CN102633642B - 一种截短侧耳素晶体的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种截短侧耳素晶体的制备方法，该制备方法是将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸提，浸提液浓缩至基本无丙酮，待有晶体析出时降温结晶、离心、干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品，然后将粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脱色，浓缩至有晶体析出时降温结晶，分离，用冷石油醚洗涤，干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。本发明采用丙酮代替甲基异丁基甲酮浸提，不仅降低了生产成本，提高了提取收率，而且减少了溶媒消耗及回收困难的问题，工艺条件温和，易于实现，降低了环境污染。在制备过程中，选择合适的溶媒使用量，减少了截短侧耳素杂质的引入，使产品纯度达98%以上。

Description

一种截短侧耳素晶体的制备方法

技术领域

本发明属于生物医药中间体制备技术领域，特别是涉及一种泰妙菌素合成中间体截短侧耳素晶体的制备方法。

背景技术

截短侧耳素（Pleuromutilin）是由侧耳菌（Pleurotus mutilus）和帕氏侧耳菌产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，是合成延胡索酸泰妙菌素的前体。它具有良好的抗菌活性，能够有效抑制大部分革兰阳性菌以及部分革兰氏阴性菌，被广泛用于兽药临床中。近年来，研究人员对截短侧耳素C~14位进行结构修饰，获得了对细菌和支原体的抑菌活性有所增强的衍生物，如：泰妙菌素，沃尼妙林，瑞他莫林等。因此，对截短侧耳素进行提取纯化是生产上述产品的关键步骤。

目前，截短侧耳素的获得大多是采用将发酵液中的截短侧耳素提取纯化，然后经离心得到截短侧耳素产品。有关文献以及公开的专利报道的提取截短侧耳素的方法还有如下几种：（1）干菌丝采用MIBK（甲基异丁基甲酮）浸取，处理得粗品；粗品用甲醇溶解，浓缩洗涤最后得截短侧耳素成品；（2）干菌丝直接采用MIBK萃取，浓缩，浓缩液直接转入泰妙菌素合成；（3）菌丝干燥过滤后，用醋酸丁酯萃取，浓缩结晶至截短侧耳素成品；（4）采取甲醇或乙醇提取，浓缩，降温结晶至成品。

上述工艺均较为简单，但是最终所获得的产品杂质含量较高，纯度较低，对后工序产品影响较大。 

发明内容

针对上述延胡索酸泰妙菌素的中间体产品杂质含量较高，检测困难等诸多问题，本发明提供一种制备方法简单，产品收率高，纯度高，容易实现的截短侧耳素晶体的制备方法。

本发明所采用的技术方案如下：

一种截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸提，浸提液浓缩至基本无丙酮，待有晶体析出时降温结晶、离心、真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品，然后将粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脱色，浓缩至有晶体析出时降温结晶，离心分离，用冷石油醚洗涤，真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。

其中截短侧耳素晶体粗品提取包括以下步骤：

（1）浸提

将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸取两次，浸取后离心分离，将两次所得的浸取液合并。第一次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入 5~7L的丙酮，浸提时间为3~4小时；第二次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入2~4L的丙酮，浸提时间为1小时；

（2）浓缩

浸提液转入真空浓缩器，在50~60℃以下真空搅拌至基本无丙酮，真空度控制在-0.04~-0.06MPa；

（3）降温结晶、离心、干燥

将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温至0~5℃，此时析出大量黄色结晶颗粒，继续保温5小时，充分结晶后，离心分离，50~55℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品。

截短侧耳素晶体制备包括如下步骤：

（1）溶解

将截短侧耳素粗品用甲醇溶解，加入甲醇的体积为粗品质量的4~5倍，加热至溶解完全；

（2）脱色

向溶解液中加入粗品重量的1~2%的活性炭，脱色0.5~1小时，过滤；

（3）浓缩

将滤液转入真空浓缩器，真空浓缩蒸发至原体积的30~40%，此时有晶体析出；

（4）降温结晶，分离，用冷石油醚洗涤，干燥

将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温到0~5℃，析出白色晶体，保温反应5小时，充分结晶，用离心机离心分离，加入晶体质量10倍的冷石油醚洗涤，60~70℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

