CN102341097A - 现场制成施用于预定动物群的疫苗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于制成施用于预定动物群的疫苗的方法，该方法包括提供一组多种不同的非活抗原，每种非活抗原以冻干形式存在并包装在容器中，提供液体载体，该载体对于动物是药物学上可接受的，测定所述畜群与微生物感染有关的健康风险，确定所述组中的哪一种或多种非活抗原对应于这些健康风险，取出对应于该一种或多种非活抗原的一个或多个容器，并将所述一个或多个容器中的冻干内含物与所述载体混合，以制成疫苗。本发明还涉及生产适于构成疫苗的多种不同的非活抗原的方法，能够现场制成该疫苗的试剂盒和方法。

Description

现场制成施用于预定动物群的疫苗

本发明涉及制成施用于动物群的专用疫苗的方法以及能够制成这样的专用疫苗的生产方法和所得到的用于该方法中的试剂盒。

背景技术

通过施用疫苗来预防性地或治疗性地处理许多疾病(或至少这些疾病的负面身体影响)，特别是当这些疾病是微生物感染的结果，即，受到微生物(如，细菌或病毒)的感染时。这样的疫苗可以含有活的减毒微生物，其能够充分地引发受试动物的免疫***，而同时具有不能够诱导一整套的疾病症状的受损毒力。然而，通常认为这样的“活”疫苗对于受试动物不是100％安全的(术语“动物”包括人)，因为它仍然可能诱导疾病的症状，对于环境也不是100％安全的，因为在理论上，其遗传信息可能与其天然对应物的遗传信息混合，可能导致具有未知特性的新微生物。因此，有时候优选含有源自微生物的非活的抗原的疫苗。例如，这样的非活的抗原可以是杀灭的(完整)微生物、这些微生物的亚基(提取的或重组表达的)、灭活的毒素(类毒素)或其他代谢产物(提取的或重组表达的)。除了非活抗原是固有安全的(例如，它们不能通过自身感染受试动物)这一事实以外，还有另一个重要优势：非活抗原相对稳定，并且与活的微生物相比，不太易于降解。如通常所知的，为了储存活的微生物，必须应用昂贵的技术，如深度冷冻(低于至少-70℃，优选在-196℃下)或冷冻干燥。后一种技术非常昂贵(例如，因为需要昂贵的装置和长的加工时间)，但可以使微生物贮存在例如4℃，在1-2年的储存期间几乎不丧失生活力。非活抗原的明显优势在于它们不需要经受这样昂贵的保存处理以在相对长的时间段内是稳定的。许多非活的抗原保存在液体载体中，这些液体载体也用于施用目的(如，该载体可以是，例如，无菌水、磷酸盐缓冲盐水、氢氧化铝悬浮液等)。这样，它们可以贮存长达几年，而对于它们在靶动物中诱导适当的免疫应答没有有害影响。

关于疫苗，特别是在兽医实践中，易于使用是一个重要的因素。在这点上，通常的愿望是使用专用疫苗，以使用这一种疫苗来处理多种特定的健康风险，优选在通常发生由致病微生物引起的天然感染之前的那一刻。其次，在兽医实践中，例如，疫苗接种时间表应当遵照动物的管理实践。特别是在大型农场中，那里只在有限的预定时间点(例如，在x-天的大小时，在断奶时，或在转运时)处理动物，常常只在符合这种计划的操作时才进行疫苗接种(至少“常规的”疫苗接种)。

现有技术提供了几种解决方法来满足上述期望。例如，许多疫苗供应商在他们的业务中提供组合疫苗。在这样的疫苗中，存在对应于不同类型的微生物(不同属的微生物，或相同属中的不同种)的抗原，使得该疫苗可以用于处理由这些不同类型的微生物引起的感染。通常认为：对于组合疫苗，不优选活的抗原。使用活的抗原(例如，减毒的细菌或病毒)，存在相对大的干扰风险，并且活的抗原还常常需要特定的施用途径，模仿天然感染。这导致了组合疫苗优选含有非活抗原的情况。例如，这样的组合疫苗包含对应于多达10种不同类型的微生物的抗原(例如，

10，可获自Intervet/Schering-Plough Animal Health，Boxmeer，荷兰)。这些组合疫苗的特别优势在于易于使用，并且具有该特定抗原组合核准的(通过监管部门)稳定性、功效和安全性。组合疫苗的缺点在于：在确定了期望具有这样的特定组合以使用仅仅一种疫苗来对付几种健康风险后，这种疫苗的研发可能要花费数年。尽管不太严格，但另一个缺点在于该疫苗中抗原的组合对付比受试动物所需要的更多的健康风险。多余的抗原对于受试动物可能具有(小)风险，并且，这些抗原代表疫苗总成本的一部分。因此，优选不具有多余抗原的组合疫苗。

