CN102512482A

CN102512482A - 一种鬼箭羽提取物及其降糖活性与在制备降血糖制品中的应用

Info

Publication number: CN102512482A
Application number: CN2012100098689A
Authority: CN
Inventors: 石任兵; 张兰珍; 姜艳艳; 巴寅颖; 刘倩颖
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-01-13
Filing date: 2012-01-13
Publication date: 2012-06-27

Abstract

本发明涉及鬼箭羽提取物及其制备工艺，质量控制方法、降糖活性及其在制备降血糖制品中的应用。鬼箭羽提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合制备获得。所制得的鬼箭羽提取物中所涵盖的各种活性成分包括黄酮类、酚类、生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类，其中最主要的是黄酮类和酚类，总黄酮含量以重量计为5～100％。经四氧嘧啶所致糖尿病小鼠降血糖试验表明，有效地抑制了葡萄糖灌胃后血糖的升高，对四氧嘧啶造成的胰岛β细胞损伤而引起的实验性糖尿病有一定治疗作用。能够应用于制备降血糖制品中。

Description

一种鬼箭羽提取物及其降糖活性与在制备降血糖制品中的应用

技术领域

本发明涉及一种鬼箭羽提取物及其制备工艺，质量控制方法、及其降糖活性与在制备降血糖制品中的应用。

背景技术

随着糖尿病(DM)患病率的逐年升高，糖尿病已严重威胁人类健康。糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，常导致严重的并发症如冠心病、脑中风、血栓、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、肢体外周动脉闭塞和水肿等。

目前的降糖药物仍以西药为主，存在着低血糖症、胃肠道反应等副作用，还不能从根本上驱除病因及防止并发症。因此寻找高效低毒既能降糖又能治疗并发症的药物，成为目前糖尿病药物开发的方向。传统中草药毒副作用小，治疗糖尿病的作用机理常为多靶点、多效应、多功能的综合作用，可以作用于全身多个脏器和***，在降糖方面具有很好的优势，成为糖尿病新药开发的热点。

鬼箭羽系卫矛科植物卫矛Euonymus alatus by various spectral analyses(Thunb.)sieb.的翅状物的枝条或翅状附属物。具有破血、通经、杀虫、散瘀止痛等功效，主治闭经、产后腹痛、虫积腹痛、跌打损伤等症，广布于我国各地区。近年临床用于治疗糖尿病、高血脂症、动脉硬化等效果显著。民间使用鬼箭羽治疗治疗糖尿病取得了较好的效果。

鬼箭羽的化学成分较为复杂，目前国内外报道有黄酮和黄酮苷、强心苷、五坏酚、甾体、有机酸等类化合物。申请人通过研究发现鬼箭羽提取物及其衍生物具有良好的降血糖等作用，其化学组成主要为黄酮类、酚类成分及其其他类成分，如生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类，并建立了简便易行经济的制备方法分离富集鬼箭羽提取物，为鬼箭羽在治疗糖尿病方面的科学应用开发提供科学依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鬼箭羽提取物，本发明的另一个目的在于提供其制备方法，本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法，本发明的第四个目的在于提供鬼箭羽提取物的降糖活性，本发明的第五个目的在于提供鬼箭羽提取物的制品及其在药品、食品领域的应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明鬼箭羽提取物的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取鬼箭羽水或有机溶剂提取；

步骤2：纯化。

该鬼箭羽提取物中所涵盖的各种活性成分包括黄酮类、生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类，其中最主要的是黄酮类和酚类，总黄酮含量为5～100％；优选为20～90％。

将以上所得提取物，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。

上述步骤1中，所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。优选的提取工艺为鬼箭羽药材用20～90％乙醇回流提取2～4次，每次提取0.5～2小时，溶剂用量以体积份计为8～20倍。合并提取液，减压回收溶剂至干，得鬼箭羽乙醇提取物。

