CN102335214A - 一种高效的三七总皂苷注射剂及其制备方法 - Google Patents

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许淑清
黄宇声
刘冠萍
张栩颜
李钊文
陈小杰
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Abstract

本发明公开了一种高效的三七总皂苷注射剂及其制备方法，该注射剂中含有以下重量百分比的活性成分：三七皂苷R19.5-15.0％、人参皂苷Rg137.0-56.0％、人参皂苷Re 5.0-8.0％、人参皂苷Rb121.0-32.0％、人参皂苷Rd不低于0.45％，且三七三醇苷与三七二醇苷重量比为1.5-3.5∶1。经药效学实验证实，符合本发明三醇苷和二醇苷比例的三七总皂苷注射剂治疗瘀血阻络，中风偏瘫，胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症等心脑血管疾病时，效果好。

Description

一种高效的三七总皂苷注射剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种高效的治疗心脑血管等疾病的三七总皂苷注射剂及其制备方法。
背景技术
三七总皂苷是临床上用于治疗心脑血管疾病的一种常用药。目前用于治疗心脑血管疾病的三七总皂苷注射制剂有：血栓通注射液、注射用血栓通、血塞通注射液、注射用血塞通。
《中华人民共和国***药品标准》及《国家中成药标准汇编中成药地方标准上升国家标准部分经络肢体脑系分册》等国家标准公开的三七总皂苷注射剂中各成分比例对比如下表：
表1：三七总皂苷国家标准含量测定部分对比
Figure BDA0000096235410000011
以上标准中对三七三醇苷与三七二醇苷比例没有作出限定，亦没有作出具体的比例限定值。
三七二醇苷主要含人参皂苷Rb1(C54H92O23和Rd(C48H82O18)。
三七三醇苷主要含人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Re(C48H82O18)及三七皂苷R1(C47H80O18)。
下表是市场购买的三七总皂苷注射剂实际检验数据：
表2：市场购买的注射液含量测定部分对比
  批号   R1   Rg1   Re   Rb1   Rd   总皂苷   三醇苷与二醇苷比例
  血栓通注射液(圣泰)   20090506   4.39   15.57   1.99   16.65   3.51   42.1   1.08879∶1
  血栓通注射液(圣泰)   20081226   3.77   13.83   1.68   15.16   3.56   37.99   1.029915∶1
  血栓通注射液(圣泰)   20090518   4.26   15.19   1.94   16.27   3.43   41.09   1.085787∶1
  注射用血栓通(梧州制药)   091029   8.35   36.51   6.16   36.85   3.95   96.82   1.25049∶1
  注射用血栓通(梧州制药)   091131   7.37   33.44   5.84   36.39   5.04   88.09   1.125996∶1
  注射用血栓通(梧州制药)   091130   7.37   32.87   5.78   36.76   5.21   87.98   1.096497∶1
  血塞通注射液(珍宝岛)   20081101   3.86   15.56   2.4   25.96   5.41   53.19   0.695569∶1
  血塞通注射液(珍宝岛)   20090430   4.55   17.68   2.16   23.01   5.19   52.59   0.864894∶1
  血塞通注射液(昆明兴中)   20090504   3.11   11.79   1.88   18.14   3.97   38.89   0.758933∶1
  注射用血塞通(昆明制药)   09GB08   7.53   28.84   3.53   39.88   9.41   89.2   0.809495∶1
  注射用血塞通(昆明制药)   09FB05   7.59   29.03   3.62   40.22   9.5   89.96   0.809332∶1
  注射用血塞通(昆明制药)   09FB05   8.06   31.04   3.89   40.66   9.67   93.32   0.854163∶1
国家法定三七总皂苷注射剂质量标准中虽然对三七三醇苷与三七二醇苷比例没有作出限定，但根据实际的产品测定结果，检测批次的三七总皂苷注射剂中三七三醇苷与三七二醇苷实际比例在0.6-1.3∶1之间。
现有的三七总皂苷是从三七原料中提取得到，三七总皂苷中各皂苷的成分组成比例没有经过刻意调整，生产所得的三七总皂苷提取物中其各皂苷成分及其比例基本与三七原料相同，只是各厂家的生产工艺有所不同，造成各企业生产的三七总皂苷中各皂苷的成分有所区别，三七三醇苷与三七二醇苷实际比例多在0.6-1.3∶1之间。
三七总皂苷属多靶点药物，药物中的各皂苷成分不同、比例不同，必定会导致三七总皂苷注射剂在药效上有所差异，针对此问题，发明人经过对不同三七三醇苷与三七二醇苷比例的三七总皂苷的制备研究及其药效研究，最终确定了三七总皂苷注射剂中的三七三醇苷和三七二醇苷的合理比例，提出了本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效的三七总皂苷注射剂。
本发明的另一目的还提供了该注射剂的制备方法。
本发明提供的一种三七总皂苷注射剂，含有以下重量百分比的活性成分：三七皂苷R19.5-15.0％、人参皂苷Rg137.0-56.0％、人参皂苷Re5.0-8.0％、人参皂苷Rb121.0-32.0％、人参皂苷Rd不低于0.45％，且三七三醇苷与三七二醇苷重量比为1.5-3.5∶1。
优选地，三七三醇苷与三七二醇苷重量比为2.0-3.5∶1。
进一步优选地，三七三醇苷与三七二醇苷重量比为2.5-3.5∶1。
三七中的三七三醇苷主要由三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re组成。
三七中的三七二醇苷主要由人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd组成。
所述注射剂为注射液、冻干粉针或无菌粉末。
本发明还提供了三七总皂苷注射液的制备方法，包括以下步骤：
1)取三七，制成粗粉，用乙醇提取2-5次，每次加2-20倍50-95％的乙醇，每次提取1-5小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.5-1g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.05-0.5％，搅匀，静置，滤过；