目前可用的备选解决方法是同时施用只含有对应于一种类型的微生物的抗原的疫苗(所谓的“单”疫苗)。当使用这种解决方法时，常常同时施用两种或更多种疫苗。优选，在施用之前立即混合单疫苗，以减少施用次数。当然优点在于不需要组合疫苗的明确研发。仅仅必须确定同时乃至混合施用仍然满足安全性和功效的合理需求。假如这样的话，这种解决方法提供了具有按照需要差不多可用的专用组合疫苗的机会。由于可以根据特定的需要构成疫苗，对于保护的迫切需求与实际的疫苗接种方案之间的配合不当不必定存在。此外，可以减少组合疫苗内在较高的生产风险。特别是当在施用之前混合疫苗时的一个缺点是增加的施用量。通常，适量的抗原存在于1至2ml的疫苗中。根据动物，一个部位总施用量的身体限度为2ml(对于如小的陪伴动物这样的动物)至10ml(对于大的动物，如牛)。这限制了可以混合的疫苗的总数。

所提供的再一种解决方法是当需要时简单使用单疫苗，即，只有在已知存在健康风险的情况下才接种。这当然给予了高度自由来操作并且允许非常专用的疫苗接种方案。可以完全排除疫苗的干扰。然而，这种策略固有地意味着当与使用组合疫苗相比时，疫苗接种的次数增加。这增加了接种疫苗者的工作负荷，并且也增加了受试动物的压力。接着，由于在使用不同抗原的每次疫苗接种之间必须等待几周，所以常常在很晚的阶段才给予保护。因此，当通常已经发生了自然感染时，常常才能施用系列中的最后一种抗原。在这样的情况下，疫苗接种可能是多余的，乃至是无用的。因此，在保健医师每天的实践中，这种策略常常是不可行的。

发明概述

需要一种改进的解决方法，其克服或至少减少了一种或多种上述与现有技术解决方法相关的问题，用于提供正确及时(right-on-time)施用专用疫苗，以治疗多种疾病。在这方面，已经发明了一种用于制成施用于预定动物群的疫苗的方法，该方法包括提供一组多种不同的非活抗原，每种非活抗原以冻干形式存在并包装在容器中，并且提供液体载体，该载体对于动物是药物学上可接受的，测定所述畜群的与微生物感染有关的健康风险，确定所述组中的哪一种或多种非活抗原对应于这些健康风险，取出对应于一种或多种非活抗原的一个或多个容器，并将所述一个或多个容器中的冻干内含物与所述载体混合，以制成疫苗。

使用本发明，可以恰在进行实际施用之前(因此，通常在动物群所在的场所)制成专用疫苗(对付多种健康风险，即，由不同类型的微生物引起的多重感染)，而不增加施用体积。换句话说，可以将冻干的非活抗原溶解或悬浮于液体载体中，而没有明显(乃至无)体积增加。接着，由于每种非活抗原分开生产和包装，生产风险是最小的。此外，为了得到在单一体积的液体载体中组合使用抗原的实际商业化的许可必须满足不太严格的需求。因此，可以缩短上市时间。本发明非常重要的优势在于可以具有专用疫苗，准确及时并且其中没有多余抗原，没有太大施用体积的不利方面。这可以理解如下：本发明允许特异性地评价预定动物群(具有等于1的最小数量受试动物的畜群)的健康风险，然后决定哪种组合疫苗，由组中存在的一种或多种抗原组成，特异性地对应于这些健康风险(当然没有排除少于所有预期的健康风险与组合疫苗相关)。只有在此以后，通过将冻干的抗原与液体载体混合来实际制成疫苗。在每种情况下，这种方式都可以具有专用疫苗、准确及时、其中没有多余抗原，并且具有可接受的施用体积。

应当注意所需的技术，即冷冻干燥(或冻干)，已经公知数十年了，因此不需要进一步的介绍，乃至解释。然而，在疫苗制备领域中，这种昂贵的技术只用于活疫苗的保存。其原因是显而易见的：非活疫苗不需要为获得足够的稳定性而冷冻干燥，并且冷冻干燥是相对昂贵的加工步骤。因此，事实是没有人在商业实践中曾经将冷冻干燥用于非活抗原。申请人的功绩在于认识到对于组合非活抗原，冷冻干燥可带来关于易于使用、专用和疫苗的正确及时配制的典型优点，同时减少现有技术组合疫苗典型的生产和管理缺陷。在这点上，还应注意EP0799613公开了使用冷冻干燥的分开的抗原，并将冷冻干燥的抗原混合，以构成组合疫苗。然而，该特别的专利提供了实际生产完全组合疫苗的解决方法，但没有涉及能够在现场构成专用疫苗以对付预定动物群的特定健康风险的解决方法。

还应注意当应用本发明时，不存在对付对应于所关注的动物群的所有健康风险所需要的原则。所解决的实际健康风险可以例如取决于管理机构是否允许将特定的抗原组合用于商业/公众使用，对于特定组合的安全性和功效是否存在科学支持，在该组合中是否存在小的风险，是否不同抗原的数量超过了可接受的数量(通常，但不必定，少于10)，是否存在紧急情况(对于医学观点，较大的组合更能接受)等。此外，不需要按照所附权利要求中呈现的次序来进行本发明的不同步骤或者在不同步骤之间不需要任何等待时间就可以进行。例如，可以从测定特定动物群的健康风险开始，此后获得(完整)组的可以冻干形式获得的非活抗原，然后挑选对应于(至少部分)已知健康风险的抗原。还可以从提供所有可用的抗原开始，并进行测定。这很大程度上取决于应用该方法的实践者所发现的方便性。此外，根据实践者所发现的方便性，可以在现场(即，在进行施用的场所，例如，动物群所在的农场)配制疫苗，或在环境更受控制的场所，如医生或兽医的外科手术类房间，在进行疫苗接种前几小时(或发现可接受时)进行配制。另一个选择是在进行实际接种前几小时乃至几天时混合冷冻干燥的抗原(因为几乎不存在干扰风险)，并且只有恰在接种疫苗之前才将液体载体加入到该混合物中。全部落入本发明和所附权利要求范围内的各种方案都可以考虑。