上述步骤2中，提取物采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行纯化：(1)溶剂萃取法；(2)大孔吸附树脂法；(3)超临界流体萃取法；(4)柱色谱法；(5)液液逆流分配色谱法。

其中优选的方法为大孔吸附树脂法，优选工艺为将步骤1所得提取物加水分散溶解，使水溶液以鬼箭羽药材计，浓度为0.02～0.2g/mL，以2000～4000转/分钟的转速离心10～30min，取上清液，将离心后的上清液通过大孔吸附树脂，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶6～1∶15，按照药材重量与树脂体积比计，上样量为0.2～0.8g/mL，0～40％乙醇或甲醇洗脱1～7倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3～8BV/h，用40％～90％乙醇或甲醇洗脱2～6倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h，收集乙醇或甲醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得鬼箭羽提取物。当采用大孔吸附树脂法进行纯化时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同，如D101、D4020、HPD400、AB8、S8、HZ806、D4006、X5、NKAII、NKA9、SP825等，其中优选的为氢键、弱极性或中极性，优选AB8、SP825、860021、D101氢键或弱极性大孔吸附树脂，更优选为AB8型大孔吸附树脂；

当采用溶剂萃取法进行纯化时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、***、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或这些溶剂的混合物，萃取获得鬼箭羽提取物。

当采用柱色谱法进行纯化时，所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH20系列)、ODS、活性炭、纤维素等，所用的洗脱液因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物，也可以是经上述溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。

当采用超临界流体萃取法进行纯化时，萃取时可以使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物：水、醇类、酮类及酯类溶剂。其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物，也可以是经上述溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。

当采用液液逆流萃取法进行纯化时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、***、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得鬼箭羽提取物。

上述纯化方法中，优选的方法为鬼箭羽药材用16倍量50％乙醇提取3次，每次1.5h，合并乙醇提取液，减压回收溶剂，得到薄荷乙醇提取物，加水分散溶解，以鬼箭羽药材计，上样液浓度为0.05g/mL，以3000r/min的速度离心30min，取上清液，上样于AB～8型大孔吸附树脂柱，吸附流速为3BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量为0.5g/mL，待吸附结束后，用5％乙醇洗脱5BV进行除杂，除杂流速为6BV/h，弃去，再用70％乙醇洗脱5BV，洗脱流速为3BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得鬼箭羽黄酮提取物；

本发明鬼箭羽提取物经提取纯化得到，富集了更多的有效部位，并且经四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型试验表明，能够有效地抑制葡萄糖灌胃后血糖的升高，表明鬼箭羽提取物对四氧嘧啶造成的胰岛β细胞损伤而引起的实验性糖尿病有一定治疗作用。

含有本发明提出的提取物的制剂可根据本领域公知的方法制备。可将本发明提出的提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅料结合，制成可作为人药使用的适当的施用形式或剂量形式。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，如液体剂型可以是真溶液剂型、胶体溶液剂型、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、酒剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳液等；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、霜剂、栓剂、散剂、膏剂等。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以是普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药***等。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子包括，赋形剂如碳酸钙、乳糖、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝、葡聚糖、胶态二氧化硅、***胶、明胶、三硅酸镁、角蛋白等；湿润剂与粘合剂如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、***胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂如干燥淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氢化植物油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片等。

为了将单位给药剂型制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可酯、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如***胶、黄耆胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将单位给药剂型制成胶囊，可将本发明提出的提取物与上述各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明提出的提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

为了将单位给药剂型制成口服液体制剂，如乳液、溶液、悬浮液、糖浆等，可根据需要任选添加剂如着色剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、矫味剂(如薄荷、冬青油等)、甜味剂(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。

为了将单位给药剂型制成注射用含水或非水制剂，如溶液剂、混悬型溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体，如稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂，以及常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、植物油(如橄榄油、玉米油等)、明胶、可注射用有机酯(如油酸乙酯、脂肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。为了制备等渗注射剂，还可以添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油。