2)取滤液加0.1-1.0％的枸橼酸钠，过0.5-10倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为0.5-10BV/h；用0.5-3倍、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为0.5-15BV/h，洗脱液弃去，再分别用纯化水及10％乙醇液洗柱，洗脱液弃去；用45-49.5％的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在40-80℃时相对密度为1.05-1.20的清膏，减压干燥，得三七总皂苷；
3)按照注射剂的常规制备方法，将三七总皂苷制成三七总皂苷注射剂。
优选地，本发明提供的制备方法包括以下步骤：
1)取三七，制成粗粉，粒径控制在10-40目，用乙醇提取2-4次，每次加8-12倍60-80％的乙醇，每次提取2-5小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.5-1g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1-0.2％，搅匀，静置，滤过；
2)取滤液加0.3-0.6％的枸橼酸钠，过1-8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为0.5-5.0BV/h；用0.5-3倍、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为1-6BV/h，洗脱液弃去，再分别用纯化水洗脱至中性，洗脱液弃去；用3BV、浓度为10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用45-49.5％的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在60℃时相对密度为1.05-1.20的清膏，减压干燥，得三七总皂苷；
3)按照注射剂的常规制备方法，将三七总皂苷制成三七总皂苷注射剂。
上述两种提取方法中：
所述三七为三七主根和/或三七芦头；
所述大孔吸附树脂的型号为D101、D201、AB-8或NKA-9。
本发明还提供了上述三七总皂苷注射剂在制备心血管疾病的药物中的应用。
本发明提供的注射液具有以下优点：
1、提取方法：
背景技术中已经提到，现有的三七总皂苷是从三七原料中提取得到，三七总皂苷中各组成比例没有经过刻意调整，因各厂家的实际生产工艺不同，造成同一品种的注射剂中组成亦有区别。本发明对三七原料进行提取，通过生产工艺的严格控制，使三七三醇苷与三七二醇苷比例保持在稳定范围内，亦保证了产品疗效的稳定性。
三七总皂苷注射剂是一种多靶点、多作用的药物，不同成分起的作用不同，目前还未明确各组分在人体内的作用机制，但经过动物药效学实验结果，证实三七三醇苷与三七二醇苷在本发明的配比范围内更有利于发挥药效作用。
三七三醇苷主要是溶解在低浓度的乙醇，三七二醇苷主要溶解在高浓度的乙醇中，因此，发明人在洗脱大孔树脂时，使用45-49.5％浓度的乙醇洗脱，洗脱液中三七三醇苷的含量就会比较高。
在提取时使用的50-80％乙醇，洗脱液中三七二醇苷含量比较高，制备成相当于现市场上三七总皂苷的产品含量；低浓度洗脱时，三七三醇苷的含量较高，因此，造成不同浓度乙醇洗脱所得的三七总皂苷中三七二醇苷和三七三醇苷的比例是不同的，造成其注射液的疗效差异。
与现有技术相比，本发明提供的提取方法主要区别在于三七总皂苷制备过程中，因为三七三醇苷多溶于低度乙醇，三七二醇苷多溶于高于50％的乙醇，使用45-49.5％的乙醇洗脱大孔树脂吸附的三七总皂苷，可以得到三七三醇苷比例较高的三七总皂苷。
2、本发明中对三醇苷和二醇苷比例进行协调，经药效学实验证实，符合本发明三醇苷和二醇苷比例的三七总皂苷注射剂治疗瘀血阻络，中风偏瘫，胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症等心脑血管疾病时，效果更好，且优于与其他方法制备的过高的三七三醇苷或过高的三七二醇苷，及其重量比在不在本发明1.5-3.5∶1范围内的注射剂。
3、本发明专利与注射用血栓通相比，更好的改善了MCAO大鼠神经的功能，缩小脑梗死范围和减轻脑水肿作用更强。
在体大鼠心肌缺血再灌注模型观察药物作用实验中，本发明专利组与注射用血栓通相比，在减少梗塞面积，降低血清CK、LDH含量方面作用更强。
以小鼠脑血栓形成模型表明各药物组对胶原蛋白与肾上腺素联合诱导的小鼠体内血栓所致死亡有显著的保护作用。
且优于其他方法制备的注射用血栓通。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
BV为多少倍的柱体积，如1BV为1倍柱体积。
浓度为g/ml，如1％的枸橼酸钠溶液为1g枸橼酸钠溶于100ml的水中，制得1％的枸橼酸钠溶液。
以下实施例中大孔吸附树脂的类型可选用D101、D201、AB-8或NKA-9等常用的类型。
实施例1：三七总皂苷冻干粉针剂
1、提取方法：
取三七主根，制成40目粗粉，提取2次，每次加12倍60％的乙醇，每次提取2小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.5g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.05％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.1％的枸橼酸钠，过0.5倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为0.5BV/h；用1BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为0.5BV/h，洗脱液弃去；用纯化水洗柱至流出液为中性，洗脱液弃去；再用3BV的10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用45％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.05的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是5％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A：乙腈，流动相B：水，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与Re的分离度应不低于1.5。
Figure BDA0000096235410000061
对照品溶液(或对照提取物溶液)的制备：分别取减压干燥12小时的三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R10.3mg、人参皂苷Rg11.2mg、人参皂苷Re 0.2mg、人参皂苷Rb11.0mg、人参皂苷Rd 0.1mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；或取减压干燥12小时的三七总皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，摇匀，即得对照提取物溶液。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液(或对照提取物溶液)与供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，三七皂苷R1为10.5％，人参皂苷Rg1为37.0％，人参皂苷Re为6.2％，人参皂苷Rb1为32.0％，人参皂苷Rd为3.5％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为89.2％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝1.5∶1。
