CN102477071B - Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用 - Google Patents

Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102477071B
CN102477071B CN 201010573551 CN201010573551A CN102477071B CN 102477071 B CN102477071 B CN 102477071B CN 201010573551 CN201010573551 CN 201010573551 CN 201010573551 A CN201010573551 A CN 201010573551A CN 102477071 B CN102477071 B CN 102477071B
Authority
CN
China
Prior art keywords
boc
och
lys
nch
pro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 201010573551
Other languages
English (en)
Other versions
CN102477071A (zh
Inventor
赵明
彭师奇
金绍明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Capital Medical University
Original Assignee
Capital Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Capital Medical University filed Critical Capital Medical University
Priority to CN 201010573551 priority Critical patent/CN102477071B/zh
Publication of CN102477071A publication Critical patent/CN102477071A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102477071B publication Critical patent/CN102477071B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了溶血栓寡肽及其制备方法和应用。本发明提供了结构式为通式I所示的具有溶血栓活性的寡肽，式中n＝6、8、10、12、14或16。溶血栓活性实验表明，本发明通式I所示的寡肽具有优秀的溶血栓活性，能作为溶血栓药物应用。

Description

Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用
技术领域
本发明涉及寡肽，尤其涉及具有溶血栓活性的寡肽及其合成方法，本发明还涉及它们作为溶血栓药物的应用，本发明属于寡肽领域。 
背景技术
P6A(ARPAK)为纤维蛋白β链降解产物之一，具有溶血栓活性。在P6A的代谢研究中发现了代谢产物PAK。在大鼠动静脉旁路插管溶血栓模型上，PAK的溶血栓活性比母体P6A强。按照一般的认识，多肽在体内都会迅速降解。通过PAK的结构修饰延缓体内降解速率和提高溶血栓活性，是寡肽溶血栓药物研究的重要途径。 
按照一般的认识，含多肽的两亲性分子，例如脂肪醇链修饰的多肽，在适当的条件下通过分子间非共价键相互作用可发生自组装，形成纳米结构。借助纳米结构可改善多肽在体内的输送、延缓多肽在体内的降解速率和提高多肽的体内活性。根据这些认识，发明人提出了本发明。 
发明内容
本发明目的之一是提供具有溶血栓活性的寡肽； 
本发明目的之二是提供一种合成上述具有溶血栓活性寡肽的方法。 
本发明目的之三是将上述寡肽应用于制备溶血栓药物。 
本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的： 
具有溶血栓活性的寡肽，其结构式为通式I所示： 
Figure BSA00000373928300021
通式I 
式中n＝6、8、10、12、14或16。 
一种合成上述通式I所述寡肽的方法，包括以下步骤： 
1)、Boc-Pro与Ala-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-OBzl； 
2)、将Boc-Pro-Ala-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala； 
3)、Boc-Pro-Ala与Lys(Boc)-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl； 
4)、将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)； 
5)、Boc-Asp与饱和脂肪醇缩合为Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3，其中n＝6、8、10、12、14或16； 
6)、Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱去Boc生成Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3； 
7)、Boc-Lys(Boc)与Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3； 
8)、Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3； 
9)、Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)与Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)n-CH3]-OCH2(CH2)nCH3； 
10)、Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2-(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱除Boc。 
为了达到更好的合成效果，步骤1)优选在DCCHOBt存在下Boc-Pro在无水THF中与Ala-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-OBzl；步骤2)优选在甲醇中将Boc-Pro-Ala-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala；步骤3)优选在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala在无水THF中与Lys(Boc)-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl； 
步骤4)优选在甲醇中将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)；步骤5)优选在DCC存在下Boc-Asp在无水THF中与饱和脂肪 醇缩合为Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3；步骤6)优选在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱Boc生成Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3；步骤7)优选在DCC和HOBt存在下Boc-Lys(Boc)在无水THF中与Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3；步骤8)优选在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3；步骤9)优选在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)在无水THF中与Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3；步骤10)优选在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱Boc。 
体外和体内溶血栓活性试验表明，本发明通式I所示的寡肽化合物具有优秀的溶血栓活性活性，可作为溶血栓药物应用。 
缩略术语 
THF  四氢呋喃 
HOBT N-羟基苯并三氮唑 
DCC  二环己基羰二亚胺 
TLC  薄层色谱 
Boc  叔丁氧羰基 
附图说明
图1本发明通式I化合物的结构式。 
图2本发明通式I化合物的合成路线图；i)DCC、HOBt和NMM；ii)Pd/C，H2；iii)HCl/EA。 
图3本发明化合物6b的透射电子显微镜照片。 
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性 的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。 
实施例1制备Boc-Asp[OCH2(CH2)6CH]-OCH2(CH2)6CH3(1a) 
将3.0g(12.9mmol)Boc-Asp用20ml无水THF溶解。向得到的溶液中加入4.17g(30.9mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBT)。10分钟后，在冰浴下加入6.37g(30.9mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)与25ml无水THF的溶液，得到反应液(I)。把4.02g(30.9mmol)脂肪醇链溶于10ml无水THF并搅拌30分钟，得到反应液(II)。冰浴下将反应液(II)加入反应液(I)中，然后室温搅拌12h，TLC(石油醚/乙酸乙酯，15：1)显示Boc-Asp消失。反应混合物过滤，滤除二环己基脲(DCU)。滤液减压浓缩，除去THF。残留物用250ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、5％KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯相用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，残留物经柱层析纯化，得到4.23g(72％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：458[M+H]+. 
