别是药物组合，包括所述MEK抑制剂：N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物，即结构(I)化合物：

以及mTOR抑制剂。

本发明的第一方面中提供了组合，包含：

(i)N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺(结构(I)化合物)：

或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物(下文中结构(I)化合物的二甲亚砜溶剂合物也称作化合物A，且结构(I)化合物的游离或未溶剂化形式也称作化合物C)；

以及mTOR抑制剂。

本发明的第二方面中提供了用于治疗的组合，包含：

(i)结构(I)化合物:

或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物，以及mTOR抑制剂。

本发明的第三方面中提供了用于治疗癌症的组合，包含：

(i)结构(I)化合物:

本发明的第四方面中提供了药物组合物，包含：

(i)结构(I)化合物:

或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物，和mTOR抑制剂，以及可药用稀释剂或载体。

第五方面中，提供了一种组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途，该组合包含：

i)式(I)化合物

或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物，和mTOR抑制剂。

第六方面中，提供了治疗哺乳动物癌症的方法，包括向所述哺乳动物给药：

(i)治疗有效量的式(I)化合物

或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物；和mTOR抑制剂。

在本发明的另一方面中提供了治疗在有此需要的哺乳动物中癌症的方法，包括给药治疗有效量的本发明的组合，其中所述组合中的化合物在规定的期间内持续给药一段时间。

在本发明的另一方面中提供了治疗在有此需要的哺乳动物中癌症的方法，包括给药治疗有效量的本发明的组合，其中所述组合中的化合物顺序给药。

附图说明

图1：图1显示A427、A549、Calu6和H2122细胞系的细胞生长抑制-剂量响应曲线。

图2：图2显示A427、A549、Calu6和H2122细胞系的半胱天冬酶3/7活性曲线。

图3：图3显示MEK和mTOR抑制剂单独和组合对于癌细胞系的生长IC50(gIC50)。

图4：图4显示MEK和mTOR抑制剂对癌细胞系的组合指数的对数值。

图5：图5显示MEK抑制剂、mTOR抑制剂及其组合对A549肺癌细胞系生长的作用。

图6：图6显示MEK抑制剂、mTOR抑制剂及其组合对于细胞系的细胞响应。

发明详述

本发明涉及显示抗增殖活性的组合。适当地，该方法涉及共同给药以下药物治疗癌症的方法：

mTOR抑制剂；和

N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺，或其可药用盐或溶剂合物，适当地为其二甲亚砜溶剂合物，

该化合物以结构I表示：

化合物C及其可药用盐和溶剂合物在以下文献中被公开并要求保护，其用作MEK活性的抑制剂，特别是用于治疗癌症：国际申请号PCT/JP2005/011082，其国际申请日为2005年6月10日，国际公布号WO2005/121142，其国际公布日为2005年12月22日，将其公开整体引入本文并作参考，化合物B为实施例4-1的化合物。化合物C可根据国际申请号PCT/JP2005/011082公开的方法制备。化合物C可根据美国专利申请号US2006/0014768公开的方法制备，其公布于2006年1月19日，将其公开整体引入本文并作参考。

适当地，化合物C为二甲亚砜溶剂合物形式，即化合物A。适当地，化合物C为钠盐形式。适当地，化合物C为水合物或溶剂合物形式，该溶剂选自：乙酸、乙醇、硝基甲烷、氯苯、1-戊醇、异丙醇、乙二醇和3-甲基-1-丁醇。这些溶剂合物和盐形式可根据以下公开由本领域技术人员制备：国际申请号PCT/JP2005/011082或美国专利申请号US 2006/0014768。

用于本文中的术语mTOR抑制剂、mTOR及其衍生物，除非另有限定，包括但不限于雷帕霉素及其类似物、RAD001或依维莫司(everolimus，Afinitor)、CCI-779或坦罗莫司（temsirolimus）、AP23573、AZD8055、WYE-354、WYE-600、WYE-687和Pp121。适当地，所述mTOR抑制剂选自雷帕霉素、依维莫司(Afinitor)和坦罗莫司。适当地，所述mTOR抑制剂选自雷帕霉素和依维莫司(Afinitor)。适当地，所述mTOR抑制剂为依维莫司。

给药治疗有效量的本发明的组合相对于单个的组分化合物是有利的，因为与单独给药治疗有效量的的组分化合物相比，该组合将会提供一个或多个下列改进的性质：i)与活性最大的单个药物(agent)相比有更高的抗癌作用，ii)协同的或高度协同的抗癌活性，iii)提供增强的抗癌活性和减少的副作用分布的给药方案，iv)毒性作用分布减少，v)治疗窗口增加，vi)组分化合物中的一个或两者的生物利用度增加，或vii)相比于单个成分的化合物，细胞凋亡增加。

本发明的各化合物可以含有一个或多个手性原子，或者可以以两个对映异构体存在。因此，本发明的化合物包括对映异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映异构体富集的混合物。还应当理解所有的互变异构体和互变异构体的混合物均包括在化合物A和其可药用溶剂合物和/或盐以及抑制mTOR的化合物和其可药用盐的范围内。

本发明的化合物可以形成溶剂合物，其可以理解为由溶质(在本发明中，化合物A或其可药用溶剂合物和/或盐和/或mTOR抑制剂或其盐)和溶剂形成的不同化学计量的复合物。用于本发明目的的这些溶剂不可以干扰溶质的生物学活性。适当溶剂的实例包括但不限于：水、甲醇、二甲基亚砜、乙醇和乙酸。适当地，所使用的溶剂为可药用的溶剂。适当地，所用的溶剂不为水。

本领域技术人员可以容易地制备本发明化合物的可药用盐。

本发明还包括使用本发明的组合治疗癌症的方法，其中以mTOR化合物或其可药用盐和/或化合物C或其可药用盐或溶剂合物以前药形式给药。本领域技术人员可以容易地制备本发明化合物的可药用前药。

当涉及给药方案(dosing protocol)时，术语“天”、“每天”等是指日历上一天内的时间，其从子夜开始，结束于下一个子夜。

如本文所使用的，术语“治疗”及其相关表述表示治疗性治疗。当涉及具体的病症时，治疗表示：(1)改善或预防该病症的一个或多个生物学表现的状况，(2)干扰(a)引起或响应于该病症的生物学级联中的一个或多个点，或(b)该病症的一个或多个生物学表现，(3)减轻与该病症或其治疗相关联的一个或多个症状、作用或副作用，或者(4)减缓该病症的进展，或者减缓该病症的一个或多个生物学表现。由此，也包括了预防性治疗。本领域技术人员将会理解“预防”不是绝对的术语。在医学中，将“预防”理解为药物的预防性给药以基本上减少病症或其生物学表现的可能性或严重性，或者以延缓这种病症或其生物学表现的开始。例如，当受治疗者被认为处于患癌症的高风险时，例如当受治疗者具有强大的癌症家族史时或者当受治疗者已经暴露于致癌物质时，预防性治疗是适当的。

如本文所使用的，术语“有效量”表示产生例如研究者或临床医师所寻求的组织、***、动物或人的生物学或药学响应的药物或药用制剂的量。此外，术语“治疗有效量”表示，与没有接受该量的相应受治疗者相比，引起疾病、病症或副作用的改进治疗、治愈、预防或减轻的量，或者引起疾病或病症的进展的速率降低的量。该术语还包括在其范围内有效地增强正常生理功能的量。

如本文所使用的，术语“组合”及其相关表述表示同时给药或者以任何分开的顺序给药治疗有效量的抑制mTOR的化合物和化合物C或其可药用盐或溶剂合物。优选地，如果给药不是同时的，那么所述化合物以彼此紧密相近的时间给药。此外，化合物是否以相同的剂型给药是无关紧要的，例如一个化合物可以局部给药，另一个化合物可以口服给药。适当地，这两个化合物均口服给药。

如本文所使用的，术语“组合试剂盒”，表示用于给药根据本发明的抑制mTOR的化合物和化合物C或其可药用盐或溶剂合物的一种或多种药物组合物。当该两种化合物同时给药时，所述组合试剂盒可以含有在单个药物组合物如片剂或在分开的药物组合物中的抑制mTOR的化合物和化合物C或其可药用盐或溶剂合物。当不同时给药所述化合物时，所述组合试剂盒将包括在分开的药物组合物中的抑制mTOR的化合物和化合物C或其可药用盐或溶剂合物。该组合试剂盒可以包括在单个包装中的分开的药物组合物中，或在分开包装中的分开药物组合物中的抑制mTOR的化合物和化合物C或其可药用盐或溶剂合物。

在一个方面中提供了包含下列成分的组合试剂盒：

抑制mTOR的化合物以及可药用载体；和

化合物C或其可药用盐或溶剂合物，以及可药用载体。

在本发明的一个实施方案中所述组合试剂盒包含如下成分：

抑制mTOR的化合物以及可药用载体；和

化合物C或其可药用盐或溶剂合物，以及可药用载体，

其中所述成分以适于顺序、分开和/或同时给药的形式提供。

在一个实施方案中所述组合试剂盒包含：

第一容器，其包含抑制mTOR的化合物以及可药用载体；和

第二容器，其包含化合物C或其可药用盐或溶剂合物，以及可药用载体；和

用于容纳所述第一容器和第二容器的容器装置。

所述“组合试剂盒”还可以提供说明书，如剂量和给药说明书。这些剂量和给药说明书可以为向医师提供的资料(kind)，例如药物产品标签，或者它们可以为由医师提供的资料，如向患者提供的说明书。

如本文所用的术语“肿瘤”是指细胞或组织的异常生长，且理解为包括良性（即非癌性）生长和恶性（即癌性）生长。术语“肿瘤的”指代或涉及肿瘤。

如本文所用的术语“药物（agent）”理解为是指在组织、***、动物、哺乳动物、人或其他受治疗者中产生所需效果的物质。因此，术语“抗肿瘤药物”理解为是指在组织、***、动物、哺乳动物、人或其他受治疗者中产生抗肿瘤作用的药物。还应理解“药物”可为单一化合物或两种或两种以上化合物的组合或组合物。