定义

在本发明的意义上，使用以下定义：

疫苗：适于应用于动物的构成，包含一种或多种免疫有效量(即，能够刺激靶动物的免疫***，足以至少降低接种前或接种后野生型微生物攻击的负面影响)的抗原，例如，杀灭的完整微生物和/或其亚基，或任何其他物质，如生物体的代谢产物，通常结合药物学上可接受的载体，如含有水的液体，任选包含免疫刺激剂(佐剂)，在施用于动物时，诱导处理疾病或失调的免疫应答，即，帮助预防、缓解或治愈疾病或失调。通常，可以使用本领域已知的方法来制造疫苗，本领域已知的方法基本上包括将抗原(或含有抗原的组合物)与药物学上可接受的载体混合，例如，液体载体，如(任选缓冲的)水。任选地，根据预期用途或所需的疫苗特性，加入其他物质，如佐剂、稳定剂、粘度调节剂或其他成分。对于口服或非肠道接种，许多形式是合适的，特别是液体制剂(含有溶解或悬浮的抗原)，但固体制剂也是合适的，如植入物或即用形式，如用于悬浮于液体中的抗原的固体载体。施用于动物的疫苗的合适(物理)形式已知超过200年了。

药物学上可接受的载体：任何溶剂、分散介质、涂层、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂，或与靶动物在生理上相容并且可接受的其他材料，例如，制成无菌的。这些载体(或携带介质)的一些实例是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、细菌培养液、葡萄糖、甘油、乙醇等，及其组合。这些载体的配制可以通过任何本领域已知的方法来完成，例如，通过倒入纯流体，如水，加入合适的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液)和稳定剂(例如，BHT或维生素C)，并且使得所得到的产物无菌。如通常所知的，载体的存在对于疫苗的功效通常不是必需的，但其可以明显简化抗原的剂量和施用。

抗原：源自微生物的抗原性材料的总和。抗原启动和介导相应免疫体的形成。细菌、病毒、原生动物和其他微生物是重要的抗原来源。例如，这些可以是源自细胞外表面(荚膜抗原)、细胞内部(菌体抗原或O抗原)或鞭毛(鞭毛抗原或H抗原)的蛋白质或多糖。例如，可以通过细胞微生物分泌其他抗原，或在微生物死亡和破坏过程中释放至介质中。后一种抗原包括许多酶和毒素。

容器：贮藏器中分开的容纳空间，例如，烧瓶、注射器、袋子、发泡、盒子等中的容纳空间。在本发明的意义上，单个贮藏器可以包括多个容器。例如，在本发明的意义上，发泡包装通常包括多个分开的发泡，每个发泡是一个容器。对于包括多个分开容纳空间的盒子或其他装置，也是相同的情况。

微生物的：属于微生物或由微生物引起的。

佐剂：能够促进或扩大免疫事件级联中的特定过程，最终导致更好的免疫应答的物质，即，对抗原的综合身体应答，特别是通过淋巴细胞介导的并且通常涉及特定抗体或之前敏化的淋巴细胞对抗原的识别的应答。通常佐剂对于待发生的所述特定过程不是必需的，但促进或扩大了所述过程。

吸附团(Lyosphere)：冷冻干燥的自支持体，特别是具有球形(如，颗粒)。

试剂盒：一组物质(部分)一起使用以满足特定目的。该试剂盒可以是实体包(如，含有几种物质的盒子)，但也可以是非实体包，如通过互联网或其他公开方式结合使用的提议。

为了生产：为了大规模制造，通常包括重复的过程，以获得根据相同规格的多个物质，与(一次)制备每组规格的单个物质相对。该过程自身可以是简单的并且不必定需要复杂的工业机器。

为了运输：为了促成传送至目的地，例如，使用平信或快递运送，使用路运、航运、水运或适于特定包装等的任何方式。

人：自然人或法人。例如，医师或兽医，或其各自的商业实体。

本发明的实施方案

除了本发明的用于制成施用于预定动物群的疫苗的方法的优选实施方案，本发明的概念还具体表现为生产适用于组成疫苗的多种不同的非活抗原的方法，用于构成疫苗的试剂盒，和能够在现场组成疫苗的方法，包括生产抗原和载体，包装容器中的抗原和贮藏器中的液体，并将这些容器和贮藏器运送至易于在现场制成疫苗的人员处，恰在实际接种疫苗前，通过混合一个或多个容器的内含物与一定体积的液体载体来制成疫苗。

在制成用于施用于预定动物群的疫苗的方法的一个实施方案中，每个容器含有源自一种类型的微生物的抗原。这进一步降低了生产风险，并且给最终使用者提供了更多自由来制成专用疫苗。

