CN102283855A - 松果菊苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了属于胃肠道疾病治疗技术领域的松果菊苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。以松果菊苷为药物活性成分的药物制剂可以减轻3％DSS对肠道的损伤，有助于保护肠道的组织结构，减少炎性细胞浸润，增加表皮层和肌层增殖的细胞比例。本发明还阐明了松果菊苷对炎症性肠病的作用机理：松果菊苷能够抗炎，促进受损组织修复并维持炎症部位的内环境稳态，缓解便溏和便血，促进受损肠道肌层表皮细胞的增殖和减少炎性浸润。

Description

松果菊苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用

技术领域

本发明属于胃肠道疾病治疗技术领域，具体涉及松果菊苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。

背景技术

炎症性肠病是一种常见的胃肠道疾病，是诱发大肠癌的主要因素之一，患者常伴有腹痛，血便等症状，病因复杂，经常反复难以彻底治愈。炎症性肠病患病历史越长，诱发大肠癌的机率越大，据统计，10年病史的患者有2％的风险，20年将有8％的风险，30年将有18％的机率罹患大肠癌。

临床上常利用高效的免疫抑制剂治疗炎症性肠病，如氨基水杨酸盐类，5-氨基水杨酸，巴柳氮钠，奥柳氮钠以及柳氨磺胺吡啶。此类药物均具有较严重的副作用，服用后出现腹泻，恶心，头疼，以及过敏反应，甚至有一定的肾毒性，且不能抑制炎症性肠病的反复发作，对大肠癌的预防作用甚微。

松果菊苷是一种水溶性的天然产物(分子结构式如式1所示)，广泛存在于肉苁蓉、列当、地黄、钓钟柳、玄参、石竹、紫锥菊等植物体内。已有研究表明松果菊苷具有抗氧化、抗衰老、神经保护、肝脏保护、改善学习记忆、免疫调节、抗炎、抗肿瘤、改善性能力等诸多药理活性，可用于制备抗帕金森病、痴呆症、学习记忆障碍等的药物。有关松果菊苷对炎症性肠病的作用机理尚未见报道，本研究利用3％DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型，发现松果菊苷可减少右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)对肠道组织结构的损伤，减轻炎症性肠病的症状，促进受损部位的修复，提示松果菊苷具有一种新的药理活性，即可用于治疗和预防炎症性肠病。

发明内容

本发明的目的是提供松果菊苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。

松果菊苷在制备治疗和预防炎症性肠病药物中的应用。

所述治疗和预防炎症性肠病是通过使用松果菊苷后抗炎，促进受损组织修复并维持炎症部位的内环境稳态。

所述治疗和预防炎症性肠病是通过使用松果菊苷后抑制体重降低，缓解便溏和便血，促进受损肠道肌层表皮细胞的增殖和减少炎性浸润。

所述松果菊苷是含有松果菊苷的药物制剂组合物。

所述药物制剂组合物，以松果菊苷为药物活性成分，同时含有药物可接受的载体，其中松果菊苷在制剂中所占重量百分比是0.01-99.99％，其余为药物可接受的载体。

所述可接受的载体选自山梨醇、甘露醇、巯基乙酸、蛋氨酸、EDTA钠盐、氯化钠、氯化钾、甘氨酸、蔗糖、乳糖、环糊精、滑石粉、硫酸钙、硬脂酸钠、纤维素、明胶、甘油等。

本发明的有益效果：本发明发现了松果菊苷的一种新药理作用，阐明了松果菊苷对炎症性肠病的作用机理，以松果菊苷为药物活性成分的药物制剂能够有效预防和治疗炎症性肠病。

附图说明

图1为实验小鼠体重日变化曲线。

图2为实验小鼠疾病活动指数日变化曲线。

图3为DSS小组和ECH小组肠长度比较(n＝8)。

图4为小鼠肠道组织切片的H&E染色的实例；

图中，A：DSS处理组小鼠肠道组织结构B：松果菊苷处理组小鼠肠道组织结构C：DSS处理组小鼠炎性浸润至黏膜下层D：松果菊苷处理组小鼠炎性浸润至黏膜层。

图5为小鼠肠道表皮结构和炎性浸润计分结果比较。

图6为小鼠肠道组织切片的Ki67免疫组织化学染色结果；

图中，A：Ki67阴性示意图B：DSS处理组小鼠Ki67染色结果C：松果菊苷处理组小鼠Ki67染色结果。

具体实施方式

下面以具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

本实施例通过动物实验证明松果菊苷对3％DSS诱导的溃疡性肠炎模型小鼠具有显著的缓解作用，具有减轻炎症性肠病的症状，促进受损部位的修复，保护肠道组织等药理活性。

松果菊苷标准品(购自中国药品生物制品检定所，纯度≥95％)。右旋葡聚糖硫酸钠DSS(Dextran Sulfate Sodium：DSS，分子量为6000，购自Sigma公司)。