实施例2制备Boc-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(1b) 
按照实施例1的方法由5.0g(21.5mmol)Boc-Asp和8.14g(51.5mmol)CH3(CH2)8CH2OH制得7.60g(69％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：514[M+H]+. 
实施例3制备Boc-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(1c) 
按照实施例1的方法由5.0g(21.5mmol)Boc-Asp和9.58g(51.5mmol)CH3(CH2)10CH2OH制得7.94g(65％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：570[M+H]+. 
实施例4制备Boc-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(1d) 
按照实施例1的方法由5.0g(21.5mmol)Boc-Asp和11.02g(51.5mmol)CH3(CH2)12CH2OH制得8.32g(62％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：626[M+H]+. 
实施例5制备Boc-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(1e) 
按照实施例1的方法由3.0g(12.9mmol)Boc-Asp和7.48g(30.9mmol)CH3(CH2)14CH2OH制得5.16g(59％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：682[M+H]+. 
实施例6制备Boc-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(1f) 
按照实施例1的方法由3.0g(12.9mmol)Boc-Asp和8.34g(30.9mmol)CH3(CH2)16CH2OH制得4.94g(52％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：738[M+H]+. 
实施例7制备Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(2a) 
将4.23g(9.26mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3溶解在45ml 4N氯化氢-乙酸乙酯溶液中，室温搅拌1小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯，15∶1)显示Boc-Asp(OC8H17)-OC8H17消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复加少量***进行减压浓缩以除去氯化氢。最后加少量***将残留物研磨成3.39g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：358[M+H]+. 
实施例8制备Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(2b) 
按照实施例7的方法5.96g(11.6mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得4.96g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：414[M+H]+. 
实施例9制备Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(2c) 
按照实施例7的方法6.28g(11.0mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得5.24g(94％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：470[M+H]+. 
实施例10制备Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(2d) 
按照实施例7的方法6.32g(10.1mmol) Boc-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得5.39g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：526[M+H]+. 
实施例11制备Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(2e) 
按照实施例7的方法5.18g(7.6mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得4.27g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：582[M+H]+. 
实施例12制备Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(2f) 
按照实施例7的方法4.94g(6.7mmol)Boc-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得4.06g(90％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：638[M+H]+. 
实施例13制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(3a) 
按照实施例1的方法由1.25g(3.6mmol)Boc-Lys(Boc)和1.18g(3.0mmol)Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得1.63g(80％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：686[M+H]+. 
实施例14制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(3b) 
按照实施例1的方法由1.25g(3.6mmol)Boc-Lys(Boc)和1.35g(3.0mmol)Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得1.68g(75％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：742[M+H]+. 
实施例15制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(3c) 
按照实施例1的方法由1.25g(3.6mmol)Boc-Lys(Boc)和1.52g(3.0mmol)Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得1.72g(72％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：798[M+H]+. 
实施例16制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(3d) 
按照实施例1的方法由1.25g(3.6mmol)Boc-Lys(Boc)和1.69g(3.0mmol)Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得1.72g(67％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：854[M+H]+. 
实施例17制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(3e) 
按照实施例1的方法由1.25g(3.6mmol)Boc-Lys(Boc)和1.85g(3.0mmol)Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得1.77g(65％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：910[M+H]+. 
实施例18制备Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(3f) 
按照实施例1的方法由0.83g(2.4mmol)Boc-Lys(Boc)和1.35g(2.0mmol)Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得1.64g(85％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：966[M+H]+. 
实施例19制备Lys-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(4a) 
按照实施例7的方法由1.63g(2.4mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3制得1.17g(88％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：486[M+H]+. 
实施例20制备Lys-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(4b) 
按照实施例7的方法由1.68g(2.26mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得1.27g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：542[M+H]+. 
实施例21制备Lys-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(4c) 
按照实施例7的方法由1.72g(2.16mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得1.34g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：598[M+H]+. 
实施例22制备Lys-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(4d) 
按照实施例7的方法由1.72g(2.02mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得1.301g(89％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：654[M+H]+. 