在另一个实施方案中，在将冻干内含物混合在一起之前，载体包含非活抗原。例如，用于一些类型的动物时，该实施方案是有利的，在任何情况下，接种疫苗需要一些抗原。例如，在欧洲和USA，实际上所有猪都接种猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)抗原。因此，当来自这种微生物的抗原已经存在于液体载体中时，其可能是有利的。当制成另外包含来自其他猪疾病的抗原的组合疫苗时，这可节约操作时间。对于其他动物，例如，人、鱼或其他水生动物、反刍动物、鸟类、猫、狗、马等，也是相同的情况。

在另一个实施方案中，载体包含佐剂。特别地，在非活抗原的情况下，疫苗中佐剂的存在可以显著提高靶动物中的免疫应答。

在另一个实施方案中，其中存在抗原的冻干形式包含一种或多种吸附团。这样的球体是已知的，例如，从EP0799613，并且与传统的由存在的病毒支持的冻干饼状物相比，具有易于操作的优势。此外，可以相对有效地进行生产，这显著降低了生产成本(参见国际专利申请PCT/EP2009/050584，2009年1月20日申请，归属于IntervetInternational BV)。

在一个实施方案中，在畜群所在的场所制成疫苗。这将抗原之间的干扰降至最小，并且在该实施方案中，抗原混合物的稳定性通常将不是问题。

在另一个实施方案中，将疫苗装入用于皮内施用的装置中。申请人认识到当结合用于疫苗皮内施用的装置时，根据本发明的方法提供了更多其他优点。通常，使用皮内施用，使用较少的抗原量获得较高的功效，并且副作用较低。然而，施用量通常小于1ml。由于本发明提供了以专用方式结合几种抗原的选择，同时保持低的相应疫苗剂量的体积，结合皮内施用来使用提供了明显的优势。皮内施用装置是已知的(参见，例如，Proceedings of the 2008AASV conference，pp 201-204；Needle-free injection technology in swine(猪的无针注射技术)，Chris Chase)。特别地，如从EP928209或EP1515763已知的无针装置看来非常适用于这种施用方式。

实施例

使用以下具体的实施例来进一步解释本发明。

实施例1描述了获得含有一种或多种药物的冷冻干燥颗粒的各种方法。

实施例2结合图1(冻干机，图示)和2(容器，图示)描述了用于本发明中的冷冻干燥装置。

实施例3提供了可以用于本发明中的液体载体的列表。

实施例4提供了可以使用本发明的动物的列表，以及诱导这些动物疾病的相应微生物。

实施例5提及了根据本发明可以制得的典型组合疫苗的一些实例。

实施例6结合图3(互联网模拟)和图4(用于运输的包装)给出了根据本发明的试剂盒的实施方案。

实施例1

本领域已知怎样生产含有微生物抗原内含物的冷冻干燥颗粒。这描述于，例如，EP 799613(归属于AKZO Nobel NV)、JP 09248177(归属于Snow Brand Milk Corp)和WO 2006/008006(归属于BayerTechnology Services GmbH)。从这些参考文献中已知怎样冻干颗粒，以获得“干的”和稳定的吸附团。在后一种参考文献中，提及了用于生产这些颗粒的各种可替换方法。这些是从第4页第23行开始(“存在许多本领域技术人员已知的方法......”)到第8页第13行结束(“......该方法适用于冷冻颗粒或小球”)所概括的。除了这些已知的方法外，已知各种其他方法来获得其中含有药物化合物的冷冻小球，形成球形或球形样颗粒。在本发明的情况下，我们已经使用了从JP 09248177已知的技术，来获得平均直径大约为6mm的冷冻球形小球。最常使用1至15mm的大小，特别是2至10mm的尺寸。

实施例2

在图1中，图示了冻干仪(冷冻干燥装置)。例如，这样的冻干仪可以是Christ Epsilon 2-12D，如从Salm en Kipp，Breukelen，荷兰获得。冻干仪1包括外壳2和多个搁板3。Epsilon 2-12D包括4+1个搁板，为了方便，图1中显示了这些搁板中的三个(即，搁板3a、3b和3c)。给这些搁板的每一个提供了加热元件5(分别用编号5a、5b和5c来表示)，用于搁板3的均匀加热。通过使用处理部件10来控制加热。将外壳连接泵组11，用于在外壳2提供合适的低压。通过使用冷却部件12，特别是含有冷凝器，可以将外壳内部冷却至低达-60℃的温度。给搁板3a和3b提供了固定于其底部的黑色PTFE平板8和8’。这些平板的发射率系数为0.78。通过这些黑色平板和搁板之间的密切接触，实际上可以将这些平板温热至与搁板自身相同的温度。这样，除了搁板3自身以外，可以将平板8认为是热源。

防止在搁板上的是容器15和15’。这些容器由导热材料制得，在这种情况下，为填充炭黑的聚对苯二甲酸二乙酯。容器与放置它们的搁板是导热接触。容器填充冷冻颗粒30，其由此在每个容器中形成填充颗粒床29。通过加热搁板，颗粒通过加热的容器底部和侧壁和通过各自来自加热的平板8和8’的辐射而接受热。图2给出了容器15自身的视图。每个容器包括底部21和侧壁20。通常，容器具有约20至30cm的宽度和长度以及约4cm的高度。填充容器后的填充床高度通常为1.5至3cm。