实施例2：三七总皂苷的提取方法
1、提取方法：
取三七芦头，制成30目粗粉，提取5次，每次加8倍95％的乙醇，每次提取5小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约1g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.5％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加1.0％的枸橼酸钠，过10倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为2.0BV/h；用0.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为15BV/h，洗脱液弃去；用纯化水洗柱，至流出液为中性，洗脱液弃去；再用3BV、浓度为10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用49.5％的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.20的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是10％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含固形物150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为14.8％，人参皂苷Rg1为46.9％，人参皂苷Re为5.2％，人参皂苷Rb1为24.3％，人参皂苷Rd为2.4％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为93.6％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝2.5∶1。
实施例3：三七总皂苷的提取方法
1、提取方法：
取三七主根，制成20目粗粉，提取4次，每次加10倍70％的乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.6g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.2％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加1.0％的枸橼酸钠，过3倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为1.0BV/h；用3BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为5BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，洗脱液弃去；再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用48％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.10的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为9.5％，人参皂苷Rg1为42.9％，人参皂苷Re为5.4％，人参皂苷Rb1为26.5％，人参皂苷Rd为2.3％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为86.6％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝2.0∶1。
实施例4：三七总皂苷的提取方法
1、提取方法：
取三七主根，制成10目粗粉，用乙醇提取2次，每次加20倍80％的乙醇，每次提取1小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.8g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.6％的枸橼酸钠，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为10BV/h；用2BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为15BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用46％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.15的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为15.0％，人参皂苷Rg1为52.6％，人参皂苷Re为8.0％，人参皂苷Rb1为21.1％，人参皂苷Rd为0.5％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为97.2％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝3.5∶1。
实施例5：三七总皂苷的提取方法
1、提取方法：
取三七主根，制成25目粗粉，用乙醇提取3次，每次加6倍50％的乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.9g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.7％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.5％的枸橼酸钠，过6倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为5BV/h；用1BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为6BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用47％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.10的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为10.2％，人参皂苷Rg1为56.0％，人参皂苷Re为5.0％，人参皂苷Rb1为25.2％，人参皂苷Rd为1.8％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为98.2％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝2.6∶1。
实施例6：三七总皂苷的提取方法
1、提取方法：
