CN102279235A - 一种妇炎康片的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种妇炎康片的检测方法，属于中药检测领域。包括下列步骤：供试品溶液的制备，色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器，乙腈-0.1%磷酸为流动相，检测波长为230nm;对照品溶液的制备，测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。本方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。

Description

一种妇炎康片的检测方法

技术领域

本发明属于中药检测领域，涉及一种妇炎康片的检测方法，更具体地说是检测妇炎康片中芍药苷的方法，

背景技术

妇炎康片以丹参、赤芍、当归、醋延胡索、炒川楝子、醋香附、醋三棱、醋莪术、山药、炒芡实、苦参、黄柏、土茯苓等13味中药组成，经过中药材炮制、提取、浓缩、干燥、粉碎、制粒、压片、包衣而成，为纯中药制剂。方中丹参、赤芍、当归活血化瘀，为君药，醋延胡索、炒川楝子、醋香附合用行气解郁止痛，加之醋三棱、醋莪术增强行气止痛兼软坚散结，山药、炒芡实滋肾止带，苦参、黄柏清热燥湿，土茯苓解毒利湿，诸药配合可达到活血化瘀，清热解毒、软坚散结、止痛利湿的目的，能消除炎症，解除病人腰腹疼痛，减少白带，有治愈慢性***等妇科炎症的疗效。具有清热利湿，理气活血，散结消肿作用。用于湿热下注，毒淤互阻所治带下病。症见带下量多、色黄、气臭、少腹痛、腰骶痛，口苦咽干，***炎、慢性***、慢性***见上述证候者。

赤芍是方中的君药，而原质量标准中没有赤芍的检测方法，所以增加赤芍活性成分的检测，具有保证产品质量意义。

赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根。味苦，微寒。归肝经。具有清热凉血，散瘀止痛作用。用于温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，症瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。

药理作用：

1.抗血栓形成作用赤芍煎剂15-20g(生药)/kg给大鼠灌胃，使血栓形成时间明显延长，长度缩短，重量减轻；凝血酶原时间和白陶土部分凝血活酶时间延长，优球蛋白溶解时间缩短，表明对血凝有显著抑制作用。赤芍提取液125-250mg(生药)/ml，除使凝血酶原时间、部分凝血活酶时间明显延长外，250mg(生药)/ml也明显抑制凝血酶凝集牛纤维蛋白原，在500～1000mg/ml时均完全不凝。此外能激活纤溶酶原，使凝固的纤维蛋白溶解，因此赤芍通过抑制凝血酶和激活纤溶酶原而发挥抗血栓作用。赤芍精(d-儿茶精，d-catechin)200mg/只灌服，每日1次，连续46日，使高脂饲料饲养的大鼠血小板聚集时间，血小板血栓形成时间和血栓形成时间显着延长，血栓长度和湿重显著低于对照组。赤芍精对高粘滞血冠心病患者也有改善血液流变性作用，使中、低切速下全血粘度降低，红细胞电泳时间延长，血小板聚集性降低，草芍药浸膏片能使肺原性心脏病患者的全血粘度、血浆粘度和血细胞比容明显降低。

2.抗血小板聚集作用赤芍提取物在体外对肾上腺素、二磷酸腺苷(ADP)、烙铁头蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集均有显著抑制作用，并使血小板粘附与血小板第三因子活性降低，血小板内cAMP含量升高。赤芍成分及其衍生物801、802在5×10-4～5×10-3ml/L时对ADP和胶原诱导的兔血小板聚集均有明显抑制作用，其中802作用最强，对ADP诱导的血小板聚集尚有解聚作用。3药的抗血小板聚集作用与降低大鼠肝线粒体氧耗量、呼吸控制率和减少磷/氧(P/O)比值等作用颇为一致，表明3药的抗血小板作用与干扰血小板的能量代谢有关。赤芍精抑制兔富血小板血浆(PRP)与AA孵育时血栓烷A2(TXA2)样物质的生物合成，使其生成物对兔主动脉条的收缩幅度显着降低，表明赤芍精抑制血小板聚集与对抗TXA2的促聚集作用有关。给冠心病心绞痛患者静滴赤芍精可使扩大聚集型血小板的百分数与聚集数显着减少，表明能使增高的血小板表面活性和聚集性明显降低。上述实验表明，赤芍抑制血小板聚集的机制可能与干扰血小板的能量代谢，抑制TXA2的生物合成及提高血小板内cAMP含量等有关。

