CN102389392B - 重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶 - Google Patents

Abstract

一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。所述眼用凝胶的组分及用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；蛋白保护剂0.01-0.25mg；凝胶基质0.5-1.5mg；pH调节剂适量；注射用水加至0.4g；本品具有刺激性小、易涂布、药效持久的特点。

Description

重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶

技术领域

本发明涉及生物制品领域。特别是涉及一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。

背景技术

碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor，简写为bFGF)主要分布于中胚层和神经胚层来源的组织器官，对许多组织细胞有作用，可促进细胞***，调节细胞代谢，影响细胞的形态、浸润、分化和衰老，对角膜的上皮细胞基质细胞核内皮细胞均可产生影响，对碱烧伤角膜上皮的再生、角膜基质层和内皮层的修复均有促进作用。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，简写为rb-bFGF)是由含有高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后得到的活性因子。rb-bFGF可治疗各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变、复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼症、大泡性角膜炎、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状(或营养性)单疱性角膜溃疡等。

眼用凝胶是一种用于眼部的凝胶剂，由于用于眼部的制剂要求细腻均匀、无刺激、易涂布等，因此，眼用凝胶对辅料的种类和用量要求极严。同时，为了获得持久的药效，眼用凝胶中凝胶基质的选择也非常重要。

中国专利申请200510036465(申请人为南海朗肽制药有限公司)公开了一种用于治疗烧伤创面等疾病的重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶剂，其由重组人碱性成纤维细胞生长因子原液和可药用辅料组成，其中可药用辅料选自卡波姆940NF、透明质酸钠、海藻糖、甘露醇、右旋糖酐40、肝素钠。中国专利申请200510009218(申请人为北京双鹭立医药科技有限公司)公开了一种治疗创伤、烧烫伤等疾病的重组人碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶剂，其凝胶基质包括增稠剂(选自重量百分比为0.1-10％的羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙二醇、卡波姆、甲壳胺)、保湿剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂和水。

上述两个专利申请虽然公开了重组人碱性成纤维细胞生长因子的凝胶剂及其辅料组成，但它们仅适合通过外用给药的途径来治疗创伤等，而对于如何将重组牛碱性成纤维细胞生长因子通过特定的辅料选择制备得到适用于眼部的凝胶剂并未做任何教导。

因此，仍然有需要开发一种刺激性小、易涂布、药效持久的重组人碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶。

发明内容

本发明的目的是提供一种刺激性小、易涂布、药效持久的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。

本发明的发明目的通过以下的实施方式来实现。

一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，其特征在于所述眼用凝胶的组分及用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；

蛋白保护剂0.01-0.25mg；

凝胶基质0.5-1.5mg；

pH调节剂 适量；

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述的蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白；所述的凝胶基质选自羟丙基甲基纤维素和卡波姆；所述的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸；

在一个优选的实施方式中，重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的组分及用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

蛋白保护剂0.2mg；

凝胶基质1.00mg；

pH调节剂 适量；

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述的蛋白保护剂为人血白蛋白；所述的凝胶基质为羟丙基甲基纤维素和卡波姆；所述的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸；

本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备方法包含以下步骤：

(1)将凝胶基质用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将重组牛碱性成纤维细胞生长因子和蛋白保护剂溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

(3)在无菌条件下将步骤(1)得到的透明凝胶和步骤(2)得到的溶液混合均匀，分装即得。

优选的，制备方法为：

(1)将0.5-1.5mg凝胶基质用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将1000-3000IU重组牛碱性成纤维细胞生长因子和0.01-0.25mg蛋白保护剂溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

(3)在无菌条件下将步骤(1)得到的透明凝胶和步骤(2)得到的溶液混合均匀，分装即得。

本发明具有以下的优点和效果：

①本发明的眼用凝胶剂为患有各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变、复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼症、大泡性角膜炎、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状(或营养性)单疱性角膜溃疡等的眼部疾病患者提供了一种可替换的用药形式；

②本发明的眼用凝胶剂易涂布、细腻均匀、作用持久、对眼部无刺激性；

③本发明的眼用凝胶剂使用方便、经济实用，增加了病人的依从性。

具体实施方式

下面结合本发明较佳的实施例做进一步的说明，这些实施例应理解为不会限制本发明的实施范围，其变型及等同方式均被涵盖在本发明的保护范围内。

实施例1：

处方：

具体制备方法为：

将羟丙基甲基纤维素和用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子和人血白蛋白溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；在无菌条件下将上述的透明凝胶和滤液混合均匀，分装即得。

实施例2：

处方：

具体制备方法为：

将卡波姆、羟丙基甲基纤维素和用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白和甘露醇起溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；在无菌条件下将上述的透明凝胶和滤液混合均匀，分装即得。

实施例3：

处方：

具体制备方法为：

将卡波姆和用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、甘露醇和聚乙二醇溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；在无菌条件下将上述的透明凝胶和滤液混合均匀，分装即得。

