CN102393466B - 伯氨基测定仪 - Google Patents

Abstract

本发明通过改进范式氨基酸测定仪，给出一种主要用于测定蛋白质中伯氨基基团含量的伯氨基测定仪，推广可用于测量各种有机化合物中伯氨基基团的含量。该装置主要由反应部分、量气部分、洗气部分及回收部分组成，具有快速、精确、清洁等特点。

Description

伯氨基测定仪

技术领域：

本发明属于化学分析测试仪器设备领域，涉及一种主要用于测定蛋白质伯氨基含量(包括胶原多肽，各种氨基酸)的仪器——伯氨基测定仪。

背景技术：

目前用于测量蛋白质中伯氨基基团含量的方法都有茚三酮比色法、TNBS比色法、胶束电动色谱法、甲醛法、范斯莱克法、气相色谱法。其中，茚三酮比色和TNBS比色属于分光光度法，均存在仪器误差。另外，在茚三酮比色法中，加热显色的时间长短以及显色后颜色的深浅都会造成误差；TNBS比色法专一性很强，主要和赖氨酸ε-氨基发生反应，不能定量全部伯氨基。甲醛法中，羟甲基化合物还存在进一步与伯氨基缩合的副反应，影响测量准确度。此外，甲醛由于在存放过程中，容易受外界环境的影响发生氧化变成甲酸，在滴定过程中甲酸会额外消耗氢氧化钠，从而使测量结果偏高。虽色谱法然具有高的灵敏度，但是对仪器设备要求较高，例如：气相色谱法中所需的不锈钢反应装置加工要求高且造价昂贵。范斯莱克法使用过程中测量周期长，实验操作复杂，实验受外界环境温度影响较大。

现有的范式氨基酸测定仪，主要由反应装置、量气装置和洗气装置三部分组成。其中反应装置和洗气装置分别为一体式结构，给清洗带来许多不便。原范式氨基酸测定仪需要专用的支架进行固定，占用空间大。测试受周围环境影响较大，低温下不能进行测量。范式氨基酸测定仪没有对废气、废液进行统一处理，对环境污染严重。

发明内容：

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种伯氨基酸测定仪以及其使用方法。

本发明以范斯莱克法为原理，在范式氨基酸测定仪的基础上，设计一种快捷、简单、精确、洁净的伯氨基测定仪。测定仪的反应部分(I)内含磁子(9)，带有水浴夹套(4)及磁力搅拌(10)，反应器(1)底部为平底设计。测定仪的洗气部分(III)内含磁子(29)，配有磁力搅拌(30)，洗气半球(27)底部为平底设计。该装置可用于蛋白质、明胶及微量氨基酸中伯氨基基团的测量。

一种伯氨基测定仪，由反应装置(I)、量气装置(II)、洗气装置(III)、回收装置(IV)组成，其特征在于，反应装置(I)、量气装置(II)、洗气装置(III)、回收装置(IV)依次连接，反应装置(I)、量气装置(II)、洗气装置(III)的排气口及排液口全部连接于回收部分(IV)上。

优选的，所述的反应装置(I)包含反应器(1)、加料管(2)及三通连接管(14)。优选的，三通连接管(14)带有旋塞(15)，旋塞(15)位于三通连接管(14)交汇处，用于调节气体在三通连接管(14)中的走向。

优选的，所述的反应器(1)上部为磨口(12)，底部为平底，带有水浴夹套(4)，如图1所示。反应器(1)底部有向上的细颈玻璃管(7)及一个向下的排料管(11)；细颈玻璃管(7)的一端连接加料管(2)，另一端穿过夹套(4)与反应器内壁(5)接通；排料管(11)穿过夹套(4)与反应器内壁(5)接通，用于反应器(1)的排料。优选的，反应器夹套(4)外壁上含有两个接口(6)，用于连通循环水浴。优选的，反应器(1)内含有磁子(9)，底部配套磁力搅拌(10)。

优选的，所述的反应装置(I)包括两个加料管——第一加料管(2)和第二加料管(3)。优选的，第一加料管(2)和第二加料管(3)下部为细颈玻璃管，第一加料管(2)为25～35ml，第二加料管(3)约为10～20ml。反应装置(I)包括两个细颈玻璃管，第一细颈玻璃管(7)和第二细颈玻璃管(8)，分别连接第一加料管(2)和第二加料管(3)。