3.降血脂和抗动脉硬化作用赤芍浸膏片5g(生药)/kg，每日服1次，连用10-15星期，使高脂血兔的血浆总胆固醇(Tch)，三酰甘油(TG)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Ch)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-Ch)显着降低；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Ch)及HDL2-Ch显着高于对照组；

Tch/HDL-Ch，Tch/HDL2-Ch，LDL-Ch/HDL-Ch和LDL-Ch/HDL2-Ch比值显着降低，同时使高脂血症所致血栓烷A2/前列环素(TXA2/PGI2)比值趋于正常。此外并可降低血浆过氧化脂质(LPO)，动脉壁脂质、钙和磷脂及主动脉斑块面积。赤芍抗动脉硬化的机制可能与改善脂蛋白组分比值、降低血浆过氧化脂质、减少钙沉积于动脉壁，抑制血小板聚集，调节TXA2/PGI2平衡和激活腺苷酸环化酶而增加动脉壁内cAMP浓度等有关。

4.对心血管***的影响赤芍(草芍药)煎剂对离体蟾蜍心脏和家兔在位心脏，小剂量(1∶0.5，0.05ml)轻度抑制，使心率减慢，搏出量减少；大剂量(1∶0.5，0.15ml)明显抑制，并有传导阻滞。血管灌流使蟾蜍内脏、后肢和离体兔耳血管轻度扩张。以0.2％赤芍注射液灌流大鼠离体心脏，使冠脉流量增加28.4％。给麻醉犬动脉注射也使冠脉流量增加，静脉注射除增加冠脉流量外，也使外周阻力降低，血压下降；这些作用不受利血平预处理影响，可能为直接作用。给小鼠腹腔注射赤芍注射液，使心肌86Rb摄取量增加，表明使心肌营养血流量增加，此作用可被***抑制，表明与β-受体有关。对大鼠烫伤后早期出现的心脏功能降低，赤芍注射液10g(生药)/kg灌胃，有一定缓解和改善作用。赤芍注射液1g/kg肌内注射，对实验性肺动脉高压兔有治疗和预防作用，使肺血管扩张、肺血流改善、肺动脉压降低，心输出量增加，心功能改善。赤芍注射液对肺源性心脏病患者也有扩张肺血管，降低肺动脉压和肺血管阻力，增加心输出量，改善右心功能和血液流变性等作用。草芍药浸膏片对肺源性心脏病患者也有相似作用。赤芍注射液40g(生药)/kg和80g(生药)/kg腹腔注射，明显延长小鼠常压缺氧的存活时间。8g/kg静脉注射对脑垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血有明显保护作用。40g/kg灌胃，也能延长小鼠减压缺氧的存活时间。

5.抗肿瘤作用赤芍正丁醇提取物(赤芍D)1～2g/kg腹腔注射，对小鼠S180实体瘤的抑制率为31％-49％。赤芍水提取物(赤芍A)或70％乙醇提取物(赤芍C)单用对S180实体瘤无明显作用，当与阈下剂量的环磷酰胺合用时则有明显抑制作用；赤芍A、C对615小鼠白血病无明显作用，而与小剂量甲氨蝶呤合用时，可显着延长615白血病小鼠的生存时间。肿瘤组织中的cAMP含量明显低于正常组织，赤芍A、C、D可分别增加S180实体瘤、S180腹水癌或Lewis肺癌组织中的cAMP水平，此作用可能与抗癌或抗癌增效作用有关。S180实体瘤小鼠的血浆纤维蛋白含量比正常高2-3倍，赤芍A2g/kg腹腔注射，可使其明显降低，此作用也可能与抗癌增效有关。赤芍A或C单用促进Lewis肺癌自发性转移，小剂量环磷酰胺也无明显影响，但与赤芍A合用可显著减少此肺癌转移。