实验步骤及结果如下：

(1)动物实验

选择体重20-25克的雄性C57BL/6小鼠，随机分为3组，每组8只小鼠。设定只饲喂3％DSS(葡聚糖硫酸钠)组为急性溃疡性肠炎模型对照组，饲喂3％DSS+120ug/ml松果菊苷为实验处理组，正常饮水组为正常对照组。每日检查饮水并及时更换，保持小鼠生活环境通风和清洁卫生。实验7天内每天称量小鼠体重，观察日常活动、大便性状和隐血情况。第8天撤除DSS，模型对照组换为正常饮水，实验处理组换作添加了120ug/ml松果菊苷的饮水。第9天结束实验处理。处死小鼠，收集所需组织。

(2)测定指标

以DAI(Disease activity index：疾病活动指数)指数评估小鼠的疾病活动，松果菊苷饲喂小鼠后，每日记录体重变化，大便性状和隐血情况，并根据表1所示的划分标准换算成DAI指数，小鼠的DAI指数等于体重变化，大便性状和隐血情况的分值三项总和的平均值。实验结束后，颈部脱臼处死小鼠，迅速从盲肠底部到直肠底部分离直肠，量取长度。其余部分用作组织切片。

表1小鼠体重、大便性状和隐血情况的划分标准

(3)结果

用3％DSS诱导C57BL/6小鼠建立急性溃疡性肠炎模型，该模型的发病与人溃疡性肠炎症状类似。如图1所示饮用DSS的第1天，小鼠体重基本没有变化，较活跃。从第2日开始，3％DSS组小鼠体重开始下降。松果菊苷处理组小鼠体重没有变化。第三天，3％DSS组小鼠体重下降为5％-10％；松果菊苷处理组小鼠体重开始下降，降幅为0-5％。第4天，3％DSS组小鼠体重下降为10％-20％；松果菊苷处理组小鼠体重下降，降幅为5％-10％；两组小鼠明显懒动，大便带血但成形。第5天，3％DSS组小鼠体重下降为20％以上；松果菊苷处理组小鼠体重开始下降，降幅为10％-20％。3％DSS组小鼠大便带血，不成形；松果菊苷处理组小鼠大便带血成形。第6日，两组小鼠体重均为下降，大便带血，不成形。第7日变化与第6日相同。小鼠活动不活跃。在7天的饲喂3％DSS过程中，两组小鼠体重均为下降趋势，但是与3％DSS处理组相比，松果菊苷处理组小鼠体重降低趋势稍缓。第8日小鼠活动仍然不活跃。3％DSS处理组有2只小鼠在第8天死亡。DSS诱导溃疡性肠炎过程中，每日两组小鼠的体重都呈下降趋势，只是松果菊苷处理组小鼠体重减少幅度小于DSS处理组。

疾病活动指数由体重变化，大便形态和隐血情况3部分构成，用以综合比较松果菊苷处理的治疗效果。DSS处理组小鼠有明显的症状变化，包括体重减少，不成形大便，后期大便潜隐血。松果菊苷处理组也有同样症状，但出现时间要晚于DSS处理组。如图2所示松果菊苷处理组小鼠的DAI指数一直低于DSS处理组。从第5日开始，两组之间DAI指数出现显著差异。

在DSS诱导的溃疡性肠炎模型中，大肠缩短严重，表明肠炎严重。因此实验最终量取大肠长度，如图3所示两组之间大肠长度的T检验结果表明3％DSS处理组大肠长度显著低于松果菊苷处理组。松果菊苷处理组小鼠健康状况明显好于DSS处理组。

3％DSS处理组小鼠从盲肠，近端结肠到远端结肠，肌层都有严重的炎症。组织病理切片采用H&E染色，表皮细胞损伤和炎性浸润的计分结果见图5。松果菊苷处理组小鼠的表皮损伤和炎性浸润均小。其中3％DSS处理组结肠粘膜不完整，大部分腺体被破坏，杯状细胞缺失，腺体正常结构丧失，腺腔消失，炎症细胞浸润严重，主要累及黏膜和黏膜下层见图4(A，C)；松果菊苷处理组小鼠结肠仍然有正常的粘膜结构，但也有杯状细胞减少和缺失，炎症浸润，主要发生在黏膜层见图4(B，D)。个别严重小鼠浸润发生严重。从整个大肠来看，远端结肠的损伤比近端结肠严重。