优选的，三通连接管(15)通过细颈玻璃管一端的磨口塞(13)与反应器上部磨口(12)连接，三通连接管(15)的另一端通过细颈弯管(17)与斜孔三通活塞(19)相连。

洗气装置(III)包括洗气半球(27)及缓冲球(26)；洗气半球(27)及缓冲球(26)经细颈玻璃连接管(23)与斜孔三通活塞(19)连接。优选的，洗气半球(27)半径为100～150mm，缓冲球(26)半径为80～100mm。

优选的，洗气半球(27)顶部连接细颈玻璃管(24)，用于气体进出；底部带有一个向下的玻璃管(25)用于排液，并带有一个90°向上弯管(28)用于连接缓冲球(26)。洗气半球(27)为平底，内含磁子(29)，配套磁力搅拌器(30)。

所述的回收装置(IV)包含四通连接管(31)和回收瓶(33)。优选的，回收瓶(33)配有含两个玻璃管(34)、(35)的胶塞(36)。

本发明反应器(1)配有水浴夹套(4)，底端连接两个加料管，第一加料管(2)和第二加料管(3)，上部磨口(12)通过细颈玻璃管一端的磨口塞(13)与三通连接管(14)连接，三通连接管(14)另一端通过细颈弯管(17)与斜孔三通活塞(19)相连，量气管(20)下部通过乳胶管(22)连接水准球(21)(乳胶管(22)长度为量气管(20)的1.5倍)，量气管(20)上部直管(18)通过连接管(23)连接洗气半球(27)，洗气半球(27)下端90°向上弯管(25)连接缓冲球(26)。三通连接管排气管(16)、反应器排液管(11)、洗气半球排液管(25)均通过硅胶管(排液管(11)、(25)口的硅胶管上带有止水夹)与四通连接管(31)连接，再通过硅胶管(32)连接于回收装置(IV)上。

本发明的反应器(1)的水浴夹套(4)连接恒温水浴槽，用以调节反应温度；反应器(1)内含磁子(9)，下部配有磁力搅拌(10)，通过调节搅拌速度可以调节反应速度。本发明的洗气半球(27)内含磁子(29)，下部配有磁力搅拌(30)，通过调节搅拌速度调节洗气速度。

本发明还提供所述伯氨定量仪的使用方法，包括下列步骤：

本发明的使用前先进行准备工作，密封好各个接口，反应器排液管(11)和洗气半球排液管(25)用止水夹夹好。首先从水准球(21)注入去离子水，将量气管(20)注满去离子水后，旋动量气管旋塞保持量气管(20)充满水状态。然后将洗气液(高锰酸钾20～40g，氢氧化钠20～40g，去离子水200～400ml)，从缓冲瓶(26)倒入，注满洗气半球(27)至量气管旋塞(19)处时，旋动量气管旋塞(19)，使量气管(20)与三通连接管(14)相通。提高水准球(21)，将量气管(20)注满去离子水至三通连接管旋塞(15)处。旋动三通连接管旋塞(15)，使反应器(1)通过三通连接管排气管(11)与回收装置(IV)相通，同时旋动量气管旋塞(19)至水平方向，闭合量气管。把水准球(21)放于低处，此时洗气半球(27)与量气管(20)中均充满液体，并与外界空气隔绝。打开循环水浴与磁力搅拌(10)。