本发明的组合中的化合物可具有以多种特征性形式结晶的能力（其称为多晶型现象），且应理解所述多晶型形式(“多晶型物”)也在本发明的组合中的化合物的范围内。多晶型现象通常可根据温度或压力或两者的变化而发生，并且可由结晶方法变化产生。多晶型物可根据本领域已知的多种物理特性而区分，例如X射线衍射图、溶解度和熔点。

除非另有说明，在本文所述的所有给药方案中，给药化合物的方案没有必要在治疗开始时开始，也没有必要在治疗结束时终止，仅要求给药该两种化合物的连续天数以及任选仅给药组分化合物中的一种的连续天数，或者所指明的给药方案-包括所给药的化合物量，在治疗过程中的一些点发生。

如本文所用的术语“化合物C²”是指化合物C或其可药用盐或溶剂合物。

本文所使用的术语“负荷剂量”，应理解为表示向受治疗者给药高于维持剂量以快速增加药物的血液浓度的抑制mTOR的化合物或化合物C²的单个剂量或短期治疗方案。适当地，这里使用的短期治疗方案可以为1至14天；适当地为1至7天；适当地为1至3天；适当地为三天；适当地为两天；适当地为一天。在一些实施方案中，所述“负荷剂量”可以将药物的血液浓度增加到治疗有效水平。在一些实施方案中，所述“负荷剂量”可以将药物的血液浓度增加到与药物的维持剂量相关的治疗有效水平。所述“负荷剂量”可以每天给药一次，或每天给药多于一次(例如，每天最多4次)。适当地，所述“负荷剂量”可以一天给药一次。适当地，所述负荷剂量为维持剂量的2至100倍的量；适当地为2至10倍；适当地为2至5倍；适当地2倍；适当地3倍；适当地4倍；适当地5倍。适当地，所述负荷剂量给药1至7天；适当地1至5天；适当地1至3天；适当地1天；适当地2天；适当地3天，接着进行维持剂量给药方案。

本文所使用的术语“维持剂量”，应理解为表示连续(serially)给药(例如，至少两次)的剂量，并用于将化合物的血液浓度水平缓慢增加至治疗有效水平或者维持该治疗有效水平。所述维持剂量一般每天给药一次，维持剂量的每日剂量低于所述负荷剂量的全部每日剂量。

适当地，本发明的组合“在规定的期间内”给药。

如本文所使用的术语“规定的期间(specified period)”及其类似表达，表示给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个以及给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个之间的时间间隔。除非另有说明，规定的期间可以包括同时给药。当一天一次给药本发明的两个化合物时，规定的期间是指在一天内给药抑制mTOR的化合物和化合物C²的时间安排(timing)。当给药本发明的一个或两个化合物一天多于一次时，基于首次给药各化合物的具体日期计算规定的期间。在计算规定的期间时，不考虑在该具体日期中接着首次给药的所有本发明化合物的给药。

适当地，如果所述化合物不同时给药，它们均可以在彼此相隔24小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为24小时；适当地，它们均可以在彼此相隔12小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为12小时；适当地，它们均可以在彼此相隔11小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为11小时；适当地，它们均可以在彼此相隔10小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为10小时；适当地，它们均可以在彼此相隔9小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为9小时；适当地，它们均可以在彼此相隔8小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为8小时；适当地，它们均可以在彼此相隔7小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为7小时；适当地，它们均可以在彼此相隔6小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为6小时；适当地，它们均可以在彼此相隔5小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为5小时；适当地，它们均可以在彼此相隔4小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为4小时；适当地，它们均可以在彼此相隔3小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为3小时；适当地，它们均可以在彼此相隔2小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为2小时；适当地，它们均可以在彼此相隔1小时内给药-在该情况中，所述规定的期间将为1小时。如本文所使用的，抑制mTOR的化合物和化合物C²的给药相隔小于45分钟被认为是同时给药。

适当地，当本发明的组合给药一段“规定的期间”时，各化合物共同给药一段“持续时间”。

如本文所使用的术语“持续时间”及其类似表述，表示本发明的两个化合物在“规定的期间”内给药指定数目的连续天数，任选接着仅给药一种组分化合物一定的连续天数。

关于“规定的期间”给药：

适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少2天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少2天-在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少3天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少4天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少5天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少6天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少7天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续6天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续6天-在该情况中，所述持续时间为至少9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少10天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少连续5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少连续7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少连续8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续11天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少连续6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少连续8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少连续9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少连续10天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续7天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续14天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续21天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续30天，接着仅给药抑制mTOR的化合物至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续37天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续1至3天，接着仅给药抑制mTOR的化合物连续3至7天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续3至6天，接着仅给药抑制mTOR的化合物连续1至4天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续5天，接着仅给药抑制mTOR的化合物连续2天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续2天，接着仅给药抑制mTOR的化合物连续3至7天。

进一步关于“规定的期间”给药：

适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少2天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少2天-在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少3天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少4天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少5天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少6天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少1天，接着仅给药化合物C²至少7天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续6天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续2天，接着仅给药化合物C²至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少4天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续6天-在该情况中，所述持续时间为至少9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续3天，接着仅给药化合物C²至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少10天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药化合物C²至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少连续5天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药化合物C²至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药化合物C²至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少连续7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药化合物C²至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少连续8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续4天，接着仅给药化合物C²至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续11天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药化合物C²至少1天-在该情况中，所述持续时间为至少连续6天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药化合物C²至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续7天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药化合物C²至少连续3天-在该情况中，所述持续时间为至少连续8天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药化合物C²至少连续4天-在该情况中，所述持续时间为至少连续9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续5天，接着仅给药化合物C²至少连续5天-在该情况中，所述持续时间为至少连续10天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续7天，接着仅给药化合物C²至少连续2天-在该情况中，所述持续时间为至少连续9天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续14天，接着仅给药化合物C²至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续21天；适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药至少连续30天，接着仅给药化合物C²至少连续7天-在该情况中，所述持续时间为至少连续37天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续1至3天，接着仅给药化合物C²连续3至7天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续3至6天，接着仅给药化合物C²连续1至4天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续5天，接着仅给药化合物C²连续2天。适当地，在治疗过程中，两个化合物在规定的期间内给药连续2天，接着仅给药化合物C²连续3至7天。

进一步关于“规定的期间”给药：

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药1至3天，在7天周期的其他天将仅给药抑制mTOR的化合物。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药1至3天，在7天周期的其他天将仅给药化合物C²。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药3天，在7天周期的其他天将仅给药抑制mTOR的化合物。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药3天，在7天周期的其他天将仅给药化合物C²。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药2天，在7天周期的其他天将仅给药抑制mTOR的化合物。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药2天，在7天周期的其他天将仅给药化合物C²。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药1天，在7天周期的其他天将仅给药抑制mTOR的化合物。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在7天周期中给药1天，在7天周期的其他天将仅给药化合物C²。适当地，该7天的方案重复2个周期或14天；适当地4个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在14天周期中给药1至5天，在14天周期的其他天将仅给药抑制mTOR的化合物。适当地，该14天的方案重复2个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，在治疗过程中，抑制mTOR的化合物和化合物C²将在规定的期间内在14天周期中给药1至5天，在14天周期的其他天将仅给药化合物C²。适当地，该14天的方案重复2个周期或28天；适当地连续给药。

适当地，如果所述化合物不在“规定的期间内(during a specifiled period)”给药，那么它们就顺序给药。如本文所使用的术语“顺序给药”及其相关表述，表示给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个连续一天或更多天，接着给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个连续一天或更多天。同样地，本发明还包括在顺序给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个以及给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个之间所使用的休药期。如本文所使用的，休药期为在顺序给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个之后和在给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个之前不给药抑制mTOR的化合物也不给药化合物C²的间隔天数。休药期为选自以下的间隔天数：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。

关于顺序给药(sequential administration)：

适当地，给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个连续1至30天，接着任选的休药期，接着给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个连续1至30天。适当地，给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个连续1至21天，接着任选的休药期，接着给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个连续1至21天。适当地，给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个连续1至14天，接着1至14天的任选的休药期，接着给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个连续1至14天。适当地，给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的一个连续2至7天，接着1至10天的任选的休药期，接着给药抑制mTOR的化合物和化合物C²中的另一个连续2至7天。

适当地，以该顺序首先给药化合物C²，然后任选的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物。适当地，给药化合物C²连续1至21天，然后任选的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续1至21天。适当地，给药化合物C²连续3至21天，然后1至14天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续3至21天。适当地，给药化合物C²连续3至21天，然后3至14天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续3至21天。适当地，给药化合物C²连续21天，然后任选的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续14天。适当地，给药化合物C²连续14天，然后1至14天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续14天。适当地，给药化合物C²连续7天，然后3至10天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续7天。适当地，给药化合物C²连续3天，然后3至14天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续7天。适当地，给药化合物C²连续3天，然后3至10天的休药期，然后给药抑制mTOR的化合物连续3天。适当地，给药化合物C²连续7天，然后给药抑制mTOR的化合物1天。适当地，给药化合物C²连续6天，然后给药抑制mTOR的化合物1天。

适当地，给药抑制mTOR的化合物连续2天，然后给药化合物C²连续3至7天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续2天，然后给药化合物C²连续5天。

适当地，以所述顺序首先给药抑制mTOR的化合物，然后任选的休药期，然后给药化合物C²。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续1至21天，然后任选的休药期，然后给药化合物C²连续1至21天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续3至21天，然后任选的1至14天的休药期，然后给药化合物C²连续3至21天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续3至21天，然后任选的3至14天的休药期，然后给药化合物C²连续3至21天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续21天，然后任选的休药期，然后给药化合物C²连续14天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续14天，然后任选的1至14天的休药期，然后给药化合物C²连续14天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续7天，然后任选的3至10天的休药期，然后给药化合物C²连续7天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续3天，然后任选的3至14天的休药期，然后给药化合物C²连续7天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续3天，然后任选的3至10天的休药期，然后给药化合物C²连续3天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续7天，然后给药化合物C21天。适当地，给药抑制mTOR的化合物连续6天，然后给药化合物C²1天。