实施例23制备Lys-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(4e) 
按照实施例7的方法由1.77g(1.95mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得1.39g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：710[M+H]+. 
实施例24制备Lys-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(4f) 
按照实施例7的方法由1.64g(1.70mmol)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得1.35g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：766[M+H]+. 
实施例25制备Boc-Pro-Ala-OBzl 
按照实施例1的方法从3.0g(14.0mmol)Boc-Pro和5.88g(16.7mmol)Tos·Ala-Obzl制得到5.19g(99％)目标化合物，为黄色粉末。ESI-MS(m/e)：377[M+H]+. 
实施例26制备Boc-Pro-Ala 
将5.19g(13.8mmol)Boc-Pro-Ala-OBzl用25ml甲醇溶解。往溶液中加入1.0g Pd/C、通H2(0.02Mba)并室温搅拌至Boc-Pro-Ala-OBzl消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得3.59g(91％)目标化合物，为黄色粉末。ESI-MS(m/e)：285[M-H]-. 
实施例27制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl 
按照实施例1的方法由6.76g(23.6mmol)Boc-Pro-Ala和10g(19.7mmol)Tos·Lys(Boc)-OBzl制得6.78g(57％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：605[M+H]+. 
实施例28制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc) 
按照实施例14的方法由6.78g(11.2mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl制得5.36g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：513[M-H]-. 
实施例29制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2(CH2)6CH3(5a) 
按照实施例1的方法由1.32g(2.56mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和650mg(1.16mmol)Lys-Asp(OC8H17)-OC8H17制得180mg(11％)目标化合物，为无色粉末。Mp 163℃；[α]D 25＝-648(c＝0.51，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1478[M+H]+.IR(KBr)：3294，3235，2974，2932，2860，1639，1516，1456，1398，1393，1366，1273，1250，1223，1171，1121.1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.71-7.40(m，3H)，7.23-7.21(m，1H)，7.02-6.93(m，2H)，5.22-4.96(m，2H)，4.83-4.81(m，1H)，4.54-4.49(m，1H)，4.42-4.28(m，4H)，4.24-4.16(m，2H)，4.11-4.04(m，4H)，3.47-3.39(m，4H)，3.26-3.16(m，1H)，3.07(s，4H)，2.94-2.81(m，2H)，2.16-2.02(m，4H)，1.94-1.82(m，7H)，1.73-1.67(m，3H)，1.62-1.58(m，5H)，1.46-1.41(m，41H)，1.36-1.26(m，33H)，0.88-0.86(t，J＝5.5Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例30制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3(5b) 
按照实施例1的方法由1.20g(2.33mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和650mg(1.06mmol)Lys-Asp(OC10H21)-OC10H21制得185mg(11％)目标化合物，为无色粉末。Mp 130℃；[α]D 25＝-568(c＝0.59，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1556[M+Na]+；IR(KBr)：3401，3283，3237，3208，3088，2976，2932，2857，2359，2332，1738，1634，1545，1516，1506，1479，1456，1393，1366，1277，1250，1229，1207，1167，1123，775. 1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.49-7.32(m，2H)，7.26-7.07(m，1H)，6.99-6.88(m，2H)，5.21-5.07(m，2H)，4.85-4.82(m，1H)，4.52-4.35(m，5H)，4.26-4.21(m，2H)，4.14-4.06(m，4H)，3.72-3.68(m，1H)，3.56-3.48(m，5H)，3.31-3.21(m，1H)，3.14-3.08(m，4H)，2.98-2.81(m，2H)，2.19-1.93(m，14H)，1.74-1.71(m，2H)，1.62-1.59(m，5H)，1.52-1.39(m，50H)，1.33-1.28(m，30H)，0.91- 0.88(t，J＝6.5Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例31制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(5c) 
按照实施例1的方法由1.18g(2.30mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和700mg(1.04mmol)Lys-Asp(OC12H25)-OC12H25制得210mg(13％)目标化合物，为无色粉末。Mp 156℃；[α]D 25＝-467(c＝0.72，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1612[M+Na]+；IR(KBr)：3316，3296，3285，3252，3244，3046，2978，2926，2855，1738，1690，1639，1533，1516，1506，1476，1456，1395，1366，1277，1252，1169，1123，984，779.1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.88-7.71(m，1H)，7.47-7.37(m，2H)，7.21-7.11(m，1H)，6.94-6.85(m，2H)，5.08-4.98(m，1H)，4.84-4.81(m，1H)，4.46-4.36(m，4H)，4.22(s，2H)，4.12-3.99(m，4H)，3.48-3.46(m，4H)，3.22(s，2H)，3.08-3.07(m，4H)，2.93-2.81(m，2H)，2.13-2.02(m，3H)，1.92-1.89(m，6H)，1.76-1.58(m，7H)，1.46-1.37(m，43H)，1.32-1.22(m，38H)，0.89-0.86(t，J＝5.7Hz，J＝6.9Hz，6H). 