取三七主根，制成15目粗粉，用乙醇提取4次，每次加11倍75％的乙醇，每次提取3小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.6g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.2％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.5％的枸橼酸钠，过3倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为8BV/h；用1.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为5BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，洗脱液弃去；再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用45％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.17的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、注射液的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水溶解并调节每1ml含三七总皂苷60mg，另加氯化钠1mg，滤过，灌装，制成注射液。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为13.2％，人参皂苷Rg1为45.3％，人参皂苷Re为7.9％，人参皂苷Rb1为25.8％，人参皂苷Rd为2.6％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为94.8％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝2.3∶1。
实施例7：三七总皂苷无菌粉末
1、提取方法：
取三七芦头，制成35目粗粉，用乙醇提取2次，每次加9倍75％的乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.7g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.15％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.4％的枸橼酸钠，过1.5倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为3BV/h，收集流出液；流出液过2.5倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附；用2.5BV浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为4BV/h，洗脱液弃去；用纯化水洗柱至流出液为中性，再用3BV的10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用46％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在65℃时相对密度为1.15的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7.5％)。
2、无菌粉末的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，除菌滤过，冻干，无菌分装，制成无菌粉末。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为14.3％，人参皂苷Rg1为48.2％，人参皂苷Re为5.9％，人参皂苷Rb1为23.6％，人参皂苷Rd为3.1％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为95.1％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝2.6∶1。
从背景技术中“市场购买的三七总皂苷注射剂实际检验数据”可以看到，血塞通注射剂与血栓通注射剂相比，三七三醇苷的含量比例是偏低的，其原因在于三七提取以及大孔树脂洗脱时使用的乙醇浓度比较高。由此，发明人参照血塞通注射剂三七总皂苷的提取方法，制备了对比例1-4，三七三醇苷含量比例比较低的样品作为实施例的对照用药物。
对比例1：三七总皂苷的提取方法(参照血塞通注射剂的三七总皂苷提取方法)
1、提取方法：
取三七主根，制成20目粗粉，用乙醇提取2次，每次加10倍70％的乙醇，每次提取3小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.6g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.6％的枸橼酸钠，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为10BV/h；用0.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为15BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV量10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用50-80％(依次洗脱的乙醇浓度分别为50、55、60、65、70、75、80％)的乙醇梯度洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.10的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是6％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为9.8％，人参皂苷Rg1为37.7％，人参皂苷Re为5.1％，人参皂苷Rb1为38.4％，人参皂苷Rd为3.8％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为94.8％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝1.25∶1。
对比例2：三七总皂苷的提取方法(参照血塞通注射剂的三七总皂苷提取方法)
1、提取方法：
取三七主根，制成10目粗粉，用乙醇提取2次，每次加20倍80％的乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.8g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.6％的枸橼酸钠，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为10BV/h；用0.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液以15BV/h流速洗脱，洗液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV量10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用50-80％(依次洗脱的乙醇浓度分别为50、55、60、65、70、75、80％)的乙醇梯度洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.15的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为9.6％，人参皂苷Rg1为32.8％，人参皂苷Re为4.0％，人参皂苷Rb1为32.8％，人参皂苷Rd为9.1％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为88.3％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝1.11∶1。