适当地，给药化合物C²连续2天，然后给药抑制mTOR的化合物连续3至7天。适当地，给药化合物C²连续2天，然后给药抑制mTOR的化合物连续5天。

应当理解，“规定的期间”给药和“顺序”给药可以接着重复给药(dosing)或者可以接着交替的给药方案，以及休药期可以在重复给药或交替的给药方案之前。

适当地，化合物C²作为本发明的组合的一部分的给药量可选自约0.125mg至约10mg；适当地，该量可选自约0.25mg至约9mg；适当地，该量可选自约0.25mg至约8mg；适当地，该量可选自约0.5mg至约8mg；适当地，该量可选自约0.5mg至约7mg；适当地，该量可选自约1mg至约7mg；适当地，该量可为约5mg。因此，化合物C²作为本发明的组合的一部分的给药量可选自约0.125mg至约10mg。例如，化合物C²作为本发明的组合的一部分的给药量可为0.125mg、0.25mg、0.5mg、0.75mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg、5mg、5.5mg、6mg、6.5mg、7mg、7.5mg、8mg、8.5mg、9mg、9.5mg、10mg。适当地，所选量的化合物C²一天两次给药。适当地，所选量的化合物C²一天一次给药。适当地，化合物C²的给药将以负荷剂量开始。适当地，所述负荷剂量将为维持剂量的2至100倍的量；适当地为2至10倍；适当地为2至5倍；适当地为2倍；适当地为3倍；适当地为4倍；适当地为5倍。适当地，所述负荷剂量将给药1至7天；适当地为1至5天；适当地为1至3天；适当地为1天；适当地为2天；适当地为3天，然后进行维持剂量给药方案。

mTOR抑制剂的量最终取决于所用的特定药物。

适当地，依维莫司作为本发明的组合的一部分的给药量可选自约1.25mg至约20mg；适当地，该量可选自约2mg至约15mg；适当地，该量可选自约2.5mg至约10mg。因此，依维莫司作为本发明的组合的一部分的给药量可选自约1.25mg至约20mg。例如，依维莫司作为本发明的组合的一部分的给药量可为1.25mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg、5mg、5.5mg、6mg、6.5mg、7mg、7.5mg、8mg、8.5mg、9mg、9.5mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg。适当地，所选量的依维莫司一天给药两次。适当地，所选量的依维莫司一天给药一次。适当地，给药依维莫司的量以负荷剂量开始。适当地，所述负荷剂量将为维持剂量的2至100倍；适当地为2至10倍；适当地为2至5倍；适当地为2倍；适当地为3倍；适当地为4倍；适当地为5倍。适当地，所述负荷剂量将给药1至7天；适当地为1至5天；适当地为1至3天；适当地为1天；适当地为2天；适当地为3天，然后进行维持剂量给药方案。

适当地，坦罗莫司作为本发明的组合一部分的给药量是30至60分钟时间内的输注量，选自约5mg至约50mg；适当地，该量可选自约10mg至约40mg；适当地，该量可选自约15mg至约35mg。因此，坦罗莫司作为本发明的组合一部分的给药量可选自约5mg至约50mg。例如，坦罗莫司作为本发明的组合一部分的给药量可为5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg。适当地，所选量的坦罗莫司每天两次给药。适当地，所选量的坦罗莫司每天一次给药。适当地，坦罗莫司的给药以负荷剂量开始。适当地，所述负荷剂量将为维持剂量的2至100倍；适当地为2至10倍；适当地为2至5倍；适当地为2倍；适当地为3倍；适当地为4倍；适当地为5倍。适当地，所述负荷剂量将给药1至7天；适当地为1至5天；适当地为1至3天；适当地为1天；适当地为2天；适当地为3天，然后进行维持剂量给药方案。

如本文所使用的，对于本发明组合中的化合物适当地为化合物C²详细说明的所有量均为游离的或未成盐的和未溶剂化的化合物的量。

治疗方法

本发明的组合被认为可用于其中对MEK和/或mTOR的抑制是有益的疾病。

本发明的方法也可与其他癌症的治疗方法共同使用。

本发明的组合可单独使用或与一种或多种其他治疗药物组合使用。本发明因此在另一方面中提供其他组合，其包含本发明的组合以及其他治疗药物；提供包含所述组合的组合物和药物和所述其他组合、组合物和药物的治疗用途，特别是在治疗对MEK和/或mTOR的抑制敏感的疾病中的用途。

在该实施方案中，本发明的组合可与其他癌症治疗方法共同使用。特别是，在抗肿瘤疗法中，还关注本文上述之外的与其他化疗、激素、抗体以及手术和/或放射治疗的组合疗法。因此本发明的组合疗法包括给药化合物C²和抑制mTOR的化合物以及任选的使用其他治疗药物，包括其他抗肿瘤药物。所述药物组合可共同或分开给药，且当分开给药时其可同时给药或以任何顺序给药，给药时间间隔可长可短。在一个实施方案中，所述药物组合包括化合物C²、抑制mTOR的化合物和任选地至少一种其他的抗肿瘤药物。

前文已述及治疗有效量的化合物C²和抑制mTOR的化合物。本发明的其他治疗药物的治疗有效量将取决于若干因素，包括例如哺乳动物的年龄和体重、需要治疗的精确病症、病症的严重程度、制剂的性质和给药途径。最终，治疗有效量由主治医师或兽医来决定。为了达到所需组合的治疗效果，将选择给药的相对时机。

在一个实施方案中，所述其他抗癌疗法是手术和/或放疗。

在一个实施方案中，所述其他抗癌疗法是至少一种其他的抗肿瘤药物。

任何针对治疗敏感的肿瘤具有活性的抗肿瘤药物均可用于所述组合中。典型的有用的抗肿瘤药物包括但不限于抗微管药物，例如二萜类和长春花生物碱；铂配合物；烷基化剂，例如氮芥、氧氮磷杂环己烯（oxazaphosphorines）、烷基磺酸酯、亚硝基脲，和三氮烯类；抗生素药物，例如蒽环类，放线菌素和博来霉素；拓扑异构酶II抑制剂，例如表鬼臼毒素；抗代谢剂例如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂，例如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸血管生成抑制剂；免疫治疗药物；促凋亡药物；和细胞周期信号抑制剂。

抗微管或抗有丝***药物:

抗微管或抗有丝***药物为时相特异性药物，其在肿瘤细胞周期中的M期或有丝***期具有针对肿瘤细胞微管的活性。抗微管药物的实例包括但不限于二萜类和长春花生物碱。

二萜类，其源自天然的来源，是时相特异性抗癌药物，其作用于细胞周期的G₂/M期。认为二萜类通过与微管的β-微管蛋白亚单元结合而使之稳定。该蛋白出现分解，然后有丝***受到抑制而停止，进而细胞死亡。二萜类的实例包括但不限于紫杉醇及其类似物多西紫杉醇。

紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯，是一种天然的二萜产物，分离自太平洋红豆杉且市售商品名为可注射溶液

其为萜类的紫杉烷家族的成员。紫杉醇在美国已经批准用于治疗顽固性卵巢癌(Markman等人，Yale Journal of Biology and Medicine，64:583，1991；McGuire等人，Ann.lntem，Med.，111:273,1989)和治疗乳腺癌(Holmes等人，J.Nat.Cancer Inst.，83:1797,1991)的临床应用。其为治疗皮肤肿瘤(Einzig等人，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，20:46)和头颈癌(Forastire等人，Sem.Oncol.，20:56，1990)的潜在候选药。所述化合物也显示了对于多囊肾病(Woo等人，Nature，368:750.1994)、肺癌和疟疾的治疗潜力。用紫杉醇治疗患者导致骨髓抑制(Multiple cell lineages，Ignoff，R.J.等人，Cancer Chemotherapy Pocket Guide，1998)，这与高于阈浓度(50nM)的给药持续时间有关(Kearns，C.M.等人.，Seminars in Oncology，3(6)p.16-23，1995)。

多西紫杉醇，5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮-N-叔丁酯13-(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸酯4-乙酸酯2-苯甲酸酯三水合物；其市售商品为可注射溶液

多西紫杉醇用于治疗乳腺癌。多西紫杉醇是紫杉醇的半合成衍生物，其使用天然前体10-去乙酰基-浆果赤霉素III（提取自欧洲紫杉的针）制备。

长春花生物碱是时相特异性抗肿瘤药物，源自蔓长春花植物。长春花生物碱通过特异性结合于微管蛋白作用于细胞周期的M期(有丝***)。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合于微管中。有丝***被认为终止于***中期，然后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括但不限于长春碱，长春新碱和长春瑞滨。

长春碱，硫酸长春碱，市售商品为

其为可注射溶液。尽管其可能用作多种实体瘤的二线治疗，其主要用于治疗睾丸癌和多种淋巴瘤包括霍奇金氏症；和淋巴细胞和组织细胞淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱限制剂量的副作用。

长春新碱，22-氧代长春碱硫酸盐，市售商品为

其为可注射溶液。长春新碱用于治疗急性白血病且还用于治疗霍奇金氏和非霍奇金氏恶性淋巴瘤的治疗方案。脱发和神经作用是长春新碱最常见的副作用，且会发生较低程度的骨髓抑制和胃肠道粘膜炎作用。

长春瑞滨，3’,4’-二去氢-4’-去氧-C’-去甲长春碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸盐(1:2)(盐)]，市售商品为酒石酸长春瑞滨可注射溶液

是半合成长春花生物碱。长春瑞滨用作单一药物或与其他化疗药物，例如顺铂组合，治疗多种实体瘤，特别是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素性顽固性***癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的限制剂量的副作用。

铂配合物:

铂配合物为非时相特异性抗癌药物，其与DNA相互作用。铂配合物进入肿瘤细胞，进行水合并与DNA形成链内和链间交联，对肿瘤引起不利的生物作用。铂配合物的实例包括但不限于奥沙利铂，顺铂和卡铂。

顺铂，顺-二氨二氯合铂，市售商品为

其为可注射溶液。顺铂主要用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌和晚期膀胱癌。

卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸(2-)-O,O’]合铂，市售商品为

其为可注射溶液。卡铂主要用于一线和二线治疗晚期卵巢癌。

烷基化剂:

烷基化剂为非时相特异性抗癌药物和强亲电试剂。通常，烷基化剂通过与DNA分子的亲核部分烷基化形成共价键，所述亲核部分例如磷酸基，氨基，巯基，羟基，羧基和咪唑基。所述烷基化扰乱了核酸功能，导致细胞死亡。烷基化剂的实例包括但不限于氮芥例如环磷酰胺，美法仑和苯丁酸氮芥；烷基磺酸酯例如白消安；亚硝基脲例如卡莫司汀；和三氮烯例如达卡巴嗪。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-氧氮磷杂环己烯2-氧化物一水合物，其市售商品为可注射溶液或片剂