本发明测样时先从第一加料管(2)加入冰醋酸约20～30ml，接着加入40％的亚硝酸钠水溶液约20～30ml，闭合第一加料管(2)和第二加料管(3)。反应器(1)内反应生成NO或NO₂气体，保持5～8min，排净反应器(1)内空气。旋动三通连接管旋塞(15)，闭合反应器(1)。打开第一加料管(2)和第二加料管(3)，反应器(1)内产生气体把液体从第一加料管(2)和第二加料管(3)中赶出，当把第一加料管(2)和第二加料管(3)下部细颈内气体完全赶出后，闭合第一加料管(2)和第二加料管(3)。旋动三通连接管旋塞(15)和量气管旋塞(19)，使反应器(1)仅与量气管(20)相通，保持反应器(1)内气体进入量气管(20)。在第一加料管(2)中注满去离子水，液封。在第二加料管(3)中加入待测蛋白质溶液，缓慢打开加料管(3)旋塞，使待测液缓慢流入反应器(1)，并用少量去离子水冲洗第二加料管(3)，以正戊醇液封。加料结束时闭合第二加料管(3)。反应过程中，当量气管(20)内气体超过量气管细颈部分时，迅速提高水准球(21)，旋动量气管旋塞(19)，把气体赶入洗气半球(27)。气体被赶净后，旋动量气管旋塞(19)，闭合洗气半球(27)，使量气管(20)与反应器(1)相通。把水准球(21)放于低处，继续保持反应器(1)内气体进入量气管(20)。反应器(1)从加入待测液开始计时反应30min～60min停止反应。分别打开第一加料管(2)和第二加料管(3)，使第一加料管(2)和第二加料管(3)内液体进入反应器(1)内。赶尽反应器(1)内气体后，旋动量气管旋塞(19)，闭合量气管(20)。打开反应器排液口(11)止水夹，使反应废液全部流入回收瓶(33)。提起水准球(21)，旋动量气管旋塞(19)，把气体全部赶入洗气半球(27)。旋动量气管旋塞(19)，闭合量气管(20)。开大洗气半球(27)内磁子(29)的搅拌速度，保持2～5min。停下洗气半球(27)的磁力搅拌(30)，旋动量气管上旋塞(19)，降低水准球(21)，把洗气半球(27)内气体赶入量气管(20)，当洗气液流至量气管旋塞(19)处时，旋动量气管旋塞(19)，闭合量气管(20)。提高水准球(21)，使水准球(21)内液体液面与量气管(20)内液体液面水平，读取量气管(20)刻度，记录体积V，同时记录此时气压与温度，用于以后计算。

本发明相比原有技术具有如下优点：

1、反应不受外界环境条件变化影响，相比范式氨基酸测定仪能在冬天低温下测量。测定数据稳定，平均误差较范式氨基酸测定仪减小一半。

2、通过循环水浴可以调节反应温度，检测周期短，反应时间较范式氨基酸测定仪缩短1/3。

3、洗气半球(27)配有磁力搅拌(10)，可以自动洗气。反应器(1)配有磁力搅拌(30)，可以使反应充分进行，调节反应进程。

4、清洗方便，各部件可拆卸后分别清洗，并且反应器(1)及洗气半球(27)均可通过反应器(1)的磁力搅拌(10)和洗气半球(27)的搅拌器(30)进行自清洗。

5、回收部分(IV)的加入使反应过程更干净，反应废液(亚硝酸钠、冰醋酸和待测液的混合液)及洗气废液(高锰酸钾、氢氧化钠混合液)可直接通过硅胶管(32)排入回收瓶，并且废液之间可以相互反应自清洗，反应产生废气均通过回收部分(IV)统一排出，保持环境清洁。

6、体积小，便于放置，除回收装置(IV)外均可放置于实验台上操作。

附图说明：

图1本发明的伯氨基测定仪示意图。其中：

1、反应器 2、第一加料管 3、第二加料管 4、水浴夹套 5、反应器内壁6、循环水浴接口 7、第一细颈进料管 8、第二细颈进料管 9、磁子10、磁力搅拌 11、排液管 12、反应器磨口 13、磨口塞 14、三通连接管15、三通旋塞 16、排气管 17、细颈弯管 18、细颈直管 19、斜孔三通活塞20、量气管 21、水准球 22、乳胶管 23、细颈连接管 24、细颈缓冲管25、排液管 26、缓冲球 27、洗气半球 28、进液管 29、磁子 30、磁力搅拌31、四通连接管 32、硅胶管 33、回收瓶 34、进液管 35、排气管 36、胶塞