实施例32制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3(5d) 
按照实施例1的方法由1.17g(2.27mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和750mg(1.03mmol)Lys-Asp(OC14H29)-OC14H29制得313mg(18％)目标化合物，为无色粉末。Mp 135℃；[α]D 25＝-946(c＝0.34，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1646[M+H]+；IR(KBr)：3292，2976，2926，2857，1738，1699，1686，1639，1530，1506，1456，1393，1366，1277，1450，1207，1173，1119.1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.66-7.39(m，2H)，7.22-7.13(m，1H)，7.01-6.91(m，2H)，5.23-4.96(m，2H)，4.83-4.81(m，1H)，4.53-4.34(m，5H)，4.22(s，2H)，4.11-4.04(m，4H)，3.51-3.43(m，4H)，3.24-3.17(m，1H)，3.08(s，4H)，2.95-2.84(m，2H)，2.50(s，1H)，2.15-2.03(m，4H)，1.94-1.83(m，7H)，1.72-1.69(m，2H)，1.62-1.58(m，5H)，1.46-1.42(m，42H)，1.37-1.25(m，58H)，0.88-0.86(t，J＝6.5Hz，J＝6.5Hz，6H). 
实施例33制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(5e) 
按照实施例1的方法由1.16g(2.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和800mg(1.02mmol)Lys-Asp(OC16H33)-OC16H33，经过柱层析制得326mg(19％)目标化合物，为无色粉末。Mp 127℃；[α]D 25＝-865(c＝0.37，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1724[M+Na]+；IR(KBr)：3289，2926，2855，1738，1734，1690，1639，1516，1506，1447，1395，1366，1275，1252，1207，1173，1121.1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.45-7.32(m，2H)，7.20-7.09(m，1H)，6.91-6.81(m，2H)，5.09-4.95(m，1H)，4.85-4.81(m，1H)，4.53-4.34(m，5H)，4.22(s，2H)，4.11-4.01(m，4H)，3.72-3.68(m，2H)，3.55-3.47(m，4H)，3.29-3.23(m，1H)，3.08(s，4H)，3.01-2.77(m，2H)，2.39-2.28(m，2H)，2.21-2.02(m，4H)，1.96-1.82(m，7H)，1.72-1.67(m，3H)，1.61-1.55(m，5H)，1.47-1.42(m，40H)，1.38-1.35(m，10H)，1.28-1.19(m，54H)，0.89-0.87(t，J＝6.0Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例34制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3(5f) 
按照实施例1的方法由1.15g(2.23mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和850mg(1.01mmol)Lys-Asp(OC18H37)-OC18H37制得241mg(14％)目标化合物，为无色粉末。Mp 138℃；[α]D 25＝-905(c＝0.35，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：1759[M+H]+；IR(KBr)：3298，3286，2926，2854，1687，1639，1529，1456，1392，1365，1274，1246，1170，1118.1H-NMR(500MHz，CDCl3)：δ/ppm＝7.43-7.36(m，1H)，7.19(s，1H)，6.919-6.88(m，2H)，5.06-4.83(m，2H)，4.52-4.35(m，5H)，4.23(s，2H)，4.13-4.06(m，5H)，3.72-3.68(m，1H)，3.51-3.48(m，5H)，3.25(s，1H)，3.09(s，4H)，2.92-2.83(m，2H)，2.22-2.08(m，5H)，1.94-1.89(m，8H)，1.73-1.69(m，5H)，1.63-1.59(m，6H)，1.48-1.42(m，37H)，1.39-1.34(m，9H)，1.33-1.27(m，64H)，0.90-0.88(t，J＝6.0Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例35制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)6CH3]-OCH2-(CH2)6CH3(6a) 
按照实施例7的方法由135mg(0.09mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc-Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2(CH2)8CH3制得106mg(95％)目标化合物，为无色粉末。Mp 132℃；[α]D 25＝-134(c＝0.51，H2O)；ESI-MS(m/e)：1078[M+H]+；IR(KBr)：3437，3387，3250，3242，3227，3157，3078，3057，2928，2857，1734，1653，1616，1533，1456，1362，1287，1240，1206，1171.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝10.05(s，1H)，8.85-8.84(d，J＝7.0Hz，1H)，8.57-8.44(m，1H)，8.18-8.07(m，3H)，4.64-4.62(m，1H)，4.36-4.34(m，2H)，4.26-4.18(m，5H)，4.03-4.00(m，4H)，3.23-3.19(m，4H)，3.05-2.97(m，2H)，2.74-2.71(m，6H)，2.37-2.30(m，2H)，1.89-1.83(m，6H)，1.69-1.63(m，3H)，1.58-1.52(m，11H)，1.38-1.22(m，36H)，0.87-0.85(t，J＝5.5Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例36制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)8CH3]-OCH2-(CH2)8CH3(6b) 
按照实施例7的方法由100mg(0.07mmol)Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2-(CH2)10CH3制得76mg(91％)目标化合物，为无色粉末。Mp 134℃；[α]D 25＝-78(c＝0.59，H2O)；ESI-MS(m/e)：1134[M+H]+；IR(KBr)：3437，3420，3404，3377，3356，3264，3248，3057，3021，2955，2928，2857，2762，2656，1740，1657，1547，1458，1391，1288，1240，1225，1207，1171，727.1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝10.09(s，1H)，8.86(s，1H)，8.44-8.43(d，J＝7.5Hz，1H)，8.34-7.96(m，5H)，4.64-4.62(d，J＝5.5Hz，1H)，4.36-4.32(m，2H)，4.23-4.18(m，5H)，4.06-3.96(m，4H)，3.26-3.18(m，4H)，3.04-2.97(m，2H)，2.75-2.73(m，6H)，2.37-2.31(m，2H)，1.91-1.81(m，6H)，1.68-1.54(m，14H)，1.36-1.22(m，43H)，0.86-0.84(m，6H). 