对比例3：三七总皂苷的提取方法(参照血塞通注射剂的三七总皂苷提取方法)
1、提取方法：
取三七主根，制成30目粗粉，用乙醇提取2次，每次加8倍90％的乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.7g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.8％的枸橼酸钠，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为10BV/h；用0.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为15BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用50-80％(依次洗脱的乙醇浓度分别为50、55、60、65、70、75、80％)的乙醇梯度洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.2的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是7％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为8.3％，人参皂苷Rg1为28.3％，人参皂苷Re为3.4％，人参皂苷Rb1为37.8％，人参皂苷Rd为10.1％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为87.9％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝0.84∶1。
对比例4：三七总皂苷的提取方法(参照血塞通注射剂的三七总皂苷提取方法)
1、提取方法：
取三七主根，制成40目粗粉，用乙醇提取4次，每次加5倍80％的乙醇，每次提取3小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.5g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1％，搅匀，静置，滤过；
取滤液加0.5％的枸橼酸钠，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为10BV/h；用0.5BV、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为15BV/h，洗脱液弃去；再用纯化水洗柱，至流出液为中性，再用3BV、10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用50-80％(依次洗脱的乙醇浓度分别为50、55、60、65、70、75、80％)的乙醇梯度洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂，并浓缩至在60℃时相对密度为1.2的清膏，低温干燥，得三七总皂苷(收率是8％)。
2、粉针剂的制备方法：
取上述三七总皂苷加注射用水调节每1ml含三七总皂苷150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。
3、含量检测：
方法同实施例1，本品按干燥品计算，三七皂苷R1为9.8％，人参皂苷Rg1为28.7％，人参皂苷Re为5.1％，人参皂苷Rb1为38.4％，人参皂苷Rd为6.8％。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量为88.8％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝0.96∶1。
实验例1：三七总皂苷注射制剂含量比较
对实施例1-7和对比例1-5注射剂中的含量进行测定，测定方法见实施例1，结果见下表1：
表1：三七总皂苷注射制剂含量比较
Figure BDA0000096235410000151
检查结果显示：含量测定结果，本发明实施例1-7制成的受试药物，三七三醇苷与三七二醇苷的比例在1.52-3.5∶1之间，对比例1-4制成的受试药物，三七三醇苷与三七二醇苷的比例在0.84-1.25∶1之间。
实验例2：药效实验
1、实验药物
对比例1-4制成的受试药物；本发明实施例1-7制成的受试药物。
2、实验动物
SPF级昆明种KM小鼠，18-20g，雌雄兼用，购买自广西医科大学实验动物中心(生产许可证号：SCXK桂2009-0002)，SPF级SD大鼠，150-200g，雄性，购买自南方医科大学实验动物中心(动物合格证号：SCXK(粤)2006-0015)。
3、实验方法
3.1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
3.1.1动物分组及给药
取SD大鼠260只，饲养3天后，随机分为13组，分别为空白对照组(假手术组)、模型组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组、实施例7组，每组20只。静脉给药，连续7天，对照组和模型组给予等体积的生理盐水(NS)，药物组给予相应的药物45.0mg/kg。
3.1.2制备大鼠大脑中动脉(MCA)闭塞的脑缺血再灌注模型
末次给药1h后，参照改良的Longa-Zea氏线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。于栓塞2h时不再麻醉拔出栓线，于再灌注后24h处死动物。模型成功的标志是动物苏醒后出现同侧的Homer征(眼裂变小，眼球内陷)和对侧以前肢为重的偏瘫。
3.1.3观察指标
3.1.3.1神经功能缺损评分
参照Longa-Zea 5分制评分标准于再灌注后24h进行神经功能缺损评分。0分：无神经功能损伤症状；1分：不能伸展对侧前爪；2分：行走时向偏瘫侧转圈；3分：向偏瘫侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。
3.1.3.2梗死体积测定
于脑缺血2h再灌注24h过量水合氯醛腹腔注射麻醉处死大鼠(每组10例)，迅速断头取全脑速冻15min，经视交叉水平行冠状切片(共A、B、C、D、E5个脑片，脑片厚度约2mm)，C片常规做石蜡包埋，用做免疫组化和HE染色，其余脑片置于2％TTC磷酸盐缓冲液中避光，37℃恒温温育30min，10％***后固定，正常脑组织着深红色，梗死脑组织不着色。各脑片在同等条件下用数码相机正反面拍照，应用病理图像分析仪测量每片梗死面积及该片总面积，按公式：[(各片正反面梗死面积之和/2)×片厚]/[(各片正反面总面积之和/2)×片厚]]×100％计算出梗死体积/大脑体积百分比，以此作统计分析。其中C片脑片正反面面积以B及D片相邻面表示。
