CN102379889A - 万年蒿提取物在制备抗肝损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了万年蒿提取分离得到的2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷；苯乙酮-4-O-β-D葡萄糖苷和6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷在制备抗肝损伤药物中的应用。本发明得到的药物的活性成分是从万年蒿中提取分离得到，其来源广泛，对肝损伤具有显著的疗效。

Description

万年蒿提取物在制备抗肝损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及朝药万年蒿的提取物，具体涉及从朝药万年蒿中分离得到的抗肝损伤的单体化合物。

背景技术

肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种特点突出的病理状态，严重威胁着人类健康。各种有害因素诸如药物、病毒、酒精、生物等可能致使肝功能有不同程度的损害，从而使肝脏的解毒、***功能及贮备和再生能力降低，肝血流量减少，代谢负荷加重，从而发生内环境紊乱，肝细胞坏死和凋亡，进而造成肝损伤。各种有害因素导致的肝损伤主要有药物性肝损伤、病毒性肝损伤、酒精性肝损伤、免疫性肝损伤等类型，全世界有数十亿人曾经或正忍受着肝损伤的痛苦。以病毒性肝损伤病因中的乙型肝炎病毒为例，全世界有20亿人感染过乙型肝炎病毒(HBV)，其中3.78亿人转化成慢性感染，0.5-1.2亿人死于肝硬化、肝衰竭、肝癌等。药物性肝损伤、酒精性肝损伤患者也同样不计其数。肝损伤的长期存在往往会导致肝纤维化，是进而诱发肝硬化，肝功能衰竭，甚至肝癌的重要始动因素。因此预防和治疗肝细胞损伤是临床上肝病治疗的重要环节之一，是抑制肝纤维化、肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝硬化以及肝癌等疾病发生和发展的基础。

治疗和预防肝损伤，在临床上没有特别好的办法。因此目前临床上对疗效明确、副作用低的抗肝损伤药物的需求十分强烈。虽然现有技术中有一些中草药的提取物具有抗肝损伤的作用，但从中草药中提取得到具有治疗作用的化合物单体相比于提取物至少具有以下几个方面的优势：单体化合物作为活性成分更加容易控制质量，特别是对于注射剂而言，使用单体化合物作为活性成分更加安全；提取物中有效成分含量通常较少，单体化合物作为活性成分时其来源并不仅仅局限于提取。因此，如何从中草药中提取得到具有活性成分的单体一直是现代中药领域具有挑战性的研究。

发明内容

本发明的目的是制备一种具有治疗肝损伤的药物。为了实现本发明的目的，本发明采用如下的技术方案：

本发明涉及化合物1-3在制备治疗肝损伤药物中的应用，其中所述的化合物1是2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷；化合物2是苯乙酮-4-O-β-D葡萄糖苷；化合物3是6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的药物包括化合物1-3中的一种、两种或三种作为活性成分。

在本发明的一个实施方式中，所述的化合物1-3是从万年蒿提取分离或者通过化学合成的方法或者通过从其它中草药中提取分离得到。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的药物是将所述的化合物以及药学上可接受的药物制成药学上可接受的剂型，所述的剂型包括但不限于丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、散剂、注射剂。

在本发明的一个优选实施方式中，本发明的药物不包括除化合物1-3以外的其它抗肝损伤的活性成分。

在本发明的一个优选实施方式中，本发明的药物还包括其它西药活性成分。

在本发明的一个优选实施方式中，本发明的所述的肝损伤是药物性肝损伤、病毒性肝损伤、酒精性肝损伤和/或免疫性肝损伤。

本发明得到的药物的活性成分是从万年蒿提取得到，其来源广泛，对肝损伤具有显著的疗效。

具体实施方式

1.单体化合物的分离

取1500g万年蒿中加入水浸泡3h后加热2h，过滤得到滤液I，残渣中加水再加热1h，得到滤液II，合并滤液I和II，得到万年蒿水提液。预处理过的大孔吸附树脂柱中加入万年蒿水提液，依次用蒸馏水、50％乙醇、95％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩后冷冻干燥至干，将其中的万年蒿50％乙醇洗脱物用水溶解，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得到二氯甲烷萃取物，乙酸乙酯萃取物及剩余水溶解部分。取其中剩余水溶解部分适量上样于预处理的反相硅胶柱中，甲醇-水***梯度洗脱。以薄层层析原理为依据观察、判断，25％和50％甲醇洗脱液洗脱部分分别上样于反相硅胶柱层析柱、葡聚糖凝胶柱(Sephadex LH-20)层析柱，分别得到单体化合物1和2。通过波谱解析和文献对照，确定其化学结构为分别为2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷，和苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷。

取乙酸乙酯萃取物适量，用甲醇溶解、过滤后湿法上样于反相硅胶层析柱，甲醇-水***洗脱，其中一部分上样于葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)层析柱，甲醇-水***反复洗脱，得到少量样品，再经制备型高效液相色谱法确定流动相为甲醇-水5∶5的混合液，保持柱温为室温，检测波长为254nm，流速为1ml/min，进样量为300uL/次，得到一个单体化合物3，通过波谱解析和文献对照，确定其化学结构为6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物1，2，3的波谱数据分别如下：

化合物1：2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷

¹H-NMR(300MHz，PYRIDINE-d₅)δppm：14.30(1H，s，2-OH)，6.68(1H，d，J＝2.00Hz，H-3)，6.34(1H，d，J＝2.00Hz，H-5)，5.72(1H，d，J＝6.72，m，H-1′)，3.67(3H，s，OCH₃)，2.50(3H，s，COCH₃).

