CN102626451B - 茅莓总皂苷在制备抗疲劳药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了茅莓总皂苷在制备抗疲劳药物中的应用，动物实验结果显示茅莓总皂苷具有良好的抗疲劳作用，能够显著延长小鼠负重游泳时间，显著增加乳酸脱氢酶的活性，降低小鼠运动后血清乳酸、尿素氮的含量，并能够显著提高小鼠运动后肝糖原和肌糖原的含量，还具有毒性低、副作用小等优点，使用安全。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，涉及茅莓总皂苷在制药领域中的新用途。
背景技术
随着社会发展，人们工作、生活节奏越来越快，疲劳成为非常普遍的都市病症。许多人都易出现头昏头疼、眼花、乏力、记忆力减退、血压下降、心率过速、情绪低落等与疲劳相关的症状。疲劳作为一种生理现象，是指机体生理过程不能持续其机能在某一特定的水平和/或不能维持预定的运动强度。疲劳发生后如果得不到及时消除，将会逐渐积累，最终导致机体的神经、内分泌及免疫***调节失常，甚至出现器质性病变，成为破坏人类身心健康的重要因素。因此，了解疲劳的原因和促进疲劳的恢复一直是近来研究的热点。
目前，各种消除疲劳的措施在效果上各有不尽如人意的地方，在寻找安全有效的抗疲劳方法中，传统中药由于副作用小，不含对人体有害的***成分而成为近年来抗疲劳研究的热点。中药茅莓为民间常用中草药，来源于蔷薇科悬钩子属植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草，性凉味苦，根、茎、叶均可入药，具有清热解毒、凉血止血等功效，主治感冒发热、跌打损伤、外伤出血等多种疾病。现代药理学研究表明，茅莓提取物具有止血、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗菌、抗脑缺血等药理作用。经过对茅莓进行***研究，并结合文献，发明人发现，茅莓总皂苷是茅莓生物活性的主要物质基础，但茅莓总皂苷是否具有抗疲劳作用，至今未见文献报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于考察茅莓总皂苷是否具有抗疲劳作用，能否用于制备抗疲劳的药物。
将茅莓总皂苷用于动物抗疲劳实验，结果显示，茅莓总皂苷具有良好的抗疲劳作用，能够显著延长小鼠负重游泳时间，显著增加乳酸脱氢酶（LDH）的活性，降低小鼠运动后血清乳酸（BLA）和尿素氮（BUN）的含量，并能够显著提高小鼠运动后肝糖原（LG）和肌糖原（MG）的含量，还具有毒性低、副作用小等优点，使用安全，可以用于制备抗疲劳药物。
所述茅莓总皂苷既可以采用文献报道的方法制得，也可以采用本发明所述方法制得：将茅莓药材浸泡在水中，加热提取2~3次，每次1~2小时，合并提取液，上大孔吸附树脂柱；或者将茅莓药材浸泡在体积分数为50%~70%的乙醇溶液中，加热提取2~3次，每次1~2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味后上大孔吸附树脂柱；然后，先用氢氧化钠溶液洗柱至流出液无色，再用蒸馏水洗柱至流出液呈中性，再用体积分数为30%~70%的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，常压或减压浓缩，干燥，即得茅莓总皂苷，纯度大于50%。作为一个具体的例子，可将茅莓药材浸泡在相当于药材10倍重量的水中，加热煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，离心，取上清液上大孔吸附树脂柱D101，先用质量分数为0.1%的氢氧化钠溶液洗柱至流出液无色，再用蒸馏水洗柱至流出液呈中性，再用体积分数为40%的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得茅莓总皂苷，纯度约65%。
本发明的有益效果在于：本发明公开了茅莓总皂苷在制备抗疲劳药物中的应用，不仅拓宽了茅莓总皂苷的应用范围，提高了其市场价值，而且为抗疲劳治疗提供了一种安全、高效的备选药物，利于满足临床治疗的多方面需求。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对茅莓总皂苷的抗疲劳作用及其效果进行详细的描述。
一、茅莓总皂苷的制备
称取茅莓药材2kg，加10倍水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，离心，取上清液上已处理好的大孔吸附树脂D101（弱极性，天津市海光化工有限公司）柱，先用质量分数为0.1%的氢氧化钠溶液洗至流出液无色，再用蒸馏水洗至流出液呈中性，最后用体积分数为40%的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为40%的乙醇洗脱液，减压蒸干，即得茅莓总皂苷，纯度为65.72%。
二、茅莓总皂苷的抗疲劳作用
1、对小鼠负重游泳时间的影响