3.1.3.3脑含水量
采用湿-干重法对脑水肿进行定量。脑缺血2h再灌注24小时后迅速取出脑组织(每组10例)，并分为同侧半球和对侧半球。每例脑组织均置放于铝箔上。称量一侧大脑半球组织的湿重后，将其置放于110℃环境中烘干24小时，称量此时的干重。根据下述公式计算缺血半球的水分含量：脑组织含水量(％)＝(脑组织湿重-脑组织干重)/脑组织湿重×100％。
3.2对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
3.2.1在体大鼠心肌缺血再灌注模型的建立
动物以3％戊巴比妥钠腹腔麻醉(50mg/kg)后，仰位固定。连接生理记录仪，记录II导联心电图。气管切开，呼吸机控制通气，根据血气结果调节呼吸频率和潮气量。左颈总动脉连接压力换能器，持续监测平均动脉压和心率。右侧内静脉置管作为药物输液通道。胸骨左缘0.5cm处做一与胸骨平行的纵形切口，暴露第3、4、5肋后，开胸暴露心脏，用6-0线结扎冠状动脉左前降支(假手术组只穿线不结扎)。血流动力学和血气分析结果稳定10min后，结扎冠状动脉缺血30min，然后冠状动脉再灌注120min。模型成功的判断：收紧结扎线可见左心室由红色迅速变为紫色，局部节段性运动不良，心电图可见QRS波立即明显增高，表示心肌缺血制作成功；放松结扎线再灌注后可见缺血去变、搏动增强、QRS波振幅较前明显下降，表示再灌注成功。
3.2.2实验分组：
130只SD大鼠随机分为13组，每组10只，方案如下(1)假手术组：开胸后冠状动脉左前降支只套线，不结扎；(2)模型组：在灌注前5min给生理盐水1ml/kg；(3)药物处理组11组，包括实施例1-7组、对比例1-4组：再灌注前5min经静脉给予相应药物45.0mg/kg。
3.2.3血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的测定
再灌注120min结束后，每只采血2ml，2500r/min离心10min，取血清用于测定肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)。
3.2.4心肌梗死面积的测定
再灌注结束完成采血后，开胸再次结扎冠脉左前降支，于颈内静脉注入3％伊文思蓝2-3ml，确定未缺血与缺血的心肌组织(未缺血心肌呈蓝色，缺血区不染色)。静脉推注10％氯化钾(2ml/kg)，使心脏停于舒张期，开胸取出心脏。生理盐水冲洗心脏，剥离心包后称重。分离出左心室称重，置于-20℃下保存1h。取出左心室，以平行于房室沟的方向切成4-5片，每片厚约2mm。置入1％TTC染液中，于37℃水浴10-15min(避光，振荡)，10％***固定10min。此时出现3种颜色：蓝色为正常心肌，红色为缺血心肌，白色为梗死心肌。数码相机拍照，分离各种颜色区，电子天平称重，测定左心室(left ventricle，LV)，危险区(areaat risk，AAR)，梗死区(infarct size，IS)心肌重量。以AAR/LV重量百分比为缺血区范围，以IS/AAR重量百分比为心肌梗死范围。
缺血面积百分比(AAR/LV)＝(缺血面积/左心室面积)×100％
梗死面积百分比(IS/AAR)＝(梗死面积/缺血面积)×100％
3.3抗小鼠脑血栓的作用
选取KM小鼠130只，雌雄各半，体重18-20g，随机分为模型组，阳性药瑞替普酶(3.3mu/kg)和对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组、实施例7组，每组10只，药物组按0.1ml/10g体重尾静脉注射受试药物2次，间隔30min一次，模型组注射等体积生理盐水(NS)。末次给药30min后，尾静脉注射胶原蛋白与肾上腺素联合混合诱导剂(胶原蛋白90ug/只，肾上腺素9ug/只)，注射后立即观察5min之内小鼠死亡数，计算药物对小鼠脑血栓的保护率，X2检验。
3.4统计学处理
采用SPSS12.0进行数据的统计分析。计量资料以均数±标准差
Figure BDA0000096235410000181
表示，组间比较用t检验(方差不齐时采用t检验校正公式)。
4结果
4.1对大鼠神经行为学、脑梗死率及含水量的影响：见下表2-4
表2：对大鼠神经行为学的影响(n＝10，
Figure BDA0000096235410000182
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   神经功能缺失评分
  假手术组   等体积NS   20   0.00±0.00
  模型组   等体积NS   20   2.90±0.31***
  对比例1   45.0   20   2.35±0.81#
 对比例2   45.0   20   2.50±0.69#
 对比例3   45.0   20   2.45±0.69#
 对比例4   45.0   20   2.40±0.68#
 实施例1   45.0   20   1.80±0.77##※△$&
 实施例2   45.0   20   1.15±0.37##※△$&
 实施例3   45.0   20   1.70±0.80##※△$&
 实施例4   45.0   20   1.45±0.60##※△$&
 实施例5   45.0   20   1.20±0.41##※△$&
 实施例6   45.0   20   1.65±0.67##※△$&
 实施例7   45.0   20   1.25±0.55##※△$&
注：与假手术组相比，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
表3：对大鼠脑梗塞范围的影响(n＝10，
Figure BDA0000096235410000191
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   梗塞范围(％)
  假手术组   等体积NS   10   0.00±0.00
  模型组   等体积NS   10   26.93±3.44***
  对比例1   45.0   10   22.76±2.02#
  对比例2   45.0   10   23.69±2.26#
  对比例3   45.0   10   23.38±2.16#
  对比例4   45.0   10   22.96±2.24#
  实施例1   45.0   10   18.79±1.64##※△$&
  实施例2   45.0   10   18.13±1.80##※△$&
  实施例3   45.0   10   18.36±1.70##※△$&
  实施例4   45.0   10   17.45±1.89##※△$&
  实施例5   45.0   10   18.61±1.45##※△$&
  实施例6   45.0   10   18.02±1.67##※△$&
  实施例7   45.0   10   17.10±1.59##※△$&
注：与假手术组相比，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
表4：对大鼠脑含水量的影响(n＝10，
Figure BDA0000096235410000192
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   脑组织含水量(％)
  假手术组   等体积NS   10   79.11±2.61