冷冻干燥处理将导致提供多个冷冻干燥的球体，每个球体含有抗原。然后将球体包装在一个容器中，单独或与多个等价对应物一起。当使用这种方法时，这将最终形成多个不同的非活抗原，每个抗原以冻干形式存在于相应的容器中。这些容器可以结合液体载体作为一个包装来销售。在可替换的实施方案中，与含有抗原的容器分开销售和运输液体载体。当非活冻干抗原组含有大量不同抗原时，这特别有利。在这种情况下，许多最终使用者将不会喜欢每次定购新抗原时接受一定体积的液体载体。

实施例3

除了上述的那些，可以用于本发明中的液体载体通常含有佐剂，如ISCOM’s(免疫刺激复合物)、皂角苷(或其级分和衍生物，如Quil A)、氢氧化铝、脂质体、cochleate、聚乳酸/乙醇酸、油乳剂、凝胶、聚合物微球体、非离子嵌段共聚物、氢氧化铝、CpG-富集基序、单磷酰基脂质A、分枝杆菌(胞壁酰二肽)、酵母提取物、霍乱毒素、表面活性剂、hypoxia等。这些和其他液体载体是本领域公知的。可以用于本发明的各种载体是可购得的。例如，后一类包括

Diluvac

(所有都来自Intervet-Schering-Plough Animal Health，USA)、

和

Diluent(Fort Dodge Animal Health，USA)、ISA 50V、206和IMS 1312(所有都来自Seppic，法国)、

和

和polysynlane(所有都来自BoehringerIngelheim，德国)、IGF-1和

(所有都来自Merial，法国)、

和

(所有都来自MVP实验室，USA)、

(Pick Cell实验室，荷兰)、

(Titermax，USA)、Ribi佐剂(Sigma，USA；作为“MPL+TDM佐剂”获得)、

和

(来自Pfizer Animal health，USA)。

实施例4

在该实施例中，列出了可以使用本发明的动物，以及相应的诱导这些动物疾病的微生物。非活抗原，如杀灭的完整生物体、亚基、毒素或其他代谢产物等，可以通过任何本领域已知的方法，如化学或物理灭活、纯化、重组表达技术等衍生于这些微生物。

第一个实例是猪科(Suidae)组。可以在属于猪科(包括猪)的动物中引起疾病的微生物例如是环状病毒，猪繁殖与呼吸综合症病毒，支原体属(Mycoplasma)，如猪关节液支原体(Mycoplasma hyosynoviae)和猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)，胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis)，猪瘟病毒，钩端螺旋体属(Leptospira)，如波摩那钩端螺旋体(Leptospira pomona)、澳大利亚钩端螺旋体(Leptospira australis)、塔拉索夫钩端螺旋体(Leptospiratarassovi)、犬钩端螺旋体(Leptospira canicola)、出血黄疸钩端螺旋体(Leptospira icterohaemorrhagicae)、哈德焦钩端螺旋体(Leptospira hardjo)和流感伤寒钩端螺旋体(Leptospiragryppothyphosa)，猪布鲁氏菌(Brucella suis)，梭菌属(Clostridium)，如艰难梭菌(Clostridium difficile)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、诺氏梭菌(Clostridium novyi)、败毒梭菌(Clostridium septicum)和破伤风梭菌(Clostridiumtetani)，沙门氏菌属(Salmonella)，如猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholerasuis)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，大肠杆菌(Escherichia coli)、猪水痘，附猪血虫体(Eperythrozoonosissuis)，多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)，猪链球菌(Streptococcus suis)，副猪嗜血菌(Haemophilus parasuis)，猪狂犬病病毒，猪流感病毒，Brachyspira，如Brachyspira pilosicoli和Brachyspira hyodysenteriae，细小病毒，大叶性肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)，猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)，猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)，疱疹病毒，日本B脑炎病毒，冠状病毒，轮状病毒，手足口病病毒，分枝杆菌属(Mycobacterium)，如鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)，猪水泡疹病毒，腺病毒和血凝性脑脊髓炎病毒，各种蠕虫属，如蛔虫属，猪鞭虫，粪类圆线虫属，肾线虫属，后圆线虫属和其他寄生虫，如猪等孢球虫(Isospora suis)和艾美耳球虫(Eimeria)属种。

第二个实例是牛科(Bovidae)组。可以在属于牛科(包括牛、绵羊、山羊)的动物中引起疾病的微生物例如是各种梭菌属(Clostridium)种，牛莫拉氏菌(Moraxella bovis)，无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureaus)，化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)，各种类型的蠕虫(如，血矛线虫(Haemonchus)、奥斯特线虫(Ostertagia)、Cooperia、细颈线虫(Nema todirus)和Dictyocaulus)，坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)，IBR和BVD病毒，副流感病毒，BRSV，大肠杆菌，各种钩端螺旋体类型(特别是，哈德焦钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、犬钩端螺旋体、流感伤寒钩端螺旋体和出血黄疸钩端螺旋体)，多杀巴斯德氏菌、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)，睡眠嗜组织菌(Histophilus somni)，产黑素拟杆菌(Bacteroidesmelaninogenicus)，Brachyspira hyodysenteriae和呼吸道合胞病毒。

第三个实例是马科(Equidae)组。可以在属于马科(包括马)的动物中引起疾病的微生物例如是马红球菌(Rhodococcus equi)、马链球菌(Streptococcus equi)、马脑髓炎病毒、马流感病毒、各种梭菌属种(特别是破伤风梭菌)、各种蠕虫和马疱疹病毒。