环磷酰胺用作单一药物或与其他化疗药物组合，治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，其市售商品为可注射溶液或片剂

美法仑用于姑息治疗多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮瘤。骨髓抑制是美法仑最常见的限制剂量的副作用。

苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，市售商品为

片剂。苯丁酸氮芥用于姑息治疗慢性淋巴白血病和恶性淋巴瘤，例如淋巴肉瘤，巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金氏症。

白消安，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，市售商品为

片剂。白消安用于姑息治疗慢性髓细胞白血病。

卡莫司汀，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，市售商品为

冻干产品的单一药瓶。卡莫司汀作为单一药物或与用于脑瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金氏症和非霍奇金氏淋巴瘤的其他药物组合用于姑息治疗。

达卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，市售商品为DTIC-

产品的单一药瓶。达卡巴嗪用于治疗转移性恶性黑素瘤且与其他药物组合用于霍奇金氏症的二线治疗。

抗生素抗肿瘤药:

抗生素抗肿瘤药为非时相特异性药物，其结合或嵌入DNA。通常，所述作用形成稳定的DNA复合物或导致DNA链断裂，其扰乱了核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素抗肿瘤药物的实例包括但不限于放线菌素例如放线菌素，蒽环类（anthrocyclins）例如柔红霉素和多柔比星；和博来霉素。

放线菌素D，市售商品为可注射形式的

放线菌素D用于治疗肾母细胞瘤和横纹肌肉瘤。

柔红霉素，(8S-顺式)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-萘并萘醌盐酸盐，市售商品为可注射形式的脂质体

或可注射形式的

柔红霉素用于缓解诱导治疗急性非淋巴细胞白血病和与晚期HIV相关的卡波西氏肉瘤。

多柔比星，(8S，10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-8-乙醇酰基，7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12萘并萘醌盐酸盐，其市售商品为可注射形式的

或ADRIAMYCIN

多柔比星主要用于治疗治疗急性淋巴母细胞白血病和急性髓细胞白血病，但也是治疗一些实体瘤和淋巴瘤的有用成分。

博来霉素，分离自轮丝链霉菌株的细胞毒性糖肽抗生素混合物，市售商品为

博来霉素用作姑息治疗，作为单一药物或与用于鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌的其他药物组合。

拓扑异构酶II抑制剂:

拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼毒素类。

表鬼臼毒素类是时相特异性抗肿瘤药物，源自盾叶表鬼臼植物。表鬼臼毒素类通常在细胞周期的S和G₂期通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物引起DNA链断裂而影响细胞。DNA链断裂累积，随后细胞死亡。表鬼臼毒素类的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，其市售商品为可注射溶液或胶囊

且通常称为VP-16。依托泊苷用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

替尼泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，其市售商品为可注射溶液

且通常称为VM-26。替尼泊苷用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗儿童急性白血病。

抗代谢抗肿瘤药物:

抗代谢抗肿瘤药物是时相特异性抗肿瘤药物，其通过抑制DNA合成或通过抑制嘌呤或嘧啶碱基合成并因此限制DNA合成而作用于细胞周期的S期(DNA合成期)。因此，S期停止，细胞死亡。抗代谢抗肿瘤药物的实例包括但不限于氟尿嘧啶，甲氨喋呤，阿糖胞苷，巯嘌呤，硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，市售商品为氟尿嘧啶。给药5-氟尿嘧啶使得抑制胸苷酸合成，并且既可混合入RNA也可混合入DNA。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗乳腺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌和胰腺癌。其他氟嘧啶类似物包括5-氟去氧尿苷(氟尿苷)和5-氟去氧尿苷单磷酸盐。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-D-呋喃***糖基-2(1H)-嘧啶酮，市售商品为

且通常称为Ara-C。认为阿糖胞苷在S期通过抑制DNA链延长显示出细胞时相特异性，这种作用是通过在正在生长的DNA链的末端结合阿糖胞苷而产生的。阿糖胞苷用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗急性白血病。其他胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2’,2’-二氟去氧胞苷(吉西他滨)。

巯嘌呤，1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，市售商品为

巯嘌呤在S期通过抑制DNA合成而显示出细胞时相特异性，其机理尚不明确。巯嘌呤用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗急性白血病。一种可用的巯嘌呤类似物为硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤，2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，市售商品为硫鸟嘌呤在S期通过抑制DNA合成而表现出细胞时相特异性，其机理尚不明确。硫鸟嘌呤用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗急性白血病。其他嘌呤类似物包括喷司他丁、赤藓羟基壬基腺嘌呤、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨，2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，市售商品为吉西他滨在S期通过阻断细胞从G1期进入S期从而表现出细胞时相特异性。吉西他滨与顺铂组合用于局部治疗晚期非小细胞肺癌，以及单独局部治疗晚期胰腺癌。

甲氨喋呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，市售商品为甲氨喋呤钠。甲氨喋呤在S期通过抑制DNA合成、修复和/或复制而表现出细胞时相特异性，这种作用通过抑制二氢叶酸还原酶实现，其为嘌呤核苷和胸苷酸的合成所需的物质。甲氨喋呤用作单一药物或与其他化疗药物组合治疗绒毛膜癌，脑脊膜白血病，非霍奇金氏淋巴瘤和乳腺癌，头颈癌，卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂:

喜树碱类，包括喜树碱和喜树碱衍生物，可用作拓扑异构酶I抑制剂，或在这一方面的研发。喜树碱的细胞毒活性被认为与其拓扑异构酶I抑制活性有关。喜树碱的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康和下述7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙基二氧基-20-喜树碱的多种光学形式。

盐酸伊立替康，(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，市售商品为可注射溶液

伊立替康是一种喜树碱衍生物，其与其活性代谢物SN-38一起结合至拓扑异构酶I-DNA复合物。认为细胞毒性的发生是拓扑异构酶I:DNA:伊立替康或SN-38的三元复合物与复制酶的相互作用所导致的不可修复的双链断裂的结果。伊立替康用于治疗结肠或直肠的转移性癌症。

盐酸托泊替康，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一盐酸盐，市售商品为可注射溶液

托泊替康是一种喜树碱衍生物，其结合至拓扑异构酶I-DNA复合物，防止由于DNA分子的链扭转造成的由拓扑异构酶I引起的单链断裂的重新连接。托泊替康用于转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。

激素和激素类似物:

激素和激素类似物是治疗癌症有用的化合物，所述癌症的生长和/或生长减少与激素有关。用于癌症治疗的激素和激素类似物的实例包括但不限于肾上腺皮质类固醇类，例如***和***龙，其用于治疗恶性淋巴瘤和儿童急性白血病；氨鲁米特和其他芳香酶抑制剂例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑（vorazole）和依西美坦，其用于治疗肾上腺皮质瘤和激素依赖的含***受体的乳腺癌；孕激素，例如醋酸甲地孕酮，用于治疗激素依赖的乳腺癌和子宫内膜癌；***、雄激素和抗雄激素例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙孕酮和5α-还原酶例如非那雄胺和度他雄胺，用于治疗***瘤和良性***肥大；抗***例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene，以及美国专利No.5,681,835、5,877,219和6,207,716公开的选择性***受体调节剂(SERMS)，用于治疗激素依赖的乳腺癌和其他易感性癌症；且***释放激素(GnRH)及其类似物（其刺激促黄体生成激素(LH)和/或促卵泡激素激素(FSH)的释放）用于治疗***瘤，例如LHRH激动剂和拮抗剂，例如醋酸戈舍瑞林和亮丙立德。

信号转导途径抑制剂:

信号转导途径抑制剂是阻断或抑制激发细胞内变化的化学过程的那些抑制剂。本文所用到的变化是细胞增殖或分化。用于本发明的信号转导抑制剂包括受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、SH2/SH3域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3激酶、肌醇信号和Ras癌基因的抑制剂。

几种蛋白酪氨酸激酶在多种参与细胞生长调节的蛋白中催化特定酪氨酰残基的磷酸化。所述蛋白酪氨酸激酶可一般地分为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是具有细胞外配体结合域、跨膜域和酪氨酸激酶域的跨膜蛋白。受体酪氨酸激酶参与细胞生长的调节且通常称为生长因子受体。许多这些激酶的不适当的或不受控制的活化，即异常的激酶生长因子受体活化，例如通过过度表达或突变引起的活化，已显示会导致不受控制的细胞生长。因此，所述激酶的异常活性与恶性组织的生长相关。因此，所述激酶的抑制将提供癌症治疗方法。生长因子受体包括，例如，表皮生长因子受体(EGFr)、来自血小板的生长因子受体(PDGFr)、erbB2、erbB4、ret、血管内皮生长因子受体(VEGFr)、免疫球蛋白样酪氨酸激酶和表皮生长因子同源域(TIE-2)、胰岛素生长因子-I(IGFI)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、BTK、ckit、cmet、纤维母细胞生长因子(FGF)受体、Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)、ephrin(eph)受体和RET原癌基因。几种生长受体抑制剂正在研发之中，且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。抑制生长因子受体功能的生长因子受体和药物公开于例如以下文献中：Kath,John C.,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6):803-818;Shawver等DDT Vol 2,No.2February 1997;和Lofts,F.J.等,“Growth factor receptors as targets”,New Molecular Targets forCancer Chemotherapy,ed.Workman,Paul and Kerr,David,CRC press 1994,London。

不是生长因子受体激酶的酪氨酸激酶称为非受体酪氨酸激酶。用于本发明的非受体酪氨酸激酶（其为抗癌药物的靶点或潜在靶点），包括cSrc、Lck、Fyn、Yes、Jak、cAbl、FAK(粘着斑激酶)、Brutons型酪氨酸激酶和Bcr-Abl。抑制非受体酪氨酸激酶功能的非受体激酶和药物公开于以下文献中：Sinh,S.和Corey,S.J.,(1999)Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8(5):465–80;和Bolen,J.B.,Brugge,J.S.,(1997)Annual review of Immunology.15:371-404。