  模型组   等体积NS   10   86.12±1.39***
  对比例1   45.0   10   83.99±1.79#
  对比例2   45.0   10   84.37±1.94#
  对比例3   45.0   10   84.21±1.87#
  对比例4   45.0   10   84.08±1.83#
 实施例1   45.0   10   80.16±1.98##※△$&
 实施例2   45.0   10   79.01±1.90##※△$&
 实施例3   45.0   10   80.01±2.09##※△$&
 实施例4   45.0   10   78.82±2.63##※△$&
 实施例5   45.0   10   80.30±1.89##※△$&
 实施例6   45.0   10   78.91±1.74##※△$&
 实施例7   45.0   10   78.60±1.71##※△$&
注：与假手术组相比，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
由表2-4可知：
与假手术组(Contro1)大鼠相比，模型组(Mode1)大鼠行为障碍明显，出现脑水肿和脑梗死，表明造模成功；
与模型组相比，药物组均可不同程度的改善MCAO大鼠神经的功能、抑制脑水肿程度并减少脑梗死体积(P＜0.05，P＜0.01)；
分别与对比例1、2、3、4组相比，实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7组与对比例1相比差异显著(P＜0.05)。
由此可见本发明提供的药物能缩小局灶性脑缺血损伤所造成的脑组织梗死范围，减轻脑水肿；且效果优于对比例。更好的改善了MCAO大鼠神经的功能，缩小脑梗死范围和减轻脑水肿作用更强。
4.2对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
4.2.1对大鼠心肌梗塞程度的影响：见表5
表5：对大鼠心肌梗塞程度的影响(n＝10，
Figure BDA0000096235410000201
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   缺血面积％   梗死面积％
  假手术组   等体积NS   10   0.00±0.00   0.00±0.00
  模型组   等体积NS   10   43.07±5.72***   48.07±7.15***
  对比例1   45.0   10   39.68±7.64#   38.36±4.31#
  对比例2   45.0   10   38.97±7.36#   41.10±6.24#
  对比例3   45.0   10   39.84±6.97#   40.23±5.43#
  对比例4   45.0   10   38.76±7.48#   39.78±4.79#
  实施例1   45.0   10   24.74±5.80##※△$&   23.34±3.61##※△$&
  实施例2   45.0   10   26.14±5.24##※△$&   23.95±5.10##※△$&
  实施例3   45.0   10   24.99±6.32##※△$&   23.31±3.25##※△$&
 实施例4   4.50   10   25.15±5.12##※△$&   24.13±5.04##※△$&
 实施例5   4.50   10   24.47±4.84##※△$&   24.93±5.71##※△$&
 实施例6   4.50   10   24.76±6.41##※△$&   21.56±3.75##※△$&
 实施例7   4.50   10   23.86±3.84##※△$&   25.81±6.82##※△$&
注：与假手术组相比，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
由表5可知：
与假手术组相比，模型组的心肌缺血面积和梗死面积极显著的增加(P＜0.001)；
与模型组相比，对比例1-4组、实施例1-7组的心肌缺血面积和梗死面积有不同程度减少(P＜0.05，P＜0.01)；
分别与对比例1、2、3、4组相比，实施例1-7组的心肌缺血面积和梗死面积明显减少(P＜0.05)。
由此可见：本发明提供的药物均能减少心肌缺血和梗死面积，效果优于对比例1-4组。
4.2.2对大鼠血清CK及LDH值的影响：见表6
表6：对血清CK及LDH值的影响(n＝10，
Figure BDA0000096235410000211
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   CK(U/L)   LDH(U/L)
  假手术组   等体积NS   10   1255.4±89.1   871.3±75.91
  模型组   等体积NS   10   2464.2±145.1***   2093.3±121.2***
  对比例1   45.0   10   2262.3±139.9#   1884.3±136.7#
  对比例2   45.0   10   2305.4±164.6#   1963.7±109.3#
  对比例3   45.0   10   2283.7±151.8#   1939.2±121.1#
  对比例4   45.0   10   2271.8±142.3#   1903.1±150.5#
  实施例1   45.0   10   1502.9±171.0##※△$&   1326.8±160.7##※△$&
  实施例2   45.0   10   1580.2±148.3##※△$&   1260.0±98.6##※△$&
  实施例3   45.0   10   1612.7±179.2##※△$&   1413.7±104.6##※△$&
  实施例4   45.0   10   1441.0±169.2##※△$&   1351.4±164.0##※△$&
  实施例5   45.0   10   1506.9±150.2##※△$&   1295.5±102.2##※△$&
  实施例6   45.0   10   1601.6±182.2##※△$&   1403.3±156.9##※△$&
  实施例7   45.0   10t   1537.7±180.1##※△$&   1323.2±116.1##※△$&
注：与假手术组相比，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
由表6可知：
与假手术组相比，模型组肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量极显著性增加(P＜0.001)；
与模型组相比，对比例1-4的CK、LDH明显减少(P＜0.05)，实施例1-7显著降低(P＜0.01)；
分别与对比例1、2、3、4相比，实施例1-7组的CK、LDH明显降低(P＜0.05)。
由此可见：本发明提供的药物给药组CK、LDH含量明显降低，效果优于对比例各组。
4.3对小鼠脑血栓的影响：见表7
表7：抗小鼠脑血栓作用(n＝10，
Figure BDA0000096235410000221
)
  组别   剂量(mg/kg)   n   5min死亡率   保护率％