具体实施方案：

以下实施例是对本发明的进一步说明，但本发明并不局限于此。

实施例1

本发明所述伯氨基酸测定仪，由反应装置(I)、量气装置(II)、洗气装置(III)、回收装置(IV)组成。

优选的，反应装置(I)包括反应器(1)、第一加料管(2)、第二加料管(3)及三通连接管(14)。其中反应器含水浴夹套(4)，水浴夹套(4)外壁上含有两个接口(6)，用于连接循环水浴。优选的，反应器底部为平底，含有第一细颈玻璃管(7)、第二细颈玻璃管(8)及一个向下的排料管(11)。其中第一细颈玻璃管(7)一端连接第一加料管(2)，另一端穿过水浴夹套(4)与反应器内壁(5)接通，用于反应液的加入；第二细颈玻璃管(8)一端连接第二加料管(3)，另一端穿过水浴夹套(4)与反应器内壁(5)接通，用于待测液的加入；排料管(11)穿过水浴夹套(4)与反应器内壁(5)接通，用于反应器(1)的排料。排料管(11)通过硅胶管与回收装置(IV)中的四通连接管(31)连接，排料管(11)配有止水夹。优选的，反应器(1)内含有磁子(9)，底部配套磁力搅拌(10)。反应器(1)上部为磨口(12)，与三通连接管的磨***塞相连。三通连接管(14)所带玻璃管均为细颈玻璃管，交汇处为三孔旋塞(15)。三通连接管的三端中带磨口塞的一端(13)与反应器磨口(12)连接，排气口(16)的一端通过硅胶管与回收装置(IV)中的四通连接管(31)连接，最后一端通过细颈弯管(17)与斜孔三通活塞(19)相连。

优选的，量气装置(II)包括量气管(20)及水准球(21)。其中量气管上端含有斜孔三通旋塞(19)，旋塞上端为两个细颈玻璃管；其中弯管(17)连接三通连接管，细颈直管(18)通过洗气装置(III)中的细颈连接管(23)与洗气半球(27)连接。优选的，量气管中细颈部分为量气部分，刻度量程10～15ml，最小刻度0.05ml；量气管下部为气体缓冲部分(作用是防止气体过多而造成气体从水准球(21)逸出)，缓冲部分体积约为150～200ml，底部含有接口，通过乳胶管与水准球(21)连接。优选的，水准球体积约为200～250ml，放置于低处。

优选的，洗气装置(III)包括细颈连接管(23)、洗气半球(27)及缓冲球(26)。其中细颈连接管一端通过细颈直管(18)与量气管(20)连接，另一端通过缓冲管(24)与洗气半球(27)连接。优选的，洗气半球(27)为平底，半径约为100～150mm，内含磁子(29)，配套磁力搅拌器(30)。洗气半球底部含有两个玻璃管，其中向下倾斜的为排液管(25)，用于洗气液的排放，通过硅胶管与回收装置(IV)中的四通连接管(31)连接；90°向上弯管(28)与缓冲球(26)下端相连。优选的，缓冲球(26)半径约为80～120mm，上部为漏斗状进液口，口径约为50～70mm，便于洗气液的加入。

优选的，回收装置(IV)包括四通连接管(31)与回收瓶(33)。其中四通连接管(31)一端的三个接口分别连接排气口(16)、反应器排液口(11)及洗气半球排液口(25)，另一端的接口通过硅胶管与进液管(34)连接。优选的，回收瓶(33)体积为10-20L，用于反应废液的回收及存放；回收瓶(33)上口配有胶塞(36)，胶塞上含有进料管(34)及出气管(35)，出气管(35)通过硅胶管直接连接于排气罩或通风橱出气口内，防止气体散逸。

本发明所述伯氨基酸测定仪，其反应装置(I)、量气装置(II)、洗气装置(III)可放置于实验台之上，用铁架台固定即可。回收装置(IV)放置于水平位置低于反应装置(I)及洗气装置(III)的地点，并随时处理。