SH2/SH3域阻断剂为在多种酶或衔接蛋白（包括PI3-K p85亚单位，Src家族激酶，衔接分子(Shc，Crk，Nck，Grb2)和Ras-GAP）中扰乱SH2或SH3域结合的药物。SH2/SH3域作为抗癌药物的靶点公开于以下文献中：Smithgall,T.E.(1995),Journal of Pharmacological and Toxicological Methods.34(3)125-32。

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)、促***素或细胞外调节激酶(MEK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的阻断剂；和蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKC阻断剂(α，β，γ，ε，μ，λ，ι，ζ)。IkB激酶家族(IKKa，IKKb)，PKB家族激酶，akt激酶家族成员和TGFβ受体激酶。所述丝氨酸/苏氨酸激酶及其抑制剂公开于以下文献中：Yamamoto,T.,Taya,S.,Kaibuchi,K.,(1999),Journal of Biochemistry.126(5)799-803;Brodt,P，Samani,A.,和Navab,R.(2000),BiochemicalPharmacology,60.1101-1107;Massague,J.,Weis-Garcia,F.(1996)CancerSurveys.27:41-64;Philip,P.A.,和Harris,A.L.(1995),Cancer Treatment andResearch.78:3-27,Lackey,K.等Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,(10),2000,223-226；美国专利No.6,268,391；和Martinez-Iacaci，L.，等，Int.J.Cancer(2000)，88(1)，44-52。

磷脂酰肌醇-3激酶家族成员的抑制剂包括PI3-激酶阻断剂，ATM、DNA-PK和Ku也可用于本发明中。所述激酶公开于以下文献中：Abraham,R.T.(1996),Current Opinion in Immunology.8(3)412-8;Canman,C.E.,Lim,D.S.(1998),Oncogene 17(25)3301-3308;Jackson,S.P.(1997),International Journalof Biochemistry and Cell Biology.29(7):935-8;and Zhong,H.等,Cancer res,(2000)60(6),1541-1545。

本发明中有用的还有肌醇信号抑制剂，例如磷酸脂酶C阻断剂和肌醇类似物。所述信号抑制剂公开于以下文献中：Powis，G.和Kozikowski A.，(1994)New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed.，Paul Workman和DavidKerr，CRC press 1994，London。

另一类信号转导途径抑制剂是Ras癌基因抑制剂。所述抑制剂包括法呢基转移酶，牻牛儿基-牻牛儿基转移酶和CAAX蛋白酶抑制剂，以及反义寡核苷酸、核酶和免疫疗法。所述抑制剂已显示可在含野生型突变体ras的细胞中阻断ras活化，因而作为抗增殖药物。Ras癌基因抑制公开于以下文献中：Scharovsky,O.G.,Rozados,V.R.,Gervasoni,S.I.Matar,P.(2000),Journal ofBiomedical Science.7(4)292-8;Ashby,M.N.(1998),Current Opinion inLipidology.9(2)99–102;和BioChim.Biophys.Acta,(19899)1423(3):19-30。

如上所述，结合至受体激酶配体的抗体拮抗剂也可用作信号转导抑制剂。这类信号转导途径抑制剂包括将人抗体用于受体酪氨酸激酶细胞外配体结合域。例如Imclone C225 EGFR特异性抗体(参见Green,M.C.等,MonoclonalAntibody Therapy for Solid Tumors,Cancer Treat.Rev.,(2000),26(4),269-286)；

erbB2抗体(Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer :erbB FamilyReceptor Tyrosine Kinases,Breast cancer Res.,2000,2(3),176-183)；和2CBVEGFR2特异性抗体(参见Brekken,R.A.等,Selective Inhibition of VEGFR2Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice,Cancer Res.(2000)60,5117-5124)。

抗血管生成药物:

抗血管生成药物，包括非受体MEK血管生成抑制剂,也是有用的。抗血管生成药物例如抑制血管内皮生长因子作用的那些药物(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]和通过其他机理作用的化合物(例如利诺胺，整联蛋白αvβ3功能抑制剂、内皮抑制素和血管抑制素)；

免疫治疗药物:

用于免疫治疗方案的药物也可与式(I)化合物组合。免疫治疗方法，包括例如在体外和体内增加患者癌细胞的免疫原性的方法（例如用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染），减少T细胞的无反应性的方法，使用转染的免疫细胞（例如细胞因子转染的树突状细胞）的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法，和使用抗独特型抗体(antidiotypic antibodies)的方法。

促凋亡药物:

用于凋亡前治疗方案的药物(例如，bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明的组合。

细胞周期信号抑制剂

细胞周期信号抑制剂抑制参与细胞周期控制的分子。称为依赖于细胞周期蛋白的激酶(CDK)的蛋白激酶家族及其与称为细胞周期蛋白的蛋白家族的相互作用，控制了整个真核细胞周期的进程。不同细胞周期蛋白/CDK复合物配位活化和失活是整个细胞周期的正常进程所必需的。几种细胞周期信号抑制剂正在研发中。例如，依赖于细胞周期调节蛋白的激酶的实例包括CDK2、CDK4和CDK6，以及其抑制剂例如公开于以下文献中：Rosania等,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(2):215-230。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物选自抗微管药物、铂配合物、烷基化剂、抗生素药物、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂、免疫治疗药物、促凋亡药物和细胞周期信号抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物为选自二萜类和长春花生物碱的抗微管药物。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为二萜类.

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为长春花生物碱.

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物为铂配合物。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为紫杉醇，卡铂，或长春瑞滨。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为卡铂。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为长春瑞滨。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤药物为紫杉醇。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I化合物和其盐或溶剂合物以及至少一种抗肿瘤药物，所述至少一种抗肿瘤药物为信号转导途径抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为生长因子受体激酶VEGFR2、TIE2、PDGFR、BTK、erbB2、EGFr、IGFR-1、TrkA、TrkB、TrkC、或c-fms的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为丝氨酸/苏氨酸激酶rafk、akt、或PKC-ζ的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自激酶src家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为c-src抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为Ras癌基因抑制剂，其选自法呢基转移酶抑制剂和牻牛儿基-牻牛儿基转移酶抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自PI3K的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为二重EGFr/erbB2抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(以下结构)：

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤药物，所述至少一种抗肿瘤药物为细胞周期信号抑制剂。

在另一实施方案中，细胞周期信号抑制剂为CDK2，CDK4或CDK6的抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的方法和用途中所述的哺乳动物为人。

尽管对于治疗应用而言，治疗有效量的本发明的组合可以以粗化学品(raw chemical)给药，但是优选该组合以一种或多种药物组合物存在。因此，本发明还提供药物组合物，其包括化合物C²和/或抑制mTOR的化合物以及一种或多种可药用载体。本发明的组合如上文所述。所述载体在以下方面必须是可接受的：与制剂中其他成分相容，能够形成药用制剂以及对其接受者无害。根据本发明的其他方面，还提供了制备药物制剂的方法，该方法包括混合化合物C²和/或抑制mTOR的化合物与一种或多种可药用载体。如上文所示，所用药物组合中的这些成分可以存在于分开的药物组合物中，或者一起配制成一种药物制剂。

药物制剂可以以含有预定量的活性成分/单位剂量的单位剂型存在。如本领域技术人员所已知的，活性成分的量/剂量取决于所治疗的病症，给药途径和患者的年龄、体重和状况。优选的单位剂量的制剂为那些含有每日剂量或亚剂量或其合适部分的活性成分的单位剂量制剂。此外，这些药物制剂可以通过药物领域公知的任何方法制备。

化合物C²和抑制mTOR的化合物可以通过任何适合的途径给药。合适的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服(buccal)和舌下)、经***和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。可以理解优选途径可随着例如该组合的受治疗者的状况和所治疗的癌症而变化。还可以理解各个药物可以通过相同或不同的途径给药，化合物C²和抑制mTOR的化合物可以一起配制成药物组合物/制剂。适当地，化合物C²和抑制mTOR的化合物以分开的口服药物组合物给药。

将本发明的化合物或组合混合成方便的剂型，如胶囊、片剂或可注射制剂。可以使用固体或液体药用载体。固体载体包括：淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、***胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水和水。类似地，载体可以包括延时释放材料，如单独的或与蜡混合的甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。固体载体的量变化范围广，但是优选从约25mg至约1g/剂量单位。当使用液体载体时，该制剂合适的为糖浆、酏剂、乳剂、软明胶胶囊剂、无菌可注射液体(如安瓿)或者含水或非含水液体混悬剂的形式。

例如，对于片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可以与口服的、无毒的可药用载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂可以通过将所述化合物研磨成合适的细小尺寸并与类似粉末化的药用载体(如可食用碳水化合物，例如，淀粉或甘露醇)混合而制备。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

应当理解，除了上述成分之外，所述制剂还可以含有在本领域中与所关注制剂类型相关的其他试剂，例如那些适于口服给药的试剂可以包括调味剂。

如所说明的，将治疗有效量的本发明组合(化合物C²与抑制mTOR的化合物组合)给药于人。典型地，给药的治疗有效量的本发明药物将取决于许多因素，包括，例如，受治疗者的年龄和重量、需要治疗的精确病症、该病症的严重程度、制剂的性质和给药途径。最后，治疗有效量依据主治医师的决定。

根据已知的方法测试本发明的组合的功效、有利和协同性质。

适当地，一般根据以下的联合细胞增殖试验测试本发明的组合的功效、有利和协同性质。在384-孔板中在适于各细胞类型、且补充了10%FBS和1%青霉素/链霉素的培养基中以500细胞/孔将细胞铺板，并在37°C、5%CO₂温育过夜。在384孔板上从左往右使用化合物A²的各稀释液(20个稀释液，包括无化合物、1-20μM 2-倍稀释液，根据化合物)以格栅方式处理细胞，并在384孔板上从上向下用化合物B²(20个稀释液，包括无化合物、1-20μM 2-倍稀释液，根据化合物)处理，并如上再温育72小时。在一些情况中，以交错方式添加化合物，并且可以将温育时间延长到最多达7天。使用CellTiter-