  模型组   等体积NS   10   9.2±0.8   8％
瑞替普酶 3.3mu/kg 10 3.8±0.6## 58.7％
  对比例1   45.0   10   7.6±1.2#   17.4％
  对比例2   45.0   10   8.3±0.8#   9.8％
  对比例3   45.0   10   8.1±1.0#   12.0％
  对比例4   45.0   10   7.9±1.0#   14.1％
  实施例1   45.0   10   4.4±1.0##※△$&   30.4％
  实施例2   45.0   10   4.1±0.7##※△$&   55.4％
  实施例3   45.0   10   4.8±1.0##※△$&   47.0％
  实施例4   45.0   10   4.9±1.0##※△$&   46.7％
  实施例5   45.0   10   4.4±1.0##※△$&   52.2％
  实施例6   45.0   10   5.3±0.9##※△$&   42.4％
  实施例7   45.0   10   4.7±0.9##※△$&   48.9％
注：与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与对比例1组相比，※P＜0.05；与对比例2组相比，△P＜0.05；与对比例3组相比，$P＜0.05；与对比例4组相比，&P＜0.05。
由表7结果可知：
模型组对胶原蛋白与肾上腺素联合诱导的5min小鼠死亡率明显增加、保护率显著降低；
与模型组相比，各组对5min小鼠死亡率有不同程度的降低(P＜0.05，P＜0.01)，保护率有不同程度的增加(P＜0.05，P＜0.01)；
分别与对比例1-4组相比，实施例1-7各组可明显的抑制5min小鼠死亡率(P＜0.05)，保护率增强(P＜0.05)。
结果表明：本发明提供的药物具有抑制小鼠脑血栓形成的作用，效果优于对比例各组。
5、结论：
1)用改良的Longa-Zea氏线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，以动物神经障碍评分、脑梗塞范围、脑组织含水量为指标，比较对比例1-4、实施例1-7组经静脉给药后对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用。结果表明，各给药组均可明显改善动物脑梗塞后的神经行为障碍，缩小大鼠局灶性脑缺血后的脑梗塞范围，减少脑组织含水量，对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有治疗作用。实施例1-7分别与对比例1-4组相比，在改善MCAO大鼠神经的功能，缩小脑梗死范围和减轻脑水肿作用更强。
2)以在体大鼠心肌缺血再灌注模型观察药物作用。心肌缺血导致心肌梗塞发生，梗塞面积为48.07％，同时CK、LDH含量增高，显示了病理模型的特征。各给药组均可明显减少梗塞面积，降低血清CK、LDH含量。实施例1-7分别与对比例1-4组相比，在减少梗塞面积，降低血清CK、LDH含量方面作用更强。
3)以小鼠脑血栓形成模型表明各药物组对胶原蛋白与肾上腺素联合诱导的小鼠体内血栓所致死亡有显著的保护作用。而实施例1-7组分别与对比例1-4组相比，这样保护作用更强。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种三七总皂苷注射剂，其特征在于，该注射剂中含有以下重量百分比的活性成分：三七皂苷R19.5-15.0％、人参皂苷Rg137.0-56.0％、人参皂苷Re 5.0-8.0％、人参皂苷Rb121.0-32.0％、人参皂苷Rd不低于0.45％，且三七三醇苷与三七二醇苷的重量比为1.5-3.5∶1。
2.一种权利要求1所述的注射剂，其特征在于，所述三七三醇苷与三七二醇苷重量比为2.0-3.5∶1。
3.一种权利要求1所述的注射剂，其特征在于，所述三七三醇苷与三七二醇苷重量比为2.5-3.5∶1。
4.根据权利要求1-3任一项所述的注射剂，其特征在于，所述注射剂为注射液、冻干粉针或无菌粉末。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述的注射剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)取三七，制成粗粉，用乙醇提取2-5次，每次加2-20倍50-95％的乙醇，每次提取1-5小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药0.5-1g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.05-0.5％，搅匀，静置，滤过；
2)取滤液加0.1-1.0％的枸橼酸钠，过0.5-10倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为0.5-10BV/h；用0.5-3倍、浓度为0.1％氢氧化钠溶液洗脱，流速为0.5-15BV/h，洗脱液弃去，再分别用纯化水及10％乙醇液洗柱，洗脱液弃去；用45-49.5％的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集合格部分，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在40-65℃时相对密度为1.05-1.20的清膏，减压干燥，得三七总皂苷；
3)按照注射剂的常规制备方法，将三七总皂苷制成三七总皂苷注射剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1)为：取三七，制成粗粉，粒径控制在10-40目，用乙醇提取2-4次，每次加8-12倍60-80％的乙醇，每次提取2-5小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，减压浓缩成每1ml含生药约0.5-1g，加氯化钠使其含氯化钠的浓度达到0.1-0.2％，搅匀，静置，滤过。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)为：
取滤液加0.3-0.6％的枸橼酸钠，过1-8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，流速为0.5-5.0BV/h；用1-3倍、0.1％氢氧化钠溶液以1-6BV/h的流速洗脱，洗脱液弃去，再分别用纯化水洗脱至中性，洗脱液弃去；用3BV、浓度为10％乙醇溶液洗柱，洗脱液弃去；用45-49.5％的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，收集洗脱液，吸附脱色，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在60℃时相对密度为1.05-1.20的清膏，减压干燥，得三七总皂苷。
8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述三七为三七主根和/或三七芦头。
9.权利要求1-4任一项所述的三七总皂苷注射剂在制备心血管疾病的药物中的应用。
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