实施例35制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3(6c) 
按照实施例7的方法由110mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc-Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)10CH3]-OCH2(CH2)10CH3制得83mg(90％)目标化合物，为无色粉末。Mp 142℃；[α]D 25＝-55(c＝0.72，H2O)；ESI-MS(m/e)：1190[M+H]+；IR(KBr)：3225，3200，3186，3173，3048，3039，3015，2926，2855，1734，1653，1614，1549，1531，1456，1377，1362，1306，1287，1254，1206，1169.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.82-8.80(m，2H)，8.44-8.42(m，2H)，8.18-8.16(m，2H)，8.08-7.95(m，5H)，4.63-4.61(m，1H)，4.35(s，2H)，4.19(s，5H)，4.01(s，4H)，3.20-3.17(m，5H)，3.00(s，3H)，2.74(s，6H)，2.39-2.28(m，4H)，2.14-1.99(m，1H)，1.88-1.83(m，6H)，1.62-1.52(m，13H)，1.38-1.19(m，47H)，0.86-0.83(m，6H). 
实施例38制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2-(CH2)12CH3(6d) 
按照实施例7的方法由150mg(0.09mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc-Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)12CH3]-OCH2(CH2)12CH3制得119mg(94％)目标化合物，为无色粉末。Mp 144℃；[α]D 25＝-114(c＝0.34，H2O)；ESI-MS(m/e)：1246[M+H]+；IR(KBr)：3275，3202，3183，3169，3075，3053，2926，2855，1734，1651，1614，1545，1520，1504，1456，1290，1252，1238，1173.1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝10.05-10.00(m，1H)，8.85-8.84(d，J＝7.5Hz，1H)，8.57-8.39(m，1H)，8.18-7.96(m，3H)，4.64-4.62(m，1H)，4.36-4.34(m，2H)，4.23-4.17(m，5H)，4.08-3.96(m，4H)，3.62-3.44(m，1H)，3.22-3.19(m，4H)，3.06-2.94(m，2H)，2.73-2.71(m，5H)，2.31-2.29(m，2H)，1.92-1.85(m，7H)，1.79-1.64(m，4H)，1.61-1.54(m，11H)，1.36-1.24(m，60H)，0.87-0.84(t，J＝6.0Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例39制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3(6e) 
按照实施例7的方法由185mg(0.11mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc-Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3制得150mg(95％)目标化 合物，为无色粉末。Mp 145C；[α]D 25＝-97(c＝0.37，H2O)；ESI-MS(m/e)：1302[M+H]+；IR(KBr)：3302，3215，3208，3198，3051，2924，2853，2822，1736，1653，1545，1535，1456，1342，1308，1256，1242，1169.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝10.03(m，1H)，8.84(s，1H)，8.57-8.50(m，1H)，8.43-7.98(m，5H)，4.64-4.63(d，J＝5.0Hz，1H)，4.36-4.32(m，2H)，4.23-4.15(m，5H)，4.04-3.98(m，4H)，3.57-3.48(m，4H)，3.23-3.19(m，5H)，3.03-2.98(m，2H)，2.73(s，6H)，2.36-2.30(m，2H)，1.91-1.86(m，7H)，1.63-1.54(m，15H)，1.38-1.24(m，67H)，0.86-0.84(t，J＝6.0Hz，J＝7.0Hz，6H). 