（1）国内丙酮的市场价格为6～7元/kg，而MIBK的市场价格为60～70元/kg，醋酸丁酯的市场价格为9～10元/kg，本发明采用丙酮浸提制备截短侧耳素粗品代替了原有工艺的MIBK或醋酸丁酯浸提制备粗品，大大降低了溶剂的使用成本，提高了企业的经济效益。同时，采用MIBK或醋酸丁酯浸提，其提取收率为80～90%；而采用丙酮，其提取收率＞90%，详细数据见实施例。

（2）本发明提取纯化工艺条件温和，容易实现，易于操作。

（3）本发明采用的溶媒较少，操作简单，不仅降低了杂质的引入，使产品纯度高于98%，而且很大程度上降低了能耗，减少了溶媒回收的困难，减少了废物的排放。

（4）本发明是环保型的提取纯化工艺，所采用的溶媒可以循环利用，对环境影响较小，有一定的发展前景。

具体实施方式

下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。

实施例1

截短侧耳素粗品提取：

（1）浸提：向每克截短侧耳素干菌丝中加入5L的丙酮，缓慢搅拌，浸提3小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用3L的丙酮二次浸提，浸提1小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。

（2）浓缩：浸提液转入真空浓缩器后，在50~60℃搅拌，浓缩蒸发至基本无丙酮，当有晶体析出时，将浓缩液迅速转入结晶罐。

（3）结晶：在缓慢搅拌的条件下，以5~8℃/h的速度缓慢降温，降至0~5℃，保温反应5小时，晶体完全析出。离心，50~55℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品。离心液再次浓缩、降温结晶、干燥得截短侧耳素粗品，合并两次所得粗品，回收丙酮，循环使用。

截短侧耳素晶体制备：

（1）溶解：加入粗品质量4倍的甲醇，加热搅拌，使截短侧耳素粗品完全溶解；

（2）脱色：向溶解液中加入粗品重量的1~2%的活性炭，脱色反应0.5小时，过滤，将脱色液转入真空浓缩器；

（3）浓缩：将溶液真空浓缩，浓缩蒸发至原体积的40%，此时开始有晶体析出，迅速转入结晶罐；

（4）结晶：缓慢搅拌，并以5~8℃/h的速度缓慢降温至0~5℃，此时析出大量晶体，保温反应5小时，直至结晶完全，离心，加入晶体质量10倍的冷石油醚洗涤，60~70℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素成品。离心液重复浓缩，降温结晶等操作，合并两次所得的截短侧耳素晶体。回收溶媒及洗涤液，循环使用。

最终提取收率达90%，产品纯度99.1%。

实施例2

方法步骤同实施例1，不同的是溶媒加入量不同，数据如下：

截短侧耳素粗品提取：

向每克截短侧耳素干菌丝中加入6L的丙酮，缓慢搅拌，浸提3小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用3L的丙酮二次浸提，浸提1小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。

浓缩和结晶同实施例1。

截短侧耳素晶体制备：

加入粗品质量4倍的甲醇，加热搅拌，使截短侧耳素粗品完全溶解；其它如脱色、浓缩、结晶同实施例1。

最终提取收率达90%以上，产品纯度98%。

实施例3

方法步骤同实施例1，不同的是溶媒加入量不同，数据如下：

截短侧耳素粗品提取：

浸提：向每克截短侧耳素干菌丝中加入6L的丙酮，缓慢搅拌，浸提3小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用4L的丙酮二次浸提，浸提1小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。

浓缩和结晶同实施例1。

截短侧耳素晶体制备：

溶解：加入粗品质量5倍的甲醇，加热搅拌，使截短侧耳素粗品完全溶解；其它如脱色、浓缩、结晶同实施例1。

最终提取收率达90%以上，产品纯度98.8%。

实施例4

方法步骤同实施例1，不同的是溶媒加入量不同，数据如下：

截短侧耳素粗品提取：

浸提：向每克截短侧耳素干菌丝中加入7L的丙酮，缓慢搅拌，浸提3小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用2L的丙酮二次浸提，浸提1小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。浓缩和结晶同实施例1。

