CN102630447A - 一种台湾长寿菜的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种台湾长寿菜的快速繁殖方法,主要通过对初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽、后期管理的步骤,达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、苗生长旺盛的优良效果,愈伤组织的萌动率达到了96%,增殖倍数达到了4.7倍,生根率达到了100%,最终的成活率达到了96%。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种植物的培养方法,尤其涉及一种台湾长寿菜的快速繁殖方法。
背景技术
长寿菜,又名叶用甘薯,俗称白薯叶、番薯叶、地瓜叶,是甘薯的叶、叶柄和芽梢部,学名Ipomoea atatas (L.) Lam.,为旋花科(Convolvulaceae)牵牛花属草本匍匐性蔓生植物。在热带为多年生。原产于热带美洲。现广泛栽培于全世界热带和亚热带地区。我国南北各地都有栽培,以收获地下块根为主,叶蔓作饲料,民间也有采食叶作为粗菜。近年发现,薯叶中含丰富的营养物质,是维生素历、矿物质钾、钙之来源,而且其病虫害甚少,很少使用农药,比其他叶菜类较抗暴风雨,生长迅速,为良好的夏季叶菜。它在人们追求享受自然的风味中获得重视,在台湾省它作为一种优良的深绿色蔬菜发展很快。,利用组培技术繁育长寿菜的技术尚未有人研究,组织培养体系尚未建立,优良品种的推广普及尚未完成,供求矛盾日益加剧,严重影响了长寿菜的应用和推广。
发明内容
本发明针对现有的不足提供了一种台湾长寿菜的快速繁殖方法。
本发明通过以下方法实现上述目的。
一种台湾长寿菜的快速繁殖方法,该方法包括下列步骤:
(1)外植体的选择:于5~7月采取生长健壮的长寿菜叶片或块茎作外植体;
(2)材料处理方法:先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去,用流水冲洗1 h后用紫外灯照射10 min,转入超净工作台,在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡20-50秒,然后用无菌水冲洗,再转入滴加了2~3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡5-7min,依时间长短用无菌水冲洗3~4次,最后在无菌条件下分割材料。茎段切割成0. 1~0. 6 cm长,叶片分割成约0. 3 cm ×0. 3 cm的小片;
(3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上,该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的2,4-D、0.4mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.5mg/L的GA,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待培养25天左右后,新芽长至3.0cm左右时,即开始下一个阶段;
(4)继代培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上,该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待新芽长至2.0cm时,即开始下一个阶段;
(5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上,该培养基是在1/3MS常规培养基中添加了0.6mg/L的IBA、0.6mg/L的NAA,0.3mg/L的KT,0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2200lux,待新苗长至2.5cm时,即开始下一个阶段;
(6)炼苗:先将培养瓶移至温室,自然条件下炼苗6d,然后解开封口膜,炼苗4d,炼苗期间适当遮光,使光照强度为自然光的50%,炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基,移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩:蛭石=3∶3∶1:2 的混合基质中,温度控制在29℃,前7d 湿度控制在85%左右,以后逐渐降低湿度;
(7) 移栽:移栽时间10月12-22日将扦插播种成活的小苗移栽到预先准备好的苗圃地,选择地势平坦,排水良好,土层深厚肥沃的土地建立苗圃地;
移栽方法 移栽前将苗圃地做成长5m、宽2.5m的低床,施足底肥,然后将扦插苗按15cm×25 cm株行距进行移栽,移栽深度2.5 cm,移栽后及时浇透水;
移栽苗管理 生长期每隔15d叶面喷施有机复合肥100倍溶液,大田苗移栽后,移植苗成活率达到96%以上;
所述的有机复合肥的制备方法为:
该复合肥按照如下方法制备:
(a)按所述重量份数选取配方量的原料;所述原料为:尿素5-20%,磷酸一铵2-5%,硫酸钾4-5%,磷酸二氢钾4-6%,腐植酸10-15%,木质素5-7%,BA3-5%,水5-10%,壳聚糖1-5%,硼砂3-7%,氯化锌0.5-1%,钼酸钠0.05-0.3%,硫酸锰0.05-0.1%,十二烷基苯磺酸钠0.05-0.3%,硫酸亚铁0.8-2%,硫酸镁0.03-0.8%,硫酸铜0.01-0.05%,二甲基亚砜0.2-2%;大田作物秸秆2-10%,禽畜粪便2-3%;
所述禽畜粪便为猪粪、牛粪、羊粪、鸡鸭粪中的一种或任意几种混合;
(b)将所述植物纤维粉碎为粉末;