实施例40制备Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2-(CH2)16CH3(6f) 
按照实施例7的方法由105mg(0.06mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc-Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)16CH3]-OCH2(CH2)16CH3制得82mg(91％)目标化合物，为无色粉末。Mp 147℃；[α]D 25＝-181(c＝0.12，H2O)；ESI-MS(m/e)：1358[M+H]+；IR(KBr)：3427，3333，3208，2920，2851，2467，1929，1734，1622，1395，1336，1177，995，835，700，446.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.80-8.75(m，1H)，8.53-8.39(m，1H)，8.06-7.94(m，2H)，4.64-4.61(m，1H)，4.36-4.34(m，2H)，4.23-4.18(m，5H)，4.03-3.97(m，3H)，3.63(s，1H)，3.54-3.49(m，2H)，3.22-3.18(m，5H)，3.01-2.97(m，2H)，2.73(s，7H)，2.31-2.29(m，3H)，1.91-1.83(m，8H)，1.74-1.53(m，28H)，1.27-1.23(m，72H)，0.87-0.83(t，J＝5.1Hz，J＝6.6Hz，6H). 
实验例1本发明化合物6a-f的体内溶血栓活性实验 
将200-220g雄性SD大鼠用20％乌拉坦溶液(6ml/kg，i.p.)进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，在远心端插管，松开动脉夹，放出约1ml动脉血并装在1ml的EP管中。往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶塞密封)中注入0.1ml大鼠动脉血液，往管内迅速***一支不锈钢质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的 不锈钢丝绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号型。血液凝固15min后，打开玻璃管底部的胶塞，用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中取出被血栓包裹的血栓固定螺旋，精确称重。 
旁路插管由3段构成，中段为聚乙烯胶管，长60mm，内径3.5mm，两端为相同的聚乙烯管，长100mm，内径1mm，外径2mm，该管的一端拉成尖管(用于***大鼠颈动脉或静脉)，外径1mm，另一端的外部套一段长7mm，外径3.5mm的聚乙烯管(加粗，用于***中段的聚乙烯胶管内)。3段管的内壁均硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg)备用。 
分离大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口***左颈外静脉开口的近心端，同时远离旁路管中段(含精确称重的血栓固定螺旋)内血栓固定螺旋的托柄。用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水(50IU/kg)，此时注射器不撤离聚乙烯管，用止血钳夹住注射器与聚乙烯管之间的软管。在右颈总动脉的近心端用动脉夹止血，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部***动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。 
用头皮针将生理盐水(3ml/kg)，尿激酶的生理盐水溶液(20000IU/kg)或1nmol/kg 6a-f(实施例35-40所制备)的生理盐水溶液通过旁路管的中段(含精确称重的血栓固定螺旋)，刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路溶栓模型，缓慢将注射器中的液体注入到血液中(约6min)，使生理盐水(空白对照)，尿激酶(阳性对照)或本发明的化合物6a-f通过血液循环，按静脉-心脏-动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时计时，1h后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重。计算每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的质量差，统计并评价化合物的体内溶栓活性。结果表明，6a-f有优秀的体内溶栓活性(表1)。 
表1 1nmol/kg本发明化合物6a-f对大鼠血栓减重的影响a
Figure BSA00000373928300161
a)n＝12，血栓减重用均值±SD mg表示；b)与生理盐水组比，p＜0.01。 
实验例2剂量对本发明化合物6d体内溶血栓活性的影响 
按照实验例1的实验方法，选取溶栓效果最好的6d(实施例38所制备)考察1nmol/kg、0.01nmol/kg和0.0001nmol/kg三个剂量下的溶栓活性。结果表明，本发明化合物6d的溶栓作用显示剂量依赖性(表2)。 
表26d的剂量对大鼠血栓减重的影响a
Figure BSA00000373928300162
a)n＝10，血栓减重用均值±SD mg表示；b)与生理盐水及0.01 nmol/kg 6d组比，p＜0.01；c)与生理盐水及0.0001nmol/kg 6d组比，p＜0.01；d)与生理盐水相比，p＞0.05。 
实验例3本发明化合物6a-f的体外溶血栓活性实验 
1)血栓形成装置的制作 
将内径4mm，外径5.5mm，长度18mm的一段玻璃管安放在一个塑料易拆卸底座上，玻璃管和塑料底座的接缝处用一段乳胶管密封。玻璃管中放置一不锈钢丝螺旋，螺旋直径1mm，长度20mm，包括一端的2mm长的挂钩，血液即凝固在不锈钢螺旋的周围，称重时可将血栓挂起，在孵育时可以将血栓挂在反应瓶的溶液中，不碰到四壁，以免损伤血栓。 
2)反应瓶的制作 
用带橡胶塞的10ml西林瓶，在橡胶塞上穿一根不锈钢丝，在瓶中的一端弯成钩，血栓挂在钩上，悬浮于瓶内待测化合物溶液中，不锈钢丝可以在橡胶塞上上下移动，调节血栓在溶液中的高度，使其刚好浸在待测溶液中。体内环境的模拟：按照大鼠平均体重估计每只大鼠有13ml血液，如果是大鼠体内血栓模型，可能约8ml的血液可接触到血栓，故反应瓶中加入8ml待测溶液，在37℃恒温摇床孵育。 
3)血栓的制备 
将350-400g雄性SD大鼠用20％乌拉坦(6ml/kg，i.p.)，麻醉，仰卧固定，分离右颈总动脉，动脉夹夹闭近心端，动脉夹上方***30mm长聚乙烯管，每次放出约3-4ml血，大约可放2-3次，用硅烷化的5ml注射器立即将放出的血液逐个注入制备血栓用的玻璃管中，马上将不锈钢螺旋放入。静置40min使血栓形成，之后将玻璃管小心从底座上取下，用细针将血栓四周和玻璃管内壁分开，取出血栓挂在反应瓶的橡胶塞上，反应瓶中加入8ml蒸馏水，将血栓悬挂在水中静置1小时，除掉血栓表面浮血。1小时后，用滤纸吸去血栓表面的水分，逐个精确称重。 
4)测定6a-f体外溶栓活性： 