试剂根据制造商的实验规范测量细胞生长，在PerkinElmerEnVision^TM读取器上读取信号(设为发光模式，0.5秒一个读数)。如下所述对数据进行分析。

结果表达为t=0时的值的百分比，并且针对化合物浓度作图。t=0时的值归一化为100%，并且表示添加化合物时存在的细胞数。各个化合物和/或化合物组合的细胞响应如下确定：使用用于Microsoft Excel软件的IDBS XLfitplug-in对细胞存活力-浓度进行4-或6-参数曲线拟合，并确定50%抑制细胞生长所需要的浓度(gIC₅₀)。背景校正通过减去不含细胞的孔中的值来进行。对于各药物组合，组合指数(Combination Index,CI)、超过最高单药物的量(Excess Over Highest Single Agent，EOHSA)和超过Bliss的量(Excess OverBliss，EOBliss)根据例如记载于Chou and Talalay(1984)Advances in EnzymeRegulation,22,37至55；和Berenbaum,MC(1981)Adv.Cancer Research,35,269-335中的已知方法计算。

检测1

在检测1和相应的图1和2中，所用的抑制MEK的化合物为本发明定义的化合物A，且所用的抑制mTOR的化合物为依维莫司，其具有下式的结构，且在检测1中其为化合物B。

依维莫司:

在一组肺肿瘤细胞系中通过化合物A和化合物B(依维莫司)诱导的体外细胞生长抑制和凋亡

方法：

细胞系和生长条件

人肺癌肿瘤细胞系A427、A549、Calu1、Calu3、Calu6、COR-L23、HOP62、MV522、NCI-H1155、NCI-H1299、NCI-H1355、NCI-H1395、NCI-H157、NCI-H1573、NCI-H1666、NCI-1755、NCI-H1792、NCI-2009、NCI-H2030、NCI-H2122、NCI-H2291、NCI-H23、NCI-H2347、NCI-H358、NCI-H441、NCI-H460、NCI-H650、NCI-H727、SW1573和SW900培养于含10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基中。对比RAS和RAF基因状态的细胞系突变数据。数据来源是作为癌症数据库中的体细胞突变目录(Catolog of SomaticMutations in Cancer database，COSMIC)(Bamford S等人Br.J.Cancer.2004.91:355-58)的一部分公开的和/或在in house DNA序列的数据中筛选的癌细胞系突变。

细胞生长抑制检测和组合数据分析

在含10%FBS的RPMI培养基的96孔组织培养板(NUNC 136102)中以500-2000细胞/孔接种细胞。铺板后约24小时，使细胞暴露于化合物A或B、或者这两种药物(化合物A、化合物B)摩尔比为10:1的组合的十个两倍或三倍的系列稀释液中。化合物A和化合物B的最终给药浓度范围分别为2-1000nM和0.2-100nM。细胞在化合物的存在下温育3天。通过添加Cell Titer(Promega)根据制造商的实验规范确定ATP水平。简单来说，将Cell Titer

加入各板中，温育20分钟，然后在SpectraMax L光吸收酶标仪(plate reader)上读取发光信号(0.5秒整合时间)。所有的检测均至少一式两份地进行。

在用化合物或各化合物的组合处理三天后，将信号与用载体(DMSO)处理的细胞比较，以此评估细胞生长的抑制。计算相对于用载体(DMSO)处理的对照孔细胞的细胞生长。当y=DMSO处理的对照孔的50%时用非线性回归后向***(back-interpolate)得到抑制50%对照细胞生长的化合物浓度(IC₅₀)，公式为

y = \frac{A + (B - A)}{1 + {(\frac{C}{x})}^{D}}

其中A为最小响应(y_min)，B为最大响应(y_max)，C为曲线的拐点(EC₅₀)，D为希尔系数(Hill coefficient)。

对效能的组合作用使用组合指数(CI)评估，组合指数使用后向***(back-interpolated)的IC₅₀值以及Chou和Talalay推导的彼此非排他性方程(1)计算(Chou TC，Talalay P.Adv Enzyme Regul.1984；22:27-55)：

CI=Da/IC₅₀(a)+Db/IC₅₀(b)+(Da x Db)/(IC₅₀(a)x IC₅₀(b))其中IC₅₀(a)为化合物A的IC₅₀；IC₅₀(b)为化合物B的IC₅₀；Da为化合物A在抑制50%细胞生长的与化合物B组合中的浓度；Db为化合物B在抑制50%细胞生长的与化合物A组合中的浓度。一般而言，CI值<0.9，在0.9和1.1之间，或者>1.1，分别表明协同效应、相加效应和拮抗效应。一般而言，CI数越小，协同效应的强度越大。

在响应范围内的组合效果通过EOHSA和对于总剂量超过最高单药物的量(EOHSATD)定量测定。后者基于非线性混合的概念，其曾经有详细的阐述(Peterson & Novick SJ.J Recept Signal Transduct Res 2007.27:125-46;Peterson J.Frontiers of Bioscience S2,483-503.2010)。该研究中，EOHSA和EOHSATD值定义为：分别相比于以其成分的剂量水平的最佳单一药物和以与所述组合的总剂量相同的剂量，所述组合提高的增量[计量为‘百分点’(ppt)差]。因此EOHSATD是比EOHSA更强的“协同”量度，后者比较所述组合与其(单一药物的)成分剂量，而不是总剂量。计算EOHSA的具体方法此前已公开。对于给定的组合(在总剂量D)，若所述组合在总剂量D的平均响应显著优于剂量D的药物1或剂量D的药物2，则达到了EOHSATD协同作用。对于EOHSA比较，使用以固定的剂量比拟合剂量响应曲线以及单一化合物曲线进行EOHSATD比较。在EOHSATD>0时，认为化合物A和B之间的相互作用是协同的。

该研究中，若CI<0.9或EOHSATD>0ppt，那么共同给药化合物A和B在具体的细胞系中在效能方面或在响应范围内显示了协同的相互作用。

细胞凋亡检测-半胱天冬酶-3/7活化

为研究凋亡的诱导，将细胞系以5,000细胞/孔铺板于96孔组织培养板中，并使之附着大约24小时。然后用上述化合物处理细胞。化合物处理24小时后，根据制造商提供的说明书使用半胱天冬酶Glo^TM3/7(Promega，catG8093)确定活性半胱天冬酶3和半胱天冬酶7的浓度。

结果

化合物A和化合物B的组合对肺肿瘤细胞系的细胞生长抑制和凋亡的作用

在一组29个人肺肿瘤细胞系中确定丝裂原活化蛋白/ERK-激酶(MEK)抑制剂化合物A、mTOR抑制剂化合物B (依维莫司)及其组合引起的细胞生长抑制作用。关于RAS和RAF突变状态的平均IC₅₀(来自至少两个独立的实验)和在各IC₅₀处的组合作用总结于表1中。

参照表1，29个细胞系中的17个显示对化合物A敏感，其IC₅₀<100nM；而29个细胞系中的2个对依维莫司敏感(IC₅₀<100nM)。所述化合物A和化合物B的组合是协同的，其在A549和H2122个细胞系中CI值分别为0.19和0.62，且在29个细胞系中的27个EOHSATD值为4至25ppt。此外，所述化合物A和化合物B的组合也显示细胞生长抑制的增强，在所有29个细胞系中其EOHSA值均为5至40ppt。注意，当单一药物值在所测试范围之外时不应计算CI值，计算CI值是无用的。有趣的是，肺肿瘤细胞系中给药化合物A和化合物B的组合显示了协同作用，其表现为CI值<0.9且EOHSATD>0，或使得IC50值相比于单独给药化合物A或化合物B大幅下降(在29个细胞系中的25个中化合物A为1-22nM，化合物B为0.1-2nM)，其中至少一种所述单一药物在测试范围内不能达到50%抑制。图1显示了化合物A和化合物B单一药物及其组合对于A427、A549、Calu6和H2122细胞系的细胞生长抑制的代表性剂量响应曲线。

对这些肺肿瘤细胞系，还评价了化合物A、化合物B或化合物A和化合物B的组合诱导凋亡的能力，其通过半胱天冬酶3/7的活性确定。半胱天冬酶3活化是凋亡诱导的标志。细胞系A427、A549、Calu6、H2122、H1755、H2347、H727和SW900显示，相比于化合物A或化合物B单一药物的处理，化合物A和化合物B的组合处理使凋亡增强。对于A427、A549、Calu6和H2122细胞系的代表性半胱天冬酶3/7活性曲线见于图2中。

表1.化合物A、化合物B及其组合在人肺肿瘤细胞系中引起的细胞生长抑制

本表关键词：

IC₅₀：使细胞生长减少50%的化合物的浓度；

*组合指数(CI)值，H2122中CI=0.62±0.11；A549中CI=0.19±0.11；

NA=无法获得；

EOHSATD:对于总剂量超过最高单药物的量，以百分比度量

EOHSA：超过最高单药物的量，以百分比度量。

检测2

在检测2中，所用抑制MEK的化合物为本文定义的化合物A，且所用的抑制mTOR的化合物为雷帕霉素，其具有以下结构：

雷帕霉素:

MEK(化合物A)和mTOR(雷帕霉素)抑制剂的组合对癌细胞细胞系的抑制

单独使用MEK抑制剂(化合物A)或mTOR抑制剂(mTORi，雷帕霉素)或将两药物以1:2(MEKi:mTORi)的比例组合，处理95个癌细胞系，且暴露于药物3天后测量细胞增殖/死亡。简言之，在适于各类型细胞的培养基（补充有10%FBS和1%青霉素/链霉素）中，将细胞以500细胞/孔铺板于384孔板上，并在37°C、5%CO₂培养过夜。用MEK抑制剂(两倍稀释液，范围为7.3μM-0.014nM)或mTOR抑制剂(两倍稀释液，范围为14.6μM-0.112nM)或两种化合物的组合处理细胞，并培养72小时。根据制造商的使用方案用CellTiterGlo(CTG)试剂(Promega)测量细胞生长。使用用于Microsoft Excel的XLfit(IDBS Ltd.)的曲线拟合工具分析数据。使用四参数曲线拟合算法(XLFit算法#205)算出生长IC50(gIC50)和Ymin值。