6.保肝作用赤芍注射液3.3mg/ml，1.67mg/ml和0.7mg/ml，对体外培养肝细胞的DNA合成有明显促进作用，对肝细胞再生和肝功能恢复有良好影响。赤芍注射液3.75g/kg静脉注射，对D-半乳糖胺所致大鼠肝损伤有明显保护作用，使动物存活率增加，肝脏萎缩与丙氨酸转氨酶明显低于对照组，FN(单核-巨噬细胞***的主要调理素)高于对照组。保肝机制可能是提高大鼠血浆纤维联结蛋白(PFN)的水平，从而增强网状内皮***的吞噬功能和加强调理素活性，以保护肝细胞，防止肝脏免疫损伤和促进肝细胞再生。赤芍801，24mg/kg腹腔注射，每日1次，连续2星期，对大鼠肝脏和心脏羧基酯酶(CEase)活性均有明显诱导作用，此作用有促进体内水解过程，促进体内毒物***的作用。d-儿茶精100mg/kg或50mg/kg腹腔注射，对乙醇诱导的小鼠肝线粒体急性损伤有保护作用，能降低模型动物肝线粒体膜脂质流动性，增加肝线粒体还原型谷脸甘肽(GSH)含量，降低Ca叶+摄取和脂质过氧化物生成，通过对抗乙醇的毒素作用，缓解肝线粒体膜结构的急性损伤。

7.其他作用赤芍成分没食子酸的衍生物没食子酸丙酯具有清除氧自由基的能力，能明显抑制硫酸亚铁和维生素C等诱导的线粒体肿胀和脂质过氧化反应，可保护线粒体结构和功能的正常。赤芍对正常离体豚鼠回肠无明显作用，但能解除乙酰胆碱所致肠痉挛。赤芍正丁醇提取物3g/kg皮下注射可促进网状内皮***的吞噬功能，增加肝脏重量，对溶血素生成与迟发型超敏反应无明显影响。川赤芍提取物对β-羟基-β-甲基戊二酸辅酶A和钙离子通道阻滞剂受体有显著抑制作用。赤芍在体外对痢疾杆菌、伤寒杆菌和溶血性链球菌有较强抑制作用。草芍药煎剂灌胃，可使家兔血糖暂时升高，窄叶芍药水-醇提取物有显著镇静和一定的镇痛作用，还能提高胃液的酸度，增进食欲和消化功能。

从上述文献报道表明，赤芍及其有效成分芍药苷的药理作用与妇炎康片的临床作用是相一致的。因此对妇炎康片中的芍药苷进行检测是非常必要的，在现有的妇炎康片质量标准中，包括中国药典中妇炎康片标准中，均未见对赤芍有效成分芍药苷的检测方法。

由于妇炎康片是中药复方制剂，所含成分极为复杂，各成分之间采用一般的方法很难分离开，本法是将赤芍中的一种有效成分-芍药苷从样品中分离出来，采用高效液相色谱法检测芍药苷含量。

发明内容

本发明提供一种妇炎康片检测方法，采用高效液相色谱法，检测测定妇炎康片中的芍药苷。

本发明包括下列步骤：

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝60～90∶40～10为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液5～15ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.05～0.15mg的对照品溶液；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

本发明的一种实施方式是，包括如下步骤：

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝85∶15为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.1mg的溶液，即得；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

本发明是通过大量试验所得到的切实可行的方法，本方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。

具体实施方式

对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，但只要使用本发明所述的检测方法，均在本发明的保护范围之内。

实验例：芍药苷含量测定方法的建立

1.方法

1.1仪器与试剂LC-10A高效液相色谱仪；紫外检测器；N2000工作站；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.2色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6mm×250mm)；乙腈-0.1％磷酸(85∶15)为流动相；检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷计算应不低于2500。

2.对照品的来源及纯度芍药苷对照品，购自中国药品生物制品检定所，采用反相高效液相色谱法归一化法标定，色谱条件同上，进样量：10μl，纯度为芍药苷99.71％。

3.方法学考察

3.1流动相的选择比较流动相(1)乙腈∶0.1％磷酸＝85∶15；(2)乙腈∶0.1％磷酸＝80∶20；(3)乙腈∶0.1％磷酸＝90∶10；(4)乙腈∶无水乙醇＝75∶25，结果流动相(1)中芍药苷峰达到基线分离，分离度很好，并列入正文。