¹³C-NMR(75MHz，CD₃OD)δppm：107.89(C-1)，163.27(C-2)，96.40(C-3)，164.08(C-4)，91.43(C-5)，166.23(C-6)，99.98(C-1′)，73.31(C-2′)，76.49(C-3′)，69.92(C-4′)，77.04(C-5′)，61.06(C-6′)，203.49(C＝O)，31.81(COCH₃)，54.92(-OCH₃).

化合物2：苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷

¹H-NMR(300MHz，，D₂O)：7.78(2H，d，J＝8.32Hz，H-2，6)，7.00(2H，d，J＝8.34Hz，H-3，5)，2.42(3H，s，COCH₃)，5.06(1H，d，J＝6.36Hz，H-1′)，3.21-3.82(m-sugar-H)。

¹³C-NMR(75MHz，，D₂O)：107.7(C-1)，131.11(C-2，6)，116.12(C-3，5)，160.92(C-4)，99.48(C-1′)，72.90(C-2′)，75.58(C-3′)，69.46(C-4′)，76.29(C-5′)，60.61(C-6′)，202.51(C＝O)，26.03(COCH₃)。

化合物3：6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷

¹H-NMR(300MHz，(CD₃)₂CO)δppm：12.42(1H，s，5-OH)，6.47(1H，s，8-H)，3.75(3H，s，6-OCH₃)，7.89(1H，d，J＝2.01Hz，2′-H)，6.82(1H，d，J＝8.40Hz，5′-H)，7.46(1H，dd，J＝2.01，8.40Hz，6′-H)，5.12(1H，d，J＝7.26Hz，H-1″)，3.24-3.75(m，sugar-H).

¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δppm：145.26(C-2)，133.43(C-3)，178.11(C-4)，156.72(C-5)，131.70(C-6)，157.95(C-7)，94.22(C-8)，152.84(C-9)，104.76(C-10)，122.06(C-1′)，116.64(C-2′)，151.98(C-3′)，148.91(C-4′)，115.65(C-5′)，121.67(C-6′)，101.31(C-1″)，74.55(C-2″)，76.96(C-3″)，70.41(C-4″)，78.02(C-5″)，61.45(C-6″)，60.43(-OCH₃).

化合物1，2，3的结构式分别如下：

化合物1：2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷

化合物2：苯乙酮-4-O-β-D葡萄糖苷(云杉苷)

化合物3：6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷

2.三个单体化合物对CCl ₄ 所致小鼠急性肝损伤保护作用

2.1动物分组及给药剂量

64只雄性昆明种小鼠随机分为8组，每组8只，分组及给药剂量见表1。

2.2给药方法

药物组按相应一天剂量连续5天灌胃给药，空白对照组、模型组以等体积的蒸馏水灌胃，早晚各一次，第5天早末次给药2小时后，空白对照组按体重腹腔注射0.1ml/10g生理盐水，其余组按0.1ml/10g腹腔注射0.1％四氯化碳(CCl₄)豆油溶液，造成小鼠CCl₄肝损伤模型，给毒剂16小时之后颈动脉采血(采血前12小时禁食，不禁水)，静置20min，3000r/min离心15min，分离血清，测定小鼠血清中ALT、AST活性；同时取肝组织，置于-80℃冰箱待测SOD活性及MDA含量。

2.3肝匀浆制备

解冻的肝0.1g置于玻璃匀浆器内，加入0.9ml生理盐水在冰浴里研磨制成10％肝组织匀浆液，3000r/min离心15min，取上清液，测定SOD活性及MDA含量，三个单体化合物对CCl₄所致肝损伤小鼠血清ALT、AST活性结果见表1。

表1三个单体化合物对CCl₄所致肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的影响

注：与空白组比较^##P＜0.05，^###P＜0.001；与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

表1可见，实验小鼠给0.1％CCl₄豆油溶液之后，模型组的ALT、AST活性均明显升高，与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.001，P＜0.05)，说明造模成功。与模型组比较，3个单体化合物的低、高剂量组都能够明显降低血清AST活性(P＜0.05或P＜0.01)。

4.1.1.2三个单体化合物对CCl₄所致肝损伤小鼠肝组织SOD活性、MDA含量的影响

表2CCl₄所致肝损伤小鼠肝组织SOD活性、MDA含量的影响

注：与空白组比较^##P＜0.01，^###P＜0.001；与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2可见，与空白对照组比较模型组肝组织中SOD活性明显降低(P＜0.001)，MDA含量明显升高(P＜0.01)，均具有显著性差异。与模型组比较，三个单体化合物的低、高剂量组都能够明显升高SOD活性(P＜0.05或P＜0.01)，都能够明显降低MDA含量(P＜0.05或P＜0.01)。

从表1和表2可以看出万年蒿抗肝损伤有效部位中提取分离出来的三个单体化合物都能够有效地抑制肝损伤。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (8)

1.化合物1-3在制备治疗肝损伤药物中的应用，其中所述的化合物1是2-羟基-6-甲氧基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷；化合物2是苯乙酮-4-O-β-D葡萄糖苷；化合物3是6-甲氧基-槲皮万寿菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的应用，所述的药物包括化合物1-3中的一种、两种或三种作为活性成分。

3.根据权利要求1所述的应用，所述的化合物1-3是从万年蒿提取分离或者通过化学合成的方法或者通过从其它中草药中提取分离得到。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的应用，所述的药物是将所述的化合物以及药学上可接受的药物制成药学上可接受的剂型。

5.根据权利要求4所述的应用，所述的剂型选自丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、散剂、注射剂中的一种。

6.根据权利要求1所述的应用，所述的药物不包括除化合物1-3以外的其它抗肝损伤的活性成分。

7.根据权利要求1所述的应用，所述的药物还包括其它西药活性成分。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的肝损伤是药物性肝损伤、病毒性肝损伤、酒精性肝损伤和/或免疫性肝损伤。