第四个实例是犬科组(包括狗)。可以在属于犬科的动物中引起疾病的微生物例如是犬小孢子菌(Microsporum canis)、石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)、须发癣菌(Trychophyton mentagrophytes)、冠状病毒、瘟热病毒、腺病毒、细小病毒、副流感病毒、各种钩端螺旋体属种(如，犬钩端螺旋体、出血黄疸钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、澳大利亚钩端螺旋体、塔拉索夫钩端螺旋体、流感伤寒钩端螺旋体和塞若钩端螺旋体(Leptospira sejroe))、伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi)、狂犬病病毒、支气管炎博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、Malasezzia pachydermatis、假单胞菌属(Pseudomonas)种、葡萄球菌(Staphylococci)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、奇异变形菌(Proteus mirabilis)和各种蠕虫(例如，犬弓首线虫(Toxocaracanis)、窄头钩虫(Uncinaria stenocephala)、犬鞭虫(Trichurisvulpis)、豆状绦虫(Taenia pisiformis))。

第五个实例是猫科组(包括猫)。可以在属于猫科的动物中引起疾病的微生物例如是犬小孢子菌(Microsporum canis)、石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)、须发癣菌(Trychophyton mentagrophytes)、鼻气管炎病毒、杯状病毒、支气管炎博德特氏菌、猫瘟病毒、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psitacci)、狂犬病病毒、各种巴尔通氏体(Bartonella)种和各种蠕虫。

第六个实例是鸟类组(包括鸡形目，如鸡、鹅、鸭和火鸡)。可以在属于鸟类的动物中引起疾病的微生物例如是禽脑髓炎，鸡痘病毒，各种血清型的副鸡嗜血菌(Haemophilus paragallinarum)(特别是血清型A、B和C)，堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)，柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)，新城鸡瘟病毒，Gumboro病毒，减蛋综合症病毒，传染性支气管炎(IB)病毒、各种支原体种，如鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum)和滑液霉形体(Mycoplasma synoviae)，各种沙门氏菌种(如，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、鼠伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌(Salmonella gallinarum))，空肠弯曲杆菌(Campylobactor jejuni)，大肠杆菌，呼肠孤病毒，传染性法氏囊病病毒，鸟鼻气管炎病毒，鸟肺炎病毒，多杀巴斯德氏菌和Erysipelas insidiosa，鸡贫血病毒，曲霉属生物体，产气荚膜梭菌，各种艾美耳球虫种，如堆型艾美耳球虫、变位艾美耳球虫(Eimeria mivati)、巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)、早熟艾美耳球虫(Eimeriapraecox)、布氏艾美耳球虫(Eimeria brunetti)和哈氏艾美耳球虫(Eimeria hagani)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、马立克氏病病毒和喉气管炎病毒。

第七个实例是鱼类组(鱼)。对于鲑鱼和鳟鱼，引起相关疾病的微生物是鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckerii)、杀鲑气单胞菌(Aeromonassalmonicida)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、奥氏弧菌(Vibrioordalii)、杀鲑弧菌(Vibrio salmonicida)、Moritella viscose、鲑鱼立克次氏体(Piscirickettsia salmonis)、传染性胰腺坏死病毒、传染性鲑鱼贫血病毒、心脏和骨骼肌炎症病毒、心肌病综合症病毒、嗜冷黄杆菌(Flavobacterium psychrophilum)、柱状黄杆菌(Flavobacterium columnarae)、Vibrio wodanis、弗朗西丝氏菌属(Francisella)种、Ichthyopthyrium multifillius、海豹链球菌(Streptococcus phocae)、寄生水霉(Saprolegnia parasitica)、传染性造血器官坏死病毒、病毒性出血败血症病毒。对于鳕鱼，相关微生物是弗朗西丝氏菌属种、火神弧菌(Vibrio logei)和鳗弧菌。对于鳊鱼和鲈鱼，相关微生物是鳗弧菌、奥氏弧菌、海洋屈挠杆菌(Tenacibaculum maritimum)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、病毒性神经坏死病毒、杀鱼巴斯德氏菌(Pasteurella piscicida)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)、无乳链球菌、虹色病毒、海洋屈挠杆菌、刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)、鳗弧菌和黄尾脾脏诺卡氏菌(Nocardia seriolae)。对于石首鱼和琥珀鱼，相关微生物是鳗弧菌、格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、杀鱼巴斯德氏菌、虹色病毒、Jaundice和黄尾脾脏诺卡氏菌。对于日本比目鱼，相关微生物是迟钝爱德华氏菌、海豚链球菌和副***链球菌(Streptococcusparauberis)。对于鲶鱼，相关微生物是鲶鱼爱德华氏菌(Edwardsiellaictaluri)和柱状黄杆菌。对于罗非鱼，相关微生物是海豚链球菌、无乳链球菌、虹色病毒、柱状黄杆菌、寄生水霉、黄尾脾脏诺卡氏菌和弗朗西丝氏菌属。对于鲤鱼，相关微生物是嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、锦鲤疱疹病毒和寄生水霉。