(c)将所述禽畜粪便、植物纤维粉末混合、拌匀,在发酵池中堆置湿料发酵,上覆保湿保温材料,经过60小时后,堆内温度达到50-70℃时第一次翻堆,并每隔24小时翻堆一次,经过3次翻堆后,发酵结束;
(d)将发酵产物与所述的尿素,磷酸一铵,硫酸钾,磷酸二氢钾,纳米硫酸亚铁,纳米碳,腐植酸,木质素,BA,水,壳聚糖,硼砂,氯化锌,钼酸钠,硫酸锰,十二烷基苯磺酸钠,硫酸亚铁,硫酸镁,硫酸铜,二甲基亚砜混合放入反应釜中,用水溶解,在100-120℃下搅拌混合反应2小时;待混合工艺完成后,用200目筛过滤溶液,去掉残渣。
有益效果:本发明对长寿菜采用组织培养技术,以茎段和叶片为外植体,经外植体灭菌、初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤,研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控,解决盘叶忍冬的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题,建立了完善的盘叶忍冬组织培养体系,达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的,并且保存了母体的全部优良性状,遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗,进行规模化、工厂化生产,并具体具有一下优点:
1、本发明针对盘叶忍冬原产地的气候特点,降低了组培过程中的培养温度,并且延长了光照周期,增强了光强度,从而使培养环境更接近其原生地的气候;
2、本发明通过对初代培养基、继代培养基、增殖培养基、生根培养基配方的精确筛选,达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果。
3、在炼苗移栽中通过逐渐提高光照强度,并且在移栽过程中,逐渐降低湿度、严格控制温度,采用合适的基质配方,最终提高了生根试管苗的成活率。
4、后期管理中采用了复合有机肥,降低了药残,复合无公害蔬菜的生菜要求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,下述实施例仅用于说明本发明,对本发明并没有限制。
一种台湾长寿菜的快速繁殖方法,该方法包括下列步骤:
(1)外植体的选择:于5~7月采取生长健壮的长寿菜叶片或块茎作外植体;
(2)材料处理方法:先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去,用流水冲洗1 h后用紫外灯照射10 min,转入超净工作台,在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡20-50秒,然后用无菌水冲洗,再转入滴加了2~3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡5-7min,依时间长短用无菌水冲洗3~4次,最后在无菌条件下分割材料。茎段切割成0. 1~0. 6 cm长,叶片分割成约0. 3 cm ×0. 3 cm的小片;
(3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上,该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的2,4-D、0.4mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.5mg/L的GA,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待培养25天左右后,新芽长至3.0cm左右时,即开始下一个阶段;
(4)继代培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上,该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待新芽长至2.0cm时,即开始下一个阶段;
(5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上,该培养基是在1/3MS常规培养基中添加了0.6mg/L的IBA、0.6mg/L的NAA,0.3mg/L的KT,0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2200lux,待新苗长至2.5cm时,即开始下一个阶段;
(6)炼苗:先将培养瓶移至温室,自然条件下炼苗6d,然后解开封口膜,炼苗4d,炼苗期间适当遮光,使光照强度为自然光的50%,炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基,移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩:蛭石=3∶3∶1:2 的混合基质中,温度控制在29℃,前7d 湿度控制在85%左右,以后逐渐降低湿度;
(7) 移栽:移栽时间10月12-22日将扦插播种成活的小苗移栽到预先准备好的苗圃地,选择地势平坦,排水良好,土层深厚肥沃的土地建立苗圃地;
移栽方法 移栽前将苗圃地做成长5m、宽2.5m的低床,施足底肥,然后将扦插苗按15cm×25 cm株行距进行移栽,移栽深度2.5 cm,移栽后及时浇透水;
移栽苗管理 生长期每隔15d叶面喷施有机复合肥100倍溶液,大田苗移栽后,移植苗成活率达到96%以上;
所述的有机复合肥的制备方法为:
该复合肥按照如下方法制备:
(a)按所述重量份数选取配方量的原料;所述原料为:尿素5-20%,磷酸一铵2-5%,硫酸钾4-5%,磷酸二氢钾4-6%,腐植酸10-15%,木质素5-7%,BA3-5%,水5-10%,壳聚糖1-5%,硼砂3-7%,氯化锌0.5-1%,钼酸钠0.05-0.3%,硫酸锰0.05-0.1%,十二烷基苯磺酸钠0.05-0.3%,硫酸亚铁0.8-2%,硫酸镁0.03-0.8%,硫酸铜0.01-0.05%,二甲基亚砜0.2-2%;大田作物秸秆2-10%,禽畜粪便2-3%;