实施例2

1.实验准备：

本发明的使用时先进行准备工作，首先要配制洗气液(高锰酸钾20～40g，氢氧化钠20～40g，去离子水200～400m1)，然后把各个活塞抹好真空脂，反应器上口(12)缠封口膜并用夹子固定好，反应器排液管(11)和洗气半球排液管(25)用止水夹夹好，反应器夹套(4)与循环水浴相通。三通连接管旋塞(15)旋成量气管旋塞(19)旋成“\\”(如图一中量气管旋塞(19))，保证量气管(20)通过三通连接管排气管(11)与回收装置(IV)相通。从水准球(21)注入去离子水，提高水准球(21)(高于量气管旋塞(19))，把气体从三通连接管排气管(11)赶出，将量气管(20)注满去离子水后，旋动量气管旋塞(19)90°成水平方向，闭合量气管(20)，保持量气管(20)充满水状态。最后将洗气液从缓冲瓶(26)倒入洗气半瓶(27)，旋动量气管上旋塞(19)成“//”，保持量气管(20)与洗气半球(27)相通，降低水准球(21)，把洗气半球(27)内气体吸入量气管(20)，当洗气液流至量气管旋塞(19)处时(保证排液口(25)处不存气体)。旋动量气管旋塞(19)180°成“\\”，使量气管(20)与洗气半球(27)闭合，而与三通连接管(14)相通。提高水准球(21)，把气体从三通连接管排气管(11)赶出，将量气管(20)注满去离子水(三通管(14)与量气管(20)相连细颈内无气体残留)，旋动量气管旋塞(19)至水平方向，闭合量气管(20)。旋动三通连接管旋塞(15)180°成反应器(1)通过三通连接管排气管(11)与回收装置(IV)相通。把水准球(21)放于低处，此时洗气半球(27)与量气管(20)中均充满液体，并与外界空气隔绝。打开循环水浴与磁力搅拌(10)(水平实验中，循环水浴温度恒定，反应器(1)下磁力搅拌(10)转速恒定)。

2.测试样品：

本发明测样时先从第一加料管(2)加入冰醋酸约20～30ml，接着加入40％的亚硝酸钠水溶液约20～30ml(反应器(1)内液体达到反应器3/4以上)，旋动第一加料管(2)和第二加料管(3)旋塞，使第一加料管(2)和第二加料管(3)闭合，反应器(1)仅通过三通连接管排气管(11)与回收装置(IV)相连。反应器(1)内反应生成NO或NO₂气体，保持2～5min以上，保证把反应器(1)内空气全部排出。旋动三通连接管旋塞(15)成使反应器(1)密封，同时量气管(20)也不与外界相通。旋动第一加料管(2)和第二加料管(3)旋塞，使第一加料管(2)和第二加料管(3)打开，反应器(1)内产生气体把液体从第一加料管(2)和第二加料管(3)赶出，当把第一加料管(2)和第二加料管(3)下部细颈内气体完全赶出后，旋动第一加料管(2)和第二加料管(3)旋塞，使第一加料管(2)和第二加料管(3)闭合。旋动量气管旋塞旋塞(19)成“\\”，使反应器(1)仅与量气管(20)相通，与外界隔绝，保持反应器(1)内气体进入量气管(20)(此时反应器(1)与量气管(20)内气体仅为反应产生的NO或NO₂气体)。在加料管(2)中加入去离子水(占体积3/4，起到液封作用，同时为实验后面做准备)。在第二加料管(3)中加入待测蛋白质溶液(如需要，请加热保持蛋白质溶液为流动液体)，缓慢打开第二加料管(3)旋塞，使待测液缓慢进入反应器(1)(不要加过，留下微量，防止空气进入反应器(1))。闭合第二加料管(3)旋塞，用少量去离子水冲洗第二加料管(3)(5ml～10ml)，再加入约1～2ml正戊醇(正戊醇与溶液分层，处于溶液上方)，缓慢打开第二加料管(3)旋塞，使溶液缓慢进入反应器(1)，当正戊醇到达第二加料管(3)旋塞处时闭合旋塞，加入去离子水(占体积3/4，起到液封作用，同时为实验后面做准备)。反应过程中，当量气管(20)内气体超过量气管细颈部分时，迅速提高水准球(21)，旋动量气管旋塞(19)180°成“//”，保持量气管(20)与洗气半球(27)相通，把气体赶入洗气半球(27)(打开洗气半球(27)下面的磁力搅拌(9)，使NO和NO₂气体迅速被洗气液吸收)，当量气管(20)内气体被赶净后，旋动量气管旋塞(19)180°成“\\”，使量气管(20)与洗气半球(27)闭合，而与反应器(1)相通，把水准球(21)放于低处，继续保持反应器(10)内气体进入量气管(20)。反应器(1)从加入待测液开始计时反应30～60min(过程内需多次把气体赶入洗气半球(27))，停止反应。分别打开第一加料管(2)和第二加料管(3)旋塞，使第一加料管(2)和第二加料管(3)内液体进入反应器(1)内，把第一加料管(2)和第二加料管(3)下部细颈内空气赶入反应器(1)内，闭合第二加料管(3)旋塞，保持第一加料管(2)旋塞打开。随着液体持续加入，反应器(1)内气体全部赶入量气管(20)。当液体赶到三通连接管旋塞(15)处时，旋动量气管旋塞(19)90°成水平方向，闭合量气管(20)，同时闭合第一加料管(2)旋塞。旋动三通连接管旋塞(15)成打开反应器排液口(11)止水夹，使反应废液全部流入回收瓶(33)。关闭止水夹，打开第一加料管(2)旋塞，加入去离子水至反应器(1)充满，闭合第一加料管(2)旋塞，用磁力搅拌(10)自动清洗反应器(1)(反应过程中保持反应器(1)循环水浴和磁力搅拌(10)的开启)。提起水准球(21)，旋动量气管旋塞(19)成“//”，把气体全部赶入洗气半球(27)(洗气半球(27)上面细颈管(24)无气体残留)，旋动量气管旋塞(19)90°成水平方向，闭合量气管(20)。开大洗气半球(27)内磁子(29)的搅拌速度，保持2～5min。停下洗气半球(27)的磁力搅拌(30)，旋动量气管上旋塞(19)成“//”，保持量气管(20)与洗气半球(27)相通，降低水准球(21)，把洗气半球(27)内气体吸入量气管(20)，当洗气液流至量气管旋塞(19)处时，旋动量气管旋塞(19)90°成水平方向，闭合量气管(20)。提高水准球(21)，使水准球(21)内液体液面与量气管(20)内液体液面水平，读取量气管(20)刻度，记录体积V，同时记录此时气压与温度，用于以后计算。