结果表示为t=0的值的百分比，并对化合物浓度作图。T=0的值归一为100%，代表加入化合物时的细胞数。对各化合物，细胞响应通过拟合浓度响应来确定，所述浓度响应是使用XLfit软件通过4或6参数曲线拟合的，并确定抑制细胞生长50%的浓度(gIC50)以及任一化合物浓度下的最低Y值(Ymin)。使用下式计算相互排他的组合指数(CI)。数据记录为logCI，其中计算CI的对数值。

CI=（a+b）的IC₅₀/a的IC₅₀+（b+a）的IC₅₀/b的IC₅₀

其中a=MEKi和b=mTORi

CI<1则为协同作用，CI=1则为相加作用，CI>1则为拮抗作用。考虑到这些增殖检测的变异性，我们任意地确定logCI>0.1作为拮抗作用，-0.1至0.1之间为无显著作用，<-0.1为协同作用。

gIC50的分析表明，对于大多数细胞系，两种抑制剂的组合是有益的，其相比于单独使用各抑制剂降低了所测得的gIC50。MEK和mTOR抑制剂单用和组合对于癌细胞系的生长IC50(gIC50)图示于图3中。图示中，MEKi的gIC50>7.3μM和mTORi的gIC50>14.6μM分别图示为7.3μM和14.6μM。按上述计算组合指数(CI)及其对数值，将其绘图并表示于图4中。这些数据表明MEKi和mTORi的组合对于所测试的多数细胞系是有协同作用的(74/95细胞系，77.9%)，而该组合对于少数细胞系是拮抗的(8/95细胞系，8.4%)。

图5显示对于一些细胞系，尽管MEKi和mTORi抑制剂的组合略微影响了gIC50，而观察到的主要区别在于Ymin(观察到的最大抑制)，其定义为在任一化合物浓度下的最低Y值。本实施例中，单用mTOR抑制剂、单用MEK抑制剂和所述两种药物组合的Ymin分别为487%，257%和-73%。对所有细胞系进行了相同的分析，Ymin结果如图6所示。这些数据表明，相比于单用各药物(mTORi=9.5%和MEKi=20%)，两种药物的组合使细胞死亡的百分比大幅增加(蓝线以下，细胞毒性，44.2%)。

通过基于KRAS和PI3K的突变状态将细胞分组，进行相同的分析。表2所示的数据表明，单用mTORi只能引起所测试的小部分癌细胞系群体的细胞死亡(细胞毒性)，无论KRAS或PI3K突变状态如何。然而，尽管无论KRAS状态如何MEKi都引起大量细胞系经历死亡(>20%)，其对于PI3K突变体显示较低的活性（相比于PI3K野生型(WT)细胞系）。相比于单一药物，在所有突变亚组中，两种药物的组合均在更多的细胞系中为活性的。

表2：经MEK和mTOR抑制剂的组合处理，基于KRAS或PI3K突变状态，癌细胞系死亡的百分比。

基于KRAS和PI3K突变状态，单用各化合物或使用其组合引起细胞死亡的能力的分析同时见于表3中。尽管mTORi作为单一药物引起很少的细胞系死亡(≤11%)，但单用MEKi在KRAS突变体/PI3K WT基因型的30%的细胞系中诱导细胞死亡。除了在死亡的细胞系总数方面占优之外，两种药物的组合对于KRAS突变体/PI3K WT群体、野生型KRAS细胞以及编码突变体PI3K的细胞也都是活性的。

表3：经MEK和mTOR抑制剂的组合处理，基于KRAS或PI3K突变状态，癌细胞系死亡的百分比。

总之，MEKi和mTORi的组合在降低各化合物引起50%生长抑制的浓度方面是有利的，在所测试的77.9%的癌细胞系中产生了协同作用。另外，相比于单用各药物，该组合在更多癌细胞系中导致细胞死亡，如Ymin值与在T=0时的初始细胞数之比较所测得。这些药物的组合在KRAS WT癌细胞系（无论PI3K突变状态如何）和KRAS突变体细胞系（野生型PI3K）中显示是有利的。

由于本发明的组合在上述测定中具有活性，因此它们在癌症治疗中显示出有利的治疗实用性。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜细胞瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌，

淋巴母细胞T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性淋巴母细胞T细胞性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核母细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、前髓细胞性白血病、红白血病，

恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非-霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤，

神经母细胞瘤、膀胱癌、膀胱上皮癌、肺癌、外阴癌、子***、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤和甲状腺癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

适当地，本发明涉及治疗Ras/Raf野生型或突变型的癌症和PI3K/PTEN野生型或突变型的癌症或减轻其严重性的方法。该方法包括Ras/Raf和PI3K/PTEN均为野生型、Ras/Raf和PI3K/PTEN均为突变型、Ras/Raf为突变型和PI3K/PTEN为野生型以及Ras/Raf为野生型和PI3K/PTEN为突变型的患者。

在一个实施方案中，所述肿瘤细胞还具有至少一个Braf突变。Braf突变包括：R462I、I463S、G464V、G464E、G466A、G466E、G466V、G469A、G469E、D594V、F595L、G596R、L597V、L597R、T599I、V600E、V600D、V600K、V600R、T119S和K601E。

术语“野生型”，如本领域中所理解的，是指在未经基因修饰的天然种群中存在的多肽或多核苷酸序列。本领域中还应当理解的是，“突变型”包括，分别与野生型多肽或多核苷酸中存在的相应的氨基酸或核酸相比，具有至少一个对氨基酸或核酸的修饰的多肽或多核苷酸序列。在术语突变型中包括单核苷酸多态性(SNP)，其中，与最普遍存在的(野生型)核酸链相比，单个碱基对差异存在于核酸链序列中。

通过已知的方法鉴定Ras/Raf野生型或突变型癌症和PI3K/PTEN野生型或突变型癌症。

例如，野生型或突变型的Ras/Raf或PI3K/PTEN肿瘤细胞可以通过DNA扩增和测序技术、DNA和RNA检测技术(分别包括但不限于RNA印迹(Northern blot)和DNA印迹(Southern blot))和/或各种生物芯片和阵列技术鉴定。野生型和突变型多肽可以通过多种技术包括但不限于免疫诊断学技术如ELISA、蛋白质印迹(Western blot)、免疫细胞化学进行检测。

丝氨酸/苏氨酸激酶11(STK11，也称为LKB1)的种系突变导致色素沉着息肉综合征（Peutz-Jeghers syndrome），其特征在于肠道错构瘤和发生率增加的上皮癌(Hongbin等人，Nature(2007)448:807-810和Hearle等人，Clin.CancerRes.(2006)12:3209-3215)。体细胞LKB1突变已在一些人类原发性肺腺瘤中报道，且已在Kras突变的肺癌中显示可调节细胞分化和转移(Hongbin等人)。

本文所用的“LKB1”与丝氨酸/苏氨酸激酶11(STK11)同义。人LKB基因(HUGO官方符号为STK11)编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，后者在色素沉着息肉综合征(PJS)患者中存在缺陷。PJS为常染色体显性遗传综合征，其特征在于胃肠道多发性错构瘤息肉和粘膜皮肤色素沉着。至今，已报道145种不同的种系LKB1突变。主要的突变产生截短的蛋白产物。已观察到一种突变的热点。在六个和七个不相关的PJS家族中，已在密码子279-281之间的单核苷酸重复(C6重复，c.83-c.842)处分别发现1-bp缺失和1-bp***。然而，这些突变只占PJS家族中鉴定的突变的大约7%(13/193)。文献的综述表明，总共有40种不同的体细胞LKB1突变存在于41种散在的肿瘤和七种癌细胞系中。突变特别是发生于肺癌和结肠直肠癌中。大多数的体细胞LKB1突变导致蛋白截短。突变的热点似乎是C6重复，其占所有体细胞突变的12.5%(6/48)。这些结果与种系突变谱相一致。然而，错义突变的比例似乎在体细胞突变中(45%)高于种系突变中(21%)，且所述突变中只有七种在体细胞突变和种系突变中是完全相同的（Hum Mutat 26(4)，291-297，2005.Launonen.HumanMutation.26(4)，291-297，2005）。

本文所用的术语“Ras蛋白”是ras亚家族成员的任何蛋白，所述亚家族为参与细胞信号传导的GTPases亚家族。如本领域所知，活化Ras引起细胞生长、分化和存活。Ras蛋白包括但不限于H-ras、K-ras和N-ras。

在一个方面中，肿瘤细胞在至少一种Ras蛋白中具有至少一个突变，或者编码至少一种Ras蛋白的基因存在于K-ras、N-ras或H-ras中。编码至少一种Ras蛋白的至少一种基因中的Ras突变可存在于外显子2和/或3中。在一些实例中，编码至少一种Ras蛋白的基因在至少一种选自以下的ras密码子中具有突变：密码子12、13、14、60、74和76。在一些实施方案中，Ras突变选自：G12S、G12V、G12D、G12A、G12C、G12R、G13A、G13D、V14I、G60E、T74P、E76G、E76K和E76Q。

肿瘤细胞可在LKB1中具有突变、缺失或***。LKB1中的至少一种错义突变可选自：581A>T引起氨基酸变化D194V；842C>T引起氨基酸变化P281L；595G>C引起氨基酸变化E199Q；1062C>G引起氨基酸变化F354L；521A>G引起氨基酸变化H174R；526G>T引起氨基酸变化D176Y；580G>T引起氨基酸变化D194Y；580G>A引起氨基酸变化D194N；166G>T引起氨基酸变化G56W；167G>T引起氨基酸变化G56V；587G>T引起氨基酸变化G196Y；232A>G引起氨基酸变化K78E；724G>C引起氨基酸变化G242R；725G>T引起氨基酸变化G242V；709G>T引起氨基酸变化D237Y；910C>G引起氨基酸变化R304G；829G>T引起氨基酸变化D277Y；923G>T引起氨基酸变化W308L；854T>A引起氨基酸变化L285Q；1225C>T引起氨基酸变化R409W；256C>G引起氨基酸变化R86G；1062C>G引起氨基酸变化F354L；816C>T引起氨基酸变化Y272Y；487G>T引起氨基酸变化G163C；368A>G引起氨基酸变化Q123R和/或1276C>T引起氨基酸变化R426W。