试验例1：rb-bFGF眼用凝胶促进角膜碱烧伤模型愈合的实验研究

1、试验方法

试验动物：健康新西兰白兔，体重2-3kg，雌雄并用，手电筒及裂隙灯检查眼前段未见异常。120只动物随机分为五组，每组24只动物。

家兔角膜碱烧伤模型：外眼检查正常动物，生理盐水滴洗右眼2次，以0.5％地卡因滴眼液滴眼2次，表面麻醉，肌注***(50mg/kg)，全身麻醉，将滤纸圆片于0.5mol/L NaOH溶液中浸透，去除多余液体，小心贴敷于已固定眼球位置的右眼角膜正中区数分钟，取下滤纸片后立即用生理盐水冲洗角膜和结膜囊，即制成角膜碱烧伤模型。

试验样品：阴性对照品为不含重组牛碱性成纤维细胞生长因子的眼用凝胶，辅料组成同实施例1，每日早晚涂于眼部伤患处各一次；本发明样品为实施例1眼用凝胶，每日早晚涂于眼部伤患处各一次；阳性对照品为素高捷疗眼膏，每次一滴，每日四次。

给药方法：将阴性对照品、本发明眼用凝胶和阳性对照品分别对模型动物给药，连续治疗二周。

评价指标：分别在治疗1、2、4、6、10、14天时将荧光素染色裂隙灯显微镜标准照相照片，经过计算机图象***测量分析出各组不同时间角膜上皮愈合面积(结果见表1)和角膜上皮愈合率(结果见表2)。角膜上皮愈合面积和角膜上皮愈合率越高，表明治疗效果越好。

2、试验结果

表1、各组不同时间的角膜上皮愈合面积(mm²；X±S)

治疗时间(天)	阴性对照组	本发明组	阳性对照组
				1	12.1±1.5	46.1±2.1	21.2±4.3
2	39.5±4.1	50.2±2.8	44.2±2.4
				4	31.3±3.9	40.7±2.4	31.1±4.5
6	32.3±7.2	48.5±3.3	39.4±2.5
				10	37.2±2.4	50.7±2.4	46.2±4.3
14	35.2±6.5	51.2±3.4	44.9±4.5

表2.各组不同时间的角膜上皮愈合率(％；X±S)

治疗时间(天)	阴性对照组	本发明组	阳性对照组
				1	28.3±1.5	95.0±1.6	41.8±7.3
2	77.1±2.2	99.8±0.7	87.2±2.5
				4	61.1±6.7	80.9±6.2	61.3±7.4
6	63.1±7.3	96.4±1.9	77.7±4.3
				10	72.7±4.2	100±1.1	91.1±6.3
14	68.7±8.3	100±0.8	88.6±3.8

由表1和表2的结果可以看出，在第1天时，本发明组的上皮愈合面积明显大于阴性对照组和阳性对照组；在第4天时，上皮愈合率呈现一定反复；在第10天和第14天时，本发明组的角膜上皮愈合率大于阴性对照组和阳性对照组，且与阴性对照组有显著性差异。

试验例2：稳定性研究

1、高温高湿试验：

将实施例1的眼用凝胶灌装于内涂层封口铝管中，密封置于60℃、相对湿度75％条件下进行加速实验，分别于1、5、10天检测凝胶的含量、pH、外观、涂展性、无菌和离心试验(300r/min)。结果如下表：

表3、高温高湿结果

	1天	5天	10天
				含量	99.99％	99.98％	99.95％
pH	7.0	7.0	7.0
				外观	无色透明	无色透明	无色透明
涂展性	好	好	好
				无菌	合格	合格	合格
离心试验	无分层	无分层	无分层

结果表明，本发明的眼用凝胶在高温高湿试验中质量稳定。

2、低温试验：

将实施例1的眼用凝胶灌装于内涂层封口铝管中，密封置于4℃下进行实验，分别于1、3、6月检测凝胶的含量、pH、外观、涂展性、无菌和离心试验(300r/min)。结果如下表：

表4、低温试验结果

	1个月	3个月	6个月
				含量	100.01％	99.98％	99.95％
pH	7.0	7.0	7.0
				外观	无色透明	无色透明	无色透明
涂展性	好	好	好
				无菌	合格	合格	合格
离心试验	无分层	无分层	无分层

结果表明，本发明的眼用凝胶在低温试验中质量稳定。

Claims (3)

1.一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，其特征在于所述眼用凝胶的组分及用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；

蛋白保护剂0.01-0.25mg；

凝胶基质0.5-1.5mg；

pH调节剂 适量；

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述的蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，所述的凝胶基质选自羟丙基甲基纤维素和卡波姆，所述的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸。

2.根据权利要求1所述的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，其特征在于所述眼用凝胶的组分及用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

蛋白保护剂0.2mg；

凝胶基质1.00mg；

pH调节剂 适量；

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述的蛋白保护剂为人血白蛋白；所述的凝胶基质为羟丙基甲基纤维素和卡波姆；所述的pH调节剂为氢氧化钠或盐酸。

3.根据权利要求1所述的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)将凝胶基质用适量注射用水溶胀，调pH值使形成透明凝胶，然后在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将重组牛碱性成纤维细胞生长因子和蛋白保护剂溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

(3)在无菌条件下将步骤(1)得到的透明凝胶和步骤(2)得到的溶液混合均匀，分装即得。