3.实验后处理：

旋动量气管旋塞(19)成“\\”，旋动三通连接管旋塞(15)成保持量气管(20)通过三通连接管排气管(16)与回收装置(IV)相连。提起水准球(21)，把气体从三通连接管排气管(16)赶出，将量气管(20)注满去离子水，旋动量气管旋塞(19)90°成水平方向，闭合量气管(20)，保持量气管(20)充满水状态(三通旋塞(15)与斜孔三通旋塞(19)之间细颈玻璃管内无气体残留)。旋动三通连接管旋塞(19)成使量气管(20)与三通连接管(14)闭合，反应器(1)通过三通连接管排气管(16)与回收装置(IV)相通。把水准球(21)放于低处，打开反应器排液口(11)止水夹，排净反应器(1)内液体，关闭排液口(11)止水夹，准备下个待测样的测试。测样过程中，洗气液由深紫变为深蓝时，打开排液口(25)止水夹，排净洗气半球(27)液体。关闭排液口(25)止水夹，重新加入新的洗气液。测试反应全部完后，打开反应器排液口(11)和洗气半球排液口(25)止水夹，排净反应器(1)和洗气半球(27)内废液。从缓冲球(26)加入冰醋酸和亚硝酸钠混合液至洗气半球(27)内，开大洗气半球(27)内磁子(29)转速，洗掉洗气半球(27)内壁上的洗气液残留。再排出废液后，用去离子水清洗一遍。回收装置(IV)内为反应器(1)和洗气半球(27)排出的高锰酸钾、氢氧化钠、冰醋酸和亚硝酸钠混合液，相互反应自吸收。产生的NO和NO₂气体由排气口(35)统一排出处理。如待测样易产生大量气泡，加入待测液前需在反应器(1)内加入少量正戊醇，用于消泡。

4.计算

以下公式给出了伯氨基测定仪的计算公式及有关参数的整定方法。

记n_样为样品伯氨基摩尔量，n_N2为所测氮气摩尔量，由反应原理可知伯氨基反应生成氮气的摩尔比为1∶1，则本方程可表示为：

n_样＝n_N2 (1)

记c为样品摩尔含量(mol/g)，m为样品质量(m)，则方程可表示为：

n_样＝c·m (2)

记ρ为氮气的质量密度(g/ml)，根据量气时的外界温度及大气压查表得到，V为测量氮气的体积(ml)，M为氮气分子量(mol/g)则方程可表示为：

n_N2＝ρV/M (3)

