CN102550812A - 有益微生物饲料添加剂及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种有益微生物饲料添加剂及其这种饲料添加剂的制作方法。现有将微生物制成干粉再混合的方法，不仅造成微生物的死亡，而且工艺复杂，多种微生物的作用难以发挥。本发明组成包括：(1)豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH7.0，先接入纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)，接种量为10％，发酵12h后再接入凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans Hammer)，接种量为10％，在37℃发酵48h；对原液做灭菌处理；再接种酵母菌(yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、醋酸杆菌(Acetobacter)，三种菌的数量均为2×10⁸cfu/g，接种量均为1％，经过搅拌混合后，静止培养十天以上，做产品分装。本发明作为一种饲料添加剂。

Description

有益微生物饲料添加剂及其制作方法

技术领域：

本发明涉及一种有益微生物饲料添加剂及其这种饲料添加剂的制作方法。

背景技术：

现有微生物饲料和微生物饲料添加剂，在国内外均有文献报道。但是，由于未掌握克服不同微生物相互抑制作用的方法，使得现有微生物饲料和微生物饲料添加剂只能使用单一微生物菌种或者将多种微生物制成干粉后加以混合，其中的微生物处于失活或休眠状态，又由于在制作过程中造成菌种死亡，作为饲料添加剂，在促进禽、畜、水产品生长、抗病、粪便除臭方面效果差，而且用途单一，微生物发挥作用条件苛刻。现有将微生物制成干粉再混合的方法，不仅造成微生物的死亡，而且工艺复杂，多种微生物的作用难以发挥。

日本琉球大学比嘉昭夫教授于二十世纪八十年代初研制出微生物饲料添加剂，其制品原名为“EM-有效微生物”，公开资料介绍称内含光合细菌、放线菌以及发酵型丝状真菌等共五种十属八十多种微生物，其产品在世界范围内有一定应用。但是，其技术处于完全保密状态，对于其产品内含菌种、菌株数量、培养方法和是否含有有害微生物无从查考。实际应用中，在促进生长、抗病、粪便除臭方面虽有一定作用，但不明显，在改善肉质方面基本没有作用。并且，作为饲料添加剂，其微生物数量若确为八十余种，则不符合我国饲料法规的现行规定：关于用于饲料的微生物种类只有十二种的要求。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种效果全面、明显，制作工艺简单、适用范围广的群体有益微生物饲料添加剂及其制作方法。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

有益微生物饲料添加剂的制作方法，该方法包括如下步骤：

(1)豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH7.0，先接入纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)，接种量为10％，发酵12h后再接入凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans Hammer)，接种量为10％，两菌比例为1∶1，在37℃发酵48h，以微生物所需要的营养元素控制硫元素的含量占营养元素总量的2％-6％，使原液中产生大量有益微生物及其代谢产物；

(2)对步骤(1)得到的原液做灭菌处理，将活菌杀死，使原液中含有大量有益微生物的代谢产物和被杀死的活菌死体；

(3)以步骤(2)得到的原液为新的培养基液，再接种酵母菌(yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、醋酸杆菌(Acetobacter)，三种菌的数量均为2×10⁸cfu/g，接种量均为1％，经过搅拌混合后，静止培养十天以上，做产品分装。

利用上述方法生产的有益微生物饲料添加剂。

有益效果：

1.本发明中多种有益微生物的代谢产物和微生物死体含有帮助消化的胞外酶和有助于提高机体免疫力的小分子蛋白，并且含有改善肉质功能的抗氧化物质、维生素、氨基酸，菌种死体蛋白还可以提高饲料营养价值。本发明中的活体微生物酵母菌、乳酸杆菌和醋酸杆菌具有帮助消化、提高免疫力、杀死和抑制肠道致病菌并减少粪便恶臭的作用。本发明通过将上述具有不同功效的成分加以组合，做成群体有益微生物饲料添加剂，不仅提高了畜、禽、水产品的免疫力，促进生长和粪便除臭效果明显，而且显著改善禽畜产品品质，使肉质鲜嫩，营养均衡。