实验例1本发明鬼箭羽提取物对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的降血糖作用

(一)实验材料

1.实验动物

ICR小鼠50只，雌雄各半，初始体重雄性18～20g，雌性17～19g；由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2009～2010：S饲料购自北京科澳协力公司，每天喂食1次。

2.药品与试剂

供试药：精确称量鬼箭羽提取物3g于250ml三角瓶中，用100ml蒸馏水溶解配制成浓度为30mg/ml，15mg/ml溶液分别作为高剂量，低剂量，分别按体重300mg/kg，150mg/kg给药。

四氧嘧啶：用生理盐水配制成浓度为1％的试液，按70mg/kg尾部静脉注射给药。

阳性药盐酸二甲双胍：精确称取降血糖阳性药二甲双胍1g于100ml三角瓶中，用水溶解配制成浓度为20mg/ml溶剂，按小鼠体重200mg/kg作为阳性药给药。

3.器材

血糖试纸(强生稳豪型，美国)。

(二)实验方法与结果

1.造模步骤

适应性喂养4天，重新称量体重，按小盒分装体重从22g～28g(小鼠体重：雄性20～29g分布，雌性20～25g)按体重计算四氧嘧啶给药量。

禁食(不禁水)7h后，尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg，72小时后尾部取血，用血糖仪测禁食不禁水3～6h后的空腹血糖值，

筛选空腹血糖＞12mmol/L的小鼠作为造模成功小鼠。

2.分组给药

将糖尿病模型小鼠雌性和雄性均随机分为5组：鬼箭羽提取物高剂量组(300mg/kg)，鬼箭羽提取物低剂量组(150mg/kg)，正常对照组，模型对照组，阳性组给药二甲双胍200mg/kg。每组不少于7只动物，雌雄各半。按10ml/kg灌胃给药，每天1次。

3.指标测定

食量和饮水量测定：给药期间，每天称体重，测食量和饮水量。(2)糖耐量测定：给药第21天，禁食不禁水3～6h，取血测定血糖作为服糖前的血糖值，立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，测定给糖后0.5小时，1小时及2小时的血糖值。

4.统计方法

对各试验组测定血糖值取均值，采用SAS软件对上述结果进行组间Student’t检验判定显著性差异。

5.实验结果

造模后，实验各组小鼠血糖值与正常对照比较，均有显著性的升高，表明四氧嘧啶造成的糖尿病模型成功。

糖尿病小鼠给与鬼箭羽提取物治疗后，血糖值逐步下降，给药21天后，在剂量150～300mg/kg时血糖值下降，与模型对照组比较鬼箭羽提取物高低剂量组有生物统计学意义，同样实验条件下，阳性对照药二甲双胍也显示出显著的降糖作用。表明鬼箭羽提取物对四氧嘧啶造成的胰岛β细胞损伤而引起的实验性糖尿病有一定治疗作用，结果见表1

糖耐量试验结果如表2，二甲双胍有效地抑制了葡萄糖灌胃后血糖的升高(P＜0.001)，鬼箭羽高低剂量组也显示了一定的抑制作用。

表1试药对糖尿病小鼠血糖的影响

给药组与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；模型与正常组比较：#P＜0.05，##P＜0.01；

表2试药组对葡萄糖负荷小鼠糖耐量的影响

注：给药组与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；模型与对照组比较：#P＜0.05，##P＜0.01；