把公式(2)、(3)带入(1)中，并整理得到：

$c=\frac{\mathrm{\ρ}\·V}{M\·m}---\left(4\right)$

通过公式(4)即可计算出样品的伯氨基含量。

Claims (6)

1.一种伯氨基测定仪，由反应装置(Ⅰ)、量气装置(Ⅱ)、洗气装置(Ⅲ)、回收装置(Ⅳ)组成，反应装置(Ⅰ)、量气装置(Ⅱ)、洗气装置(Ⅲ)、回收装置(Ⅳ)依次连接，其特征是，所述的反应装置(Ⅰ)包含反应器(1)、加料管(2)及三通连接管(14)，其中反应器(1)上部为磨口(12)，内部含有磁子(9)，底部为平底并且配套磁力搅拌(10)，外部带有水浴夹套(4)；洗气装置(Ⅲ)包括洗气半球(27)及缓冲球(26)，其中洗气半球(27)为平底，内含磁子(29)，配套磁力搅拌器(30)；回收装置(Ⅳ)包含四通连接管(31)和回收瓶(33)，反应装置(Ⅰ)、量气装置(Ⅱ)、洗气装置(Ⅲ)的排气口及排液口全部连接于回收装置(Ⅳ)上。

2.如权利要求1所述的伯氨基测定仪，其特征是，所述的反应装置(Ⅰ)中包括第一加料管(2)和第二加料管(3)，其中第一加料管(2)的下部连接第一细颈玻璃管(7)，第二加料管(3)的下部连接第二细颈玻璃管(8)，第一加料管(2)的体积为25～35ml，第二加料管(3)的体积为10～20ml。

3.如权利要求1所述的伯氨基测定仪，其特征是，所述的反应装置(Ⅰ)中反应器(1)底部有一个向上的细颈玻璃管(7)及一个向下的排料管(11)，细颈玻璃管(7)的一端连接加料管(2)，另一端穿过夹套(4)与反应器内壁(5)接通；排料管(11)穿过夹套(4)与反应器内壁(5)接通，用于反应器(1)的排料；反应器夹套(4)外壁上含有两个接口(6)，用于连通循环水浴。

4.如权利要求1所述的伯氨基测定仪，其特征是，所述的反应装置(Ⅰ)中三通连接管(14)通过细颈玻璃管一端的磨口塞(13)与反应器上部磨口(12)连接，三通连接管(14)的另一端通过细颈弯管(17)与斜孔三通活塞(19)相连，其中三通连接管(14)带有旋塞(15)，旋塞(15)位于三通连接管(14)交汇处，用于调节气体在三通连接管(14)中的走向。

5.如权利要求1所述的伯氨基测定仪，其特征是，洗气半球(27)及缓冲球(26)经细颈玻璃连接管(23)与斜孔三通活塞(19)连接；洗气半球(27)顶部连接细颈玻璃管(24)，用于气体进出；底部带有一个向下的玻璃管(25)用于排液，并带有一个90°的向上弯管(28)用于连接缓冲球(26)；洗气半球(27)的半径为100～150mm，缓冲球(26)的半径为80～100mm。

6.如权利要求1所述的伯氨基测定仪的使用方法，包括下列步骤：

1)准备工作：配制洗气液，注满洗气半球(27)，再将量气管(20)注满去离子水，并保持洗气半球(27)与量气管(20)中均充满液体，与外界空气隔绝，其中洗气液主要成分包括高锰酸钾20～40g，氢氧化钠20～40g，去离子水200～400ml；打开循环水浴与磁力搅拌(10)；

2)测样：依次向第一加料管(2)加入冰醋酸20～30ml，40％的亚硝酸钠水溶液20～30ml，在反应器(1)内发生化学反应，生成NO或NO₂气体，排净反应器(1)内空气；赶出第一加料管(2)和第二加料管(3)下部细颈内气体，通过调整旋塞保持反应器(1)仅与量气管(20)相通，与外界大气隔绝；向第二加料管(3)中加入待测蛋白质溶液，以正戊醇液封，30～60分钟后停止反应，产生的气体从量气管(20)赶入洗气半球(27)，打开磁力搅拌，吸收NO₂气体，10～30分钟后把剩余气体赶入量气管(20)，读取量气管(20)刻度，记录体积V，同时记录此时气压与温度。