2.本发发明通过控制营养元素含量的方法配制群体有益微生物的培养基原液，实现群体有益微生物的共生繁殖，克服了不同微生物菌种间相互抑制的作用，并通过在培养之后接种乳酸杆菌、醋酸杆菌和酵母菌活体的二次培养，实现有益微生物能够在营养充分和全面的环境中保持持久活力，活菌数量突破每毫升60亿个，超出国家标准两个数量级，并产生抗病的积极效果，简化了工艺，节约了时间和生产成本。

具体实施方式：

实施例1：

有益微生物饲料添加剂的制作方法，该方法包括如下步骤：

(1)豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH7.0，先接入纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)，接种量为10％，发酵12h后再接入凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans Hammer)，接种量为10％，两菌比例为1∶1，在37℃发酵48h，以微生物所需要的营养元素控制硫元素的含量占营养元素总量的2％-6％，使原液中产生大量有益微生物及其代谢产物；

(2)对步骤(1)得到的原液做灭菌处理，将活菌杀死，使原液中含有大量有益微生物的代谢产物和被杀死的活菌死体；

(3)以步骤(2)得到的原液为新的培养基液，再接种酵母菌(yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、醋酸杆菌(Acetobacter)，三种菌的数量均为2×10⁸cfu/g，接种量均为1％，经过搅拌混合后，静止培养十天以上，做产品分装。

实施例2：

利用上述方法生产的有益微生物饲料添加剂。

实施例3：

1发酵剂的制备

1.1纳豆芽胞杆菌(Bacillus natto)

(1)斜面种子：采用肉汤培养基，37℃培养24h。

(2)摇瓶种子：将纳豆芽胞杆菌由斜面挑取一环接入装有30mL肉汤培养基的250mL锥形瓶中，置于摇床180r/min，37℃振荡培养6h。

1.2凝结芽胞杆菌(Bacillus coagulans Hammer)

(1)斜面种子：采用种子培养基，40℃培养24h。

(2)摇瓶种子：将凝结芽胞杆菌由麸皮斜面挑取一环接入装有25mL种子培养基的250mL锥形瓶中，置于摇床140r/min，40℃振荡培养20h。

2豆粕固态发酵最适菌株的确定

分别采用纳豆芽胞杆菌和凝结芽胞杆菌对豆粕进行单菌、混菌分别在37℃发酵48h，测定发酵豆粕中的活菌数、发酵豆粕中活菌数、豆粕蛋白的水解度等营养指标以确定发酵最适菌株。结果确定用纳豆芽胞杆菌和凝结芽胞杆菌。

3豆粕固态发酵条件研究

以接种方式、豆粕与麸皮质量比、接种量、初始含水量、初始PH、发酵温度和时间为因素，确定固态发酵豆粕最佳发酵条件。

3.1接种方式

考虑到纳豆芽胞杆菌和凝结芽胞杆菌的特性，实验采用了两种不同的接种方式，即A组：将两种菌同时接入；B组：先接纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接凝结芽胞杆菌。以豆粕蛋白水解度、蛋白酶活力、乳酸含量和益生菌含量为指标确定最佳接种方式。结果确定用先接纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接凝结芽胞杆菌。

3.2豆粕与麸皮质量比确定

采用豆粕∶麸皮(w∶w)为9∶1、8∶2、7∶3调节初始含水量为40％，初始pH自然，先接入纳豆芽胞杆菌，接种量为10％，发酵12h后再接入凝结芽胞杆菌，接种量为10％，两菌接入比例为1∶1，37℃发酵48h。测定发酵豆粕的的蛋白水解度、蛋白酶活力和益生菌含量，结果确定发酵基质中豆粕与麸皮最适质量配比为7∶3。

3.3接种量的确定

在确定豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH自然，先接入纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接入凝结芽胞杆菌的前提下，分别采用4％、6％、8％、10％、12％的接种量接入上述两种菌(两菌的比例为1∶1)，然后在37℃发酵48h。测定发酵豆粕的蛋白水解度、蛋白酶活力和益生菌含量。确定两种菌的接种量均为10％。