所述禽畜粪便为猪粪、牛粪、羊粪、鸡鸭粪中的一种或任意几种混合;
(b)将所述植物纤维粉碎为粉末;
(c)将所述禽畜粪便、植物纤维粉末混合、拌匀,在发酵池中堆置湿料发酵,上覆保湿保温材料,经过60小时后,堆内温度达到50-70℃时第一次翻堆,并每隔24小时翻堆一次,经过3次翻堆后,发酵结束;
(d)将发酵产物与所述的尿素,磷酸一铵,硫酸钾,磷酸二氢钾,纳米硫酸亚铁,纳米碳,腐植酸,木质素,BA,水,壳聚糖,硼砂,氯化锌,钼酸钠,硫酸锰,十二烷基苯磺酸钠,硫酸亚铁,硫酸镁,硫酸铜,二甲基亚砜混合放入反应釜中,用水溶解,在100-120℃下搅拌混合反应2小时;待混合工艺完成后,用200目筛过滤溶液,去掉残渣。
Claims (1)
1.一种台湾长寿菜的快速繁殖方法,其特征在于该方法包括下列步骤:
(1)外植体的选择:于5~7月采取生长健壮的长寿菜叶片或块茎作外植体;
(2)材料处理方法:先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去,用流水冲洗1 h后用紫外灯照射10 min,转入超净工作台,在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡20-50秒,然后用无菌水冲洗,再转入滴加了2~3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡5-7min,依时间长短用无菌水冲洗3~4次,最后在无菌条件下分割材料,茎段切割成0. 1~0. 6 cm长,叶片分割成约0. 3 cm ×0. 3 cm的小片;
(3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上,该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的2,4-D、0.4mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.5mg/L的GA,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待培养25天左右后,新芽长至3.0cm左右时,即开始下一个阶段;
(4)继代培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上,该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT,PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2000-2200lux,待新芽长至2.0cm时,即开始下一个阶段;
(5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上,该培养基是在1/3MS常规培养基中添加了0.6mg/L的IBA、0.6mg/L的NAA,0.3mg/L的KT,0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、PH 6.0,培养温度为24℃,光照周期13h/d,光强度为2200lux,待新苗长至2.5cm时,即开始下一个阶段;
(6)炼苗:先将培养瓶移至温室,自然条件下炼苗6d,然后解开封口膜,炼苗4d,炼苗期间适当遮光,使光照强度为自然光的50%,炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基,移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩:蛭石=3∶3∶1:2 的混合基质中,温度控制在29℃,前7d 湿度控制在85%左右,以后逐渐降低湿度;
(7) 移栽:移栽时间10月12-22日将扦插播种成活的小苗移栽到预先准备好的苗圃地,选择地势平坦,排水良好,土层深厚肥沃的土地建立苗圃地;
移栽方法 移栽前将苗圃地做成长5m、宽2.5m的低床,施足底肥,然后将扦插苗按15cm×25 cm株行距进行移栽,移栽深度2.5 cm,移栽后及时浇透水;
移栽苗管理 生长期每隔15d叶面喷施有机复合肥100倍溶液,大田苗移栽后,移植苗成活率达到96%以上;
所述的有机复合肥的制备方法为:
该复合肥按照如下方法制备:
(a)按所述重量份数选取配方量的原料;所述原料为:尿素5-20%,磷酸一铵2-5%,硫酸钾4-5%,磷酸二氢钾4-6%,腐植酸10-15%,木质素5-7%,BA3-5%,水5-10%,壳聚糖1-5%,硼砂3-7%,氯化锌0.5-1%,钼酸钠0.05-0.3%,硫酸锰0.05-0.1%,十二烷基苯磺酸钠0.05-0.3%,硫酸亚铁0.8-2%,硫酸镁0.03-0.8%,硫酸铜0.01-0.05%,二甲基亚砜0.2-2%;大田作物秸秆2-10%,禽畜粪便2-3%;
所述禽畜粪便为猪粪、牛粪、羊粪、鸡鸭粪中的一种或任意几种混合;
(b)将所述植物纤维粉碎为粉末;
(c)将所述禽畜粪便、植物纤维粉末混合、拌匀,在发酵池中堆置湿料发酵,上覆保湿保温材料,经过60小时后,堆内温度达到50-70℃时第一次翻堆,并每隔24小时翻堆一次,经过3次翻堆后,发酵结束;
(d)将发酵产物与所述的尿素,磷酸一铵,硫酸钾,磷酸二氢钾,纳米硫酸亚铁,纳米碳,腐植酸,木质素,BA,水,壳聚糖,硼砂,氯化锌,钼酸钠,硫酸锰,十二烷基苯磺酸钠,硫酸亚铁,硫酸镁,硫酸铜,二甲基亚砜混合放入反应釜中,用水溶解,在100-120℃下搅拌混合反应2小时;待混合工艺完成后,用200目筛过滤溶液,去掉残渣。
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