另一实施方案中，LKB1中的至少一种无义突变选自：109C>T引起氨基酸变化Q37X；508C>T引起氨基酸变化Q170X；206C>A引起氨基酸变化S69X；358G>T引起氨基酸变化E120X；180C>G引起氨基酸变化Y60X；180C>A引起氨基酸变化Y60X；595G>T引起氨基酸变化E199X；409C>T引起氨基酸变化Q137X；493G>T引起氨基酸变化E165X；571A>T引起氨基酸变化K191X；658C>T引起氨基酸变化Q220X；193G>T引起氨基酸变化E65X；130A>T引起氨基酸变化K44X；630C>A引起氨基酸变化C210X；667G>T引起氨基酸变化E223X；208G>T引起氨基酸变化E70X；996G>A引起氨基酸变化W332X；949G>T引起氨基酸变化E317X；996G>A引起氨基酸变化W332X；658C>T引起氨基酸变化Q220X和/或475C>T引起氨基酸变化Q159X。

另一实施方案中，LKB1中的至少一种缺失、***、取代或复合突变选自：120_130del11；153delG；126_149del24；291_464del174；291_597del307；465_597del133；842delC；735_862del128；166_178del13；431delC；579delC；157delG；810delG；598_13del22；544_546delCTG；827delG；169delG；291_378del88；598delG；842delC；465_862del1398；633delG；1302del1302；379_433del55；128_129delC；142_143delA；180delC；209delA；227_228delC；47_651del605；153_536del384；外显子2-3del；外显子2-3del；外显子2-3del；外显子2-4del；562_563delG；外显子4del；外显子4del；外显子4del；外显子4del；610_623del14；837delC；464_465del2GGinsTTTGCT；75_76del2&insT；125_127insGG；584_585insT；704_705insA；152_153insCT；842_843insC；649_650insG；127_128insGG；979_980insAG；165_166insT；外显子6del；和/或1039_1040insG；735-2A>T；5982AT；465-1G>A；465-1G>T；291-2A>T；921-1G>A；和/或597+1G>T；143_144>T；841_842>T；和/或271_272GG>TT。

另一实施方案中，LKB1中的缺失、***或突变是在催化性激酶域中。LKB1的缺失、***或突变可存在于密码子50-337中。

本发明提供组合，其包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物，适当地为依维莫司。

本发明还提供组合，其包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物适当地为依维莫司，其用于治疗。

本发明还提供组合，其包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物适当地为依维莫司，其用于治疗癌症。

本发明还提供药物组合物，其包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物适当地为依维莫司的组合。

本发明还提供组合试剂盒，其包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物，适当地为依维莫司。

本发明还提供组合在制备药物中的用途，所述组合包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和适当地为依维莫司的抑制mTOR的化合物。

本发明还提供组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述组合包含N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物，适当地为依维莫司。

本发明还提供治疗癌症的方法，其包括向有此需要的患者给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂合物和抑制mTOR的化合物适当地为依维莫司的组合。

下面的实施例仅用于解释本发明，不以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1-胶囊组合物

按照下面表4中所示比例，将各成分填充标准双部分硬明胶胶囊中，制备用于给药本发明组合的口服剂型。

表4

实施例2-胶囊组合物

按照下面表5中所示比例，将各成分填充标准双部分硬明胶胶囊中，制备用于给药本发明化合物之一的口服剂型。

表5

实施例3-胶囊组合物

按照下面表6中所示比例，将各成分填充标准双部分硬明胶胶囊中，制备用于给药本发明化合物之一的口服剂型。

表6

实施例4-片剂组合物

用10%的明胶溶液，将下面表7所示的蔗糖、微晶纤维素和本发明组合中的化合物按所示的比例混合和造粒。将湿的颗粒筛分，干燥，并与淀粉、滑石和硬脂酸混合；然后筛分并压制成片剂。

表7

实施例5-片剂组合物

用10%的明胶溶液，将下面表8所示的蔗糖、微晶纤维素和本发明化合物之一按所示的比例混合和造粒。将湿的颗粒筛分，干燥，并与淀粉、滑石和硬脂酸混合；然后筛分并压制成片剂。

表8

实施例6-片剂组合物

用10%的明胶溶液，将下面表9所示的蔗糖、微晶纤维素和本发明化合物之一按所示的比例混合和造粒。将湿的颗粒筛分，干燥，并与淀粉、滑石和硬脂酸混合；然后筛分并压制成片剂。

表9

尽管上面已经说明了本发明的优选实施方案，但是应当理解，本发明并不限于本文中所公开的明确说明，而且保留在权利要求书范围内的所有修改的权利。

Claims

1.组合，其包含：

(i)结构(I)化合物：

或其可药用盐或溶剂合物；和

(ii)mTOR抑制剂。

2.权利要求1的组合，其中结构(I)化合物为二甲亚砜溶剂合物的形式。

3.组合试剂盒，其包含权利要求1或权利要求2的组合以及一种或多种可药用载体。

4.权利要求1至3中任一项的组合，其中结构(I)化合物的量为选自0.125mg至10mg的量。

5.权利要求1至4中任一项的组合在制备用于治疗癌症的一种或多种药物中的用途。

6.治疗在有此需要的人中癌症的方法，其包括向所述人体内给药治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和mTOR抑制剂的组合，

其中所述组合在规定的期间内给药，和

其中所述组合的给药持续一段时间。

7.权利要求6的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.125mg至约10mg，且所述mTOR抑制剂为依维莫司，其给药的量选自约2.5mg至约20mg。

8.权利要求7的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.25mg至约9mg，且该量以每天一次给药，且依维莫司的量选自约3mg至约15mg，且该量以每天一次给药。

9.权利要求8的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续1至3天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续3至7天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

10.治疗在有此需要的人中选自以下癌症的方法：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜细胞瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌，

神经母细胞瘤、膀胱癌、膀胱上皮癌、肺癌、外阴癌、子***、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌；

该方法包括向所述人体内给药治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和mTOR抑制剂的组合，

其中所述组合在规定的期间内给药，和

其中所述组合的给药持续一段时间。

11.权利要求10的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.125mg至约10mg，且所述mTOR抑制剂为依维莫司，其给药的量选自约2.5mg至约20mg。

12.权利要求11的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.25mg至约9mg且该量以每天一次给药，且依维莫司的量选自约3mg至约15mg且该量以每天一次给药。

13.权利要求12的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续1至3天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续3至7天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

14.权利要求10的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

15.权利要求11的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

16.权利要求12的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

17.权利要求13的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

18.治疗在有此需要的人中癌症的方法，所述癌症为Ras/Raf的野生型或突变型和PI3K/PTEN的野生型或突变型，该方法包括向所述人体内给药治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和mTOR抑制剂的组合，

其中所述组合在规定的期间内给药，和

其中所述组合的给药持续一段时间。

19.权利要求18的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.125mg至约10mg，且所述mTOR抑制剂为依维莫司，其给药的量选自约2.5mg至约20mg。

20.权利要求19的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.25mg至约9mg且该量以每天一次给药，且依维莫司的量选自约2.5mg至约15mg且该量以每天一次给药。

21.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续1至3天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续3至7天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

22.权利要求18的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

23.权利要求19的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

24.权利要求20的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

25.权利要求21的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

26.治疗在有此需要的人中选自以下的癌症的方法：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜细胞瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌，

其中所述组合中的化合物顺序给药。

27.权利要求26的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.125mg至约10mg，且所述mTOR抑制剂为依维莫司，其给药的量选自约2.5mg至约20mg。

28.权利要求27的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.25mg至约9mg且该量以每天一次给药，且依维莫司的量选自约3mg至约15mg且该量以每天一次给药。

29.权利要求28的方法，其中依维莫司给药连续1至21天，然后任选的1至14天的休药期，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜1至21天。

30.权利要求26的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

31.权利要求27的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

32.权利要求28的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

33.权利要求29的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

34.治疗在有此需要的人中癌症的方法，所述癌症为Ras/Raf的野生型或突变型和PI3K/PTEN的野生型或突变型，该方法包括向所述人体内给药治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和mTOR抑制剂的组合，

其中所述组合中的化合物顺序给药。

35.权利要求34的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约0.125mg至约10mg，且所述mTOR抑制剂为依维莫司，其给药的量选自约2.5mg至约20mg。

36.权利要求35的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜的量选自约1mg至约9mg且该量以每天一次给药，且依维莫司的量选自约3mg至约15mg且该量以每天一次给药。

37.权利要求36的方法，其中依维莫司给药连续1至21天，然后任选的1至14天的休药期，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜1至21天。

38.权利要求34的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

39.权利要求35的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

40.权利要求36的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

41.权利要求37的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

42.权利要求37的方法，其中依维莫司给药连续2至21天，然后3至10天的休药期，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜2至21天。

43.权利要求42的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

44.权利要求29的方法，其中依维莫司给药连续2至21天，然后3至10天的休药期，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜2至21天。

45.权利要求44的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和***癌。

46.权利要求9的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续2天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续4至6天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

47.权利要求8的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在7天的周期内在彼此相隔12小时之内给药2天，且在所述7天的周期的其它天中单独给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

48.权利要求13的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续2天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续4至6天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

49.权利要求12的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在7天的周期内在彼此相隔12小时之内给药2天，且在所述7天的周期的其它天中单独给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

50.权利要求21的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续2天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续4至6天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

51.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在7天的周期内在彼此相隔12小时之内给药1至3天，且在所述7天的周期的其它天中单独给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

52.权利要求8的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续5天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续2天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

53.权利要求12的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续5天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续2天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

54.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在彼此相隔12小时之内给药连续5天，然后给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜连续2天，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

55.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和所述mTOR抑制剂依维莫司在14天的周期内在彼此相隔12小时之内给药2至5天，并在所述14天的周期的其它天中单独给药N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

56.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在7天的周期内在彼此相隔12小时之内给药1至3天，并在所述7天的周期的其它天中单独给药依维莫司，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

57.权利要求20的方法，其中N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和依维莫司在14天的周期内在彼此相隔12小时之内给药2至5天，并在所述14天的周期的其它天中单独给药依维莫司，然后任选地进行一个或多个周期的重复给药。

58.权利要求20的方法，其中所述化合物N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜首先以负荷剂量给药1至3天，然后以所述化合物的维持剂量给药。

59.权利要求20的方法，其中依维莫司首先以负荷剂量给药1至3天，然后以所述化合物的维持剂量给药。