3.4初始含水量确定

采用豆粕与麸皮质量比为7∶3作为发酵基质，初始pH自然，加入适量水使含水量分别为30％、35％、40％、45％和50％，接种量均为10％(两菌比例为1∶1)，先接入纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接入凝结芽胞杆菌，在37℃发酵48h，测定发酵豆粕的蛋白水解度、蛋白酶活力和益生菌含量等指标确定最适初始含水量。确定初始含水量为40％。

4材料与方法

4.1初始pH确定

在确定发酵基质(豆粕∶麸皮＝7∶3)和初始含水量为40％的基础上，通过加入不同pH的水使发酵基质的初始pH分别为6.0、6.5、7.0和7.5，然后先接入纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接入凝结芽胞杆菌，接种量为10％，两菌比例为1∶1，在37℃发酵48h，测定发酵豆粕的蛋白水解度、蛋白酶活力和益生菌含量以确定最适初始pH。确定初始pH为7.0。

4.2发酵温度的确定

在豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH7.0，先接入纳豆芽胞杆菌，发酵12h后再接入凝结芽胞杆菌，接种量均为10％，两菌比例为1∶1，分别在30℃，32℃，37℃，40℃发酵48h，测定不同温度发酵豆粕的蛋白水解度、蛋白酶活力和益生菌含量，确定最适发酵温度为37℃。

4.3响应面法优化发酵发酵工艺

采用响应面法对发酵工艺条件进行优化，在单因素的基础上，采用响应面分析方法，以豆粕与麸皮质量比，含水量，接种量，初始PH值，发酵时间，培养温度六个因素为自变量，以豆粕蛋白水解度为响应值，对豆粕固态发酵条件进行了优化。

4.4最适工艺下豆粕发酵过程曲线

采用响应面法优化的最适发酵条件，于不同时间取样，测定纳豆芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌活菌数和发酵豆粕蛋白水解度、蛋白酶活力，并绘制发酵过程曲线，以确定最终最佳发酵时间为48h。

由微生物通用营养元素，其中硫的含量为2％-6％，与经过脱氯处理的深井水搅拌混合，经过提取分离去除杂质后制成微生物培养基液，选取十种至一百种光合细菌、放线菌以及发酵型丝状真菌，并将其投入培养基液中，常温静止培养十天至二十五天，在培养基液中微生物繁殖的同时，产生大量胞外酶、小分子蛋白、维生素和氨基酸等。随后做灭菌处理，生成含有大量有益微生物代谢产物和微生物死体的新的培养基液，在此新的培养基液中再次接种酵母菌、乳酸杆菌和醋酸杆菌活菌，其比例为1∶1∶1，经过搅拌混合后，静止培养十天以上，做产品分装。

本发明用来作为喂养禽、畜、水产品饲料的添加剂，不仅可以降低病死率，增加体重，减少粪便恶臭，改善禽、畜生长环境，并显著改善禽、畜肉品质，使之细嫩、粗蛋白和氨基酸含量提高，口味鲜美。

Claims (2)

1.一种有益微生物饲料添加剂的制作方法，其特征是：该方法包括如下步骤：

(1)豆粕与麸皮质量比为7∶3，初始含水量40％，初始pH7.0，先接入纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)，接种量为10％，发酵12h后再接入凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans Hammer)，接种量为10％，两菌比例为1∶1，在37℃发酵48h，以微生物所需要的营养元素控制硫元素的含量占营养元素总量的2％-6％，使原液中产生大量有益微生物及其代谢产物；

(2)对步骤(1)得到的原液做灭菌处理，将活菌杀死，使原液中含有大量有益微生物的代谢产物和被杀死的活菌死体；

(3)以步骤(2)得到的原液为新的培养基液，再接种酵母菌(yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、醋酸杆菌(Acetobacter)，三种菌的数量均为2×10⁸cfu/g，接种量均为1％，经过搅拌混合后，静止培养十天以上，做产品分装。

2.一种利用上述方法生产的有益微生物饲料添加剂。