Ki 67抗原简称为Ki67或Ki-67，是一种与细胞***密切相关的核抗原，存在于细胞周期的G1后期，S、G2和M期，在静止的G0期细胞中不存在该抗原，是应用最为广泛的增殖细胞标记之一，用来判断细胞增殖活性以及细胞周期。在免疫组化切片中，Ki67阳性的细胞核为褐色或深棕色，表明是正在增殖的细胞核，用Ki67阳性细胞核所占比例表征肠道组织的修复功能。计数方法为每个切片随机选取5个视野，统计视野范围内Ki67阳性细胞核和阴性细胞核数目(见图6：A：Ki67阴性示意，B：DSS小组Ki67示意C：松果菊苷小组Ki67示意)。结果表明松果菊苷处理组小鼠的Ki67阳性比例为61.88％，高于3％DSS处理组(37.77％)，T检验的P值小于0.05。表明松果菊苷处理可显著提高小鼠肌层中Ki67阳性细胞核比例。同时也表明松果菊苷处理可促进肌层表皮细胞的增殖，表明松果菊苷可能通过促进表皮细胞的增殖，加快受损部位的更新和修复，从而对DSS导致的炎症有明显的缓解作用，有利于进行肠道自我修复。

本实验过程中未出现服用松果菊苷后有严重副作用的个例，受试小鼠生长良好，无一死亡。表明本实验中饲喂小鼠的松果菊苷浓度为安全浓度。

通过以上实验得出松果菊苷处理后可以缓解小鼠溃疡性肠炎的症状，可以减轻3％DSS对肠道的损伤有助于保护肠道的组织结构，减少3％DSS对肠道表皮细胞层的损伤，减少炎性细胞浸润，可以增加表皮层和肌层增殖的细胞比例。表明松果菊苷防治急性溃疡性肠炎的机理是由于该化合物的抗炎活性，促进受损组织修复，维持炎症部位的内环境稳态。本实验的结果提示，松果菊苷可用于制备抗炎症性肠病和肠癌的药物。

实施例2

药剂成分：松果菊苷1g，硫酸钙100g，纤维素50g，硅胶5g，硬脂酸钠1.5g。

制取方法：取原料过100目筛；取松果菊苷，硫酸钙，纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入硅胶及硬脂酸钠，混匀，压片，制成1000片。

实施例3

药剂成分：松果菊苷10g，硫酸钙100g，纤维素50g，硅胶5g，硬脂酸钠1.5g。

制取方法：取原料过100目筛；取松果菊苷，硫酸钙，纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入硅胶及硬脂酸钠，混匀，压片，制成1000片。

实施例4

取松果菊苷10g，加入适量淀粉，硬脂酸镁等辅料，制粒，整粒，装入1号胶囊。

实施例5

取松果菊苷5g，加入适量蔗糖，防腐剂，加水到1000mL，分装成10mL一支。

实施例6

取松果菊苷10g，加入适量环糊精，干式制粒，整粒，分装。

实施例7

应用实例，炎症性肠病的治疗

患者王XX，男性，36岁，某企业职工，有腹痛，恶心，大便出血不成形，经诊断为炎症性肠病。

使用实施例1所制得的药物制剂，每日3次，每次4片，10天后症状有明显好转。用药期间无任何不良反应。

Claims (6)

1.松果菊苷在制备治疗和预防炎症性肠病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述治疗和预防炎症性肠病是通过使用松果菊苷后抗炎，促进受损组织修复并维持炎症部位的内环境稳态。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述治疗和预防炎症性肠病是通过使用松果菊苷后抑制体重降低，缓解便溏和便血，促进受损肠道肌层表皮细胞的增殖和减少炎性浸润。

4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述松果菊苷是含有松果菊苷的药物制剂组合物。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述药物制剂组合物，以松果菊苷为药物活性成分，同时含有药物可接受的载体，其中松果菊苷在制剂中所占重量百分比是0.01-99.99％，其余为药物可接受的载体。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述药物可接受的载体为山梨醇、甘露醇、巯基乙酸、蛋氨酸、EDTA钠盐、氯化钠、氯化钾、甘氨酸、蔗糖、乳糖、环糊精、滑石粉、硫酸钙、硬脂酸钠、纤维素、明胶、甘油中的一种或一种以上。

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