CN102565233B - 一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 - Google Patents
一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102565233B CN102565233B CN2012100156561A CN201210015656A CN102565233B CN 102565233 B CN102565233 B CN 102565233B CN 2012100156561 A CN2012100156561 A CN 2012100156561A CN 201210015656 A CN201210015656 A CN 201210015656A CN 102565233 B CN102565233 B CN 102565233B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tobacco leaf
- volatile
- fresh tobacco
- tobacco leaves
- semi
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,其特征在于:快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻,采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎,用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中次生代谢物,离心后,吸取上清液低温下悬蒸或离心浓缩,浓缩后的样品溶液直接采用GC-MS进行分析。本发明的突出优点是发展了适用于新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的提取方法。并且方法简单、有效且重现性好,可以弥补经典的衍生化GC-MS的无法检测挥发、半挥发次生代谢物的不足。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,该方法操作简单、高效、精确度高,可以弥补经典的衍生化GC-MS的无法检测挥发、半挥发次生代谢物的不足。
背景技术
烟草作为重要的模式作物及经济作物,人们对其化学组成有了很多了解。但是,大多数研究仅限于对调制后烟叶的了解,而人们对于新鲜烟叶,包括不同生长周期、不同部位烟叶的化学组成了解仍旧十分有限。次生代谢物主要是指分子量在1000以下的小分子代谢物,与植物基体抗性、信号传导、生长发育、植物的花色、香气等现象相关。因此,了解不同时期、处于不同生长周期的烟叶的代谢物组成及含量本身具有重大意义,而且是开展基因组学、蛋白质组学、转录组学研究的化学平台。
尽管近几年国内外已经开始开展关于烟叶次生代谢物的研究工作,但是数量有限,且大都基于调制后烟叶。目前,对于烟叶及其它模式植物此生代谢物的检测方法仍以衍生化GC-MS方法为主,这是由于其检测范围可涵盖大多数次生代谢物,且GC-MS方法可进行谱库检索,便于对次生代谢物进行定性分析。然而,衍生化GC-MS需要对提取液进行完全干燥,因此会导致挥发、半挥发次生代谢物完全损失,影响测试结果。鉴于衍生化GC-MS检测范围未能涵盖挥发、半挥发次生代谢物,建立一种测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的GC-MS检测方法是十分有必要的。而且,据调研目前并无相关报道。
发明内容
本发明的目的正是针对上述现有技术状况而提供一种简单、高效的检测新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻,采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎,用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中次生代谢物,离心后,吸取上清液浓缩,浓缩后的样品溶液直接采用GC-MS进行分析。
具体步骤如下:
(1) 烟叶的采集、处理、干燥、粉碎:快速采摘烟株指定部位烟叶,用液氮迅速冷冻以终止生命过程,冷冻干燥24h以除去烟叶水分,干燥过的烟叶粉碎至40-60目,放于-20℃冰箱保存;
(2) 提取次生代谢物:称量50-250mg的烟粉,加入内标溶液、6-8ml甲醇-氯仿萃取溶剂进行超声提取,提取液经高速离心后,取4-6ml上清液进行浓缩,浓缩液经0.45μm微孔滤膜过滤后直接用GC-MS分析;
(3) 检测:采用GC-MS进行检测分析,色谱条件如下:
色谱柱: DB-35ms (30m×0.25mm×0.25μm); 载气,He;流速:1.0ml/min;进样口温度:290℃;进样量:1μL;分流比为5:1;升温程序: 60℃保持4min,然后以5℃/min的升温速度升到280℃,保持10 min,
MS参数:采用全扫描模式;采集质量数范围:40-350。
本发明中,在步骤(1)的处理过程中要迅速去处烟叶主脉,用锡箔纸包裹叶片部分,标记后放入液氮中终止烟叶生命过程,并放于-80℃低温冰箱冷冻保存,在烟叶从冰箱取出至冷冻干燥开始之前,必须用干冰包埋,进行转移。
所述萃取溶剂为3∶2或4∶1的甲醇-氯仿溶液, 加入量为6-8ml,萃取时间为20-40min。
内标溶液为配在萃取溶剂中的氘代尼古丁溶液,浓度为200μg/ml,加入量为100μl。
步骤(2)中的浓缩方式采用旋蒸或真空离心浓缩。
采用GC-MS进行检测分析时,所用色谱柱前接1.0m长的0.25mm内径的空管毛细管作为预柱,预柱需每周定期更换。
本发明的突出优点是发展了适用于新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的提取方法。并且方法简单、有效且重现性好,可以弥补经典的衍生化GC-MS的无法检测挥发、半挥发次生代谢物的不足。
附图说明
图1为本发明的测定步骤流程图。
图2为本发明所得GC-MS全扫描色谱图。
具体实施方式
本发明以下结合实施例作进一步描述,但并不限制本发明。
实施例1:
采集实验室6片旺长期的新鲜烟叶(品种为红花大金元),快速去除主干并用锡箔纸包裹,用液氮速冻。从液氮取出锡箔纸包,轻轻拍碎,立即用冷冻干燥机冷冻24h取出水分,并磨碎至40-60目。称取200mg烟粉于10ml离心管,加入100μl氘代尼古丁内标溶液,5.9ml的甲醇-氯仿(3:2)溶液,超声提取30min,10000r/min下离心10min。吸取4.0ml上清液于5ml离心管中,35℃下用真空离心浓缩仪浓缩到1.0ml体积左右。 浓缩后的样品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后直接用GC-MS分析。
色谱条件如下:
色谱柱: DB-35ms (30m×0.25mm×0.25μm); 载气,He;流速:1.0ml/min;进样口温度:240℃;进样量:1μL;分流比为5:1;升温程序:60℃保持4min,然后以5℃/min的升温速度升到280℃,保持10 min。
MS参数:采用全扫描模式;采集质量数范围:40-350。