在每个反应瓶中重新注入6a-f(10nM)的生理盐水溶液，以生理盐水作为空白对照，尿激酶(100IU/ml)作为阳性对照，再将血栓悬挂于待测本发明化合物6a-f的溶液中，37℃恒温摇床70rpm孵育2小时。孵育结束后，用滤纸吸取表面水再逐个精确称重，计算血栓在加入待测溶液前后的重量差，统计评价化合物体外溶栓活性。结果表明，本发明化合物6a-f有优秀的体外溶栓活性(表3)。 
表310nM 6a-f体外溶栓活性a
Figure BSA00000373928300171
a)n＝6，血栓减重用均值±SD mg表示；b)与生理盐水组比，p＜0.01。 
实验例4浓度对本发明化合物6b体外溶血栓活性的影响实验 
按照实验例3的实验方法，选取溶栓效果最好的6b(实施例36所制备)考察10nM，1nM和0.1nM三个浓度下的溶栓活性。结果表明，6b的体外溶栓作用显示浓度依赖性(表4)。 
表26b的浓度对体外溶栓活性的影响a
a)n＝6，血栓减重用均值±SD mg表示；b)与生理盐水及1nM 6b组比，p＜0.01；c)与生理盐水及0.1nM 4b组比，p＜0.01；d)与生理盐水组比，p＞0.05。 
实验例5本发明化合物6a-f的纳米球实验 
1)水溶液中6a-f纳米球的粒径 
先测得本发明化合物6a-f在水溶液中的临界胶束浓度为1×10-12mg/ml。然后在Nano-ZS90纳米粒度测定仪上测定6a-f在1×10-12mg/ml的粒径。结果表明，6a-f在水溶液中可组装为纳米球，粒径为147至260nm(表5)。 
表5本发明化合物6a-f在水溶液中组装的纳米球的粒径 
Figure BSA00000373928300182
2)6a-f的纳米球的形态 
将本发明化合物6a-f配成浓度为1×10-12mg/ml的水溶液，然后将此溶液滴在铜网上，挥发干溶剂后在JEM-1230透射电子显微镜下观察纳米球的形态。测定表明，6a-f形成规则的纳米球。6b的透射电子显微镜照片作为代表(图3)。 

Claims (10)

1.具有溶血栓活性的寡肽，其结构式为通式I所示：
Figure FDA00002997371300011
通式I
式中n=6、8、10、12、14或16。
2.一种合成权利要求1所述寡肽的方法，包括以下步骤：
1)Boc-Pro与Ala-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-OBzl;
2)将Boc-Pro-Ala-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala;
3)Boc-Pro-Ala与Lys(Boc)-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl;
4)将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc);
5)Boc-Asp与饱和脂肪醇缩合为Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3,其中n=6、8、10、12、14或16;
6)Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱去Boc生成Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3;
7)Boc-Lys(Boc)与Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3;
8)Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱Boc生成Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3;
9)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)与Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3;
10)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3OCH2(CH2)nCH3脱除Boc。
3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1)中在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下Boc-Pro在无水THF中与Ala-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-OBzl;步骤2)中在甲醇中将Boc-Pro-Ala-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala。
4.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤3)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala在无水THF中与Lys(Boc)-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl。
5.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤4)在甲醇中将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)；步骤5)中在DCC存在下Boc-Asp在无水THF中与饱和脂肪醇缩合为Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3。
6.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤6)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱Boc生成Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3。
7.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤7)在DCC和HOBt存在下Boc-Lys(Boc)在无水THF中与Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3。
8.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤8)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Lys(Boc)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3。
9.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤9)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)在无水THF中与Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3,步骤10)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)]-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2-(CH2)nCH3脱除Boc。
10.权利要求1所述的寡肽在制备溶血栓药物中的用途。