取体重25±4g的雄性昆明小鼠40只，随机分为四组：空白对照组，茅莓总皂苷低、中、高剂量组，每组10只。各组小鼠每天经口灌胃给药1次，空白对照组按照0.01ml/g(体重)的剂量给予小鼠生理盐水，茅莓总皂苷低、中、高剂量组分别按照20、40、80mg/kg(体重)的剂量给予小鼠茅莓总皂苷，连续给药30天，每周称重1次。末次给药30分钟后，在距小鼠尾尖1cm处用细绳给小鼠系上相当于5%体重的铅皮，然后将小鼠置水深30cm、水温30±1℃的游泳箱中游泳，记录小鼠自游泳开始至沉下水10秒不再浮出水面的时间，作为小鼠的负重游泳时间。结果如表1所示，可见给予小鼠低剂量的茅莓总皂苷即能显著延长小鼠的负重游泳时间，随着茅莓总皂苷剂量的提高，作用更加明显，说明茅莓总皂苷可以增强小鼠的运动耐力。
表1 茅莓总皂苷对小鼠负重游泳时间的影响（ 
±s，n=10）
2、对小鼠自游泳运动后血BLA、LDH和BUN含量的影响
取体重25±4g的雄性昆明小鼠40只，随机分为四组：空白对照组，茅莓低、中、高剂量组，每组10只。各组小鼠每天经口灌胃给药1次，空白对照组按照0.01ml/g(体重)的剂量给予小鼠生理盐水，茅莓总皂苷低、中、高剂量组分别按照20、40、80mg/kg(体重)的剂量给予小鼠茅莓总皂苷，连续给药30天，末次给药前空腹12小时，每周称重1次。末次给药30分钟后，将小鼠在不负重的情况下置水温30±1℃的游泳箱中游泳30分钟，再休息10分钟后眼球采血，分取血清，利用相应的检测试剂盒检测BLA、BUN和LDH的含量。结果如表2所示，可见自游泳运动后茅莓总皂苷低、中、高剂量组小鼠的BLA、BUN水平均显著低于空白对照组，而LDH水平均显著高于空白对照组，说明茅莓总皂苷能通过增强LDH活力，清除肌肉中过多的BLA，从而减少运动中BLA的生成，伴随着BUN生成的减少，肌体对负荷的适应性提高，达到延缓疲劳的效果。
表2 茅莓总皂苷对小鼠运动后血BLA、LDH和BUN含量的影响（
±s，n=10）
3、对小鼠自游泳运动后糖原含量的影响
取前述眼球采血后的四组小鼠，分取肝脏和后腿部肌肉，经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，利用相应的检测试剂盒检测LG和MG的含量。结果如表3所示，可见茅莓总皂苷中、高剂量组小鼠运动后LG和MG含量均显著高于空白对照组，提示茅莓总皂苷能够维持运动后小鼠的LG和MG含量，从而为肌体提供较好的能量储备。
表3 茅莓总皂苷对小鼠运动后LG、MG含量的影响（
±s，n=10）
三、茅莓总皂苷的急性毒性
1、口服给药的急性毒性试验
取体重20±2g的小鼠40只，雌雄各半，每只小鼠按照2.4g/kg(体重)的剂量给予茅莓总皂苷（相当于生药120g/kg），每天经口灌胃给药3次，连续给药7天，观察小鼠有无急性毒性反应。结果显示，在口服给予小鼠相当于人体用药剂量130倍的茅莓总皂苷时，未见小鼠死亡，未测得LD50。
2、腹腔注射给药的急性毒性试验
取体重20±2g的小鼠40只，雌雄各半，每只小鼠按照2.4g/kg(体重)的剂量给予茅莓总皂苷（相当于生药120g/kg），每天经口灌胃给药3次，连续给药7天，观察小鼠有无急性毒性反应。结果显示，在腹腔注射给予小鼠相当于人体用药剂量130倍的茅莓总皂苷时，未见小鼠死亡，未测得LD50。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照上述实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
Claims (3)
1.茅莓总皂苷在制备抗疲劳药物中的应用，所述茅莓总皂苷采用以下方法制得：将茅莓药材浸泡在水中，加热提取2~3次，每次1~2小时，合并提取液，上大孔吸附树脂柱；或者将茅莓药材浸泡在体积分数为50%~70%的乙醇溶液中，加热提取2~3次，每次1~2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味后上大孔吸附树脂柱；然后，先用氢氧化钠溶液洗柱至流出液无色，再用蒸馏水洗柱至流出液呈中性，再用体积分数为30%~70%的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，常压或减压浓缩，干燥，即得茅莓总皂苷。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗疲劳的药物为能够延长负重运动时间、增加乳酸脱氢酶的活性，降低运动后血清乳酸和尿素氮的含量，并能够提高运动后肝糖原和肌糖原含量的药物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述茅莓总皂苷采用以下方法制得：将茅莓药材浸泡在相当于药材10倍重量的水中，加热煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，离心，取上清液上大孔吸附树脂柱D101，先用质量分数为0.1%的氢氧化钠溶液洗柱至流出液无色，再用蒸馏水洗柱至流出液呈中性，再用体积分数为40%的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得茅莓总皂苷。
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