所得GC-MS全扫描色谱图见图2。
实施例2:
采集贵州遵义地区品种为NC297的3片成熟期烟叶,快速去除主干并用锡箔纸包裹,用液氮速冻。将锡箔纸包从液氮中取出,包埋在干冰中,航空快递至实验室,放于-80℃冰箱。从冰箱中取出锡箔纸包,轻轻拍碎,立即用冷冻干燥机冷冻24h去除水分,磨碎至40-60目。分别称取50mg、100mg、150mg、200mg、250mg烟粉于10ml离心管,加入100 μl氘代尼古丁内标溶液,5.9 ml的甲醇-氯仿(3:2)溶液,超声提取30min,10000r/min下离心10min, 取4.0ml上清液于另5ml离心管,35 oC下用真空离心浓缩仪浓缩到1.0ml体积左右。浓缩后的样品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后直接用GC-MS分析。
色谱条件如实施例1.
选取代表性挥发、半挥发目标分析物,计算色谱峰面积,以“峰面积/内标面积”为y轴,称取烟粉重量为x轴进行线性拟合,拟合系数列于表1中。拟合系数均在0.999之上,证明该方法对挥发、半挥发次生代谢物具有良好的定量特性。
表1
Claims (4)
1.一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,其特征在于:快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻,采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎,用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中次生代谢物,离心后,吸取上清液低温下旋蒸或离心浓缩,浓缩后的样品溶液直接采用GC-MS进行分析,具体步骤如下:
(1) 烟叶的采集、处理、干燥、粉碎:快速采摘烟株指定部位烟叶,用液氮迅速冷冻以终止生命过程,冷冻干燥24h以除去烟叶水分,干燥过的烟叶粉碎至40-60目,放于-20℃冰箱保存;
(2) 提取次生代谢物:称量50-250mg的烟粉,加入内标溶液、6-8ml甲醇-氯仿萃取溶剂进行超声提取,提取液经高速离心后,取4-6ml上清液进行浓缩,浓缩液经0.45μm微孔滤膜过滤后直接用GC-MS分析;内标溶液为配在萃取溶剂中的氘代尼古丁溶液,浓度为200μg/ml,加入量为100μl;
(3) 检测:采用GC-MS进行检测分析,色谱条件如下:
色谱柱: DB-35ms,30m×0.25mm×0.25μm; 载气,He;流速:1.0ml/min;进样口温度:290℃;进样量:1μL;分流比为5:1;升温程序: 60℃保持4min,然后以5℃/min的升温速度升到280℃,保持10 min,采用GC-MS进行检测分析时,所用色谱柱前接1.0m长的0.25mm内径的空管毛细管作为预柱;
MS参数:采用全扫描模式;采集质量数范围:40-350。
2.根据权利要求1所述的用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,其特征在于:在步骤(1)的处理过程中要迅速去处烟叶主脉,用锡箔纸包裹叶片部分,标记后放入液氮中终止烟叶生命过程,并放于-80℃低温冰箱冷冻保存,在烟叶从冰箱取出至冷冻干燥开始之前,必须用干冰包埋,进行转移。
3.根据权利要求1所述的用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,其特征在于:萃取溶剂为3∶2或4∶1的甲醇-氯仿溶液, 加入量为6-8ml,萃取时间为20-40min。
4.根据权利要求1所述的用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法,其特征在于:步骤(2)中的浓缩方式采用旋蒸或真空离心浓缩。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012100156561A CN102565233B (zh) | 2012-01-18 | 2012-01-18 | 一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012100156561A CN102565233B (zh) | 2012-01-18 | 2012-01-18 | 一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102565233A CN102565233A (zh) | 2012-07-11 |
CN102565233B true CN102565233B (zh) | 2013-12-11 |
Family
ID=46411195
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012100156561A Active CN102565233B (zh) | 2012-01-18 | 2012-01-18 | 一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102565233B (zh) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2844634B1 (en) * | 2012-05-03 | 2021-04-14 | DSM IP Assets B.V. | Process for the preparation of intermediate compounds for preparing vitamin b6 |
CN104101662B (zh) * | 2014-08-01 | 2015-07-08 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测新鲜烟叶萜类化合物代谢组学方法 |
CN104266871B (zh) * | 2014-09-19 | 2017-03-22 | 国家烟草质量监督检验中心 | 带内腔的直线型吸烟机捕集装置及其分析测试方法 |
CN105289773B (zh) * | 2015-09-25 | 2017-04-12 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种用于植物代谢组分析的样品前处理方法 |
CN106290616A (zh) * | 2016-07-29 | 2017-01-04 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草花瓣代谢组学分析方法 |
CN106290618A (zh) * | 2016-07-29 | 2017-01-04 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草种子代谢组学分析方法 |
CN106018654A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-10-12 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草花柱代谢组学分析方法 |