实施例5

含有源自一种或多种类型的微生物，乃至多达10种不同类型的微生物的抗原的疫苗，已经知道很多年了。抗原，特别是非活抗原，可以在单个载体内混合，并且作为一种组合物来施用，是疫苗技术领域公知的。实际上，对于每种特定组合需要注意各种抗原的功效，但这可以根据本领域已知的方法来进行。对于尽管是现场混合的不同抗原之间的干扰也是如此，这几乎不是一个问题。实际上，在施用前混合抗原是医药领域、人以及兽医实践中常用的工作方法。本发明提供了一种方便的方式来支持这种已知的工作方法。在该实施例中，给出了特定的组合疫苗的实施方案。这些疫苗例如从文献是已知的，认为是所需的乃至可购得的。

对于猪，可以获得以下的抗原组合：对应于猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)、猪环状病毒、胞内劳森氏菌(Lawsoniaintracellularis)和任选猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopa thiae)的抗原的组合。例如，出厂时将头两种微生物的抗原置于液体载体中(因为几乎100％的猪需要接种对抗这些微生物的疫苗)并以冻干体形式提供后两种微生物，例如，各自分开包装在容器中。这给最终使用者提供了如果需要考虑预定猪群中与微生物感染相关的特定健康风险时加入劳森氏菌和或丹毒丝菌抗原的选择。在备选的方案中，只有猪肺炎支原体抗原或猪环状病毒抗原存在于载体中，而其他抗原，如副猪嗜血菌、猪链球菌、胞内劳森氏菌、猪环状病毒、猪肺炎支原体等作为非活冷冻干燥抗原可获得，用于溶解(分散)于液体载体中。其他组合例如是对应于O、A、C、Asial和SAT1、SAT2和SAT3型的手足口病病毒的抗原的混合物；源自多杀巴斯德氏菌和支气管炎博德特氏菌的抗原的混合物；对应于猪红斑丹毒丝菌和猪细小病毒的抗原的混合物；对应于猪肺炎支原体、猪环状病毒和PRRS病毒的抗原的混合物；和对应于猪肺炎支原体、多杀巴斯德氏菌和支气管炎博德特氏菌的抗原的混合物。

对于牛，可以获得以下的抗原组合：对应于各种梭菌种的抗原组合(如，肖氏梭菌(Clostridium chauvoei)、诺氏梭菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、败毒梭菌、索氏梭菌(Clostridium sordellii)等)；对应于BRS病毒、3-副流感病毒和溶血性曼氏杆菌的抗原的组合物；对应于IBR病毒和副流感病毒的抗原的组合；对应于冠状病毒、轮状病毒和大肠杆菌的抗原的组合；对应于IBR病毒、副流感病毒和BVD病毒的抗原的组合；对应于各种沙门氏菌的抗原的组合，如都柏林沙门氏菌(Salmonella dublin)和鼠伤寒沙门氏菌等；对应于O、A、C、Asial和SAT1、SAT2和SAT3型的手足口病病毒的抗原的组合。

对于狗，可以获得以下的抗原组合：对应于瘟热病毒和腺病毒的抗原的组合；对应于瘟热病毒、腺病毒和细小病毒以及任选副流感病毒的抗原的组合；对应于副流感病毒和支气管炎博德特氏菌的抗原的组合；对应于各种钩端螺旋体种(犬钩端螺旋体、出血黄疸钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、澳大利亚钩端螺旋体、塔拉索夫钩端螺旋体、流感伤寒钩端螺旋体、塞若钩端螺旋体等)并任选结合冠状病毒和/或狂犬病病毒的抗原的组合。

对于猫，可以获得以下的抗原组合：对应于疱疹病毒和杯状病毒并任选结合猫瘟和鹦鹉热衣原体的抗原的组合。

对于鸡，可以获得以下的抗原组合：对应于鸟脑脊髓炎和鸡痘病毒的抗原的组合；对应于各种血清型的副鸡嗜血菌(特别是血清型A、B和C)的抗原的组合；对应于堆型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫的抗原的组合；对应于新城鸡瘟病毒、Gumboro病毒和任选减蛋综合症病毒和/或传染性支气管炎(IB)病毒的抗原的组合；对应于各种支原体种的抗原的组合，如鸡毒霉形体和滑液霉形体；对应于各种沙门氏菌种(如，肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌)和任选空肠弯曲杆菌和/或大肠杆菌的抗原的组合；对应于呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒和新城鸡瘟病毒和/或鸟肺病病毒的抗原的组合；对应于多杀巴斯德氏菌和Erysipelas insidiosa的抗原的组合。

对于鱼，对于每种特定类型的鱼(例如，“鲑鱼和鳟鱼”、“鳕鱼”、“鲈鱼”、“鳊鱼”、“石首鱼和琥珀鱼”、“日本比目鱼”、“鲶鱼”、“罗非鱼”和“鲤鱼”)，引起疾病的微生物的抗原的组合将是有利的。这样的组合可以在一种疫苗中用于治疗每种类型的鱼中的多种健康风险。

对于人，可以获得以下的抗原组合，对应于白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、百日咳博德特氏菌(Bordatellapertussis)、破伤风梭菌和脊髓灰质炎病毒的抗原的组合；对应于(各种类型的)副粘病毒和(各种类型的)reseolovirus的抗原的组合。