(三)结论

鬼箭羽提取物对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有降血糖作用。

实验例2本发明鬼箭羽提取物化学成分研究

利用硅胶柱色谱，聚酰胺柱色谱，Sephadex LH～20柱色谱等方法对本发明鬼箭羽黄酮提取物进行分离纯化，并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。共从本发明鬼箭羽黄酮提取物分离并鉴定了黄酮化合物包括柚皮素、香橙素、二氢槲皮素、橙皮苷、柚皮苷、山奈酚、槲皮素、芹菜素、蒙花苷、山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖苷、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷、金丝桃苷、山柰酚-3，7-二-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3，7-二-O-α-L-鼠李糖苷、儿茶素、去氢双儿茶素A；甾体类化合物包括豆甾-4-烯-3-酮、豆甾-4-烯-3，6-二酮、6-β-羟豆甾-4-烯-3-酮、β-谷甾醇；三萜类包括木栓酮、表木栓醇、羽扇豆醇；生物碱类化合物包括鬼箭羽碱、雷公藤碱、卫矛碱、新鬼箭羽碱；酚类包括原儿茶酸、对羟基苯甲酸、苯甲酸、咖啡酸。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：胶囊剂

取鬼箭羽1kg，50％乙醇16L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.05g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心15min，取上清液通过3LAB～8大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，水洗3倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，70％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取儿茶素对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取鬼箭羽提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为64％。

定性鉴别表明其中还含有酚类、生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类。

实施例2：片剂

取鬼箭羽1kg，70％乙醇16L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)，以3000转/分钟的转速离心20min，取上清液通过3L SP825大孔吸附树脂，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比为1∶12，上样量为0.5g/mL(以生药材量计)，水洗5倍树脂体积，除杂流速为6BV/h，50％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速是6BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为52％。

实施例3：丸剂

取鬼箭羽1kg，水12L煎煮3次，每次提取1小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.15g/mL(以生药材量计)，以2500转/分钟的转速离心30min，取上清液采用液～液逆流萃取法进行制备用石油醚萃取除去脂溶性杂质，然后用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂至干获得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为58％。

实施例4：口服液体制剂

取鬼箭羽1kg，60％甲醇14L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂至干，加乙酸乙酯溶解，以4000转/分钟的转速离心20min，取上清液加500硅胶搅拌均匀，上样于3kg硅胶，吸附流速3ml/min，乙酸乙酯洗脱500ml，乙酸乙酯～甲醇1∶1洗脱1000ml收集乙酸乙酯和乙酸乙酯甲醇部分洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液体制剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为39％。

实施例5：注射剂

取鬼箭羽1kg，30％乙醇16L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.2g/mL(以生药材量计)，以3000转/分钟的转速离心20min，取上清液通过1L Sephadex LH～20凝胶，吸附流速6ml/min，水洗5倍凝胶体积，除杂流速为6ml/min，70％甲醇洗脱5倍凝胶体积，洗脱流速是6ml/min，，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

实施例6：

取鬼箭羽1kg，50％乙醇12L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.05g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心10min，取上清液通过3LAB～8大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，水洗5倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，50％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速是6BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为60％。

实施例7：

取鬼箭羽1kg，60％乙醇12L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心15min，取上清液通过3LAB～8大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.5g/mL(以生药材量计)，水洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，70％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为48％。

实施例8：

取鬼箭羽1kg，50％乙醇16L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心20min，取上清液通过3L SP825大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶10，上样量为0.5g/mL(以生药材量计)，水洗3倍树脂体积，除杂流速为6BV/h，50％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是6BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％饮***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为50％。

实施例9：

取鬼箭羽1kg，70％乙醇14L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.05g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心20min，取上清液通过3L 860021型大孔吸附树脂，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比为1∶12，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，水洗3倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，80％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是6BV/h，收集80％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

测定方法：采用三氯化铁-铁***可见分光光度法，分别精密吸取一定量的儿茶素对照品溶液和样品溶液，置于25ml棕色瓶中，加入95％乙醇至5ml，再加入0.6％三氯化铁～0.9％铁***溶液(体积1∶1)1ml和0.3％十二烷基硫酸钠，放在暗处反应5分钟，再加入0.5mol/L冰醋酸，定容至25ml，再放在暗处反应30min，在760nm处检测。外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为56％。

实施例10：

取鬼箭羽1kg，50％乙醇16L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂至干，加水进行稀释，使溶液浓度为0.15g/mL(以生药材量计)，以4000转/分钟的转速离心20min，取上清液通过3L聚酰胺，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶10，上样量为0.75g/mL(以生药材量计)，水洗5倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，70％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是6BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明鬼箭羽提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。