截短侧耳素晶体制备：

溶解：加入粗品质量5倍的甲醇，加热搅拌，使截短侧耳素粗品完全溶解；其它如脱色、浓缩、结晶同实施例1。

最终提取收率达90%以上，产品纯度98.2%。

实施例5

方法步骤同实施例1，不同的是浸提时间不同，数据如下：

截短侧耳素粗品提取：

浸提：向每克截短侧耳素干菌丝中加入5L丙酮，缓慢搅拌，浸提4小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用3L的丙酮二次浸提，浸提2小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。浓缩和结晶同实施例1。

截短侧耳素晶体制备方法步骤相同，最终提取收率达90%以上，产品纯度98.9%。

对比例   采用MIBK(甲基异丁基甲酮)提取截短侧耳素

截短侧耳素粗品提取：

（1）浸提：向每克截短侧耳素干菌丝中加入5L的MIBK，缓慢搅拌，浸提3小时后，用离心机离心，离心处理后的菌丝再用3L的MIBK二次浸提，浸提1小时后，离心，合并两次浸提液并转入真空浓缩器。

（2）浓缩：浸提液转入真空浓缩器后，在50~60℃搅拌，浓缩蒸发至基本无MIBK，当有晶体析出时，将浓缩液迅速转入结晶罐。

（3）结晶：在缓慢搅拌的条件下，以5~8℃/h的速度缓慢降温，降至0~5℃，保温反应5小时，晶体完全析出。离心，50~55℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品。离心液再次浓缩、降温结晶、干燥得截短侧耳素粗品。 

截短侧耳素晶体制备：

（1）溶解：加入粗品质量4倍的甲醇，加热搅拌，使截短侧耳素粗品完全溶解。

（2）脱色：向溶解液中加入粗品质量的1~2%的活性炭，脱色反应0.5小时，过滤，将脱色液转入真空浓缩器。

（3）浓缩：将溶液真空浓缩，浓缩蒸发至原体积的40%，此时开始有晶体析出，迅速转入结晶罐；

（4）结晶：缓慢搅拌，并以5~8℃/h的速度缓慢降温至0~5℃，此时析出大量晶体，保温反应5小时，直至结晶完全，离心，加入晶体质量10倍的冷石油醚洗涤，60~70℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素成品。离心液重复浓缩，降温结晶等操作，合并两次所得的截短侧耳素晶体。

最终提取收率达90%，产品纯度97%。

Claims (6)

1. 一种截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸提两次，第一次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入 5～7L的丙酮，浸提时间为3～4小时，第二次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入2～4L的丙酮，浸提时间为1小时，浸取后离心分离，合并两次所得的浸提液；然后将该浸提液浓缩至基本无丙酮，待有晶体析出时缓慢降温至0～5℃，保温至晶体完全析出，离心、干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品，然后在粗品中加入粗品质量的4～5倍的甲醇溶液进行溶解，之后采用粗品质量的1～2%的活性炭脱色0.5～1小时，浓缩至有晶体析出时缓慢降温到0～5℃，保温至结晶完全，离心分离，用晶体质量的9～10倍的冷石油醚洗涤，干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。

2.按照权利要求1所述的截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：上述浸提液浓缩采用真空浓缩，控制温度为50～60℃，真空度为-0.04～-0.06MPa。

3.按照权利要求1所述的截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：所述粗品离心干燥处理过程是采用离心机离心处理，干燥采用真空烘箱干燥，50～55℃真空干燥至干燥失重低于1%。

4.按照权利要求1所述的截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：上述粗品溶解液的浓缩采用真空浓缩，控制温度为60～70℃，真空度为-0.04～-0.06MPa。

5.按照权利要求1所述的截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：所述晶体分离采用离心机分离。

6.按照权利要求1所述的截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：所述晶体干燥采用真空烘箱干燥，60～70℃真空干燥至干燥失重低于1%。