在每种情况下，可以确定哪些抗原是处理特定动物群的特定健康风险需要或期望的。对于所关注的畜群，这可能是只有一种特定的风险，直至许多特别相关的。然后，确定这些抗原中的哪些可用于(现场)构成疫苗。可以取该组中的一种或多种抗原(例如，但不是必定的，对应于每种健康风险的所有可获得的抗原)。因为每种抗原都可以以冷冻干燥形式来使用，可以将抗原简单地与合适的液体载体混合，由此它们将溶解和/或分散于介质中，而没有明显地增加体积，形成即可使用的疫苗。充分均质后，可以将即可使用的疫苗施用于受试动物(例如，通过非肠道施用于猪或通过口服施用于鱼)。可以通过任何本领域已知的方式来完成非肠道疫苗接种(例如，通过注射器的肌内、粘膜下或皮内施用)。特别合适的是用于皮内施用的无针注射装置，作为

接种器可从Intervet/Schering-Plough Animal Health，Boxmeer，荷兰获得。

实施例6

该实施例给出了根据本发明的试剂盒的实施方案。在图3中，在笔记本电脑35上描绘了网页40，该网页40登出了对于动物(43，在这种情况下是“猪”)是药物学上可接受的液体载体45和一组多种不同冻干的非活抗原46(描述为“Aaaa”、“Bbbb”等)，其(通常)对应于这种类型的动物的健康风险，并且适于与载体混合来构成疫苗。在这种特定的情况下，网页40显示了获得液体载体和抗原的公司名称(41)，以及交互式按钮42，以形成通过该网页可获得的某些信息。

图4显示了根据本发明的试剂盒的另一个实例，在该情况下，盒子400(出于清晰的原因，图4中未显示盖子)含有瓶子45，其含有液体载体和多个小瓶46，每个含有非活冷冻干燥的抗原。例如，如网页40的区域46中显示的每种抗原存在于该盒子400中。在可替换的实施方案中，盒子含有只表示区域46中所示一部分抗原的小瓶，特别是当想要用这些抗原中的一种或多种组成疫苗的人员不需要所有不同抗原来构成合适疫苗用于治疗预定动物群时。例如，如果预先清楚在特定区域中没有发生某些微生物感染，因此没有赋予该区域中的预定动物群健康风险，可能就是这种情况。

Claims (14)

1.一种制成施用于预定动物群的疫苗的方法，包括：

-提供一组多种不同的非活抗原，每种非活抗原都以冻干形式存在并包装在容器中，

-提供液体载体，该载体对于动物是药物学上可接受的，

-测定所述畜群与微生物感染有关的健康风险，

-确定所述组中的哪一种或多种非活抗原对应于这些健康风险，

-取出对应于该一种或多种非活抗原的一个或多个容器，和

-将所述一个或多个容器中的冻干内含物与所述载体混合，以制成疫苗。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于每个容器都含有源自一种类型的微生物的抗原。

3.根据在前任一项权利要求的方法，其特征在于在与冻干的内含物混合之前，所述载体包含非活抗原。

4.根据在前任一项权利要求的方法，其特征在于所述载体包含佐剂。

5.根据在前任一项权利要求的方法，其特征在于所述冻干形式包含一个或多个吸附团。

6.根据在前任一项权利要求的方法，其特征在于在畜群所在的场所制成疫苗。

7.根据在前任一项权利要求的方法，其特征在于将疫苗装载至用于皮内施用的装置中。

8.一种生产适于制成施用于预定动物群的疫苗的多种不同的非活抗原的方法，该方法能够制成疫苗，使其对应于该畜群的特定健康风险，该方法包括：

-将每种不同的非活抗原分开冻干；

-将每种不同的非活抗原包装在容器中，以形成一组多种冻干的非活抗原；

-配制对于动物是药物学上可接受的并且适于重建每种冻干的非活抗原的液体载体，

-制成包含所述液体载体和所述那组多种非活抗原的试剂盒。

9.根据权利要求8的方法，其特征在于所述试剂盒还包含用于皮内施用疫苗的装置。

10.根据权利要求8的方法，其特征在于所述试剂盒包括含有容纳液体载体的贮藏器和多个分开的容器的盒子，每个容器包含冻干的非活抗原。

11.一种用于制成施用于动物群的疫苗的试剂盒，包含对于动物是药物学上可接受的液体载体和一组适于与载体混合以制成疫苗的多种不同的冻干非活抗原，所述试剂盒任选包含用于皮内施用疫苗的装置。

12.根据权利要求11的试剂盒，其特征在于其包括含有容纳液体载体的贮藏器和多个分开的容器的盒子，每个容器包含冻干的非活抗原。

13.一种能够就地制成施用于预定动物群的疫苗的方法，制成该疫苗以对应于该畜群特定的健康风险，其特征在于该方法包括：

-生产一组多种不同的非活抗原，

-将每种非活抗原冻干，和

-将每种冻干的非活抗原包装在分开的容器中，

-生产液体载体，该载体对于动物是药物学上可接受的，和

-用该液体载体填充贮藏器，

-将容器和贮藏器运输至帮助现场制成所述疫苗的人员处，所述人员通过将一个或多个容器中的内含物与一定体积的液体载体混合来现场制成所述疫苗。

14.根据权利要求13的方法，其特征在于将容器与贮藏器分开运输。

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