总黄酮含量测定方法：

Claims

1.一种具有降血糖作用的鬼箭羽提取物，其特征在于该提取物的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取鬼箭羽药材，水或有机溶剂提取；

步骤2：纯化；

该鬼箭羽提取物中所涵盖的各种活性成分包括黄酮类、酚类、生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类。

2.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征步骤1中，所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。

3.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征步骤1中，鬼箭羽药材用20～90％乙醇回流提取2～4次，每次提取0.5～2小时，溶剂用量以体积份计为8～20倍。合并提取液，减压回收溶剂至干，得鬼箭羽乙醇提取物。

4.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，将步骤1所得提取物采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行纯化：(1)溶剂萃取法；(2)大孔吸附树脂法；(3)超临界流体萃取法；(4)柱色谱法；(5)液液逆流分配色谱法。

5.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，将步骤1所得提取物加水分散溶解，使水溶液以鬼箭羽药材计，浓度为0.02～0.2g/mL，离心10～30min，取上清液，将离心后的上清液通过大孔吸附树脂，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶6～1∶15，按照药材重量与树脂体积比计，上样量为0.2～0.8g/mL，0～40％乙醇或甲醇洗脱1～7倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3～8BV/h，用40％～90％乙醇或甲醇洗脱2～6倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h，收集乙醇或甲醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得鬼箭羽提取物。

6.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，当采用大孔吸附树脂法纯化时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同，如D101、D4020、HPD400、AB8、S8、HZ806、D4006、X5、NKA II、NKA9、SP825等。

7.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，当采用溶剂萃取法纯化时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂，萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或这些溶剂的混合物，萃取获得鬼箭羽提取物。

8.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，当采用柱色谱法进行纯化时，所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、Sephadex系列或Sephadex LH20系列葡聚糖凝胶、ODS、活性炭、纤维素等，所用的洗脱液因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂

9.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，当采用超临界流体萃取法进行纯化时，萃取时可以使用以下任一种类溶剂或溶剂混合物：水、醇类、酮类及酯类溶剂。

10.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，其特征在于步骤2中，当采用液液逆流萃取法进行纯化时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得鬼箭羽提取物。

11.如权利要求1所述的鬼箭羽提取物，所涵盖的各种活性成分包括黄酮类、生物碱类、三萜类、甾体类、有机酸类，多糖类。其中最主要的是黄酮类和酚类，总黄酮含量为5～100％；优选为20～90％。

12.如权利要求1～11任一所述的鬼箭羽提取物，其特征在于加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。

13.如权利要求1～12任一所述的鬼箭羽提取物的制备方法，其特征在于步骤1中，所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。优选的提取工艺为鬼箭羽药材用20～90％乙醇回流提取2～4次，每次提取0.5～2小时，溶剂用量以体积份计为8～20倍。合并提取液，减压回收溶剂至干，得鬼箭羽乙醇提取物。

14.如权利要求1～12任一所述的鬼箭羽提取物的制备方法，将步骤1所得提取物采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行纯化：(1)溶剂萃取法；(2)大孔吸附树脂法；(3)超临界流体萃取法；(4)柱色谱法；(5)液液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法，优选工艺为将步骤1所得提取物加水分散溶解，使水溶液以鬼箭羽药材计，浓度为0.02～0.2g/mL，离心10～30min，取上清液，将离心后的上清液通过大孔吸附树脂，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶6～1∶15，按照药材重量与树脂体积比计，上样量为0.2～0.8g/mL，0～40％乙醇或甲醇洗脱1～7倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3～8BV/h，用40％～90％乙醇或甲醇洗脱2～6倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h，收集乙醇或甲醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得鬼箭羽提取物。

15.如权利要求1～12任一所述的鬼箭羽提取物在制备降血糖作用制品中的应用。