CN 201010573551 2010-11-30 2010-11-30 Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用 Expired - Fee Related CN102477071B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010573551 CN102477071B (zh) 2010-11-30 2010-11-30 Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010573551 CN102477071B (zh) 2010-11-30 2010-11-30 Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102477071A CN102477071A (zh) 2012-05-30
CN102477071B true CN102477071B (zh) 2013-09-25

Family

ID=46089861

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201010573551 Expired - Fee Related CN102477071B (zh) 2010-11-30 2010-11-30 Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102477071B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111087317B (zh) * 2019-11-11 2023-04-14 中国药科大学 不饱和阳离子脂质衍生物、制备方法以及在质粒递送***中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1356338A (zh) * 2001-10-25 2002-07-03 北京明心源科技有限公司 P6a的代谢产物的分离、合成及其在医学中的应用
CN101190941A (zh) * 2006-11-30 2008-06-04 首都医科大学 具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1356338A (zh) * 2001-10-25 2002-07-03 北京明心源科技有限公司 P6a的代谢产物的分离、合成及其在医学中的应用
CN101190941A (zh) * 2006-11-30 2008-06-04 首都医科大学 具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Synthetic Lipidation of Peptides and Amino Acids: Monolayer Structure and Properties";Peter B.等;《J. Am. Chem. SOC.》;19951231;第9515-9522页 *
"基于脂质前药的自组装药物传递***";金义光 等;《中国医药工业杂志》;20051231;第36卷(第3期);第185-188页 *
Peter B.等."Synthetic Lipidation of Peptides and Amino Acids: Monolayer Structure and Properties".《J. Am. Chem. SOC.》.1995,第9515-9522页.
金义光 等."基于脂质前药的自组装药物传递***".《中国医药工业杂志》.2005,第36卷(第3期),第185-188页.

Also Published As

Publication number Publication date
CN102477071A (zh) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102796167B (zh) (S)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-L-脯氨酰-L-丙氨酰-L-氨基酸及其制备方法和应用
CN101190940B (zh) 具有靶向抗血栓活性的多肽、其制备方法和应用
CN101190941B (zh) 具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及应用
CN101240027B (zh) 正壬烷基和rgd肽构建的缀合物、它们的合成及在医学中的应用
CN103159835A (zh) Lys及寡肽修饰的姜黄素衍生物、其合成及在医学中的应用
CN102807605B (zh) Nα-(1,3-二氧-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-2-苯基-4’-氧乙酰基)-Nω-脂肪酰基-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe、其制备方法和应用
CN102477071B (zh) Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用
CN101240028B (zh) 正十五烷基和rgd肽构建的缀合物、它们的合成及在医学中的应用
CN102477076B (zh) 用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用
CN102477069B (zh) Pro-Ala-Lys-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3、及其合成和作为溶血栓剂的应用
CN102807604B (zh) Nα-(1,3-二氧-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-2-苯基-4’-氧乙酰基)-Nω-脂肪酰基-Lys-Arg-Gly-Asp-Val、其制备方法和应用
CN102485746B (zh) 具有靶向性溶血栓活性的寡肽、其制备方法和应用
CN102796168B (zh) 一种具有溶血栓活性的化合物，及其制备方法和应用
CN102485747B (zh) 具有靶向性溶血栓活性的寡肽、其制备方法和应用
CN102485748B (zh) 具有靶向性溶血栓活性的寡肽、其制备方法和应用
CN102485745B (zh) 溶血栓寡肽及其制备方法和应用
CN102477075B (zh) 用于抗血栓的寡肽及其制备方法和应用
CN102477077B (zh) Boc-Pro-Ala-Lys-Lys(Pro-Ala-Lys)-OCH2(CH2)nCH3、其合成和作为溶血栓剂的应用
CN102477072B (zh) 用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用
CN102702312A (zh) 具有靶向抗血栓活性的rgdvyigsk、制备和应用
CN103450336B (zh) Krgd肽修饰的咔啉并六氢吡嗪-1,4-二酮、其制备方法、抗血栓作用和应用
CN102485744B (zh) 溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用
CN102702313A (zh) 具有靶向抗血栓活性的rgdvyigsr、制备和应用
CN103450337B (zh) Trgd肽修饰的咔啉并六氢吡嗪-1,4-二酮、其制备方法、抗血栓作用和应用
CN102702317A (zh) 具有靶向抗血栓活性的rgdsyigsr、制备和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130925

Termination date: 20181130