3.2测定波长的选择经测定芍药苷紫外吸收光谱，芍药苷最大吸收波长为218nm，属于末端吸收，在此波长处，基线严重漂移，参考2010版药典二部148页赤芍的含量测定条件选择230nm作为检测波长。

3.3***适用性试验根据上述确定的条件，得到赤芍对照品及样品的色谱图，计算其理论塔板数N＝2500。

3.4供试品提取条件的选择试验参考2010年版药典赤芍的含量测定的样品溶解方法，分别采用甲醇50ml，25ml、20ml、10ml，结果见表1。

表1 不同溶解方法的样品含量测定

由表1看出，乙醇25mL+水饱和正丁醇+甲醇10ml时，样品溶解最好。

3.5标准曲线的绘制精密称取芍药苷对照品1.86mg，置25mL量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.0744mg的对照品溶液，分别精密吸取上述溶液3、6、9、12、15、18μl注入液相色谱仪测定，以进样量(μg)对峰面积绘制标准曲线。芍药苷回归方程为Y＝-36210+76088X(r＝0.9989)。结果表明，在上述色谱条件下，芍药苷进样量在10μl范围内，峰面积与浓度成良好的线性关系。符合外标法定量测定的要求，结果见表2。

表2 芍药苷标准曲线结果

进样量(μl)	3	6	9	12	15	18
							芍药苷峰面积	359780.415	465073.813	722583.750	952815.375	1245858.561	1512198.320

3.6空白试验取芍药苷的阴性样品，同法制备阴性对照液，照液相色谱法试验，

结果在与芍药苷对照品相同保留时间处无吸收峰，表明阴性对照样品无干扰。

3.7稳定性试验精密吸取批号(110401)供试品溶液10μl。按上述色谱条件分别于0、2、7、12、24小时进样，结果见表3。

表3 稳定性试验结果

结果说明，在24小时内，芍药苷含量基本稳定。

3.8精密度试验精密吸取批号(110401)供试品溶液10μl，按上述色谱条件重复进样5次，结果见表4。结果表明，仪器整个***精密度良好。

表4 精密度试验结果

3.9重现性试验取批号(110401)样品，按正文方法操作，独立测定五次，结果见表5，表明该方法重现性良好.

表5 重现性试验结果

3.10回收率试验取已知含量的样品(批号110401，芍药苷的量为0.50mg/片，平均片重0.5008g)5份。精密加入芍药苷对照品溶液10ml(Cs＝0.0744mg/ml)，依正文方法操作制备供试品，取10μl测定，计算回收率，结果见表6。

表6 回收率试验结果

如表6所示，表明本法回收率较好，准确度较高。

4.三批样品的含量测定：采取正文方法对三批样品进行了含量测定，结果见表7。

表7 三批样品含量测定结果

下面列举实施例进一步说明详细说明本发明，对本发明并不构成限制。

实施例1：

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×250mm；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝60∶40为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25mL，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液5ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.05mg的对照品溶液。

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

实施例2：

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝75∶25为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.10mg的对照品溶液；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

实施例3：

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝90∶10为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液15ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.15mg的对照品溶液；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

实施例4

(a)色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈∶0.1％磷酸＝85∶15为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b)供试品溶液制备：取本品50g，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

(c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.1mg的溶液，即得；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

Claims (2)

1.   一种妇炎康片的检测方法，其特征在于包括下列步骤：

（a）色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈：0.1%磷酸=60～90:40～10为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b) 供试品溶液制备：取本品50g，研细，取0.5～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25 ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液5～15 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得;

(c) 对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.05～0.15mg的对照品溶液;

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。

2.如权利要求1所述的妇炎康片的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(a）色谱条件选择：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测器为紫外检测器；乙腈:0.1%磷酸=85:15为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500；

(b) 供试品溶液制备：取本品50g，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0.5h，超声处理30min，功率250W，频率250KHz，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 ml，摇匀，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25 ml，合并正丁醇液，摇匀，取正丁醇液10 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

 (c)对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍药苷0.1mg的溶液，即得；

(d)：测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。