CN106018653A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-10-12 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草根部代谢组学分析方法 |
CN106338569A (zh) * | 2016-07-29 | 2017-01-18 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草茎部代谢组学分析方法 |
CN106018626A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-10-12 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种基于气相色谱质谱的烟草柱头代谢组学分析方法 |
CN106248836B (zh) * | 2016-09-30 | 2018-06-15 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种基于挥发性代谢物的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法 |
CN106483217A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-03-08 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种gc‑ms检测新鲜烟叶中初生代谢物和次生代谢物的方法 |
CN107497412B (zh) * | 2017-08-14 | 2020-10-20 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种用于降低烟草萃取液中重金属离子含量的吸附剂及其应用 |
CN108593817A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-09-28 | 上海烟草集团有限责任公司 | 一种检测造纸法再造烟叶液体样品中致香物质的方法及其前处理方法 |
CN109696503A (zh) * | 2019-02-26 | 2019-04-30 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 一种植物叶片中代谢物的检测方法及其应用 |
CN112362771B (zh) * | 2020-10-29 | 2021-08-20 | 上海鹿明生物科技有限公司 | 基于lcms高通量分析植物次生代谢产物的方法及应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101131378B (zh) * | 2007-09-29 | 2011-05-18 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 烟叶或烟丝中挥发性和半挥发性有机酸的测定方法 |
CN101661022A (zh) * | 2009-09-24 | 2010-03-03 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 利用液相色谱-气相色谱质谱联用技术分离分析烟草中挥发性、半挥发性香味成分的方法 |
-
2012
- 2012-01-18 CN CN2012100156561A patent/CN102565233B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102565233A (zh) | 2012-07-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102565233B (zh) | 一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法 | |
CN102590412B (zh) | 一种检测新鲜烟叶中次生代谢物的衍生化gc-ms方法 | |
CN103293245B (zh) | 同时分析卷烟主流烟气中四种烟草特有亚硝胺(TSNAs)的GC-MS/MS方法 | |
CN103278589B (zh) | 一种挥发、半挥发性成分的检测方法及其装置 | |
CN104020246A (zh) | 同时检测大气中多种挥发性痕量羰基化合物的方法 | |
CN101334385B (zh) | 一种芳香植物挥发性有机物的分析方法 | |
CN103226139B (zh) | 一种气袋-热脱附-气/质联用法分析卷烟主流烟气中的气相全成分的方法 | |
CN104181246B (zh) | 一种烟草中除草剂残留的合相色谱分析方法 | |
CN104142374B (zh) | 一种采用直接衍生/高效液相色谱测定电子烟烟液中羰基化合物含量的方法 | |
CN103257194B (zh) | 同时分析卷烟主流烟气中三种多环芳烃和四种烟草特有亚硝胺的gc-ms/ms方法 | |
CN105675757B (zh) | 一种同时测定卷烟主流烟气中烟草特有n‑亚硝胺和多环芳烃的方法 | |
CN102645496A (zh) | 卷烟主流烟气中挥发性和半挥发性组分在气相和粒相中分配比例的鉴别分析方法 | |
CN103616453A (zh) | 一种测定卷烟主流烟气中氨含量的方法 | |
CN104535695B (zh) | 一种气相色谱-串联质谱同时检测卷烟主流烟气中苯酚、NNK和苯并[a]芘的方法 | |
CN108051524A (zh) | 一种卷烟、加热不燃烧卷烟、电子烟主流烟气中相关成分的测定方法 | |
Ueta et al. | Double-bed-type extraction needle packed with activated-carbon-based sorbents for very volatile organic compounds | |
CN105092750A (zh) | 一种判别烟草代谢组学新鲜烟叶样品质量的方法及试剂盒 | |
CN103257195B (zh) | 同时分析卷烟主流烟气中苯并[a]蒽、屈和苯并[a]芘的GC-MS/MS方法 | |
CN203324233U (zh) | 一种适合于测定易挥发性成分的二维色谱装置 | |
CN101865889A (zh) | 一种卷烟侧流烟气中苯并[a]芘的测定方法 | |
CN110174417A (zh) | 一种滤棒中三乙酸甘油酯的定量检测方法 | |
CN108931596A (zh) | 一种同时检测卷烟主流烟气中乙酸和烟碱的方法 | |
CN104931594A (zh) | 一种五味子中5-羟甲基糠醛的含量检测方法 | |
CN113109472B (zh) | 一种新型烟草制品呼出烟气中主要化学成分及酚类有害成分的同时测定方法 | |
CN103063759A (zh) | 一种卷烟侧流烟气中马来酰肼含量的测定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |